Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Kronik Apikal Periodontitte P. gingivalis/F. nucleatum, TLR4/MyD88/NF-κB Yolu üzerinden gebelik kısalmasıyla ilişkilidir

166 görüntülenme

DOI:

10.3791/70793

15 Mayıs 2026

Bu makalede

Özet

Kronik apikal periodontitle ilişkili ağız patojenleri (P. gingivalis, F. nucleatum) fare CAP modelleri ve insan trofoblast enfeksiyonu testleri kullanılarak değerlendirilir. Gebeliksel kısalma, plasenta inflamatuar aktivasyonla birlikte gözlemlenir ve bu da TLR4/MyD88/NF-κB sinyalleriyle uyumludur. Bakteriyel DNA, plasenta/damar dokularında tespit edilebilir olup, hematojenik bir bağlantı ve potansiyel müdahale hedeflerini destekler.

Özet

Kendiliğinden erken doğum (sPTB; 37. haftadan önce doğum) yenidoğan ölümünün başlıca nedenlerinden biri olmaya devam etmekte olup, vakaların önemli bir kısmında intrauterin enfeksiyon da rol oynamaktadır. Ortaya çıkan kanıtlar, Porphyromonas gingivalis ve Fusobacterium nucleatum gibi ağızdan patojenleri olumsuz gebelik sonuçlarıyla ilişkilendirir; ancak kronik apikal periodontiti (CAP) gebelik riski ile bağlayan mekanik yollar henüz tam olarak tanımlanmamıştır. Hamile C57BL/6J farelerinde, CAP kök kanal aşısıyla belirlenmiş ve bakteriyel süspansiyonlar (1 × 108 CFU/mL) kullanılarak kuyruk damarı meydan okuma modeliyle tamamlanmıştır. Gebelik süresi, plasenta histopatoloji, inflamatuar belirteçler ve bakteriyel DNA sinyalleri qPCR ile değerlendirildi. Paralel olarak, insan trofoblastları TLR4/MyD88/NF-κB ekseninin aktivasyonuyla uyumlu inflamatuar sinyalleri incelemek için P. gingivalis veya F. nucleatum (MOI = 50, 24 saat) ile maruz kaldılar. Kontrol gruplarına göre, CAP ile ilişkili gruplarda gebelik kısalması (medyan 19,5 vs 20,5 gün), plasentada inflamatuar değerlerin artması (yüksek IL-1β ve TNF-α dahil) ve inflamatuar hasarla uyumlu histopatolojik özellikler gösterildi. qPCR, plasenta ve damar dokularında bakteriyel DNA sinyallerinin varlığını da gösterdi. Trofoblast testlerinde, F. nucleatum P . gingivalis'e göre daha güçlü proinflamatuar yanıtlar üretmiş ve bu da artan NF-κB fosforilasyonu ile ilişkilidir. Bu bulgular toplamda, CAP ile ilişkili ağız patojenlerinin TLR4/MyD88/NF-κB sinyalizasyonu yoluyla plasenta iltihabını yönlendirerek gebeliksel kısalmaya katkıda bulunabileceğini ve enfeksiyonla ilişkili gebelik riskini azaltmak için potansiyel hedef olarak ağız–plasentalı mikrobiyal eksenin desteklenebileceğini göstermektedir.

