Orta hat Laparotomisi ile Farelerde Enterosisteplasti için Standartlaştırılmış İleal Mesan Büyütmesi

Özet

Bu protokol, tekrarlanabilir mesane artışını sağlamak için pedikle, damarlanmış ve tübülerize edilmiş ileal yama ile geçici olarak dışa dönük idrar yönlendirme ile kanül tüpü ile standartlaştırılmış bir fare enterosistoplastisi modelini tanımlar.

Özet

Bağırsak segmentleri kullanılarak mesane büyütme, konservativ tedaviler başarısız olduğunda düşük kapasiteli veya kötü uyumlu mesane olan hastalar için temel bir rekonstrüksiyon prosedürü olmaya devam etmektedir. Klinik önemine rağmen, deneysel ilerleme ve derinlemesine çalışma, kontrollü preklinik ortamda cerrahi prensipleri güvenilir şekilde modelleyen standartlaştırılmış, tekrarlanabilir protokollerin eksikliğiyle sınırlıdır. Burada, damarlı, tübülüze edilmiş ileal yamayı pedicled flep olarak kullanarak doğal mesaneyi güçlendiren adım adım bir fare enterosistoplastisi protokolü sunuyoruz. İşlem, orta hat laparotomi, kontrollü maruz kalma ve mesaneyi tutma dikişleriyle stabilize etmesi, dışa dönük kanül tüpü Foley ile idrar yönlendirmesi, sağlam mezenterik pedik ile kısa bir ileal segmentin izolasyonu, tübüler ve mesane duvarıyla gerginliksiz anastomoz içermektedir. Mezenterik perfüzyonun korunmasına, pedikul burulmasının önlenmesine, su geçirmez dikişin sağlanmasına ve kateter açıklığının sağlanmasına vurgu yapılır; bunlar prosedürel başarı ve tekrarlanabilirlik için kritik öneme sahiptir. Sekiz hayatta kalmayan sıkçanda hiperspektral görüntüleme (HSI) kullanılarak temsil intraoperatif doğrulama, önemli ameliyat adımlarından sonra korunmuş doku oksijenasyonu ve bağırsak segmentinin perfüzyonu gösterdi ve bu işlemin sonunda doku canlılığını destekledi. Bu nedenle, bu protokol, sıçan enterosistoplastisinin tekrarlanabilir cerrahi uygulaması için standartlaştırılmış deneysel bir yaklaşım sağlar. Modelin potansiyel sonraki uygulamaları arasında metabolik ve elektrolit değişiklikleri, enfeksiyon hassasiyeti, mukus üretimi ve displazi veya malignite indüksiyonu incelenmesi yer almakta olup, bu konular gelecekteki hayatta kalma araştırmalarında ele alınmalıdır.

Giriş

Fizyolojik idrar kesesi fonksiyonu, yüksek yaşam kalitesini korumak için temel bir yapımdır; etkili idrar deposu ve boşaltma kaçırma, sosyal iyilik ve genel sağlık için kritik öneme sahiptir. Mesane fonksiyonunu etkileyen bozukluklar, idrar kaçırma, tekrarlayan enfeksiyonlar, böbrek yetmezliği ve günlük yaşamda derin olumsuz etkiler gibi önemli hastalıklara yol açabilir.

Hem doğuştan hem de edinilmiş mesane patolojileri önemli fonksiyonel bozukluklara neden olabilir; konservatif ve farmakolojik tedaviler yetersiz olduğunda cerrahi müdahale gerektirebilir. Arka üretral^{kapak 1}, mesane ve kloakal ekstrofi ile epispadias ^2,3 gibi doğuştan gelen anomaliler genellikle düşük kapasiteli, kötü uyumlu mesanelerle ilişkilidir ve bu da üst idrar yolunun bozulma riskini artırır. Benzer şekilde, miyelodisplazi⁴, multipl^{skleroz 5} ve omurilik^{yaralanması 6} gibi nörolojik durumlar genellikle nörojenik mesane fonksiyon bozukluğuna yol açar ve hem depolama hem de boşalma mekanizmalarını bozur. Ayrıca,^{tüberküloz 7} ve şistozomiaz⁸ gibi enfeksiyon etiyolojiler mesane duvarı fibrozunu indükleyebilir, uyumu azaltabilir ve ikincil komplikasyonlara yatkın olabilir. Refrakter durumlarda, mesane artırma depolama kapasitesini artırmak, intravezikal basıncı azaltmak ve böbrek fonksiyonunu korumak için etkili bir strateji olarak hizmet eder; nihayetinde yaşam kalitesini artırır ve uzun vadeli komplikasyonları azaltır.

