Yöntem makalesi

Asit Kaynaklı Het-1A Hücre Modelinin Oluşturulması ve MiR-107/FGFRL1 Ekseninin Fonksiyonel Analizi

DOI:

10.3791/70874

⸱

29 Mayıs 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Gastroenterology, Longyan First Hospital, 2Department of Gastroenterology, The Affiliated TCM Hospital of Guangzhou Medical University, 3Department of Gastroenterology, The Affiliated TCM Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, 4Department of Gastroenterology, Jiaozhou Central Hospital of Qingdao, 5Clinical Nutrition Department, Jiaozhou Central Hospital of Qingdao, 6Department of Gastroenterology, People's Hospital of Wenshang County

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, Het-1A hücreleri kullanılarak HCl kaynaklı reflü özofajit hücre modeli oluşturmak ve moleküler ile hücresel testlerle miR-107/FGFRL1 eksenini incelemek için bir protokol sunuyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kapsamlı kanıtlar, mikroRNA'ların (miRNA'ların) gastrointestinal patofizyolojik süreçlerde kilit rol oynadığını göstermektedir. Ancak, reflü özofajitindeki (RE) spesifik mekanizmaları hâlâ yeterince anlaşılmamaktadır. Burada, asit kaynaklı RE modeli oluşturmak ve miR-107/FGFRL1 eksenini moleküler ve hücresel testlerle incelemek için bir protokol sunuyoruz. R E (n=94) ve sağlıklı kontrol (n=94) hastalarından serum toplama dahil olmak üzere klinik örnek analizleri yaptık, ardından RT-qPCR ile nicel tespiti yapıldı. In vitro, hidroklorik asite maruz kalan Het-1A hücreleri kullanılarak asit kaynaklı bir hasar modeli oluşturuldu. Ayrıca, hücrelerin fonksiyonel doğrulaması MTT hücre canlılık testleri ve çift lusiferaz raporlayıcı testleri kullanılarak gerçekleştirildi. Temsilci sonuçlar, miR-107'nin RE hastalarının serumunda ve asitle tedavi edilmiş Het-1A hücrelerinde aşağı regülasyonda olduğunu göstermektedir. miR-107, FGFRL1'i doğrudan hedefleyerek hidroklorik asit kaynaklı Het-1A hücre canlılığı ve iltihap seviyelerindeki değişiklikleri aracılık etti ve FGFRL1 hedefleme yoluyla hücre canlılığı ve iltihaplanma değişiklikleriyle ilişkilidir. Bu protokol, RE'de miR-107/FGFRL1 aracılı mekanizmaların araştırılmasını sağlar. Bu yaklaşım, RE'de moleküler mekanizmaların incelenmesi için tekrarlanabilir bir platform sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Reflü özofajit (RE), mide asidi ve mide içeriğinin tekrar tekrar özofagusa geri döndüğü, bu da özofagus mukozasında iltihaplanma, erozyon veya hatta ülserasyona yol açan bir sindirim hastalığıdır ve bu şiddet şiddeti reflü malzemenin doğası, reflü sıklığı ve özofagus mukozasının direnciile ilişkilidir 1,2. Gastroözofageal reflü hastalığının (GERD) çok yaygın bir türü olan RE, giderek artan bir sisinlik ve giderek genişleyen küresel etkigösterir 3. RE'nin spesifik olmayan klinik görünümü genellikle yanlış teşhis veya yetersiz teşhise yol açar. Ayrıca, hastalığın tekrarlayan seyrisi sıklıkla daha ciddi gastrointestinal komplikasyonlara ilerler ve etkilenen bireyler üzerinde önemli fizyolojik ve sosyoekonomik yükleroluşturur 4. RE'nin standart klinik yönetimi genellikle farmakoterapiyi (örneğin proton pompası inhibitörleri), minimal invaziv endoskopik işlemler veya cerrahi 5,6 içerir. Ancak, terapötik etkinlik genellikle ilaçlara bağlı yan etkiler ve prosedürel morbidite nedeniyle sınırlıdır. RE'nin moleküler patogenezi hakkında eksik anlaşılma nedeniyle, altta yatan mekanizmalarının açıklanması yeni terapötik hedefleri ortaya çıkarabilir ve RE, daha etkili, hastaya özgü tedavi stratejilerinin geliştirilmesine yol açabilir. Bu protokol, in vitro RE modeli oluşturmayı ve moleküler ve hücresel testler kullanarak miR-107/FGFRL1 ekseninin düzenleyici rolünü araştırmayı amaçlamaktadır.