Giriş

Kendiliğinden erken doğum (sPTB), gebeliğin 20–37. haftaları arasında tıbbi müdahale olmadan gerçekleşen doğum olaraktanımlanır 1. Kritik bir küresel halk sağlığı endişesi olarak, sPTB görülürlüğü gelişmiş ülkelerde yaklaşık %5–%9'dan, kaynakları sınırlı bölgelerde %12–%18'ekadar değişmektedir 2,3. Erken doğum ve komplikasyonları, 5 yaş altı çocuklarda ölüm oranlarının başlıca nedenlerinden biri olmaya devam etmekte olup, yılda yaklaşık bir milyon yeni doğumlu ölümeneden olur 4. Hayatta kalanlar genellikle hem solunum sıkıntısı s....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Xinjiang Tıp Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesi Hayvan Araştırmaları Etik Komitesi tarafından belirlenen etik kurallara (Onay No.: IACUC-20231121-13) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı rehberine (2011 baskısı) uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Ayrıca, bu çalışma ARRIVE yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm malzemeler (reaktifler, tüketim malzemeleri, ekipman ve yazılım) ile ilgili üretici bilgileri ve katalog numaraları, tekrarlanabilirliği kolaylaştırmak için Malzeme Tablosu'nda sağlanmıştır.

1. Bak....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

P. gingivalis veya F. nucleatum enfeksiyonu, farelerde gebelik sırasında kısalma ve serum proinflamatuar sitokinlerinin yükselmesiyle ilişkilidir
Anne kilo değişiklikleri, yenidoğan sonuçları ve gebelik süresi için temel istatistikler Tablo 1 ve Şekil 1'de özetlenmiştir. Anne kilo yönleri ve yenidoğan hastalıkları gruplar arasında anlamlı olarak fark etmedi (tek yönlü ANOVA, P > 0.05;

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Son yıllarda, biriken kanıtlar ağız sağlığı ile gebelik sonuçları arasında yakın bağlantılar olduğunu göstermiştir; bu da kronik apikal periodontit (CAP) ile erken doğumla ilişkili fenotipler dahil olmak üzere olumsuz gebelik sonuçları arasındaki olası ilişkilere daha fazla dikkat çekmektedir. Sistematik bir inceleme, mevcut klinik kanıt tabanının sınırlı ve heterojen olduğunu göstermekte, ancak genel olarak anne apikal periodontitiyle olumsuz gebelik sonuçları ar.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların beyan edecek rakip çıkarları yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Sichuan Eyaleti Kadın ve Çocukların Gelişim ve İlgili Hastalıkları Vakfı Key Laboratory tarafından desteklenmiştir (Hibe No. FYYFEJB2025002).

