Kas-iskelet hastalıklarının modellenmesi için insan osteositleri ve hücresizleştirilmiş ekstrasellüler matriks kullanan 3D kemik kültürü platformu

Özet

Bu protokol, metakrilatlenmiş jelatin (GelMA) hidrojellerine gömülü insan osteositleri kullanılarak 3D kemik yapılarının üretilmesini ve decellularize ekstrasellüler matriks ile desteklenmesini açıklar. Yöntem düşük maliyetli, ölçeklenebilir ve temel laboratuvar ekipmanlarıyla uyumludur; bu da kas-iskelet hastalıkları süreçlerini incelemek için translasyonel bir platform sağlar.

Özet

Osteoporoz gibi kas-iskelet hastalıklarının modellemesi, insan kemik biyolojisinin temel özelliklerini doğru şekilde yeniden üreten in vitro platformlar gerektirir. Geleneksel 3D kültür sistemleri, hücre-hücre ve hücre-matris etkileşimleri hakkında değerli bilgiler sağlar, ancak pahalı malzemelere, biyoyazıcılara veya özel altyapıya bağımlılıkları daha geniş benimsenmesini sınırlar. Burada, GelMA hidrojellerine gömülü insan kaynaklı osteositler kullanılarak 3D kemik yapıları oluşturmak için sağlam ve maliyet etkin bir protokolü tanımlıyoruz; bu protokol bağışlanan femur başlarından elde edilen decellularize ekstrasellüler matriks (dECM) ile destekleniyor. Bu pipetleme tabanlı yöntem, standart laboratuvar ekipmanları kullanılarak fizyolojik sıcaklıkta (37 °C) tekrarlanabilir, kemik benzeri yapıların üretilmesini sağlar.

Ortaya çıkan yapılar, yüksek kullanılabilirlik ve yapısal bütünlüğü korur ve immünofluoresans görüntüleme ve moleküler testler gibi sonraki uygulamaları destekler. Hastadan kaynaklanan dECM'nin dahil edilmesi, insan kemik remodelasyonunu ve hastalık ilerlemesini daha iyi yansıtarak translasyonel önemi artırır. Bu yaklaşım, ilaç testi, rejeneratif tıp ve kemik biyolojisi mekanik çalışmaları için erişilebilir ve ölçeklenebilir bir platform sağlar. Genel olarak, protokol yüksek maliyetli biyoprint tekniklerine pratik bir alternatif sunar ve diğer dokuya özgü dECM kaynaklarına kolayca uyarlanabilir.

Giriş

Bu yöntem, osteoporoz dahil olmak üzere kas-iskelet hastalıklarını modellemek için GelMA'yı insan kemik dokusundan türetilen dECM ile birleştirerek maliyet etkin ve tekrarlanabilir bir 3D hücre kültürü platformu oluşturmayı amaçlamaktadır. Bu strateji, geleneksel iki boyutlu kültürlere kıyasla fizyolojik mikroçevreyi daha yakın şekilde taklit eden kemik benzeri yapıların oluşturulmasını sağlar ve biyolojik olarak ilgili koşullar altında hücre-hücre ve hücre-matris etkileşimlerinin incelenmesini^{destekler 1}. Femoral başlardan hasta kaynaklı osteositlerin ve klinik kaynaklı dECM'nin kullanımı, translasyon değerini artırır ve in vitro deneyler ile klinik araştırma ihtiyaçları arasında pratik bir bağlantı sağlar².

Bu yöntem, mevcut 3D kültür ve biyofabrikatasyon sistemlerinin temel sınırlamalarını gidermek için geliştirilmiştir; bu sistemler genellikle biyoyazıcılar, özel biyomalzemeler veya pahalı tüketim malzemeleri (örneğin Matrigel) gerektirir ve birçok kişide erişilebilirlik^{sınırları vardır 3,4}. Ayrıca, sentetik hidrojeller sıklıkla mineralize kemik ekstrasellüler matriksinin biyokimyasal karmaşıklığını veya yerleşik osteositlerin davranışını^{tekrarlamakta başarısız olur 5}. Buna karşılık, bu protokol insan kemiğinden türetilen dECM'yi içerir; mineralize içeriği, doğal proteinler ve sinyal moleküllerini korur ve katlayıcı üretim teknolojileriyle ilgili altyapı gereksinimlerinden^kaçınır.

GelMA ve dECM'nin birleşimi çeşitli avantajlar sağlar. GelMA, hücresel yapışma, canlılık ve farklılaşmayı destekler ve 37 °C'de işlenebilir, böylece özel ekipman olmadan hücre kapsüllenmesini sağlar. Düşük maliyetli ultraviyole (UV) kaynakları (365 nm) kullanılarak çapraz bağlama erişilebilirliği daha da^{artırır 7}. dECM takviyesi, sentetik ikamelerde olmayan dokuya özgü ipuçlarıyla yapıyı zenginleştirir, osteojenik uyumluluğu artırır ve immünofluoresans ile moleküler profilleme gibi sonraki analizleri^{kolaylaştırır 8}.

Bu yöntem, hayvan çalışmalarına bağımlılığı azaltan, translasyon doğruluğu genellikle türler arası farklılıklarla sınırlanan insanla ilgili kemik modelleri geliştirme çabalarıyla^{uyumlu hale gelir 1,9,10}. Protokol, 3Rs¹¹ prensipleriyle tutarlıdır ve diğer dokuya özgü dECM'ler kullanılarak yapılar oluşturmak üzere uyarlanabilir; böylece kıkırdak, cilt ve kardiyovasküler doku mühendisliğine potansiyel uygulamalar^{genişletilebilir 12}.

Genel olarak, bu teknik, fizyolojik olarak ilgili koşullarda kemik biyolojisini incelemek için erişilebilir ve ölçeklenebilir bir platform sağlar. Rutin laboratuvar altyapısıyla uyumluluğu ve insan klinik örneklerini entegre etme kapasitesi, özellikle akademik ve hastane tabanlı araştırma grupları için uygun hale getirmektedir. Bu yöntem, kemik süreçlerinin daha ileri kemik çalışmaları için bir platform olarak değil, aynı zamanda rejeneratif tıpta daha translasyonel uygulamalar ve kişiselleştirilmiş terapötik gelişim için bir başlangıç noktası olabilir.

Protokol

Bu çalışma, Concepción Sağlık Servisi'nin Bilimsel Etik Komitesi tarafından onaylandı. İnsan kemik dokusu, Şili'deki Concepción Travmatoloji Hastanesi'nde kalça protezi ameliyatı geçiren hastaların yazılı bilgilendirilmiş onay sonrası bağışlanan femoral başlarından alındı. Örnekler kullanılana kadar −80 °C sıcaklıkta saklandı. Tüm prosedürler, insan dokusunun araştırmada etik kullanımı için kurumsal yönergelere uygundu. Tüm insan kemik dokusu, Şili'deki Concepción Travmatoloji Hastanesi'ndeki hastalar tarafından bağışlanan femoral başlardan, bilgilendirilmiş onay ve Concepción Sağlık Servisi Bilimsel Etik Komitesi'nin onayı ile alınmıştır. Tüm prosedürler, insan dokusu kullanımı için kurumsal yönergelere uygundur.

1. GelMA sentezi

1. 10 g tip A jelatini 100 mL fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS, pH 7.5) içinde 60 °C'de sürekli karıştırma altında çözün.
2. Sıcaklığı 50 °C'ye düşürün ve 1–3 saat boyunca nazikçe karıştırarak 0,5 mL/dakika hızla 5 mL metarlik anhidrit ekleyin.
3. Reaksiyon karışımını PBS'yi 40 °C'de önceden ısıtarak 5× seyreltirin ve reaksiyonu durdurun.
4. Çözeltiyi 12–14 kDa membran ile 3–5 L damıtılmış suya karşı 40 °C'de 5–7 gün boyunca diyaalize edin ve suyu günlük olarak değiştirin.
   NOT: (Kritik adım) Tepki vermemiş metakrilik anhidriti çıkarmak için günlük su değişimini tam olarak garantileyin.
5. Diyalizlenmiş çözeltiyi 24 saat boyunca liyofilize edin ve liyofilize GelMA'yı 4 °C'de depolayın, ta ki kullanılana kadar.