MikroRNA'lar (miRNA'lar), mRNA çevirisini dizilere özgü bağlanma yoluyla düzenleme yetenekleriyle birçok insan hastalığının patogenezine katıldıkları kapsamlı şekildebelgelenmiştir. Örneğin, miR-3682-3p, FHL1 ifadesini düzenleyerek Wnt/β-katenin yolunu etkiler ve bu da özofagealkanserin 8 ilerlemesine yol açar. miR-21-5p ve miR-223-3p, aşağı yönlü hedef genlerin ekspresisini aracılık ederek eozinofilik özofajitin (EOE) seyrinietkiler 9. miR-107, insanlarda kromozom 10 üzerinde kodlanan bir miRNA'dır ve çeşitli tümörjenik süreçlerdeki etkileri nedeniyle önemli araştırma ilgisi çekmiştir(10,11,12). Mevcut kanıtlar, miR-107'nin mide kanseri ve özofageal kanserde bir sıcak nokta aracıolduğunu göstermektedir 13,14, ancak neoplastik olmayan sindirim hastalıklarındaki patofizyolojik işlevleri ve düzenleyici mekanizmaları kapsamlı şekilde incelenmelidir. Ancak, RE'de miR-107 fonksiyonunu incelemek için uygun in vitro modeller ve entegre analitik yaklaşımlar sınırlı kalmaktadır.

RE15'te yemek borusu mukoza hasarından sorumlu birincil patojenik faktör olarak gastrik asit reflüsü yaygın olarak kabul edilir. Son çalışmalar, RE'nin patojenik mekanizmasının doğrudan mide sıvılarının mukoza hasarını değil, özofagus epitel hücrelerinden kemokin salınımını uyararak inflamatorik aracılı doku hasarı zincirinibaşlattığını öne sürmektedir 16. Bu sürecin altında yatan moleküler mekanizmaları araştırmak için, Het-1A hücrelerini hidroklorik asitle işleyerek asit reflüsünün neden olduğu epitel hasarının temel patolojik özelliklerini kopyalayan bir in vitro asit hasar modeli oluşturduk. Bu yaklaşım, in vitro asit kaynaklı epitel yaralanmasını taklit etmek için kontrollü ve tekrarlanabilir bir sistem sağlar. MiR-107'nin RE ile ilişkili iltihaplanma ve apoptozdaki düzenleyici rolünü ve tanısal potansiyelini sistematik olarak inceledik. Bu protokol, özofagus epitel hücrelerinde inflamatuar ve apoptotik yolların miRNA aracılı regülasyonunun araştırılmasını sağlar. Geleneksel in vivo hayvan modelleri ve birincil hücre kültürleriyle karşılaştırıldığında, HCl ile indüklenen Het-1A modeli, miR-107 fonksiyonel testleriyle birleşerek olağanüstü kararlılık, kontrol edilebilirlik ve tekrarlanabilirlik sunar; bu da asit kaynaklı epitel hasarı, miRNA aracılı transkripsiyon sonrası düzenleme ve özofagus hücrelerinde iltihablı yanıtların incelenmesi için özellikle uygundur17. Bu yöntem, özellikle asit kaynaklı epitel hasarının moleküler mekanizmalarını ve miRNA aracılı regülasyonu inceleyen çalışmalar için uygundur. Hastaların klinik analizleriyle birleştirildiğinde, bu yaklaşım klinik verilerle birleştirilerek RE'de mekanik çalışmaları destekleyebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hasta alımı

