Bağırsak otonom sinirlerinin seçici kesimleri için mare modeli

Özet

Bu protokol, üst mezenterik arteri tutarlı anatomik bir işaret olarak kullanarak, bağırsak innervasyonlu sempatik ve parasempatik sinirlerin kesin, seçici bir transeksiyonunu mümkün kılmayı amaçlamaktadır; böylece bağırsak fizyolojisi ve hastalığının otonom düzenlenmesi için odaklanmış ve tekrarlanabilir bir model sağlar.

Özet

Otonom sinirler, çeşitli fizyolojik fonksiyonları düzenlemek için büyük ölçüde antagonistik bir şekilde hareket eden sempatik ve parasempatik sistemleri içerir. Otonom innervasyonun bağırsak fizyolojisi ve patolojideki rollerine artan ilgi ile birlikte, bağırsak yönlendirilmiş sempatik ve parasempatik girdilerin hassas manipülasyonunu mümkün kılan deneysel modellere olan ihtiyaç artmaktadır. Burada, bağırsağı innerve eden sempatik ve parasempatik sinirleri seçici olarak aktarmak için cerrahi bir protokol sunuyoruz. Üst mezenterik arteri (SMA) tekrarlanabilir anatomik bir işaret olarak kullanılarak, bu yaklaşım bağırsak otonom sinir demetlerinin güvenilir şekilde tanımlanmasını ve ardından hedeflenmiş kesimin belirlenmesini sağlar. Ganglionektomi veya subdiafragmatik vagotomi gibi daha geniş denervasyon yaklaşımlarının aksine, bu yaklaşım bağırsak yönlendirilmiş otonom demetlerin anatomik olarak daha lokalize bir transeksiyonunu sağlamak için tasarlanmıştır ve bu da bağırsak dışı girişimin azalmasına yardımcı olabilir. Yaralanma kontrol edilebilir ve genellikle minimal kanamayla ilişkilidir, bu da prosedürel tutarlılığı ve ameliyat sonrası iyileşmeyi destekler. Ameliyat uygun mikrocerrahi eğitim gerektirse de, protokol uyarlanabilir ve kullanıcıların temel parametreleri belirli deneysel amaçlara uyarlamasını sağlar. Önemli olarak, bu model hem fizyolojik hem de hastalık koşullarında bağırsak fonksiyonunun düzenlenmesinde sempatik ve parasempatik sinirlerin rollerini araştırmak için pratik bir platform sağlar. Bu makale, yeni kullanıcıların araştırmalarında benimsemesini kolaylaştırmak için prosedürü ayrıntılı olarak tanımlamayı amaçlamaktadır.

Giriş

Gastrointestinal sistem, otonom sinir sisteminin (ANS) sürekli kontrolü altındadır; sempatik ve parasempatik yollar, bağırsak fizyolojisinin temel unsurlarını koordine eder; hareketlilik, salgı, epitel bariyer fonksiyonu ve bağışıklık^{homeostazı 1,2}. Kolonda, dışsal sempatik girdiler birden fazla hücresel bölme boyunca bölgeye bağlı etkiler yaratabilir; bu da geniş ANS bozulmalarının siteye özgü bağırsak^{fenotipleri 1'i} gizleyebileceğini vurgular. Buna karşılık, klasik olarak vagal sinyal ve aşağı akım kolinergik mekanizmalarla aracılık edilen parasempatik devreler, bağırsak bağışıklık dengesini korumada ve mukoza yanıtlarını şekillendirmede giderek daha fazla önemli olarak kabul edilir; bu da anatomik hassasiyetle sempatik ve parasempatik katkıları ayırabilen deneysel stratejileri daha da motive^{eder 2}.