Amerikan Üroloji Derneği'nin (AUA) aşırı aktif mesane yönergelerine göre, mesane büyütme (enterosistolesti), mesane kapasitesi azalmış, uyum zayıf veya konservatif tedaviye dirençli detrusor aşırı aktivitesi olan hastalar^{için önerilir 9}. İlk olarak 1888'de Tizzoni ve Foggi tarafından köpek^{modeli 10} kullanılarak tanımlanan ve daha sonra 18991'de von Mikulicz tarafından insan uygulamasına uyarlanan enterosistoplasti, idrar depolama basınçlarını azaltmak ve nörojenik mesane, mesane ekstrofisi ve arka üretral kapaklar gibi çeşitli mesane bozukluklarıyla ilişkili böbrek hasarı ve kontinans risklerini azaltmak için standart cerrahi yaklaşım ^{olmaya devam etmektedir 12. 13}.

Geleneksel enterosistoplasti tekniği, mesanenin koronal veya sagital düzlemde trigona kadar iki valf edilmesini ve ardından detübüler bağırsak^{segmenti 12'nin} dahil edilmesini içerir. İleum, genellikle ileosekal^{valf 12'ye} 25-40 cm proksimal olarak alınan en sık kullanılan bağırsak segmentidir. İleum uygun değilse, sigmoid kolon tercih edilen^{alternatif olarak kullanılır 12}.

Bu işlem uzun vadeli dayanıklılık ve yüksek hasta memnuniyet^{oranları sunsa da}, gastrointestinal dokunun idrar yoluna eklenmesi metabolik bozukluklar, mesane taşı oluşumu ve yüksek malignite riski gibi belirgin dezavantajlar da taşır^{. 15,16,17}.

Bu potansiyel komplikasyonlar göz önüne alındığında, altta yatan mekanizmaları incelemek, cerrahi teknikleri geliştirmek ve alternatif artırma malzemelerini değerlendirmek için kontrollü çalışmalara kritik ihtiyaç vardır. Bir kemirgen modeli, bu yönleri araştırmak için yapılandırılmış ve tekrarlanabilir bir ortam sağlar; bu da araştırmacıların asit-baz dengesi ve elektrolit bozulmaları dahil olmak üzere artırım sonrası metabolik adaptasyonları analiz etmesini sağlar. Ayrıca, mesane dokusunun zamanla yeniden şekillendirilmesini incelemeye olanak tanır ve fibroz, ürotelyal rejenerasyon ve artırılmış segmentlerin entegrasyonu hakkında içgörü sağlar. Ayrıca, enterosistolesti ile ilişkili artan malignite riski göz önüne alındığında, kemirgen modeli histopatolojik değişiklikleri inceleme ve karsinogenezin erken belirteçlerini belirleme fırsatı sunar. Önemli olarak, böyle bir model aynı zamanda biyomateryal ve doku mühendisliği uygulamaları üzerine araştırmaları kolaylaştırır ve potansiyel olarak daha düşük kanserojen ve immünojenik risklere sahip alternatif takviye malzemelerinin yolunu açar¹².