2. GelMA hidrojel hazırlama

1. GelMA hidrojellerinden 10 mL partileri 5, 10 veya 15 w/v% ile hazırlayın.
2. 0,5, 1,0 veya 1,5 g liyofilize GelMA'yı 9,5 mL deiyonize suda 50 °C'de çözebilirsiniz.
3. Çözeltiyi 37 °C'ye soğutun.
4. 0.5 mL Irgacure 2959 fotobaşlatıcı çözeltisi (mutlak etanol içinde %0.5 w/v) ekleyin.
5. Çözeltiyi nazikçe karıştırın ve 0,22 μm selüloz asetat membran filtresinden steril filtre ile 37 °C sıcaklıkta tutun.

3. Kemik desellülerizasyonu

1. Femur başlarını yavaşça 25 °C'ye kadar eritir. Her bir femur başını ikiye kesin ve sonra daha küçük parçalara ayırın.
2. Parçaları 60 °C'de steril damıtılmış suya batırın ve 15 dakika (40 kHz, sürekli) sonikasyon yapın.
3. Örnekleri 300 mL damıtılmış suyla 60 °C'de önceden ısıtılmış suyla 200 rpm'de 5 dakika çalkalayın.
4. 1850 × g sıcaklıkta 25 °C'de 15 dakika boyunca santrifüj yaptı. Yıkama ve santrifüj adımlarını üç kez tekrarlayın.
5. Doku, %3 hidrojen peroksit ve %0,02 peroksiasetatik asit içeren bir çözelti içinde 60 °C'de 10 dakika boyunca sonikasyon (40 kHz, kesintili) ile sterilize edilir.
6. Dokuyu %70 etanol ve sonikat (40 kHz, sürekli) içeren 300 mL'ye 21 °C'de 10 dakika boyunca aktarın.
7. Örnekleri 300 mL damıtılmış suyla iki kez yıkayın, 200 rpm'de 60 °C'de 10 dakika çalkalayın ve 1850 × g'de 25 °C'de 15 dakika santrifüj yapın.
8. Önce kemiği -80 °C'de 4 saat önceden dondurun, ardından decellularize kemiği geniş tabanda 24 saat boyunca liyofilize ederek dengeli kurumayı sağlar ve -40 ila -60 °C arasında 0,05 mbar'da aşırı örnek yüksekliği önlenir.
   NOT: (Kritik adım) Eksik liyofilizasyonu önlemek için numunenin kap içinde 2–3 cm yüksekliği geçmediğinden emin olun.

4. Kemik mikropartikül hazırlığı

1. Decellularize kemik parçalarını 250 mL Erlenmeyer şişesine sterilizasyon çözeltisine yerleştirin ve homojenizatör kullanılarak homojenize ederek tekdüze beyaz bir çözelti elde edilene kadar (Ek Video 1).
2. 1850 × g sıcaklıkta 25 °C'de 15 dakika boyunca santrifüj yapın, üst yüzeyi atın ve pelleti 200 rpm'de 200 rpm'de çalkalama altında 300 mL damıtılmış suyla 25°C'de iki kez 10 dakika boyunca yıkayın. 1850 × g sıcaklığında 25 °C'de 15 dakika boyunca son santrifüj yapın.
3. Elde edilen malzemeyi 48 saat boyunca liyofilize edin (-40 ila -60 °C arasında 0,05 mbar) ve kullanılana kadar -80 °C'de saklanın.
4. Liyofilize kortikal veya meduller kemik, sterilize edilmiş seramik harç kullanılarak mekanik olarak öğütülen ve ince toz elde edilene kadar (Şekil 1).
5. Tozu 200 μm'lik bir ağ veya elekten geçirin, son malzemeyi tartın ve -80 °C'de saklayın.
   NOT: (Kritik adım) Toplama ve yanlış parçacık boyutu seçimini önlemek için tozun tamamen kuru olduğundan emin olun.