  1. Çalışmayı Helsinki Bildirgesi'ne uygun olarak yürütmek.
  2. Qingdao Jiaozhou Merkez Hastanesi Etik Komitesi'nden araştırma protokolü için onay alın (Onay Numarası: 2023033-01).
  3. Tüm katılımcıların çalışmaya başlamadan önce imzalı bilgilendirilmiş onay sağladığından emin olun.
  4. Qingdao Jiaozhou Merkez Hastanesi'nden reflü özofajiti (RE) olan 94 hastayı tespit edip kaydedin.
  5. Kontrol grubuna 94 sağlıklı gönüllü dahil edilsin.
  6. Tüm RE hastalarını gastroskopi ile teşhis ederek özofageal mukoza lezyonları ve erozyonları doğrulayın. Hastalar Los Angeles sınıflandırmakriterlerine göre gruplandırılır 18.
  7. 3 aydan uzun süren sindirim sistemi rahatsızlığı yaşayan, üst gastrointestinal cerrahi öyküsü olmayan RE hastalarını dahil etti ve bu çalışma için imzalı bilgilendirilmiş onay verdi.
  8. Barrett yemek borusu, özofagus varisleri, özofagus stenozu, derin ülserler veya kötü huylu tümör lezyonları olan hastaları gastroskopi ile hariç tutun.

2. Serum örnekleri toplama

  1. Her katılımcıdan en az 8 saat boyunca bir gece oruçundan sonra saat 8:00 ile 10:00 arasında 5 mL oruç venöz kan toplayın.
  2. Toplanan kanı 4 °C'de 3000 × g sıcaklıkta 15 dakika boyunca santrifüjleyin.
  3. Santrifüjlemeden sonra süpernatantı dikkatlice toplayın.
  4. Ayrılmış serumu -80 °C sıcaklıkta dondurucuda saklayıp sonraki ölçüme kadar tutun.
    NOT: Örnekler −80 °C'de uzun süreli depolama için saklanabilir ve daha sonra işlenebilir

3. Hücre kültürü

  1. İnsan özofagus skuamöz hücre hatları Het-1A'yı ticari bir hücre bankasından satın alın. Hücreleri 37 °C'lik su banyosunda 1–2 dakika içinde hızlıca eritin.
  2. Het-1A hücrelerini yeniden canlandırın ve %10 fetal sığır serumu ve %1 penisillin/streptomisin takviyesi içeren RPMI-1640 ortamında kültürleyin.
  3. Hücre kültürünün korunması için kuluçka parametrelerini 37°C ve %5 CO₂ olarak ayarlayın.
  4. Ortamı her 2 günde bir değiştirin ve %0,25 tripsin-EDTA kullanarak %80–90 birleşimde geçiş hücrelerini alın.

4. Hücre indüksiyonu

  1. Het-1A hücrelerini 6 kuyu plakalarına aşılayın ve hücre yoğunluğunu 2 mL tam ortamda 2×10 5hücre·kuyup-1'e ayarlayın.
  2. Konsantre hidroklorik asidi (HCl) fosfatla tamponlanmış tuzlu suyla seyreldin ve pH'ı 4.0'a ayarlayın.
    DIKKAT: Hidroklorik asit aşındırıcı ve tahriş edicidir. Hidroklorik asidi uygun kişisel koruyucu ekipmanlarla (koruyucu gözlük, eldiven ve laboratuvar önlüğü dahil) kullanın ve kimyasal bir duman davlumbazında çalışın
  3. Her kuyuya hazırlanmış HCl çözeltisinden 2 ml ekleyerek hücreleri indüke et.
  4. HCl çözeltisini atın ve hücreleri her zaman zaman testlerinden önce önceden ısıtılmış PBS ile iki kez yıkayın.
  5. Hücre yaşamlılığını 0, 10, 20 ve 30 dakikada bir MTT testi ile ölçün.