Fizyolojik düzenlemenin ötesinde, otonom aktivite, kolorektal kanser (CRC) dahil olmak üzere bağırsak hastalıkları biyolojisinin önemli bir modifikatörü olarak ortaya çıkmıştır. CRC'deki son çalışmalar, β2-adrenerjik sinyal ile kanserle ilişkili fibroblastların sinir-stromal etkileşimleri pekiştirdiği ve tümör ilerlemesini teşvik ettiği çift yönlü sempatik sinir–mezenkimal programı göstermektedir; bu da sempatik devrelerin CRC^{patogenezi 3} ile fonksiyonel olarak bağlanabileceğine doğrudan kanıt sunmaktadır. Paralel olarak, kolinerjik sinyal iletişimi, ortotopik fare modelinde muskarinik reseptör 3'ün farmakolojik inhibisyonu ve kolinergik sinyalin bağışıklık noktası ifadesi ile diğer kötü huylu işaretlerle ilişkilendirilmesiyle CRC büyümesi ve tümör ilişkili bağışıklık özellikleriyle^{ilişkilendirilmiştir 4,5}. Önemli olarak, bağırsak hastalıkları üzerindeki otonom etkiler, psikolojik stres ve bağırsak mikrobiyotası gibi diğer modülatörlerle de yakınşabilir. Enterik sinir sistemi, stres sinyallerini bağırsak^{iltihabına iletebilir 6} ve mikrobiyal sinyaller, bağırsak-dışa sempatik nöronları ayarlayan bağırsak-beyin devrelerini aktif hale getirerek, sinir düzenlemesinin bağışıklık ve mikrobiyal ekolojiyle kesiştiği çoklu faktörlü bir^{çerçeveyi birlikte destekler 6,7}.

Bu birleşen kanıt çizgileri, hem fizyolojik hem de patolojik ortamlarda nedensel çıkarımı destekleyecek bağırsak yönlendirilmiş otonom etkileri yeterli anatomik hassasiyetle izole edebilen deneysel yaklaşımlara olan ihtiyacı vurgulamaktadır. Devre haritalama ve nöromodülasyondaki hızlı ilerlemelere rağmen, yaygın kullanılan birçok müdahale organ özgüllüğü açısından sınırlı kalır. Sistemik farmakolojik manipülasyon, kimyasal sempatektomi ve subdiafragmatik vagotomi, geniş otonom çıkışları etkileyebilir ve böylece bağırsak dışındaki bağışıklık ve metabolik asal noktaları değiştirebilir; bu da kolona özgü sinir girdilerine nedensel atfetmeyi^{zorlaştırır. 8}. Örneğin, vagal devreler inflamatuar sitokin^{üretimini 9} bastırabilir ve vagal stimülasyon pankreas endokrin fonksiyonunu ve β hücre dinamiklerini modüle edebilir; bu da yukarı yönlü veya seçici olmayan müdahalelerin bağırsak fenotiplerinin yorumunu karıştıran bağırsak dışı etkiler^{yaratabileceğini gösterir 10}. Bu sınırlamalar, fizyoloji ve patolojide kolon kısıtlı otonom mekanizmaları izole etmeye yönelik çalışmalar için özellikle önemlidir. Bu nedenle yöntemin genel amacı, farelerde bağırsak yönlendirmeli sempatik ve parasempatik liflerin anatomik olarak yönlendirilmiş, seçici bir transeksiyonunu mümkün kılmak, bağırsak otonom düzenlemesinin hedeften uzak etkisiyle sorgulanması için pratik bir model sağlamaktır.

Özetle, bu protokol diğer karın organlarının otonom innervasyonunda minimum bozulma ile daha hassas bir fare bağırsak otonom denervasyon yaklaşımı rapor eder; böylece bağırsak dışı organ etkilerinden kaynaklanabilecek önyargıyı azaltarak yorumlanabilirliği artırır.

Protokol

Tüm hayvan prosedürleri, Pekin Dostluk Hastanesi, Capital Medical University (NO. 24-2026) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı. Bu çalışmada yetişkin yabani tip erkek C57BL/6J fareleri kullanıldı (8–10 haftalık, 20–30 g). Reaktifler ve ekipmanlar hakkında ayrıntılı bilgiler Malzeme Tablosu'nda verilmiştir.

Dahil etme kriterleri: Her deneyde aynı suş, cinsiyet ve yaş aralığından fareler biyolojik değişkenliği en aza indirmek için kullanıldı. Sadece normal aktivite, bakım davranışı, yiyecek ve su alımı ile alışma döneminde dışkı çıkarımı gösteren sağlıklı hayvanlar dahil edilmiştir. Ayrıca, fareler ameliyattan önce en az 7 gün hayvan tesisine alıştırıldı.