Ek Video 1: Kemik homojenleştirme prosedürü. Homojenizatör kullanılarak hücresizleştirilmiş kemik parçalarının homojenleştirilmesi ve tekdüze beyaz süspansiyon üretilene kadar. Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 1: Kemik mikropartikül hazırlanması. (A) OV5 homojenizatörü ile homojenizasyon ve -80 °C'de depolama sonrası decellularize kemik parçaları. (B,C) Decellularize kemiği ince toz haline getirmek için kullanılan sterilize seramik harç. (D) Elemeden sonra son decellularize kemik mikropartikülleri. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

5. Kemik jeli üretimi

1. 10 w/v% GelMA hazırlamak için 1 g GelMA'yı 50 °C'de 9,5 mL deyonize suda çözerek alın.
2. Çözeltiyi 37 °C'ye soğutun ve Irgacure 2959 fotobaşlatıcı çözeltisi ekleyin.
3. Çözeltiyi 37 °C'de tutun ve 0,22 μm filtre kullanılarak steril filtrasyon yapın.
4. %1 w/v'de decellularize kemik mikropartikülleri (DBMP) ekleyin.
5. Kemik jeli (BG) oluşturmak için homojen bir süspansiyon elde edilene kadar 40 °C'de dikkatlice yukarı ve aşağı karıştırın ve pipet yapın.
6. Vücut tansiyonunu 4 °C'de 2 haftaya kadar sakla.
   NOT: (Kritik adım) Hücre entegrasyonundan önce hidrojeli jelleşme sıcaklığının (≥37 °C) üzerinde tutarak erken katılaşmayı önleyin.

6. Osteosit birincil kültürü

1. Kemik iliği ekstraksiyonu ve ilk yıkama
   1. Femoral başının iç bölgesinden steril cerrahi aletlerle kemik iliği dokusu çıkarılıp doğranıyor (Şekil 2).
   2. Kıyılmış dokuyu steril bir Petri kabına aktarın.
   3. Dokuyu antibiyotik-antimikotik çözeltisi (100 μg/mL penisilin, 100 μg/mL streptomisin, 0,25 μg/mL amfoterisin) takviye edilmiş α-MEM kültür ortamı ile üç kez yıkayın.
   4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) ile bir kez durulayın.
      NOT: (Kritik adım) Hücre yaşamını korumak için doku alımı ile işleme arasındaki zamanı en aza indirin.
2. Enzimatik sindirim
   1. Dokuyu kollagenaz Tip I çözeltisinde 25 dakika boyunca 37 °C'de hafif bir çaltlama ile inkübe edin.
   2. HBSS ile yıkayın.
   3. 6.2.1–6.2.2 adımlarını iki ek kez tekrarlayın (üç toplam kollagenaz sindirimi).
   4. Dokuyu 0,5 mM etilen diamintetraasetik asit (EDTA) içinde 37 °C'de 25 dakika boyunca inkübe edin.
   5. HBSS ile yıkayın ve EDTA adımını iki kez daha tekrarlayın.
   6. Son bir kollagenaz Tip I sindirimi (37 °C'de 25 dakika) ve ardından HBSS yıkaması yapıldı.
      NOT: (Sorun Giderme) Eksik sindirim düşük hücre verimine yol açabilir; gerekirse enzimatik kuluçkiyi 5–10 dakika uzatın.
3. Hücre iyileşmesi ve kültürü
   1. Kolagenaz çözeltisini toplayın ve son HBSS yıkamasını 50 mL'lik santrifüj tüpüne aktarın.
   2. Oda sıcaklığında 1.000 × g boyunca 5 dakika boyunca santrifüj yapın.
   3. Süpernatantı atın ve pelleti 2 mL tam α-MEM ile yeniden askıya alın.
   4. Hücre süspansiyonunu iki T75 kültür şişesine tohumlayın ve %5 CO₂ ile 37 °C'de kuluçka yapın.
      NOT: Yeterli birleşim sağlanana kadar (Şekil 3) kültür ortamını her 2–3 günde bir değiştirin.

Şekil 2: Kemik iliği dokusu alımı. (A) Kalça protezi ameliyatından alınan femoral baş, hücre izolasyonu için kullanılan meduller bölgeyi gösteriyor. (B) Enzimatik sindirimden önce steril bir Petri kabına yerleştirilmiş öğütülmüş medullar kemik parçaları. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: Birincil osteosit kültürü. Osteositler, insan meduller kemiğinden izole edildikten sonra bir T75 içinde bir monotabaka içinde birikmiş ve çoğalmıştır. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

7. 3D hücre kültürü

1. BG hidrojel miktarını 37 °C'de önceden ısıtın.
   NOT: (Kritik adım) Çalışma alanının taslaklardan arınmasını sağlamak; soğutma erken jelleşmeyi hızlandırır.
2. Kültürlenmiş osteositleri ve santrifüjü 500 × g ile 5 dakika boyunca 15 mL'lik bir tüpte ayırın.
3. Pelleti 200 μL kültür ortamında yeniden süzülür ve BG hidrojeliyle karıştırarak nihai hücre yoğunluğu en az 1000 hücre/μL elde edilir (bundan sonra bioink olarak adlandırılır).
4. Bioink'in 50 μL'sini 1000 μL pipet ile çekin ve biriktirilene kadar 37 °C'de kalın.
5. Her bir yapı için biyomürekkepten 50 μL pipet kültür plakasının her kuyusuna (Ek Video 2); Oda sıcaklığında fiziksel jelleşme için yaklaşık 5 dakika bekleyin (Şekil 4).
6. Her kuyuyu 1 dakika boyunca 365 nm UV ışığına maruz bırakarak geri dönüşü olmayan çapraz bağlama (0.30 J/^{cm 2}) elde edin.
7. Kültür ortamı ekleyin ve yapıları gerekli zaman noktaları için %5_CO2 ile 37 °C'de kuluçka yapın. Her zaman noktası için ayrı bir plaka kullanın.

Şekil 4: 3D hücre kültürü yapı hazırlığı. Hücre yüklü GelMA içeren kuyu plakası, pipetlemeden hemen sonra ve UV (365 nm) çapraz bağlamadan sonra oluşturulur. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Video 2: 3D hücre yüklü yapıların hazırlanması. UV çapraz bağlamadan önce basit bir pipetleme tekniği kullanılarak hidrojel-hücre karışımlarının 12 kuyruklu bir plakaya biriktirilmesi. Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

8. Biyouyumluluk testi

1. Canlı/ölü lekelenme
   1. İstenilen zaman aralıkları için hücre yüklü iskeleleri kültürleyin.
   2. Nazikçe steril PBS ile yıka.
   3. Yapıları 30 dakika boyunca karanlıkta %0,2 etidiyum homodimer-1 (EthD-1) ve %0,05 kalsein içeren PBS içeren canlı/ölü çözeltiyle inkübe yapın.
   4. Kalsein (~495/515 nm) ve EthD-1 (~495/635 nm) için filtrelerle birlikte floresans mikroskobu ile hemen görüntü alın. Standart floressein izotiyosiyanet (FITC) ve Texas Red filtre setleri sırasıyla kalsein ve EthD-1 algılama ile uyumludur.
   5. Canlı hücreleri yeşil sitoplazmik floresans ile ve ölü hücreleri kırmızı nükleer floresans ile tanımlayın.
      NOT: Düzlemsel görüntüler ImageJ (Fiji) kullanılarak işlenebilir. Objektif lens, pozlama süresi, kazanç ve aydınlatma yoğunluğu karşılaştırılan tüm örnekler için sabit tutuldu ve sadece sinyal doygunluğunu önlemek için ayarlandı. Otofloresansın neden olduğu yanlış yorumu en aza indirmek için, her deneydeki tüm örnekler için aynı alım ayarları korundu ve hücresiz iskele/kemik mikropartikül yapılarının kontrol gözlemleri, biyomateryalle ilişkili arka plan floresans desenini tanımak için kullanıldı. Bu kontroller, görüntü yorumlama sırasında parçacık kaynaklı sinyalin gerçek yuvarlak hücre boyamalarından ayırt etmemizi sağladı.
2. Alamarblue nicellendirmesi
   1. Tam ortamda %5 alamarmavi çalışma çözeltisi hazırlayın.
   2. İskeleleri alamarBlue çözeltisinde 2,5 saat boyunca, 37 °C ve %5 CO₂ sıcaklıkta, ışıktan korunarak kuluçka edin.
   3. 100 μL süpernatantı 96 kuyuluğa üçlü bir plakaya, kontroller dahil olmak üzere aktarın.
   4. 360/40 nm uyarılma ve 460/40 nm emisyonda floresansı ölçün.
   5. Kontrollere floresans değerlerini normalleştirerek göreceli metabolik aktiviteyi belirleyin.

