Bu protokol, hedefli ilaç dağıtım uygulamaları için CD47- ve integrin α4/β1–komodifiye makrofaj membranı kaplı poli(laktik-ko-glikolik asit) nanopartiküllerinin hazırlanması ve karakterizasyonunu sağlar.
Method Article
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| 7-aminoaktinomisin D (7-AAD) | Thermo Fisher Scientific (ABD) | A1310 | Akış sitometrisi canlı/ölü ayırımı için uygulanabilirlik boyası |
| Alexa Fluor 488-konjuge keçi anti-tavşan IgG | Thermo Fisher Scientific (ABD) | A-11008 | CD68 immünoflüoresans boyama için ikincil antikor |
| Fare karşıtı CD47 antikoru | Abcam (ABD) | ab214453 | CD47 ifadesini doğrulamak için Western blot analizinde kullanılır |
| Anti-fare integrin α 4 antikor (B-2) | Santa Cruz Biyoteknolojisi (ABD) | SC-376334 | Western blot analizinde integrin ve alfa doğrulamak için kullanılır; 4 ifadesi |
| Anti-fare integrin & beta; 1 antikor (A-4) | Santa Cruz Biyoteknolojisi (ABD) | SC-374429 | Western blot analizinde integrin ve beta doğrulamak için kullanılır; 1 ifadesi |
| ApoE-/- fareler | Jackson Laboratuvarı (ABD) | Yok | in vivo ateroskleroz modeli için kullanılıyor |
| BCA test kiti | Thermo Fisher Scientific (ABD) | 23225 | Protein konsantrasyonunu belirlemek için kullanılır |
| Siyah silikon plaka | Yok | Yok | Ex vivo görüntüleme için aort monte etmek için kullanıldı |
| CD47 plazmid (pcDNA3.1(+)) | Generay Biotech (Çin) | G0177361-1 | Aşırı ifade için fare Cd47 geni içerir |
| Kolşisin | Sigma-Aldrich (ABD) | C9754 | Nanopartiküllerde terapötik yük |
| Konfokal lazer tarama mikroskobu | Leica Microsystems | TCS SP8 | Floresans görüntüleme ve ortak lokalizasyon analizi için kullanılır |
| Sitrat tamponu (pH 6.0) | Thermo Fisher Scientific (ABD) | Yok | İmmünoflüoresans boyamada antijen alımında kullanılır |
| Diyaliz tüpü (MWCO 3.500 Da) | Sigma-Aldrich (ABD) | PURD35030 | Nanopartikül arıtma için kullanılır |
| Dimetil sülfoksit (DMSO) | Sigma-Aldrich (ABD) | D2447 | Nanopartikül hazırlamak için çözücü |
| DiI (1,1′-dioktadesil-3,3,3′,3′-tetrametilindokarbosiyanin perklorat) | Beyotime (Çin) | C1036 | Nanopartikül çekirdeğinin floresan etiketlenmesi |
| DiO (3,3′-dioktadesisiksakarbosiyanin perklorat) | Beyotime (Çin) | C1038 | Makrofaj zarının floresan etiketlenmesi |
| DiR | Beyotime (Çin) | Y239280 | in vivo floresans görüntüleme için kullanılır |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific (ABD) | D3571 | Floresans görüntüleme için nükleer karşı boyama |
| Dulbecco' s Modifiye Kartal Ortamı (DMEM) | Thermo Fisher Scientific (ABD) | 11965092 | Hücre kültürü ortamı |
| Dinamik ışık saçma analizörü (Zetasizer Nano ZS) | Malvern Panalytical (Birleşik Krallık) | Yok | Nanopartikül boyutu, PDI ve zeta potansiyelinin dinamik ışık saçılması (DLS) ölçümleri için kullanılır |
| ELISA kiti | R& D Systems (ABD) | Hedef sitokine bağlıdır | İltihap sitokinleri nicelendirmek için kullanılır |
| Endothelin-1 (ET-1) | Sigma-Aldrich (ABD) | E7764 | Integrin ve alfa uyarıcısı için kullanılır; 4/β 1 ifadesi |
| Fetal sığır serumu (FBS) | Gibco (Thermo Fisher Scientific, ABD) | 10091148 | Hücre kültürü ortamı için takviye |