Kemirgenlerde ve diğer türlerde deneysel mesane artırma modelleri bildirilmiş olsa da, orta hat laparotomisi ile ileal enterosisteplasti için doğrudan karşılaştırılabilir, standartlaştırılmış adımlı bir protokol yoksundur. Daha önceki fare çalışmaları, klasik artırma sistoplastisini deneysel bir model olarak tanıtmış ve seromüsküler ve lazer destekli enterosisteplasti gibi varyantları^{tanımlamıştır} 18,19,20. Sonraki çalışmalar uzun vadeli histopatolojik ve bakteriyolojik değişiklikler, tümör gelişimi, taşıma fizyolojisi ve fonksiyonel sonuçlarla ilgilenirken, kısmi mesane nakli ve bağırsak mukozasının ürotel ile fotodinamik değişimi gibi ek rekonstrüksiyonlar da^{incelenmiştir} 21,22,23,24,25,26,27 . Bir arada, bu çalışmalar fare takviye modellerinin var olduğunu, ancak kapsam olarak heterojen olduğunu ve esas olarak fizibilite, biyolojik sonuçlar, fizyoloji veya spesifik rekonstrüktif modifikasyonlara odaklandığını^gösteriyor 18,19,20,21,22,23,24,25,26,27 . Bu nedenle, bu çalışmanın amacı, farelerde orta hat laparotomisi yoluyla standartlaştırılmış enterosistoplasti yapmak için ayrıntılı bir prosedürel rehber sunmaktır. Protokol, hayatta kalma dışı bir ortamda kurulmuştur. Uzun vadeli gözlem gerektiren uygulamalar makul olabilir, ancak bu protokolün ameliyat sonrası iyileşme ve uzunlamasına takibi ile hayatta kalma çalışması ortamına uyarlanmasını gerektirebilir. Bunlar fonksiyonel sonuçların değerlendirilmesi, ameliyat sonrası arıza mekanizmaları, zamanla doku yenilenmesi veya doku mühendisliği entegrasyonunu içerebilir.

Mevcut model, kontrollü bir fare ortamında klinik enterosisteplastinin temel teknik prensiplerini yeniden üretmek ve standartlaştırılmış deneysel uygulama için uygulanabilir kalmak üzere tasarlanmıştır. Detübülerize ileal yama seçilmiştir çünkü detübülerizasyon içsel bağırsak kasılmasını azaltır ve klinik artırmada yaygın olarak kullanılan rekonstruktif prensibi daha iyi yansıtır. Pediküllü, damarlanmış bir segmentin kullanımı, mezenterik perfüzyonun korunmasını sağlar ve greft hazırlığı sırasında ve sonrasında doku canlılığının doğrudan değerlendirilmesini sağlar. Ameliyat sırasında mesanenin kontrollü drenajını sağlamak ve yeniden inşa edilen segmentin standart intraoperatif değerlendirmesini kolaylaştırmak için kanül tüpü Foley aracılığıyla dışa doğru idrar yönlendirme yöntemi dahil edildi.

Protokol

Bu belgede belirtilen tüm hayvan prosedürleri akredite tesislerde gerçekleştirilmiş olup, Almanya'nın Karlsruhe kentindeki Baden-Württemberg Bölge Konseyi'nin kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış (35-9185.81/G-62/23). Deneysel hayvanlar, kurumsal protokollere uygun olarak ve hayvan refahını düzenleyen Alman mevzuatına uygun şekilde ele alındı; ayrıca Avrupa Topluluğu Konseyi (2010/63/EU) ve ARRIVE yönergeleri tarafından belirlenen yönergelere uyuldu. Janvier Labs'tan alınan ve 8–12 haftalık ve 400 g ağırlığında erkek Sprague-Dawley fareleri (n = 8), bir haftalık aklimatizasyon döneminden sonra kullanıldı.

1. Anestezi ve analjezi

1. Hayvanı bir indüksiyon odasına yerleştirerek ve %100 oksijenle seyreltilmiş %4 hacim isofluran kullanarak 5 L/dakika akış hızında anestezi indükleyin.
2. Dissosiyatif anestezi, analjezi ve sedasyon için, refleks kaybı durumunda 100 mg/kg ketamin (%10 çözeltisi; 400 g vücut ağırlığı için 0,35 mL) deri altına enjeksiyon ve 4 mg/kg ksilazin (%2 çözeltinin 1:10 seyreltilmesi; 400 g için 0,75 mL eşittir) 28,29,30,31 enjeksiyonu uygulanır. Tüm anestezik ve ağrı aljezik maddeleri mg/kg vücut ağırlığı bazında verin.
   NOT: Belirtilen enjeksiyon hacimleri, vücut ağırlığı 400 g olan fareler için yaklaşık örneklerdir ve her hayvan için ayrı ayrı hesaplanmalıdır.
3. Analjezik derinliği, sıkı bir parmak sıkıştırma tepkisi olmadan forseps kullanarak doğrulayın ve kornea kurumasını önlemek için kornea merhemi uygulanın.
4. 5 mg/kg karprofen deri altı enjeksiyonu ile ek analjezi elde edin (%5 çözeltinin 1:10 seyreltilmesi; 400 g için 0,35 mL eşittir).
5. Ameliyat boyunca gerektiğinde yenidoğan yüz maskesi ile ek izofluran ile narkozu sürdürmek.
6. Hayvanı 40°C'ye ayarlanmış ısıtma pedine yerleştirerek ameliyat sırasında sıcaklık yönetimi gerçekleştirin. Ayrıca, rektal sıcaklık probu yerleştirin, ancak bu zorunlu değildir.
7. Perioperatif ve ameliyat sonrası sıvı desteği sağlanır; saatte 25 mL/kg (400 g için 10 mL eşit) 37 °C izotonik tuzlu çözelti deri altı enjeksiyonu ile her 20 dakikada bir enjeksiyonlara bölünür. Bu, genellikle 30 dakikalık beklenen kalan narkoz için hesaplanan karın kapanmasından sonra son bir enjeksiyonu da içermelidir.