Sonuçlar

Birincil osteositler insan femoral başlarından başarıyla izole edildi ve ekstraksiyondan yaklaşık 5 gün sonra kültürde tespit edilebildi. Hücreler yıldız şeklinde bir morfoloji sergiliyor ve osteosit morfolojisine özgü birbirine bağlı ağlar oluşturarak başarılı izolasyon, bağlanma ve canlılığı doğrulamıştır (Şekil 5).

<...

Tartışma

Sunulan protokol, 3D kemik benzeri yapılar üretmek için erişilebilir ve çeviri bir yöntem sunar ve pahalı biyoyazıcılara veya özel matrislere bağımlılık gibi mevcut yaklaşımların temel sınırlamalarını ele^{alır 13}. GelMA'yı insan hücresizleştirilmiş kemik ekstrasellüler^{matrisi 8} ile birleştirerek, fizyolojik olarak ilgili yapılar yalnızca standart laboratuvar ekipmanlarıyla üretilebilir. Bu sadelik, kaynak sınırlı ortamlarda benimsenmesini sa...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
2-Hydroxy-4′-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone (Irgacure 2959)	Sigma-Aldrich	410896-10G	Hidrojel polimerizasyon fotoinisiyatör
AlamarBlue hücre canlılık reaktifi	Invitrogen	DAL1100	Kantitativ canlılık analizi için
Antibiyotik-Antımikotik (100´)	Gibco	15240-062	Kültür ortamı bileşeni
Hücre kültürü şişesi (T75)	SPL Life Sciences	70075	Osteosit kültürü için
Kolagenaz Tip 1	Gibco	17100-017	Kemiğin enzimatik sindirimi için
Konik tüp, 15 mL	SPL Life Sciences	50015	Hidrojel hazırlığı için
DarkDawn D15-365 nm	DarkDawn	-	Hidrojelin UV Çapraz Bağlanması için
DPBS, toz, kalsiyumsuz, magnezyumsuz	gibco	21600069	Hidrojel çözücü, LIVE/DEAD kiti çözücüsü
EDTA Disodyum Tuzu 2-HID	Winkler	ED-0760	Kemiğin enzimatik sindirimi için
Eppendorf santrifüj 5702	Eppendorf	5702000010	Kemiğin mikro partikül hazırlanması için
Etanol mutlak analiz için	Supelco	1,00,98,32,511	Kemiğin desellerizasyonu için (%70'e seyreltilmiş), fotoinisiyatör çözücüsü
Fetal boğa serumu	Gibco	A52567-01	Kültür ortamı bileşeni
Domuz derisi jelatini	Sigma-Aldrich	G1890-500G	Hidrojel bileşeni
HBSS (10´)	Gibco	14185-052	Kemiğin iliği örneklerinin yıkanması için
L-Askorbik asit 2-fosfat	Sigma-Aldrich	A8960-5G	Kültür ortamı bileşeni
LIVE/DEAD canlılık/sitotoksisite Kiti	Invitrogen	L3224	Kantitativ canlılık/sitotoksisite analizi için
MEM Alfa (1´)	Gibco	12571-063	Kültür ortamı bileşeni
Metakrilik anhidrit	Sigma-Aldrich	276685-500G	Hidrojel bileşeni
Mikro santrifüj tüpü	Citotest	4610-1844	AlamarBlue ve LIVE/DEAD boyalarının hazırlanması için
NuncIon delta yüzey	Thermoscientific	150628	Numunelerin ekimi için 12 kuyu plakası
OLYMPUS BX43 floresan ışık kaynağı Olympus U- LH100HG	Evident	U- LH100HG	Floresan analiz ışık kaynağı
RC-6 Plus santrifüj	Thermo Scientific Sorvall	46910	Kemiğin desellerizasyonu ve kemiğin mikro partikül hazırlanması için
Synergy HTX çoklu mod okuyucu	BioTek Instruments	-	Spektrofotometre
İğnesiz şırınga	NIPRO	SY3-WN-R-03	Hidrojel filtreleme için
Doku kültürü plakası 96 kuyu	Jet Biofil	TCP001096	AlamarBlue canlılık analizi için 96 kuyu.
Ultrasonik temizleyici	VWE	97043-958	Kemiğin sonikasyonu için