Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Lycopus lucidus Ekstraktı, Bağırsak Mikrobiyotası ve Metabolom Yeniden Şekillenmesi ile Deneysel Polikistik Over Sendromunu İyileştirir

99 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/71084

⸱

28 Ağustos 2026

 ,  ,  , 
1Department of Gynecology, Cangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Hebei Province, 2Department of Gynecology, Heilongjiang Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine Science

Bu makalede

Özet

ZeLan özütü, DHEA ile indüklenmiş PCOS sıçanlarında endokrin ve metabolik fenotipleri iyileştirmiştir. Entegre 16S rRNA dizileme ve serum metabolomikleri; bağırsak mikrobiyal alfa çeşitliliğinin kısmen geri döndüğünü, mikrobiyal kompozisyonun değiştiğini ve steroid hormonları, safra asitleri ile kısa zincirli yağ asitlerini içeren metabolit değişikliklerini göstermiştir.

Özet

Bu çalışma, ZeLan ekstraktının polikistik over sendromu (PKOS) üzerindeki terapötik etkilerini araştırmış ve bağırsak mikrobiyota-metabolom yeniden şekillenmesi ile olan ilişkisini değerlendirmiştir. Yirmi dört dişi Sprague-Dawley sıçanı rastgele Kontrol, dehidroepiandrosteron (DHEA) ile indüklenen PKOS Model ve ZeLan tedavi gruplarına (her biri n = 8) ayrılmıştır. 28 günlük müdahalenin ardından serum hormon seviyeleri ELISA ile ölçülmüş; bağırsak mikrobiyota kompozisyonu 16S rRNA gen sekanslaması kullanılarak analiz edilmiş ve serum metabolik profilleri UHPLC-Q-TOF-MS ile karakterize edilmiştir. Mikrobiyota-metabolom ilişkilerini keşfetmek için çoklu test kontrolü ile Spearman korelasyon analizi gerçekleştirilmiştir. ZeLan, Model grubuyla karşılaştırıldığında vücut ağırlığını, testosteronu (0.92'ye karşı 1.85 ng/mL, P < 0.05), LH/FSH oranını ve insülin seviyelerini düşürerek PKOS ile ilişkili fenotipleri anlamlı düzeyde iyileştirmiştir. Sekanslama, ZeLan'ın mikrobiyal alfa çeşitliliğini kısmen geri kazandırdığını (Shannon indeksi: 5.79'a karşı 4.19) ve Firmicutes-Bacteroidetes oranını azalttığını göstermiştir. ZeLan, Lactobacillus ve Ruminococcus zenginleşmesi ile Bacteroides, Prevotella ve Escherichia'nın daha düşük bolluğu ile ilişkilendirilmiştir. Metabolomik analizler, litoikolik asit gibi safra asitleri, bütirik asit gibi kısa zincirli yağ asitleri ve steroid hormonlarını içeren temel değişikliklerle birlikte, değişime uğramış 52 metabolit özelliği belirlemiştir. Bu bulgular, ZeLan'ın PKOS ile ilişkili endokrin ve metabolik bozuklukları iyileştirdiğini ve bağırsak mikrobiyal ve serum metabolik profillerinin yeniden şekillenmesi ile ilişkili olduğunu göstermektedir.

Giriş

Polikistik over sendromu (PKOS), kullanılan tanı kriterlerine bağlı olarak küresel prevalansı %6 ile %20 arasında tahmin edilen, üreme çağındaki kadınları etkileyen en yaygın endokrin bozukluklardan biridir1. Bu kompleks metabolik ve reprodüktif bozukluk; hiperandrojenizm, ovulatuvar disfonksiyon ve polikistik over morfolojisi dahil olmak üzere, toplu olarak önemli reprodüktif, metabolik ve psikolojik sonuçlara yol açan bir dizi klinik belirti ile karakterizedir2. Doğurganlık üzerindeki doğrudan etkisinin ötesinde PKOS; tip 2 diabetes mellitus, kardiyovasküler hastalık ve endometrial karsinom gibi uzun süreli sağlık komplikasyonlarıyla ilişkili sistemik bir durum olarak giderek daha fazla kabul edilmekte, bu durum dünya çapında hem bireysel hastalar hem de sağlık sistemleri üzerinde önemli yükler oluşturmaktadır3. PKOS'un patofizyolojisi tam olarak anlaşılamamış olsa da, genel olarak etkilenen bireylerde gözlemlenen karakteristik hormonal ve metabolik bozukluklarla sonuçlanan genetik yatkınlık, çevresel faktörler ve yaşam tarzı belirleyicileri arasındaki karmaşık etkileşimleri içerdiği kabul edilmektedir4.