Dışlama kriterleri: Ameliyat sırasında kontrolsüz kanama veya büyük damar hasarı, bağırsak perforasyonu veya hayatta kalmaya uygun olmayan önemli doku hasarı durumunda fareler hariç tutuldu. Ameliyattan 2 saat içinde anestezi hareketine geçmeden iyileşmeyen hayvanlar da hariç tutuldu. Ek dışlama kriterleri arasında kalıcı yara açılması, şiddetli enfeksiyon veya 48 saat içinde %15'in üzerinde kilo kaybı veya herhangi bir 72 saat içinde %20'nin üzerinde kilo kaybı gibi ameliyat sonrası komplikasyonlar yer aldı. Sinir dalının cerrahi yanlış tanımlandığı ve sonradan histolojik değerlendirmeyle doğrulanan fareler de çalışmadan çıkarıldı.

1. Ameliyat öncesi hazırlık

1. Tüm cerrahi aletleri sterilize edin.
2. Ağrı duyarlılığını önlemek için ameliyattan 30 dakika önce tüm farelere önleyici analjezi uygulanır. Meloksikam (5 mg/vücut ağırlığı) deri altı enjeksiyonla uygulanır.
3. Isıtma pedini 37 °C'ye kadar önceden ısıtın ve cerrahi platformun altına yerleştirin.
4. Cerrahi alanı (anestezi indüksiyon odası dahil) %75 etanol ile sprey ve kağıt havlularla iyice silin. Indüksiyon odasının altına yeterli miktarda kağıt havlu yerleştirin.
5. Anestezi indüksiyon odasını ve tüpünü inceleyerek sızıntı olmadığını kontrol edin. Yeniden doldurun ve yeterli izofluran stokunu sağlayın. Anestezi %3–%3,5 izofluran ile 1 L/dakika oksijenle indük edilir. Fareyi sürekli izleyin; Cerrahi düzlem genellikle 1–2 dakika içinde ulaşılır.
6. Faresi, dört uzuvu tamamen açık şekilde sırtüstü pozisyona yerleştirin ve hipoalerjenik bantla sabitleyin. Burun konusunu takın ve sabitleyin. İzofluranı bakım için %1,5–%2,5'e indirin. Anestezik derinliğini, pedal yoksunluk tepkisi olmaması (ayak sıkıştırmasına reaksiyon olmaması) ve düzenli solunum (55–65 nefes/d) ile değerlendirin.
   NOT: Uzun süreli mikrocerrahi işlemler sırasında, anestezi derinliği ilk cerrahi düzlemin ötesinde sürekli olarak izlenir. Pedal çekilme refleksi ve solunum hızını her 5–10 dakikada bir değerlendirmenin yanı sıra, solunum düzenini (örneğin düzenlilik ve derinlik) ve kalp atış hızını görsel gözlem veya torakik duvarla temas yoluyla izliyoruz. Mukoz zarı rengi (patilerden veya dudaklardan ölçülür) de periyodik olarak yeterli oksijenlenme sağlanması için kontrol edilir. Farede solunum hızının artması (>80 nefes/dakika), spontan hareketler veya pedal refleksinin geri dönmesi gibi ışık anestezi belirtileri gösterirse, izofluran konsantrasyonu %0,25–%0,5 aralıklarla artırılır ve yeterli cerrahi düzlem sağlanır. Buna karşılık, solunum sığ veya düzensiz hale gelirse veya kalp atış hızı belirgin şekilde düşerse, izofluran %0,25–%0,5 oranında azalır ve stabil kardiyorespiratuar fonksiyon geri döner. Bu dinamik ayarlama, farenin işlem boyunca uygun anestezik derinliğinde kalmasını sağlarken kardiyorespiratuar depresyonu en aza indirir.
7. Anestezi altında korneanın kurumasını ve yaralanmasını önlemek için her iki göze oftalmik merhem uygulayın.
8. Karın tüylerini, kasık simfiz seviyesinden kostal kenarın altına kadar elektrikli tıraş makinesi ile tıraş edin. Sonra, cerrahi platformu stereomikroskop altında hareket ettirin.
9. Cerrahi bölgeyi, povidon-iyot sürüntleriyle dışarıya, merkezden periferiye doğru dezenfekte ederek xiphoid'in altından pubik simfize kadar ve yanlardan her iki yana kadar kaplayın. 3 kez tekrarlayın. Sonra %70 etanol ile aynı şekilde sil. Sahada gevşek tüylerin olmadığından emin olun.
10. Cerrahi maske ve tek kullanımlık şapka tak, steril bir cerrahi önlük giyin ve steril eldiven takın.
11. Faresi steril bir pencereli perdeyle örtün. Fenestrasyonu yaklaşık 2 × 3 cm olarak ayarlayın ve ameliyat alanını tamamen açığa çıkarmak için karın orta hattıyla hizalayın. Perdenin dört köşesini sabitleyin.