5. Gerçek zamanlı niceliksel polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR)

  1. Het-1A hücrelerinden fenol-kloroform reaktifiyle toplam RNA çıkarmak.
  2. NanoDrop spektrofotometresi kullanılarak RNA saflığı ve konsantrasyonunu değerlendirin, A260/A280 oranı 1.8 ile 2.0 arasında doğrulanacaktır.
  3. Ters transkripsiyon kitini kullanarak ters transkripsiyon güçlendirme sistemini yapılandırın.
  4. PCR cihazında ters transkripsiyon işlemi 37°C'de 15 dakika, 85°C'de 5 saniye boyun, ardından 4°C'de bekleyin.
  5. Ters transkripsiyon yoluyla dairesel DNA (cDNA) üretin.
  6. RT-qPCR reaksiyonlarını 20 μL reaksiyon hacminde SYBR Yeşil PCR ana karışımı kullanarak gerçekleştirin.
  7. PCR döngü koşullarını şu şekilde ayarlayın: başlangıçta denatürasyon 95 °C'de 10 dakika boyunca, ardından 15 saniye boyunca 95 °C ve 1 dakika boyunca 60 °C sıcaklıkla 40 döngü.
  8. miR-107 ve FGFRL1 için iç kontrol olarak gliseraldehit 3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) ve küçük nükleer RNA (U6) kullanın.
  9. Verileri 2-ΔΔCt yöntemiyle hesaplayın.
  10. İnflamatuar faktörlerin (IL-6, IL-8) ve apoptozla ilişkili düzenleyici moleküllerin (Fas, s.53) mRNA içeriğini RT-qPCR ile nicelikle ölçün.

6. Hücre transfeksiyonu

  1. Kültüre Het-1A hücreleri, 6 delikli plakalarda 2×105 hücre·kuyruk-1 yoğunlukta logaritmik büyüme aşamasına ulaşana kadar statik olarak kültürlenir.
  2. Sentetik oligonukleotidler (miR-107 mimik/ov-FGFRL1; 50 nM), aşağı regülasyona sahip plazmidler (miR-107 inhibitörü; 100 nM) ve bunların ilgili negatif kontrol parçalarını ticari bir tedarikçiden edinin.
  3. Yukarıda bahsedilen parçaları lipofektamin reaktifi ile hücrelere 48 saat aktarın.

7. Hücre yaşamı

  1. Tohum Het-1A hücrelerini 96 kuyluklu plakalara 5×10 yoğunlukta3 hücre·1 hücre, 100 μL ortamda bir kuyuda ve gece boyunca kültürlendirir.
  2. Het-1A hücrelerine metil tiazolil tetrazolyum (MTT) çözeltisi (20 μL, 5 mg·mL-1, nihai konsantrasyon 0,5 mg·mL-1) ekleyin ve 37 °C'de 4 saat kuluçka yapın.
  3. Dimetil sülfüsit (DMSO, 150 μL) ekleyin ve karışımı 10 dakika vorteks edin.
  4. Her kuyunun soğurma değerini (490 nm) bir mikroplaka okuyucu ile ölçün.
  5. Her grup için 3 çoğaltma kuyusu ayarlayın ve 3 bağımsız kez tekrarlayın.

8. ELISA testi

  1. Üreticinin standart işletim prosedürünü takip ederek ELISA kiti kullanarak hücrelerde IL-6 ve IL-8'i tespit edin.
  2. İşlemi üç bağımsız kez tekrarlayın.

9. Hedef tahmini ve lusiferaz aktivite testi

  1. miRDB ve ENCORI veritabanları kullanılarak miR-107'nin potansiyel hedeflerini tahmin edin. Örtüşen hedefleri belirleyin ve tamamlayıcı bağlanma noktalarını doğrulayın.
  2. miR-107 ile FGFRL1 arasındaki tamamlayıcı bağlanma noktalarını tespit edin.
  3. Klonlayın ve miR-107 bağlanma noktaları (wt-FGFRL1) içeren yabani tip FGFRL1 3'UTR'yi elde edinin. Belirli bağlanma sitesi mutantları (mut-FGFRL1) üretin.
  4. Het-1A hücrelerini wt/mut-FGFRL1 ve miR-107 mimik/inhibitörü (veya NC kontrolleri) ile birlikte transfekte eder.
  5. Lusiferaz aktivitesini çift lusiferaz raporlayıcı test sistemi kullanarak ölçün.

10. İstatistiksel analiz

  1. GraphPad Prism kullanarak ifade verilerini girerek, ROC eğri fonksiyonunu seçerek ve sonuçları dışa aktararak ROC analizi yapın.
  2. Öğrencinin t-testi (iki grup için) veya tek yönlü varyans analizi (ANOVA; birden fazla grup için) ve ardından Tukey'nin sonradan yaptığı test ile gruplar arası farkları değerlendirin.
  3. p < 0.05'i istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edin.
  4. Orijinal verilerin ayrıntılı bilgileri, ek Tablo 1'de özetlenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hasta alımı ve başlangıç özellikleri Bu sonuçlar, RE hastalarında miR-107'nin ifadesini ve tanısal performansını tanımlar. Tablo 1 , sağlıklı kontrol ve RE hastalarının genel özelliklerini kaydetmektedir. Sonuçlar, cinsiyet, yaş ve altta yatan tıbbi geçmiş açısından iki grup arasında istatistiksel olarak anlamlı farklar göstermemektedir (p > 0.05), bu da karşılaştırılabilirliği göstermektedir.

Serum miR-107 if...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

RE, gastroözofageal reflü tarafından neden olan özofagus mukozasının inflamatuar bir hastalığıdır ve yaşam kalitesini etkileyebilecek ve ciddi komplikasyonlar geliştirme riski taşıyabilecek geniş bir yelpazede semptomlartaşıyabilir. 19. Normal fizyolojik koşullarda, mide doğasında olan savunma mekanizmaları sayesinde mide asidi ve safra karşısında korunur. Buna karşılık, özofagus sağlam bir mukus bariyeri olmadığı için bu etenlerden kaynaklanan hasara daha

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden çıkarları olmadığını belirtirler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Guangzhou Geleneksel Çin Tıbbı ve Entegre Geleneksel Çin ve Batı Tıbbı Teknolojisi Projesi (Hibe Numarası: 20242A011007). Guangdong Eyalet Geleneksel Çin Tıbbı İdaresi Bilimsel Araştırma Projesi (Hibe Numarası: 20262041).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Amerikan Tip Kültürü Koleksiyonu Manassas, ABDTicari hücre bankası
Dimetil sülfoksit Sigma, AlmanyaD4540
Dual-luciferase reporter assay kitPromega, ABDE1910dual-luciferase reporter assay system
FastStart Universal SYBR Yeşil Master KitRoche, Almanya4913850SYBR Yeşil PCR master karışımı
Fetal sığır serumuGibco, NY, ABD10100147C
GenePharma ŞirketiŞanghay, Çin
Hidrojen klorürSigma-Aldrich, MO, ABD1099730001
IL-6 ELISA KitiR& D Systems, ABDD6050ELISA kiti
IL-8 ELISA KitiR& D Systems, ABDD8000CELISA kiti
Kuluçka makinesiForma Scientific, MA, ABD311 S/N29035
Lipofektamin 3000Invitrogen, ABDL3000015Lipofektamin reagenti
Metil tiazolil tetrazolyumSigma, AlmanyaM5655
Microplate okuyucuBioTek, VT, ABDELx808
NanoDrop spektrofotometresiThermo, MA, ABDND-1000
Penisillin/streptomisinGibco, NY, ABD15070063
PrimeScript RT kitTakara, JaponyaDRR047ATers transkripsiyon kiti
TRIzol Thermo, MA, ABD10296010Fenol-kloroform reaktifi
Ultra düşük sıcaklıklı dondurucu Haier, Qingdao, ÇinDW-86W100