PKOS için güncel terapötik yaklaşımlar, öncelikle adet düzenlemesi için oral kontraseptifler, insülin duyarlılaştırması için metformin ve hirsutizm kontrolü için anti-androjenler dahil olmak üzere farmakolojik müdahaleler aracılığıyla semptomatik yönetime odaklanmaktadır5. Ancak, bu konvansiyonel tedaviler genellikle eksik semptom rahatlaması sağlar ve özellikle fertilite beklentisi olan kadınlarda uzun vadeli uygulanabilirliği sınırlayan yan etkilerle sıklıkla ilişkilendirilir6. Sonuç olarak, özellikle jinekolojik bozuklukların bütüncül düzenleyici mekanizmalar aracılığıyla tedavisinde yüzyıllardır süregelen ampirik deneyime sahip olan geleneksel Çin tıbbı (TCM) başta olmak üzere, tamamlayıcı ve alternatif tıp yaklaşımlarının araştırılmasına yönelik artan bir ilgi oluşmuştur7. PKOS yönetimi için incelenen çok sayıda botanik ilaç arasında, Lycopus lucidus Turcz. (Çin tıbbında yaygın olarak ZeLan olarak bilinir), kan dolaşımını artırma, stazı giderme ve adet düzenleme konusundaki geleneksel uygulamaları nedeniyle önemli ölçüde dikkat çekmiştir8. Yayınlanmış fitokimyasal çalışmalar, L. lucidus'un antioksidan ve antiinflamatuar aktiviteye sahip polifenoller ve flavonoid açısından zengin fraksiyonlar içerdiğini göstermektedir8,9. Bu nedenle, mikrobiyota ve metabolik düzenlemeden sorumlu spesifik aktif monomerlerin tanımlanması gelecekte hedefli fitokimyasal analiz gerektirse de, mevcut çalışmada ekstrakt için kimyasal kalite kontrol indeksi olarak standardize toplam flavonoid içeriği kullanılmıştır.

Bağırsak mikrobiyotası, PKOS dahil olmak üzere çeşitli metabolik bozuklukların patogenezindeki rolünü destekleyen artan kanıtlarla birlikte, konakçı metabolizmasının ve endokrin fonksiyonun kritik bir düzenleyicisi olarak ortaya çıkmıştır10. Bağırsak-over aksı kavramı; mikrobiyal metabolitler, immün sinyalleme ve nöroendokrin yollar aracılığıyla bağırsak mikroorganizmaları ile over fonksiyonu arasındaki çift yönlü iletişimi tanımlamak için öne sürülmüştür11. PKOS'lu kadınların, azalmış mikrobiyal çeşitlilik, değişmiş Firmicutes/Bacteroidetes oranları ve Lactobacillus ile Bifidobacterium türleri gibi faydalı bakterilerin bolluğunda azalma ile karakterize bir bağırsak disbiyozu sergilediği tutarlı bir şekilde gösterilmiştir12. Bu mikrobiyal bozulmaların; artmış bağırsak geçirgenliği, sistemik düşük dereceli inflamasyon ile değişmiş safra asidi ve kısa zincirli yağ asidi (SCFA) metabolizması dahil olmak üzere çoklu mekanizmalar aracılığıyla PKOS patofizyolojisine katkıda bulunduğu ve böylece insülin duyarlılığı ile androjen biyosentezini etkilediği düşünülmektedir13. Önemli bir nokta olarak, probiyotikler, prebiyotikler ve diyet modifikasyonlarını içeren bağırsak mikrobiyotasını hedef alan müdahaleler, PKOS semptomlarını hafifletmede gelecek vaat eden sonuçlar göstermiş ve böylece bağırsak-over aksının terapötik bir hedef olduğunu desteklemiştir14.