2. Laparotomi ve maruz kalmak

1. Steril forseps kullanarak, kapub simfizine doğru küçük bir deri kıvrımını nazikçe kaldırın. Steril keskin uçlu makasla uç noktasında küçük bir ilk kesi (~0,3 cm) açın, ardından deri kesisini orta çizgi boyunca 1,5–2,0 cm boyunca kranial olarak uzatın.
   NOT: Keskin makas uçlarını ilk açıklığa yerleştirdikten sonra, uçları yukarı doğru eğin ve derin kesip karın kaslarını veya organlarını çok derin kesmekten kaçınmak için deri alt yüzeyinde kontrollü bir "itme-kesim" yapın. Pens ve makasla gevşek deri altı bağ dokusunu karın duvarı kaslarından kesip kesin. Sonraki maruziyeti kolaylaştırmak için cilt kesisinden biraz daha geniş diseksiye yapın.
2. Xiphoid sürecine yaklaşık 0,5 cm kaudal mesafede, steril ince forseps uçlarını dikkatlice linea alba'ya yerleştirin ve küçük bir doku çadırını kaldırın.
3. Steril, keskin uçlu makas kullanarak, kaldırılan bölgede küçük bir açıklık (2–3 mm) oluşturun. Bu noktada, pürüzsüz periton ve/veya alttaki organlar (örneğin, karaciğer lobu) görünür olmalıdır.
4. Steril küt uçlu bir makas bıçağını peritoneal boşluğa sokun, karın duvarına yakın tutun. Doğrudan görselleştirmede, kesiyi linea alba boyunca kafatası yönüne doğru uzatın, toplam uzunluk deri kesisiyle eşleşene kadar.
   NOT: Makasın ucunu yukarı doğru açık tutun ve makasın altında bağırsak halkaları veya kan damarları olmadığından emin olmak için sadece doğrudan görüş altında ilerleyin.

3. Üst mezenterik arter ve sinir kesiminin tanımlanması

1. Karın duvarını steril bant şeritleriyle yan tarafa nazikçe geri çekerek peritoneal boşluğu ortaya çıkarın.
2. Karın duvarına pamuklu çubukla orta düzeyde basınç uygulayarak bağırsakların dışa çıkmasını sağlayın. İnce bağırsağı, kolonu ve sekumu farenin sol tarafına nazikçe hareket ettirin.
   NOT: Açıkta kalan bağırsağı steril pamuk pediyle veya sıcak (≈37 °C) steril tuzlu suyla nemlendirilmiş gazlı bezle örtün, böylece doku kuruması ve ısı kaybı önlenir.
3. Sağ elinizle, steril, nemli pamuk çubukla (veya kör uçlu mikro pensle) kullanarak mide, onikibarı ve kolonu sol üst kvadranta doğru nazikçe hareket ettirin. Omurganın önündeki abdominal aort bu aşamada net görünür olmalı, bazen az miktarda retroperitoneal yağla kısmen kaplanmış olmalıdır.
4. Sol böbrek venini ve çölyak gövdesini tespit edin. Üst mezenterik arter (SMA), karın aortasının ön duvarından tek bir arterial dal olarak ortaya çıkar; genellikle çölyak gövdesine ~2–4 mm kuysal mesafede ve sol böbrek veninin seviyesinden biraz daha yukarıda bulunur.
   NOT: Sol böbrek damarı, karın aortasının ön tarafında yatay olarak akan koyu ve kalın bir damardır ve ardından alt vena kavaya doğru akmaktadır. Çölyak gövdesi genellikle abdominal aortanın ön duvarından çıkan ilk büyük arteriyal daldır; sol böbrek veninin hemen kraniyal (üstünde) konumlandırılır ve genellikle karaciğer, dalak ve sol mide arterlerine üçlüğe ulaşır. Buna karşılık, SMA karaciğer/dalak dalları olmayan tek bir gövdedir. Mezenterinin köküne girer ve jejunum, ileum ve proksimal kolonu sağlar; Mezenteriye doğru izlenmesi, doğru tanımlamayı doğrulamaya yardımcı olabilir.
5. SMA'ya paralel uzanan süt beyazı, kordon benzeri demetleri hedef sinir lifleri olarak tanımlayın. SMA'nın üstünde bulunan sinir demeti parasempatik liflere karşılık gelirken, SMA'nın altında bulunan demet sempatik liflere karşılık gelir (Şekil 1A).
6. Mikro forseps ve mikro makas kullanarak, SMA'yı çevreleyen yağ ve lenfatik dokuyu çok nazikçe ayırarak sinir liflerini tamamen açığa çıkarın. Sempatik veya parasempatik sinir demetini mikro forsepslerle nazikçe kaldırarak SMA'dan ayırın, ardından hızlı ve dikkatli bir şekilde kesin (Şekil 1).
   NOT: Diseksiyon sırasında, forseps ve makas uçlarını arterin yan duvarına doğru tutun ve aletleri dikey olarak daha derin düzlemlere yönlendirmekten kaçının. Büyük bir kanama meydana gelirse (örneğin, steril pamuk çubuğuyla 30 saniye içinde kontrol edilemeyen SMA veya karın aortasından kanama) işlem derhal sonlandırılır. Hayvan, anestezi altındayken insancıl bir şekilde ötenazi edilir ve sonraki tüm analizlerden hariç tutulur. Bu uç nokta, gereksiz acıyı önlemek için IACUC tarafından onaylanmış insani son noktalara uygun olarak önceden tanımlanmıştır. Yaygın ameliyat dışı komplikasyonlar için ek sorun giderme rehberi Ek Dosya 1'de verilmiştir.