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Guo, Z., et al. Integrated transcriptomic and metabolomic analyses reveal the mechanism by which quercetin inhibits reflux esophagitis in rats. PLoS One. 20 (5), e0321959(2025).
  2. Maev, I. V., Livzan, M. A., Mozgovoi, S. I., Gaus, O. V., Bordin, D. S. Esophageal Mucosal Resistance in Reflux Esophagitis: What We Have Learned So Far and What Remains to Be Learned. Diagnostics (Basel). 13 (16), 2664(2023).
  3. Quach, D. T., et al. Clinical characteristics and risk factors of gastroesophageal reflux disease in Vietnamese patients with upper gastrointestinal symptoms undergoing esophagogastroduodenoscopy. JGH Open. 5 (5), 580-584 (2021).
  4. Han, Y. M., et al. Inverse correlation between gastroesophageal reflux disease and atrophic gastritis assessed by endoscopy and serology. World J Gastroenterol. 28 (8), 853-867 (2022).
  5. Tanvir, F., et al. Gastroesophageal Reflux Disease: New Insights and Treatment Approaches. Cureus. 16 (8), e67654(2024).
  6. Bortolotti, M. Is patient satisfaction sufficient to validate endoscopic anti-reflux treatments? World J Gastroenterol. 28 (28), 3743-3746 (2022).
  7. Fabian, M. R., Sonenberg, N., Filipowicz, W. Regulation of mRNA translation and stability by microRNAs. Annu Rev Biochem. 79, 351-379 (2010).
  8. Cai, Y., et al. MiR-3682-3p promotes esophageal cancer progression by targeting FHL1 and activating the Wnt/β-catenin signaling pathway. Cell Signal. 119, 111155(2024).
  9. Tarallo, A., et al. MiR-21-5p and miR-223-3p as Treatment Response Biomarkers in Pediatric Eosinophilic Esophagitis. Int J Mol Sci. 26 (7), 3111(2025).
  10. Liu, X., et al. Decreased PANK1 expression in kidney renal clear cell carcinoma: impact on cell apoptosis, invasion, migration, and epithelial-mesenchymal transition. Discov Oncol. 15 (1), 380(2024).
  11. Huang, F., Tang, W., Lei, Y. MicroRNA-107 promotes apoptosis of acute myelocytic leukemia cells by targeting RAD51. Arch Med Sci. 17 (4), 1044-1055 (2021).
  12. Zheng, J., et al. Applications of Exosomal miRNAs from Mesenchymal Stem Cells as Skin Boosters. Biomolecules. 14 (4), 459(2024).
  13. Wang, P., et al. miR-107 reverses the multidrug resistance of gastric cancer by targeting the CGA/EGFR/GATA2 positive feedback circuit. J Biol Chem. 300 (8), 107522(2024).
  14. Zhang, P., et al. MiR-107 inhibits the malignant biological behavior of esophageal squamous cell carcinoma by targeting TPM3. J Gastrointest Oncol. 13 (4), 1541-1555 (2022).
  15. Lee, H. W., et al. A Pharmacokinetic/Pharmacodynamic Study of Esomeprazole Comparing a Dual Delayed-Release Formulation (YYD601) to a Conventional Formulation Following Multiple Administrations in Healthy Adult Subjects. Drug Des Devel Ther. 19, 97-110 (2025).
  16. Wasielica-Berger, J., et al. Expression of VEGF, EGF, and Their Receptors in Squamous Esophageal Mucosa, with Correlations to Histological Findings and Endoscopic Minimal Changes, in Patients with Different GERD Phenotypes. Int J Environ Res Public Health. 19 (9), 5298(2022).
  17. Zou, Z., Fu, L., Liu, J., Huang, B. Establishment and Evaluation of Cell Models for Bronchopulmonary Dysplasia: Challenges and Prospects. Clin Respir J. 19 (8), e70118(2025).
  18. Lundell, L. R., et al. Endoscopic assessment of oesophagitis: clinical and functional correlates and further validation of the Los Angeles classification. Gut. 45 (2), 172-180 (1999).
  19. Wu, Y., Hussain, S. A., Luo, M. Columbianadin ameliorates experimental acute reflux esophagitis in rats via suppression of NF-κB pathway. Acta Cir Bras. 39, e391824(2024).
  20. Yao, P., Liao, X., Huang, J., Dang, Y., Jiang, H. Identifying causal relationships between gastroesophageal reflux and extraesophageal diseases: A Mendelian randomization study. Medicine (Baltimore). 103 (7), e37054(2024).
  21. Webb, J., et al. The microRNA Pathway of Macroalgae: Its Similarities and Differences to the Plant and Animal microRNA Pathways. Genes (Basel). 16 (4), 442(2025).
  22. Wu, Z., Yan, Y., Li, W., Li, Y., Yang, H. Expression Profile of miR-199a and Its Role in the Regulation of Intestinal Inflammation. Animals (Basel). 13 (12), 1979(2023).
  23. Wang, J., Liu, L. MiR-149-3p promotes the cisplatin resistance and EMT in ovarian cancer through downregulating TIMP2 and CDKN1A. J Ovarian Res. 14 (1), 165(2021).
  24. Wu, L., et al. Increased miR-214 expression suppresses cell migration and proliferation in Hirschsprung disease by interacting with PLAGL2. Pediatr Res. 86 (4), 460-470 (2019).
  25. Kim, S. Y., et al. Fexuprazan safeguards the esophagus from hydrochloric acid-induced damage by suppressing NLRP1/Caspase-1/GSDMD pyroptotic pathway. Front Immunol. 15, 1410904(2024).
  26. Liu, C., Gui, Y., Zeng, M., Zhou, Z. Effects of dexmedetomidine combined with intravenous general anesthesia on hemodynamics and inflammatory factors in patients undergoing laparoscopic colorectal cancer surgery. Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne. 19 (3), 391-398 (2024).
  27. Rjiba, K., et al. Disorders of sex development in Wolf-Hirschhorn syndrome: a genotype-phenotype correlation and MSX1 as candidate gene. Mol Cytogenet. 14 (1), 12(2021).
  28. Zhao, X., et al. Exploration of Potential Integrated Models of N6-Methyladenosine Immunity in Systemic Lupus Erythematosus by Bioinformatic Analyses. Front Immunol. 12, 752736(2021).
  29. Sharma, P., Kaushik, V., Saraya, A., Sharma, R. Aberrant Expression of FGFRL1 in Esophageal Cancer and Its Regulation by miR-107. Asian Pac J Cancer Prev. 24 (4), 1331-1341 (2023).
  30. Guo, Y., et al. Pancreatic cancer stem cell-derived exosomal miR-210 mediates macrophage M2 polarization and promotes gemcitabine resistance by targeting FGFRL1. Int Immunopharmacol. 127, 111407(2024).
  31. Jia, X., Zhao, Y., Li, H., Fan, S., Hu, H. Downregulation of MUC6 improves esophageal epithelial barrier dysfunction and inhibits epithelial-mesenchymal transition in reflux esophagitis. BMC Gastroenterol. 26 (1), 53(2026).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Asitle nduklenmi H cre ModeliHet 1A H crelerimiR 107 AksRefl zofajitH cre Canl l AnaliziRT qPCRDual Lusiferaz Analizinflamasyon Belirte leriMolek ler Mekanizmalar

İlgili makaleler