2. Çalışma alanı ve enstrüman hazırlığı

1. Fırçalama masasını aletler ve malzemelerle hazırlayın, bunlar arasında:
   Atraumatik hazırlık pensepsleri
   Küt overholt kelepçeler
   Hazırlık makası
   Çift kollu, rezorbasyon olmayan monofilament 6-0 dikiş
   Tek kollu, hızlı resorbable polifilament 4-0 dikiş
   20 Gauge kateter olarak doğaçlama bir Foley kateteri
   Nemlendirilmiş pamuk çubukları
   Gazlı bez sürüntüleri
   İzotonik sodyum klorür çözeltisi
2. Hayvanı, önceki^yayınlar 30,31'de tarif edildiği gibi kemirgenlerin cerrahi maruz kalma cihazına monte edin. Karın bölgesini tıraş edin ve %70 etanol ve povidon-iyot veya klorheksidin bazlı antiseptik sürüntlerle dönüşümlü üçlü peelingler yaparak sterilize edin; kesi yerinden dışa doğru konsantrik daireler halinde uygulanır. Üç kez tekrarlayın.
3. Hayvanı steril perdelerle örtün ve sadece cerrahi alanı açık bırakın.

3. Orta hat laparotomisi ile cerrahi erişim

1. İnce makasla yaklaşık 5 cm ortaca karın laparotomisi yapın ve linea alba'yı orta hatta uzunlamasına keserek peritoneal boşluğa ulaşın.
2. Karın duvarını geri çekmek ve periton boşluğunu açmak için hazırlık kancaları ve nemli kompresler kullanın.

4. İnce bağırsak ve idrar mesanesinin tanımlanması ve hazırlanması (Şekil 1)

1. İnce bağırsağı tanımlayın ve travmatik hazırlık forseptleri ile nemlendirilmiş pamuklu çubuklarla nazikçe bir döngü harekete geçirin (Şekil 1A.1).
2. Uygun konumda bulunan bir şeyi belirlemek için ince bağırsak halkasını mesane ile yaklaşık olarak eşleştirin
3. Genişletme için yaklaşık 12 mm uzunluğunda ince bağırsak segmenti (Şekil 1A.2). Bu, ileosekal birleşime en az 2 cm yakınlıkta mekanik olarak uygun ilk bağırsak döngüsü olmalıdır.
4. İdrar kesesini, çevresindeki bağ dokusunu hazırlık makası ile disseksiye ederek harekete geçirin (Şekil 1B).
5. Tek kollu, rezorbasyon olmayan monofilament 4-0 dikişleriyle mesane duvarında 3, 6, 9 ve 12 saat pozisyonlarına stay dikişleri yerleştirilin (Şekil 1C.1–1C.5).
6. Mesane kubbesini travmatik pensle kavrayıp diseksiya makası ile stabil dikişler arasında yaklaşık 4 mm enine bir kusur oluşturun (Şekil 1D.1–1D.2).
7. Kesik kenarı kapsayacak şekilde 4 stabil dikişi değiştirin: her dikişi sırayla çekin. Bir dikiş birer birer iğneyi kesi kenarı etrafından yönlendirin, luminal taraftan doğrudan kenardan bir ısırık alın, ardından bitişik seromusküler tabakadan çıkarak kenarı döngü yapar, geri çeker ve açığa çıkarır (Şekil 1E.1–1E.6).