4. Karın boşluğunun kapanması

1. Tüm karın içi gazlı bez/pamuk pedleri çıkarın. Karın boşluğunda aktif kanama olup olmadığını dikkatlice inceleyin, özellikle SMA diseksiyon alanı, sinir kesim bölgesi ve karın duvarının kesik kenarlarına dikkat edin.
2. Periton boşluğunu az miktarda sıcak steril tuzlu suyla (0,5–1,0 mL) nazikçe sulayin, ardından steril kuru pamuklu çubukla fazla sıvıyı dikkatlice uzaklaştırın.
3. Karın boşluğunda yabancı madde kalmamasını sağlamak için bir alet ve gazlı bez/pamuk sayımı yapın.
4. 6-0 emilebilir dikiş kullanarak, periton ve kas katmanını kesinin bir ucundan başlayarak sürekli akan bir dikişle kapatın. Her ısırık, her iki tarafta periton ve karın duvarı kaslarını içermelidir.
   NOT: Yara kenarlarını forsepsle kaldırın ve her dikişi doğrudan görselleştirme altına yerleştirin, böylece alttaki bağırsak veya omentum takılmasın. Gerekirse, nemli pamuklu çubukla bağırsakları kesiden nazikçe uzaklaştırın.
5. Deriyi 5-0 ipek örgülü emmeyen dikiş kullanarak kesintili dikişlerle kapatın. Dikişleri ~2 mm aralıklarla yerleştirin ve orta gerilimle düğümler bağlayın; iskemiyi önlemek için deri kenarlarını yaklaşık olarak (ama boğmadan) yapın.
   NOT: Kötü yara pozisyonu kesi fıtığına yol açabilir. Kas katmanının sıkıca kapalı olduğundan ve deri kenarlarının iyi hizalandığından emin olun.
6. Kapalı deri kesisini bir kez daha povidon-iyot sürüntüsüyle nazikçe temizleyin.
7. Fareyi (kulak veya kuyruk) ameliyat tarihiyle işaretleyin.
8. Burun konusunu çıkarın ve fareyi 37 °C ısıtma pedine (tek gövdeli) yerleştirilmiş temiz, yumuşak bir kurtarma kafesine taşıyın. Hayvanı yan yatmada tutarak aspirasyon riskini azaltın.
   NOT: Hipotermiyi önlemek için ısıtma pedinin 37 °C'de sabit kaldığını doğrulayın. Gerekirse, hacim desteği için 1 mL sıcak steril tuzlu suyu deri altına verin.
9. Fare tamamen bilinç kazanana ve bağımsız olarak yatağa yatana kadar sürekli izleyin.
   NOT: Ameliyat sonrası analjezi, ameliyattan sonra 48 saate kadar her 24 saatte bir kez meloksikam (5 mg/kg, deri altımı) ile devam edildi ve kalıcı ağrı veya sıkıntı belirtileri tespit edilirse ek veteriner değerlendirmesi yapıldı.