Biyolojik sistemlerdeki küçük moleküllü metabolitlerin kapsamlı analizi olan metabolomik, hastalık durumlarıyla ilişkili metabolik perturbasyonların karakterize edilmesi ve terapötik müdahalelerin biyokimyasal etkilerinin değerlendirilmesi için güçlü bir yaklaşım sunar15. Mikrobiyom profilleme için 16S rRNA gen dizilemesinin hedeflenmemiş metabolomik ile entegrasyonu, bağırsak mikrobiyal toplulukları ile konakçı metabolizması arasındaki ilişkilerin sistematik olarak incelenmesine olanak tanıyarak, hem hastalık patogenezine hem de tedavi yanıtlarına eşlik edebilen mikrobiyota-metabolom etkileşimlerine dair içgörüler sağlar. PCOS yönetiminde bağırsak-yumurtalık aksını hedeflemenin teorik gerekçelerine ve ZeLan'ın jinekolojik bozukluklar için geleneksel endikasyonlarına rağmen, bugüne kadar hiçbir çalışma ZeLan ekstraktının PCOS'ta bağırsak mikrobiyota-metabolom arayüzünü modüle edip etmediğini sistematik olarak incelememiştir. Bu bilgi eksikliği, ZeLan ile ilişkili biyolojik yanıtların anlaşılmasını sınırlamakta ve bu botanik müdahalenin PCOS tedavisi için rasyonel optimizasyonunu engellemektedir.

Bu çalışma, DHEA ile indüklenmiş bir rat PCOS modelinde ZeLan ekstraktının terapötik etkinliğini araştırmak ve entegre 16S rRNA dizileme ve hedefsiz metabolomik analiz yoluyla ilişkili bağırsak mikrobiyota-metabolom değişikliklerini değerlendirmek amacıyla tasarlanmıştır. Spesifik olarak; ZeLan ekstraktının vücut ağırlığı, serum testosteronu, luteinize edici hormonun folikül uyarıcı hormona oranı (LH/FSH) ve insülin seviyeleri dahil olmak üzere PCOS ile ilişkili fenotipler üzerindeki etkilerini değerlendirdik; ZeLan tedavisini takiben bağırsak mikrobiyota kompozisyonu ve alfa çeşitliliğindeki değişimleri karakterize ettik; ZeLan müdahalesiyle ilişkili diferansiyel serum metabolit özelliklerini ve zenginleşmiş metabolik yolakları tanımladık ve spesifik bağırsak mikrobiyal taksonları ile temel metabolitler arasındaki korelasyonları inceledik. Bu hedefleri ele alarak, PCOS'ta ZeLan ile ilişkili bağırsak-over aksı modülasyonu için ilişkisel multi-omik kanıtlar sağlamayı amaçladık.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmadaki tüm deneysel prosedürler, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak yürütülmüş ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır (Onay No. IACUC-2023-0156).

Hayvanlar

Dişi Sprague-Dawley sıçanlar (n = 24, 6 haftalık, vücut ağırlığı 180–200 g), bağlı kurumun Laboratuvar Hayvanları Merkezi'nden temin edilmiş ve standart kemirgen yemi ile saf suya ad libitum erişim sağlanarak kontrollü çevresel koşullar altında (sıcaklık 22 ± 2°C, nem %50 ± 10, 12 saatlik ışık/karanlık döngüsü) barındırılmıştır. Bir haftalık alıştırma döneminin ardından hayvanlar rastgele üç deneysel gruba ayrılmıştır (grup başına n = 8): Kontrol, PCOS Modeli ve ZeLan tedavisi. Örneklem büyüklüğü, PCOS modellerindeki bağırsak mikrobiyotası değişikliklerini inceleyen önceki çalışmalara dayanarak belirlenmiş olup, güç analizi grup başına 8 hayvanın α = 0.05 düzeyinde alfa çeşitlilik indekslerinde 1,5 katlık bir farkı tespit etmek için %80 güç sağlayacağını göstermiştir.

PCOS model oluşturma ve tedavi protokolü

PCOS modeli, susam yağında çözünmüş dehidroepiandrosteronun (DHEA; Sigma-Aldrich, ABD), 21 gün boyunca ardışık olarak günlük 6 mg/100 g vücut ağırlığı dozunda dorsal boy bölgesine subkütan enjeksiyonunu içeren, iyi valide edilmiş bir protokol kullanılarak oluşturulmuştur. Kontrol hayvanlarına eş değer hacimlerde susam yağı taşıyıcı olarak verilmiştir. Tüm deneysel zaman çizelgesi, alıştırma süresini de kapsayacak şekilde 7 günlük alıştırma, 21 günlük model indüksiyonu ve 28 günlük müdahale ile 56. protokol gününde uç nokta örneklemesini içermektedir (Şekil 1). ZeLan ekstresi, kimlik doğrulaması yapılmış Lycopus lucidus Turcz. bitkisinin sulu ekstraksiyonu yoluyla hazırlanmış ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile toplam flavonoid içeriği en az %2,5 olacak şekilde standardize edilmiştir; bu durum botanik ekstrakt için kimyasal kalite kontrol kriteri olarak belirlenmiştir. DHEA ile indüklenen model oluşturma işleminin tamamlanmasının ardından, ZeLan grubundaki sıçanlara 28 gün boyunca ardışık olarak günlük 200 mg/kg vücut ağırlığında ZeLan ekstresi oral gavaj yoluyla verilmiş, Kontrol ve Model gruplarına ise eş değer hacimlerde distile su uygulanmıştır. 200 mg/kg dozu, botanik ekstraktlarla ilgili önceki hayvan kullanım deneyimleri ve ön tolerabilite değerlendirmelerine dayalı olarak keşif amaçlı bir farmakolojik doz olarak seçilmiştir; resmi bir doz-yanıt değerlendirmesi mevcut tasarımın parçası değildir. Vücut ağırlığı, deneysel süreç boyunca haftalık olarak kaydedilmiştir. Bu deneysel tasarımda, başarılı PCOS model oluşturma işlemi, DHEA indüksiyon protokolü ile birlikte vücut ağırlığı, serum testosteron, LH/FSH oranı ve açlık insülini dahil olmak üzere uç nokta endokrin ve metabolik fenotipleri kullanılarak değerlendirilmiştir. Over histopatolojik incelemesi, folikül sayımı, korpus luteum kantifikasyonu ve seri östrus döngüsü izlemi model doğrulama uç noktaları olarak dahil edilmemiştir ve bu nedenle over disfonksiyonu yorumlaması, doğrudan doku düzeyindeki değerlendirmeden ziyade endokrin ve metabolik verileri temel almıştır.

Numune toplama ve işleme

Sonraki biyokimyasal, mikrobiyota ve metabolomik analizler için her üç gruptan da (grup başına n = 8) örnekler (serum ve dışkı) toplandı. Sirkadiyen ve beslenmeye bağlı değişkenliği azaltmak için nihai örneklemler, gece boyunca açlıktan sonra sabah saatlerinde gerçekleştirildi. Kan örnekleri, anestezi altında abdominal aortadan toplandı ve serum elde etmek için 4°C'de 15 dakika boyunca 3,000 × g hızında santrifüj edildi; elde edilen serumlar alikotlara ayrılarak hormon ve metabolomik analizlere kadar -80°C'de saklandı. Taze dışkı örnekleri, aseptik koşullar altında doğrudan sekumdan steril kriyotüplere toplandı, transfer sırasında kuru buz üzerinde tutuldu, toplandıktan sonraki 10 dakika içinde sıvı nitrojenle şoklandı ve 16S rRNA gen sekanslamasına kadar -80°C'de saklandı.

Serum hormon ölçümleri

Testosteron, luteinleştirici hormon (LH), folikül uyarıcı hormon (FSH) ve insülinin serum konsantrasyonları, üretici talimatlarına uygun olarak ticari olarak temin edilen enzim bağlı immünosorbent assay (ELISA) kitleri (Cusabio Biotech, Wuhan, Çin) kullanılarak kantifiye edildi. LH/FSH oranı, PCOS için karakteristik olan gonadotropin dengesizliğinin kompozit bir indeksi olarak hesaplandı. Tüm örnekler çift paralel olarak analiz edildi ve varyasyon katsayıları %15'ten büyük olan ölçümler tekrarlandı. Kit içi ve kitler arası varyasyon katsayılarının sırasıyla %10 ve %15'in altında kalması şartı arandı. Potansiyel aykırı değerler, kaynak kayıtları ve assay performans bilgileriyle karşılaştırılarak tarandı ve belgelenmiş bir teknik neden olmaksızın hiçbir değer yalnızca istatistiksel gerekçelerle hariç tutulmadı.

16S rRNA gen dizileme ve biyoinformatik analiz

Toplam bakteriyel genomik DNA, üretici protokolü takip edilerek QIAamp DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Almanya) kullanılarak sekum içeriğinden ekstrakte edildi. DNA kalitesi ve miktarı NanoDrop spektrofotometrisi ve agaroz jel elektroforezi kullanılarak değerlendirildi ve DNA ekstraktları kütüphane kurulumundan önce -80°C'de saklandı. 16S rRNA geninin V3-V4 hiperdeğişken bölgeleri, Illumina adaptör dizilerine sahip evrensel primerler olan 338F (5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3') ve 806R (5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3') kullanılarak amplifiye edildi. Amplikon kütüphaneleri oluşturuldu, saflaştırıldı, miktarları belirlendi, eş molar konsantrasyonlarda havuzlandı ve Illumina NovaSeq 6000 platformunda (Novogene, Pekin, Çin) paired-end 250 bp okumalar kullanılarak dizilendi.

Ham sekanslama okumaları QIIME2 (versiyon 2022.2) hattı kullanılarak işlendi. Çift uçlu okumalar demültiplekslendi, birleştirildi, en az 20 Phred skor eşiği kullanılarak kalite filtresinden geçirildi ve kimera dizileri kaldırmak ve amplikon sekans varyantları (ASV'ler) oluşturmak için DADA2 ile işlendi. Taksonomik sınıflandırma, bir naive Bayes sınıflandırıcı kullanılarak SILVA 138 referans veri tabanına göre gerçekleştirildi. Örnek içi çeşitliliği ve zenginliği değerlendirmek için Shannon indeksi, Simpson indeksi ve Chao1 tahmincisi dahil olmak üzere alfa çeşitlilik metrikleri hesaplandı. Okuma özetleri, ASV bolluk tabloları, Good kapsamı ve seyreltme eğrisi dosyaları dahil olmak üzere sekanslama derinliği çıktıları, Veri Kullanılabilirliği bölümünde açıklanan mikrobiyom veri setinin bir parçası olarak değerlendirildi. Kontrol ve Model karşılaştırmasında hastalıkla ilişkili taksonları belirlemek için, 2.0'dan büyük bir LDA skor eşiği ve P < 0.05 kullanılarak doğrusal ayrıştırıcı analiz etki boyutu (LEfSe) uygulandı; ZeLan ile ilişkili geri dönüş, ZeLan grubundaki taksonomik bolluk kaymaları yönünün Model grubuna göre karşılaştırılmasıyla değerlendirildi.

Hedefsiz metabolomik analiz

Serum metabolomik profillemesi, kuadrupol uçuş süreli kütle spektrometrisi ile eşleşmiş ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UHPLC-Q-TOF-MS; Agilent 1290 Infinity II/6550, ABD) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Serum örnekleri (100 μL), internal standartlar içeren 400 μL soğuk metanol:asetonitril (1:1, v/v) ile karıştırılmış, vortekslemiş ve proteinleri çöktürmek için -20°C'de 1 saat inkübe edilmiştir. 14.000 × g'de 15 dakika santrifüjasyonun ardından, süpernatantlar azot akımı altında kurutulmuş ve analiz için 100 μL asetonitril:su (1:1, v/v) içerisinde yeniden çözündürülmüştür. Kromatografik ayırım, 40°C'de tutulan bir ACQUITY UPLC HSS T3 kolonunda (2.1 × 100 mm, 1.8 μm); mobil faz A olarak %0.1 formik asit içeren su ve mobil faz B olarak %0.1 formik asit içeren asetonitril, 0.30 mL/min akış hızında kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Metabolit ayırımı için organik fazın %5'ten %95'e artırıldığı, ardından kolon yıkama ve yeniden dengeleme ile devam eden bir gradyan programı kullanılmıştır. Kütle spektrometrik veriler, m/z 50–1200 tarama aralığında, hem pozitif hem de negatif elektrospray iyonizasyon modlarında elde edilmiştir; kaynak parametreleri kapiler voltajı 3.5 kV, kurutma gazı akışı 10 L/min, kurutma gazı sıcaklığı 325°C, nebülizatör basıncı 35 psi ve fragmantör voltajı 120 V olarak belirlenmiştir.

Ham veri dosyaları mzXML formatına dönüştürüldü ve pik saptama, tutunma zamanı hizalama ve pik alanı entegrasyonu için R'daki XCMS paketi kullanılarak işlendi. Cihaz kararlılığını izlemek amacıyla, tüm serum ekstraktlarının eşit miktarlarda havuzlanmasıyla hazırlanan kalite kontrol örnekleri analitik sekans boyunca yerleştirildi. Aşırı eksiklik gösteren veya kalite kontrol tekrarlanabilirliği stabil olmayan özellikler, istatistiksel modelleme öncesinde çıkarıldı. Metabolit tanımlaması; doğru kütle, tutunma zamanı ve MS/MS fragmantasyon paternlerinin Human Metabolome Database (HMDB), METLIN ve kurum içi spektral kütüphanelerle eşleştirilmesi yoluyla gerçekleştirildi. Çok değişkenli istatistiksel analizler MetaboAnalyst 5.0 kullanılarak yapıldı. Sonraki raporlama için seçilen metabolit özellikleri; çok değişkenli ayırt edici katkı, kat değişimi (fold-change) yönü ve istatistiksel kanıtı içeren birleşik bir kriter kullanılarak önceliklendirildi; P değerleri, çoklu testleri hesaba katmak için Benjamini-Hochberg yöntemi kullanılarak düzeltildi. 52 metabolit özelliğini içeren eksiksiz açıklama tablosu, Ek Tablo 1 olarak sunulmuştur. Yolculuk zenginleştirme analizi, Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) veri tabanı kullanılarak gerçekleştirildi.

İstatistiksel analiz

Tüm istatistiksel analizler SPSS sürüm 26.0 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA) ve R yazılımı (sürüm 4.2.1) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Sürekli veriler ortalama ± standart sapma (SD) olarak ifade edilmiş ve çıkarımsal testlerden önce Shapiro-Wilk testi ile normallikleri değerlendirilmiştir. Normal dağılım gösteren veriler için çoklu grup karşılaştırmalarında tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve ardından Tukey post hoc testi kullanılmıştır; normal dağılım göstermeyen veriler için ise Dunn post hoc testi ile birlikte Kruskal-Wallis testi kullanılmıştır. Bağırsak mikrobiyal taksonları ile serum metabolitleri arasındaki korelasyonlar Spearman sıra korelasyon katsayısı kullanılarak değerlendirilmiş ve hiyerarşik olarak kümelenmiş ısı haritaları şeklinde görselleştirilmiştir. Korelasyon P-değerleri, Benjamini-Hochberg yanlış keşif oranı yöntemi kullanılarak çoklu testler için düzeltilmiş ve yalnızca yön bakımından tutarlı ve istatistiksel olarak anlamlı olan korelasyonlar yorumlanmıştır. Düzeltilmiş bir P-değeri eşiği belirtilmediği sürece, iki yönlü P-değeri < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

ZeLan ekstraktının PCOS klinik fenotipleri üzerindeki etkileri

Sıçanlarda DHEA uygulaması, Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında vücut ağırlığı, serum testosteron konsantrasyonu, LH/FSH oranı ve açlık insülin seviyelerinde meydana gelen anlamlı artışlarla kanıtlandığı üzere PCOS benzeri endokrin ve metabolik fenotipler oluşturmuştur (tüm P < 0.05). Shapiro-Wilk testi kullanılarak yapılan dağılım değerlendirmesi, Tablo 1'de özetlenen temel vücut ağırlığı ve ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışma, ZeLan ekstraktının DHEA ile indüklenen bir sıçan modelinde PCOS ile ilişkili endokrin ve metabolik fenotipleri iyileştirdiğine ve bu etkilerin bağırsak mikrobiyota kompozisyonu ve serum metabolik profillerindeki olumlu değişikliklerle ilişkili olduğuna dair kanıtlar sunmaktadır. Entegre multi-omik yaklaşım, ZeLan tedavisinin hiperandrojenemiyi, yükselmiş LH/FSH oranını ve insülin direncini iyileştirdiğini; aynı zamanda bağırsak mikrobiyal alfa çeşitliliğini kısmen geri kazandırdığını, mikrobiyal kompozisyonu ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar beyan edilecek herhangi bir çıkar çatışmasına sahip değildir.