5. Dış idrar saptırma için kanül tüpünün Foley yerleştirilmesi ve fiksasyonu (Şekil 1)

1. Damar içi kanülü (G20) mesane lümeninden geçirin ve intraluminal taraftan karın duvarından dışarıya doğru ilerletin (Şekil 1F.1–1F.3).
2. Metal kanülü tüpten çıkarırken kanül borusunu bir forseps ile doğaçlama Foley kateteri olarak stabilize edin (Şekil 1F.4–1F.5).
3. Kanül tüpünü deriye sabitlemek için, tüp lümeninden geri çekilmeyen monofilament 4-0 dikişi geçirin ve dış açıklıktan yeterli bir güvenlik kenarıyla sabitlenerek sonraki yerinden çıkma riskini en aza indirin (Şekil 1G.1–1G.6).
4. Kanül tüpünü Foley ile boşaltın; açıklığı doğrulamak için ikinci bir intravenöz kanülün tüpünü kullanarak başlangıç kanülünden bir beden büyüklüğüne (örneğin, G18) erişin (Şekil 1G.1–1G.9).
5. Kanül tüpünü hızlı rezorbable 4-0 polifilament dikişi ile mesane duvarına intravezial olarak dikerek, kazara yerinden çıkma riskini azaltmak için kanül tüpünün merkezinden güvenlik marjini koruyarak (Şekil 1H.1–1H.4).
6. Kanül tüpünün göbeğini forsepsle tutun ve makasla borulardan ayırın (Şekil 1H.5–1H.7).
7. Kanül tüpü Foley mesaneye yerleştirilin (Şekil 1H.8–1H.9).

Şekil 1: Dışa vurulmuş idrar yönlendirme kanülü tüpü Foley yerleştirilerek ince bağırsak ve mesane hazırlığı. (A) İnce bağırsak ve mesane tanımlanması ve yaklaştırılması (A.1–A.2). (B) Peritoneumun diseksiyonu yoluyla mesanenin harekete geçirilmesi (B.1–B.4). (C) Mesane kubbesine (C.1–C.5) dayanma dikişlerinin yerleştirilmesi. (D) Mesane duvarının diseksiyonu (sistotomi) (D.1–D.2). (E) Stay dikişlerinin değiştirilmesi (E.1–E.6). (F) Kanülün dış idrar yönlendirmesi için sistotomi (F.1–F.5) yerleştirilmesi. (G) Karın duvarında dış kanül tüpü segmentinin fiksasyonu (G.1–G.9). (H) Kanül tüpünün ucu (H.1–H.9) fiksasyonu ve son intravezikal yerleştirilmesi. (I) Foley olarak tanımlanan hazırlık ve kanül tüpünün yerleşimini özetleyen şematik illüstrasyon. Kalın noktalı çizgi ince bağırsağı tasvir eder. İnce noktalı çizgi mesaneyi tasvir eder. Siyah kareler, sonraki fotoğrafta büyütülmüş görüntü bölümünü gösterir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

6. İnce bağırsak segmentinin izolasyonu (Şekil 2)

1. İnce bağırsak halkasını steril bir gazlı bez çubuğuna yerleştirin, idrar mesanesine doğru hareketliliğini değerlendirin ve yaklaşık 12 mm uzunluğunda uygun bir segment seçin (Şekil 2A.1–2A.4).
2. Seçilen bağırsak segmentini kalan bağırsaktan kesin, mezenterik kan akışını koruyarak doğru yönü koruyarak damar pedikuletinin daha sonra bükülmesini önleyin (Şekil 2B.1–1B.4).
3. Her iki kesilmiş bağırsak ucundan kalan ışık içeriğini pamuk çubuğuyla nazikçe ifade edin (Şekil 2C.1–2C.6).
4. Küçük bağırsak halkasının bitişik iki uzvunu yukarıya doğru yansıtın, böylece sadece seçilen segment gazlı bez sürüntüsünde kalsın (Şekil 2D–2E).