| Akış sitometresi | BD Biosciences (ABD) | FACSCalibur | Floresans sinyal alımı için kullanılır |
| Akış sitometrisi analiz yazılımı (FlowJo v10.8.1) | BD Biosciences (ABD) | Yok | Akış sitometrisi veri analizi için kullanılır |
| İnsan göbek veni endotel hücreleri (HUVEC) | FuHeng Biyoteknolojileri (Çin) | FH1122 | In vitro hedefleme testleri için kullanılır |
| Görüntü analiz yazılımı (ImageJ) | Ulusal Sağlık Enstitüleri (ABD) | Yok | Nicel görüntü analizi için kullanılır |
| In vivo görüntüleme sistemi | PerkinElmer (ABD) | IVIS Lumina III | Tüm vücut floresans görüntüleme için kullanılır |
| İzopropanol (%60) | Sigma-Aldrich (ABD) | 34863 | Yağlı Kırmızı O boyama sırasında farklılaştırma için kullanılır |
| Lipofektamin 3000 | Thermo Fisher Scientific (ABD) | L3000001 | Transfeksiyon reaktifi |
| Manyetik karıştırıcı ve karıştırma çubuğu | Yok | Yok | Nanopartikül hazırlamada kullanılır |
| Masson' s Trikrom leke kiti | Abcam (ABD) | AB150686 | Kolajen boyama için kullanılır |
| Mini ekstruder | Avanti Polar Lipids (ABD) | 610000 | Membran ekstrüzyonu için kullanılır |
| Murine RAW 264.7 hücre hattı | FuHeng Biyoteknolojileri (Çin) | FH0328 | Makrofajların kaynağı |
| Mouse düz kas hücre hattı | FuHeng Biyoteknolojileri (Çin) | FH-Y063 | Güvenlik değerlendirmesi için kullanılıyor |
| Yağlı Kırmızı O | Sigma-Aldrich (ABD) | O0625 | Lipid boyama için kullanılır |
| Opti-MEM | Thermo Fisher Scientific (ABD) | 31985062 | Transfeksiyon için indirgenmiş serum ortamı |
| Oksitlenmiş düşük yoğunluklu lipoprotein (Ox-LDL) | Yiyuan Biyoteknolojileri (Çin) | YB-002 | Köpük hücre oluşumunu indüklemek için kullanılır |
| Penisilin ve dash; Streptomisin | Thermo Fisher Scientific (ABD) | 15140122 | Hücre kültürü için antibiyotik takviyesi |
| Fenilmetilsülfonil florür (PMSF) | Sigma-Aldrich (ABD) | 78830 | Proteaz inhibitörü |
| Fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS) | Thermo Fisher Scientific (ABD) | 10010023 | Yıkama ve seyreltme tamponu |
| Poli(laktik-ko-glikolik asit) (PLGA, 50:50; MW 90.000) | Dalian Meilun Biyoteknolojisi (Çin) | MB5649-1 | Nanoparçacık üretimi için polimer |
| Polikarbonat membran filtreleri (200 nm, 400 nm) | Whatman (Birleşik Krallık) | 800282 | Ekstrüzyon için Kullanım |
| Potasyum klorür (KCl) | Sigma-Aldrich (ABD) | P9333 | Liz tamponunun bileşeni |
| P3000 reaktifi | Thermo Fisher Scientific (ABD) | L3000001 | Transfeksiyon artırıcı |
| Döner mikrotom | Leica Biosystems (Almanya) | RM2235 | Parafin kesitleri için kullanılır |
| Şırınga pompası | Harvard Cihazı (ABD) | 70-3007 | Kontrollü nanoparçacık oluşumu için kullanılır |
| Geçirim elektron mikroskobu (TEM) | Thermo Fisher Scientific (ABD) | Talos F200S | Nanopartikül görüntüleme için kullanılıyor |
| Tris-HÇL | Sigma-Aldrich (ABD) | T2663 | Tampon bileşeni |
| Tümör nekroz faktörü alfa (TNF-α) | R& D Systems (ABD) | 410-MT | Endotel hücrelerini aktive etmek için kullanılır |
| Ultrasaf su | Milli-Q (Merck, ABD) | ZMQSV0T01 | Nanopartikül hazırlama ve diyaliz için kullanılır |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission