Spontan intraserebral kanamadan sonra nozokomial akciğer enfeksiyonu ile ilişkili sitokinler ve inflamatuar gen polimorfizmleri

Özet

Bu retrospektif çalışma, erken hastane sonrası kan alımı, serum sitokinleri ve Toll-benzeri reseptörlerin ölçümü, inflamatuar gen polimorfizmlerinin genotiplenmesi ve spontan intraserebral kanaması olan hastalarda enfeksiyon riski değerlendirmesi için tekrarlanabilir bir iş akışı sunmaktadır.

Özet

Nozokomial akciğer enfeksiyonu, spontan intraserebral kanamadan sonra sık görülen bir komplikasyondur ve nörolojik iyileşmeyi kötüleştirebilir, hastanede yatışı uzatabilir ve klinik yükü artırabilir. Bu retrospektif klinik-laboratuvar çalışması, primer spontan intraserebral kanamadan sonra nozokomial akciğer enfeksiyonu ile ilişkili inflamatuar biyobelirteç ve konak bağışıklık genetik profillerini değerlendirmek için tekrarlanabilir bir iş akışı sunmaktadır. Hastalar, hastaneye kabul edildikten sonra nozokomial akciğer enfeksiyonu olup olmadığına göre sınıflandırılır. Periferik venöz kan, standart önce-analitik koşullarda erken doğum sonrası dönemde toplanır. Serum ayrılır, alkotlenir ve IL-1β, IL-6, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α, TLR2, TLR4 ve TLR9 enzim bağlantılı immünosorbent testi ölçümü için saklanır. Paralel olarak, antikoagüllenmiş tam kandan genomik DNA çıkarılır ve seçilmiş sitokin ve Toll benzeri reseptörle ilişkili lokusların polimeraz zincir reaksiyon-krestriksiyon parça uzunluğu polimorfizmi genotipi için kullanılır. İş akışı ayrıca örnek işleme, tekrarlanan ELISA ölçümleri, DNA saflığı değerlendirmesi, genotip çağrısı ve tekrar genotipleme için kalite kontrol prosedürlerini içerir. İstatistiksel analiz, klinik özellikler ve biyobelirteç seviyelerinin gruplar arası karşılaştırılması, Hardy-Weinberg denge testi, genotip ve allel ilişkileri için lojistik regresyon analizi, ilgili klinik kovaryatlar için ayarlama ve çoklu genetik karşılaştırmalar için yanlış keşif oranı düzeltmesini içerir. Bu birleşik klinik, iltihaplayıcı ve bağışıklık genetik iş akışı, spontan intraserebral kanamadan sonra enfeksiyon risk profillerinin karakterize edilmesine yardımcı olabilir, ancak rutin klinik uygulamadan önce prospektif çok merkezli doğrulama gereklidir.

Giriş

Kendiliğinden beyin içi kanama (ICH), beyin damarlarının travmatik olmayan yırtılması sonucu oluşan ağır bir inme alt tipidir ve nörolojik ölüm ve engelliliğin önemli bir kaynağı olmaya devam eder. Klinik olarak, ICH genellikle birincil veya ikincil olarak sınıflandırılır. Birincil ICH çoğu vakayı oluşturur ve esas olarak hipertansif arteriopati veya serebral amiloid anjiyopati^{ile ilişkilidir 1}. Buna karşılık, ikincil ICH yapısal veya hematolojik nedenlerle ilişkilidir; bunlar arasında anevrizmalar, arteriyovenöz malformasyonlar, Moyamoya hastalığı ve pıhtılaşma bozuklukları bulunur. ICH, tüm inme olaylarının i....

Protokol

Bu çalışma, Çin, Zhejiang, Jiaxing, Jiaxing Birinci Hastanesi, Jiaxing Bağlı Hastanesi Etik Komitesi tarafından onaylandı (Onay No. 2025-LP-599). İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, kurumsal gereksinimler ve Helsinki Bildirgesi'nin ilkelerine uygun olarak yürütülmüştür. Kan toplama ve veri kullanımı için yazılı bilgilendirilmiş onay, örnek toplamadan önce tüm katılımcılardan ve/veya yasal olarak yetkili temsilcilerinden alınmıştır.

Bu iş akışında kullanılan tüm ticari kitler, reaktifler, tüketim malzemeleri, aletler, yazılım, üreticiler, katalog numaraları ve temel işletim spesifikasyonları ....

Sonuçlar

Klinik göstergeler

Başlangıç klinik özellikleri Tablo 1'de özetlenmiştir. Son analizde toplam 360 spontan intraserebral kanama hastası dahil edildi; bunların 180'i hastanede yatış sırasında nozokomial akciğer enfeksiyonu geliştiren ve 180'i gelişmemiş hastalardı. Gruplar arasında yaş (62,4 yıl ± 6,8 yaş vs 63,6 yıl ± 7,0, P >0,05), cinsiyet dağılımı (142/180, %78,9 vs 137/180, %76,1, P > 0,05), sigara geçmişi.......