Teşekkürler

Bu çalışma, Hebei Eyaleti Geleneksel Çin Tıbbı Yönetimi Bilimsel Araştırma Planlama Projesi (Hibe No. 2021316) tarafından finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AsetonitrilFisher Chemical / Thermo Fisher ScientificA955-4Optima LC-MS derecesi, 4 L; mobil faz ve numune yeniden çözme
ACQUITY UPLC HSS T3 kolonuWaters Corporation186003539100 Å, 1.8 μm, 2.1 × 100 mm; UHPLC ayırımı
Agaroz jel elektroforez sistemiBio-Rad Laboratories1704486Mini-Sub Cell GT yatay elektroforez sistemi; DNA kalite değerlendirmesi
Agilent 1290 Infinity II/6550 UHPLC-Q-TOF-MSAgilent TechnologiesG7120A/G7167B/G7116B/G6550B6550 iFunnel Q-TOF MS'ye bağlı 1290 Infinity II UHPLC modül seti; serum hedef dışı metabolomik platformu
DADA2 algoritmasıBioconductorSürüm 1.24.0ASV üretimi ve kimera giderimi; R 4.2.1/Bioconductor 3.15 iş akışıyla uyumlu olduğu varsayılan sürüm
Dehidroepiandrosteron (DHEA)Sigma-Aldrich / MilliporeSigmaD4000PCOS model indüksiyonu; 6 mg/100 g vücut ağırlığı; CAS 53-43-0
Distile suInvitrogen / Thermo Fisher Scientific10977015UltraPure DNase/RNase-Free Distile Su; Kontrol ve Model gruplarında oral gavage için taşıyıcı
Formik asitFisher Chemical / Thermo Fisher ScientificA117-50Optima LC-MS derecesi, 50 mL; LC-MS mobil fazları için %0.1 katkı maddesi
Human Metabolome DatabaseUniversity of Alberta / HMDBHMDB 5.0Metabolit anotasyon veri tabanı
Illumina NovaSeq 6000 platformuIllumina20012850Paired-end 250 bp 16S rRNA sekanslaması için sekanslama servis sağlayıcısı tarafından kullanılan sekanslama sistemi
Lycopus lucidus Turcz. ottuBeijing Tongrentang Chinese Medicine Co., Ltd.Parti ZL-20230315ZeLan sulu ekstraktı için doğrulanmış botanik hammadde
MetanolFisher Chemical / Thermo Fisher ScientificA456-4Optima LC-MS derecesi, 4 L; serum metabolomikleri için protein çöktürme
METLIN veri tabanıScripps ResearchMETLIN Classic 2023Metabolit kütle-spektral anotasyon veri tabanı
NanoDrop spektrofotometresiThermo Fisher ScientificND-ONE-WNanoDrop One mikro hacimli UV-Vis spektrofotometresi; DNA miktar ve saflık değerlendirmesi
QIAamp Fast DNA Stool Mini KitQiagen51604Sekal içeriklerinden DNA ekstraksiyonu; 50-hazırlıklı dışkı DNA kiti
QIIME2QIIME2 geliştirme ekibiSürüm 2022.216S rRNA sekans işleme
R yazılımıR FoundationSürüm 4.2.1İstatistiksel analiz ve XCMS işleme
Testosteron, LH, FSH ve insülin için serum ELISA kitleriCusabio BiotechCSB-E05100r; CSB-E12654r; CSB-E06869r; CSB-E05070rSerum hormon ve insülin kantifikasyonu için sıçan testosteron, LH, FSH ve insülin ELISA kitleri
Susam yağıSigma-Aldrich / MilliporeSigmaS3547DHEA enjeksiyonu için taşıyıcı
Sodyum pentobarbitalSigma-Aldrich / MilliporeSigmaP3761Anestezi; 50 mg/kg intraperitonal
SPSS yazılımıIBM CorporationSürüm 26.0İstatistiksel analiz
Evrensel 16S rRNA primerleri 338F/806RSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.Özel sentez: 338F/806RV3-V4 bölgelerinin amplifikasyonu; 338F ACTCCTACGGGAGGCAGCAG, 806R GGACTACHVGGGTWTCTAAT
XCMS paketiBioconductor / RSürüm 3.18.0Pik saptama, retansiyon zamanı hizalama ve entegrasyon
ZeLan ekstraktıKurum içi sulu ekstraktParti ZLE-20230402Oral gavage tedavisi; standardize toplam flavonoidler ≥2.5%