5. Ameliyat sonrası izleme parametreleri

NOT: Ameliyat sonrası izleme, ilk 72 saat boyunca günde iki kez ve çalışma süresince günlük olarak gerçekleştirildi. Değerlendirilen parametreler şunları içeriyordu:

1. Genel görünümü, bakım, kürk durumu, duruş ve aktivite seviyesini takip edin.
2. Vücut ağırlığını günlük olarak ölçün; 48 saat içinde ameliyat öncesi vücut ağırlığının %15'inden fazla kaybı veya herhangi bir 72 saat içinde %20'sini insancıl bir son nokta olarak tanımlayın.
3. Ameliyat bölgesini enfeksiyon, açılma veya akıntı belirtileri açısından inceleyin.
4. Davranışları, spontan hareketleri, ele geçirmeye tepki ve sıkıntı belirtilerini (örneğin, ses çıkarma ve huzursuzluk) takip edin.
5. Veteriner personelinin analjezi göstermesine rağmen sürekli ağrı veya sıkıntı belirtileri gösteren herhangi bir hayvanı değerlendirin ve gerekirse hayvanı ötenazi yapın.

Sonuçlar

SMA'yı tutarlı bir anatomik işaret olarak kullanarak, bağırsak otonom sinir demetleri damara paralel uzanan ince, inci beyazı yapılar olarak tanımlanabilir. SMA'ya göre anatomik konumlarına dayanarak, üst demet varsayılan parasempatik demet, alt demet ise varsayılan sempatik demet olarak adlandırılmıştır (Şekil 1A,D). Hedef demet net görselleştirildiğinde ve tamamen kesildiğinde, transeksiyon düzlemini körpürleyen kalıntı lifler olmadığında ...

Tartışma

Murin SMA, çölyak gövdesinin alt kısmındaki abdominal aortanın ön duvarından çıkar ve bağırsak¹⁴ dahil olmak üzere büyük abdominal visserlere arteriyel giriş sağlar. SMA'nın önünde kolon ve mezenterisi bulunurken, arka tarafta sol böbrek veni ve karın aortası ile yakından ilişkilidir; Üst mezenterik ven genellikle sağ tarafında ilerler. Farelerde SMA son derece hassastır ve kritik organlar ile büyük damarlarla çevrilidir. Önemli olarak, eşit derecede ince sempatik...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
5-0 silk braided non-absorbable suture	Ethicon	W500
6-0 PGA Suture	Jinhuan	CR631
Anesthesia Induction Chambers	RWD Life Science	V100
Animal Anesthesia Machine	RWD Life Science	R500IP
Anti-Choline Acetyltransferase antibody	Abcam	ab181023
Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment	Akorn	59399-162-35
C57BL/6J Mice	Shanghai Model Organisms CenterTechnology	SM-001
Cholera Toxin Subunit B (CTB), Alexa FluorTM 555 Conjugate	Thermo Scientific	C34776
Compound Microscope	Yuyan Instruments	512
DAPI and Hoechst Nucleic Acid Stains	Invitrogen	D3571
Fast Green	Thermo Scientific	F7252
Fine Hemostatic Forceps	Jinzhong surgical instrument	JCG020
Hypoallergenic Surgical Tape	3M Blenderm	70200419342
Isoflurane	RWD Life Science	R510-22-10
Micro Forceps(Curved)	Jinzhong surgical instrument	WCC200
Micro Forceps(Straight)	Jinzhong surgical instrument	WCC190
Micro Needle holders	Jinzhong surgical instrument	WBA050
Micro scissors	Jinzhong surgical instrument	Y3F010
Micro syringe	Hamilton	7632-01
Ophthalmic Scissors(pointed tip)	Jinzhong surgical instrument	JC2303
Ophthalmic Scissors(rounded tip)	Jinzhong surgical instrument	JC2303
Povidone-Iodine Swabstick	Winner Medical	206
Tissue and Cell Fixative (4% Paraformaldehyde, PFA)	MedChemExpress	HY-DY3003
Tissue OCT-Freeze Medium	Sakura	C2077
Tyrosine Hydroxylase (E2L6M) Rabbit Monoclonal Antibody	Cell Signaling Technology	58844S