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Chromogenic Peroxidase SubstrateAgilent DakoK3468IHC için kromojenik peroksidaz substratı
Defibrinated sheep blood, sterileThermo Fisher (Remel)R54012Kan agar (5%) için katkı maddesi
Dental X-ray unit / radiography systemPlanmecaIntra (model)CAP onayı için periapik radyografiler
DNeasy Blood & Tissue KitQIAGEN69504Dokulardan/bakterilerden silika kolonu DNA ekstraksiyonu
E. coli DH5α Competent CellsTaKaRa9057Plazmid standardı yapımı için transformasyon
Eosin Y solution, alcoholicSigma-Aldrich (Merck)HT110132H&E boyası
Fetal Bovine Serum (FBS), qualified, AustraliaGibco (Thermo Fisher Scientific)10099-141Tamamlayıcı ortam için tamamlayıcı
Flowable resin composite3MFiltek Supreme Flowable 6010Mühürlemeden sonra restorasyon; ışık kürleme
Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum reference strainATCC25586Anaerob kültür; CAP ve kuyruk ven maruziyeti
GraphPad PrismGraphPad SoftwarePrism 9 (version)İstatistiksel analiz ve şekil oluşturma
Hematoxylin solutionSigma-Aldrich (Merck)HHS32H&E karşı boya
HTR-8/SVneo human trophoblast cell lineATCCCRL-3271In vitro enfeksiyon analizleri
Human IL-1β/IL-1F2 Quantikine ELISA KitR&D Systems (Bio-Techne)DLB50Hücre süpernatanı IL-1β ölçümü
Human TNF-α Quantikine ELISA KitR&D Systems (Bio-Techne)DTA00DHücre süpernatanı TNF-α ölçümü
Immobilon-FL PVDF membrane, 0.45 µmMillipore (Merck)IPFL00010Floresan Western blot transferi
IRDye 680RD Goat anti-Rabbit IgG (H+L)LI-COR925-68071Floresan ikincil antikor
IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG (H+L)LI-COR926-32211Floresan ikincil antikor
IκBα (44D4) Rabbit mAbCell Signaling Technology4812Birincil antikor (WB)
K-File (endodontic file)Dentsply Sirona (Maillefer)A012D015Kana aracı (örnek boyut 15)
LED dental curing light3MElipar DeepCure-S (model)20 sn kürleme (protokol başına)
Mouse IL-1β/IL-1F2 Quantikine ELISA KitR&D Systems (Bio-Techne)MLB00CSerum IL-1β ölçümü
Mouse TNF-α Quantikine ELISA KitR&D Systems (Bio-Techne)MTA00BSerum TNF-α ölçümü
MyD88 (D80F5) Rabbit mAbCell Signaling Technology4283Birincil antikor (WB)
NanoDrop One Microvolume UV-Vis SpectrophotometerThermo Fisher ScientificND-ONE-WDNA/RNA kantitasyonu
Near-infrared imaging systemLI-COROdyssey CLx (model)Floresan Western blot görüntüleme
NF-κB p65 (D14E12) Rabbit mAbCell Signaling Technology8242Birincil antikor (WB)
PBS, pH 7.4, without Ca2+/Mg2+Gibco (Thermo Fisher Scientific)10010-023Hücre yıkama ve reaktif hazırlanması
Penicillin-Streptomycin Gibco (Thermo Fisher Scientific)15140-122Antibiyotikler 
Pentobarbital sodium saltSigma-Aldrich (Merck)P3761Anestezi indüksiyonu (protokol dozajı)
Peroxidase blocking solutionAgilent DakoS2023IHC için endojen peroksidazı blokajı
Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAbCell Signaling Technology3033Birincil antikor (WB)
Porphyromonas gingivalis reference strainATCC33277Anaerob kültür; CAP ve kuyruk ven maruziyeti
PrimeScript RT Reagent Kit (Perfect Real Time)TaKaRaRR037AcDNA sentezi
Real-time PCR systemApplied BiosystemsQuantStudio 5 (model)16S hedeflerin qPCR kantitasyonu
Round bur (sterile)Dentsply SironaH1-010Maksiller birinci molar pulpa odacığı için erişim açıklığı
RPMI 1640 MediumGibco (Thermo Fisher Scientific)11875-093HTR-8/SVneo kültür ortamı tabanı
SYBR-safe DNA gel stainInvitrogenS33102DNA görselleştirme
TaKaRa MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0TaKaRa9760Standartlar için plazmid miniprep
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)TaKaRaRR820AqPCR master karışımı (boya bazlı)
TLR4 (D8L5W) Rabbit mAbCell Signaling Technology14358Birincil antikor (WB)
TRIzol ReagentInvitrogen15596-026Fenol–kloroform RNA ekstraksiyonu
Trypsin-EDTA (0.25%), phenol redGibco (Thermo Fisher Scientific)25200-056Hücre koparılması
T-Vector pMD19 (Simple)TaKaRa3271Standart eğriler için PCR ürün klonlaması
Universal dental adhesive3MScotchbond Universal Adhesive 26200İnokülasyondan sonra pulpa odasını mühürle

Kaynaklar

  1. American College of Obstetricians and Gynecologists’ Committee on Practice Bulletins—Obstetrics. Practice bulletin no. 171: Management of preterm labor. Obstet Gynecol. 128, e155-e164 (2016).
  2. Vogel, J. P., Chawanpaiboon, S., Moller, A. B., Watananirun, K., Bonet, M., et al.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Porphyromonas GingivalisFusobacterium NucleatumTLR4 YoluMyD88 SinyalizasyonuNF-KappaB AktivasyonuPlasental İnflamasyonPreterm DoğumOral Patojenler