Kaynaklar

  1. Joham AE, Norman RJ, Stener-Victorin E, et al. Polycystic ovary syndrome. Lancet Diabetes Endocrinol. 2022;10(9):668-680.
  2. Islam H, Masud J, Islam YN, et al. An update on polycystic ovary syndrome: a review of the current state of knowledge in diagnosis, genetic etiology, and emerging treatment options. Womens Health (Lond). 2022;18:17455057221117966.
  3. Azziz R, Carmina E, Chen Z, et al. Polycystic ovary syndrome. Nat Rev Dis Primers. 2016;2:16057.
  4. Fahs D, Salloum D, Nasrallah M, et al. Polycystic ovary syndrome: pathophysiology and controversies in diagnosis. Diagnostics (Basel). 2023;13(9):1559.
  5. Conway G, Dewailly D, Diamanti-Kandarakis E, et al. The polycystic ovary syndrome: a position statement from the European Society of Endocrinology. Eur J Endocrinol. 2014;171(4):P1-P29.
  6. Huddleston HG, Dokras A. Diagnosis and treatment of polycystic ovary syndrome. JAMA. 2022;327(3):274-275.
  7. Zhang J, Xin X, Zhang H, et al. The efficacy of Chinese herbal medicine in animal models of polycystic ovary syndrome: a systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022;2022:4892215.
  8. Chen J, Na E, Lim SY. Effect of fractions from Lycopus lucidus Turcz. leaves on genomic DNA oxidation and matrix metalloproteinase activity. Comb Chem High Throughput Screen. 2022;25(10):1778-1784.
  9. Ślusarczyk S, Hajnos M, Skalicka-Woźniak K, et al. Antioxidant activity of polyphenols from Lycopus lucidus Turcz. Food Chem. 2009;113(1):134-138.
  10. Qi X, Yun C, Sun L, et al. Gut microbiota-bile acid-interleukin-22 axis orchestrates polycystic ovary syndrome. Nat Med. 2019;25(8):1225-1233.
  11. He FF, Li YM. Role of gut microbiota in the development of insulin resistance and the mechanism underlying polycystic ovary syndrome. J Ovarian Res. 2020;13(1):73.
  12. Chadchan SB, Singh V, Kommagani R. Female reproductive dysfunctions and the gut microbiota. J Mol Endocrinol. 2022;69(3):R81-R94.
  13. Puspitasari VD, Lestari ES, Pramono N. Testosterone induced Wistar rat model for gut microbiota dysbiosis of polycystic ovarian syndrome research. J Indones Med Assoc. 2024;74(3):132-140.
  14. Zhang J, Sun Z, Jiang S, et al. Probiotic Bifidobacterium lactis V9 regulates the secretion of sex hormones in polycystic ovary syndrome patients. mSystems. 2019;4(2):e00017-19.
  15. Xuan Y, Hong X, Zhou X, et al. The vaginal metabolomics profile with features of polycystic ovary syndrome: a pilot investigation in China. PeerJ. 2024;12:e18194.
  16. Hu M, Zhang Y, Guo X, et al. Hyperandrogenism and insulin resistance induce gravid uterine defects in association with mitochondrial dysfunction and aberrant ROS production. Endocrinology. 2019;160(9):2208-2223.
  17. Moini Jazani A, Nasimi Doost Azgomi H, Nasimi Doost Azgomi A, et al. A comprehensive review of clinical studies with herbal medicine on polycystic ovary syndrome (PCOS). DARU J Pharm Sci. 2019;27(2):863-877.
  18. McCartney CR, Marshall JC. Polycystic ovary syndrome. N Engl J Med. 2016;375(1):54-64.
  19. Cui Y, Zhang C, Li X, et al. Systematic review and meta-analysis of animal experiments on Bushen formulas for the treatment of polycystic ovary syndrome. Sci Rep. 2025;15(1):7648.
  20. Thackray VG. Sex, microbes, and polycystic ovary syndrome. Trends Endocrinol Metab. 2019;30(1):54-65.
  21. Torres PJ, Siakowska M, Banaszewska B, et al. Gut microbial diversity in women with polycystic ovary syndrome correlates with hyperandrogenism. J Clin Endocrinol Metab. 2018;103(4):1502-1511.
  22. Insenser M, Murri M, Del Campo R, et al. Gut microbiota and the polycystic ovary syndrome: influence of sex, sex hormones, and obesity. J Clin Endocrinol Metab. 2018;103(7):2552-2562.
  23. Guo Y, Qi Y, Yang X, et al. Association between polycystic ovary syndrome and gut microbiota. PLoS One. 2016;11(4):e0153196.
  24. Liu R, Zhang C, Shi Y, et al. Dysbiosis of gut microbiota associated with clinical parameters in polycystic ovary syndrome. Front Microbiol. 2017;8:324.
  25. Jobira B, Frank DN, Pyle L, et al. Obese adolescents with PCOS have altered biodiversity and relative abundance in gastrointestinal microbiota. J Clin Endocrinol Metab. 2020;105(6):e2134-e2144.
  26. Bai X, Ma J, Wu X, et al. Impact of visceral obesity on structural and functional alterations of gut microbiota in polycystic ovary syndrome (PCOS): a pilot study using metagenomic analysis. Diabetes Metab Syndr Obes. 2023;16:1-14.
  27. Rizk MG, Thackray VG. Intersection of polycystic ovary syndrome and the gut microbiome. J Endocr Soc. 2021;5(2):bvaa177.
  28. He S, Li H, Yu Z, et al. The gut microbiome and sex hormone-related diseases. Front Microbiol. 2021;12:711137.
  29. Chu W, Han Q, Xu J, et al. Metagenomic analysis identified microbiome alterations and pathological association between intestinal microbiota and polycystic ovary syndrome. Fertil Steril. 2020;113(6):1286-1298.
  30. Yurtdaş G, Akdevelioğlu Y. A new approach to polycystic ovary syndrome: the gut microbiota. J Am Coll Nutr. 2020;39(4):371-382.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

ZeLan Tedavisi16S rRNA SekanslamaSerum MetabolomikleriUHPLC-Q-TOF-MSMikrobiyal ÇeşitlilikSteroid Hormonlar
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.