Tartışma

Kendiliğinden beyin içi kanama (ICH), inme alt tiplerinin en şiddetli örneklerinden biri olmaya devam etmekte ve önemli erken ölüm ve uzun vadeli engellilik yükü oluşturmaya devam^{etmektedir 13}. Klinik uygulamada, ICH hastaları hastane komplikasyonlarına özellikle hassastır; çünkü nörolojik yaralanma hava yolu korumasını zayıflatabilir, öksürük etkinliğini azaltabilir, hareketliliği kısıtlayabilir ve invaziv destekleyici işlemlere maruziyeti artırabilir. Bu komplik.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Human TNF-α ELISA Kit	Invitrogen / Thermo Fisher Scientific	KHC3011	Serum içinde insan TNF-α miktarının kantitatif ölçümü için ELISA kiti.
Human TLR2 / Toll-like Receptor 2 ELISA Kit	Sigma-Aldrich / Merck	RAB0744-1KT	Serum veya plazma örneklerinde insan TLR2 ölçümü için 96 kuyuluk ELISA kiti.
Human TLR4 ELISA Kit, colorimetric	Novus Biologicals / Bio-Techne	NBP3-11807	Serum, plazma veya diğer biyolojik sıvılarda insan TLR4 ölçümü için colorimetric sandviç ELISA kiti.
Human TLR9 ELISA Kit, colorimetric	Novus Biologicals / Bio-Techne	NBP2-76574	Serum örneklerinde insan TLR9 ölçümü için colorimetric ELISA kiti.
Absorbance microplate reader	Agilent BioTek	800 TS	ELISA optik-yoğunluk ölçümü için 450 nm'de ve referans düzeltme 570 nm'de olan mikroplate okuyucu.
QIAamp DNA Blood Mini Kit	QIAGEN	51104	Antikoagüle edilmiş tam kandan genomik DNA ekstraksiyonu için silika membran tabanlı kit.
NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer	Thermo Scientific	ND-ONE-W	DNA konsantrasyonu ve A260/A280 saflık değerlendirmesi için mikrovolume spektrofotometre.
SimpliAmp Thermal Cycler	Applied Biosystems / Thermo Fisher Scientific	A24811	PCR-RFLP genotiplemesi için son nokta PCR amplifikasyonunda kullanılan termal siklistir.
PCR Master Mix, 2X	Thermo Scientific	K0171	Taq DNA polimeraz, dNTP'ler, MgCl2 ve reaksiyon tamponu içeren önceden karıştırılmış PCR reaktifi; geleneksel PCR amplifikasyonu için kullanılır.
Recombinant Taq DNA Polymerase	Thermo Scientific	EP0401	Ayrı PCR bileşenleri kullanılırken 2X master mix yerine lokusa özgü PCR reaksiyonları için alternatif enzim kaynağı.
Nuclease-free water	Thermo Scientific	R0581	PCR kurulumu, DNA seyreltme ve şablonsuz kontroller için moleküler biyoloji sınıfı su.
Custom DNA primers	Sangon Biotech	Custom synthesis	PCR-RFLP genotiplemesi için lokusa özgü primerler; primer dizileri Ek Tablo S1'de listelenmiştir.
Restriction endonucleases for PCR-RFLP	Thermo Scientific / New England Biolabs	Ek Tablo S1'de listelenen lokusa özgü enzimler	PCR ürünlerinin genotip özgü sindirilmesi için kullanılan kısıtlama enzimleri. Her lokus için seçilen enzim, Ek Tablo S1'de listelenen sindirim kalıbına uygun olmalıdır.
Agarose I, molecular biology grade	Thermo Scientific	17850	PCR ürünlerini ve çoğu RFLP fragmanını çözmek için kullanılan 1.5% ve 2.5% jellerin hazırlanması için agarose.
GeneRuler 50 bp DNA Ladder	Thermo Scientific	SM0371	PCR amplikonları ve RFLP fragman boyutu tahmini için DNA boyutu işaretçisi.
SYBR Safe DNA Gel Stain	Invitrogen / Thermo Fisher Scientific	S33102	Agarozda veya akrilamid jellerinde DNA görselleştirmesi için nükleik asit jeli leke maddesi; etidyum bromür yerine düşük riskli alternatif olarak kullanılır.
Horizontal agarose gel electrophoresis system	Bio-Rad	Mini-Sub Cell GT system / 1704360 base	PCR ve RFLP ürünlerinin agarose jeli ile ayrılması için elektroforez sistemi.
Vertical PAGE electrophoresis system	Bio-Rad	Mini-PROTEAN Tetra Cell / 1658001	Daha yüksek çözünürlüklü fragman ayrımı gerektiren 8% poliakrilamid jeli ayrılması için dikey elektroforez sistemi.
Gel documentation system with UV or blue-light transillumination	Bio-Rad / equivalent laboratory system	Gel Doc XR+ or equivalent	Jel elektroforezi sonrasında lekeli DNA bantlarının belgelenmesi için görüntüleme sistemi. Mevcutsa UV koruma veya mavi ışık modunu kullanın.
Refrigerated centrifuge	Eppendorf / equivalent laboratory centrifuge	5424 R or equivalent	Serum ayrımı için 1.500 × g ve 4 °C'de kullanılan buzdolabında soğutmalı santrifüj.
−80 °C ultra-low temperature freezer	Thermo Scientific / equivalent laboratory freezer	Forma 900 Series or equivalent	ELISA analizinden önce serum alikotlarının depolanması.
IBM SPSS Statistics	IBM	Version 25.0	Tanımlayıcı istatistikler, normallik testi, grup karşılaştırmaları, lojistik regresyon ve model çıktısı ihraç için kullanılan istatistik yazılımı.
Spreadsheet software	Microsoft	Excel for Microsoft 365	Veri kontrolü, plaka haritası organizasyonu, çoğaltılmış değer incelemesi ve SPSS analizinden önce birleştirilmiş analiz dosyalarının hazırlanması için kullanılır.