Şekil 2: Mesane büyütmesi için ince bağırsak segmentinin tanımlanması ve izolasyonu. (A) Mesane büyütmesi için uygun bir ince bağırsak segmentinin mobilizasyonu ve tanımlanması (A.1–A.4). (B) Seçilen ince bağırsak segmentinin kalan bağırsak halkasından kesilmesi (B.1–B.4). (C) Kalıntı ışık içeriğinin tahliyesi (C.1–C.4). (D) Kalan ince bağırsak halkasının ağız ve aboral uçlarının ayrılması ve konumlandırılması. (E) İzole ince bağırsak segmenti, sonraki artırım için hazırlandı. (F) Segment seçimi ve izolasyonunu özetleyen şematik illüstrasyon. Kalın noktalı çizgi, izole edilmiş ince bağırsak segmentini tasvir eder. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

7. Bağırsak segmenti ve mesane büyütme işlemi (Şekil 3)

1. Antimesenterik sınır boyunca izole bağırsak segmentini makasla açın, böylece yaklaşık 12 mm × 8 mm boyutunda tübülerize bir leget oluşturulur (Şekil 3A.1–3A.3).
2. Greftin yeni oluşmuş köşe kenarlarını kesin (Şekil 3B.1–3B.3).
3. Çift kollu 6-0 monofilament dikiş kullanarak ince bağırsak segmentinin anastomozuna devam edin. Saat 12 pozisyonunda, iğneyi mesane duvarından ekstraluminal taraftan intraluminal tarafa geçirin (Şekil 3C.1–3C.2).
4. İğneyi ince bağırsak segmentinin sağ alt köşesinden intraluminal taraftan ekstraluminal tarafa geçirin. Çift kollu dikişin yaklaşık orta noktasına kadar çekildiğinden emin olun, çünkü bu, üst sabitleme noktasını tanımlar (Şekil 3C.3–3C.4).
5. Dikişi bağırsak greftini mesane ile yaklaşık olarak eşleştirecek şekilde sıkılaştırın; böylece segment yaklaşık 45° saat yönünün tersine döner. Düğümü ekstraluminal tarafta bağlayın (Şekil 3D.1–3D.2) ve ikinci iğneyi bağırsak segmentinin mezentery'sinin etrafından geçirerek greftin her iki tarafından çevresel dikişini mümkün kılın (Şekil 3E.1).
6. Mesane büyütme yamasının çevresel anastomozuna başlayın: Bağırsak segmentini mesane defektine ardışık olarak dikin, mesane kenarında dıştan içe ısırığı ile ardınca dikin, ardından bağırsak segmentinden içten dışa bir ısırık yapılır, ardından bir sonraki dikişe geçin.
7. Stay dizilerini sıralı olarak serbest bırakın (Şekil 3E.1–3E.15). İnce bağırsak yaması için mesane için biraz daha büyük ısırıklar kullanın; Ancak, yamanın üzerinde kaplamak için çok daha fazla uzunluk olması amaçlanmıştır, böylece dikişlenmemiş fazla ince bağırsak uzunluğu kalacaktır.
8. Mesane defektinin çevresel kapanmasını tamamladıktan sonra, bir dikiş ucunu bağlayın. Kalan dikiş kullanılarak, bağırsak segmentinin kalıntı serbest kısmını konik ("sivri başlık benzeri") şekilde kapatın ve dikişi bağlayın (Şekil 3F.1–3F.6).
9. Mesanesi anatomik konumuna döndürün ve bağırsak yeniden konumlandırılarak bağırsağın bükülmediğinden emin olun (Şekil 3G.1–3G.2).

Şekil 3: İnince bağırsak yamasının ve çevresel mesane artırma anastomozunun inşası. (A) İnce bağırsak segmentinin diseksiyonu ve hazırlanması (greft hazırlığı) (A.1–A.3). (B) Greftin köşe kenarlarının kesilmesi (B.1–B.3). (C) Anastomozun başlangıcı, greft ile mesane açıklığı arasına sabitleyici dikiş yerleştirilerek (C.1–C.4). (D) Greft ve sistotomi kenarlarını hizalamak için sabitleme noktasının sabitlenmesi (D.1–D.2). (E) Mesane artırma yamasının mesane duvarına çevresel anastomozu (E.1–E.15). (F) Kalan ince bağırsak segmenti dokusunun konik, sivri başlı bir konfigürasyonda kapanması (F.1–F.6). (G) Organların anatomik konumlarına yeniden konumlandırılması (G.1–G.2). (H) Greft hazırlığı ve mesane artırma anastomozunu özetleyen şematik illüstrasyon. Kalın noktalı çizgi ince bağırsak segmentini gösterir. İnce noktalı çizgi, mesane duvarının açıklığını gösterir. Beyaz ok iğneyi tasvir eder. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

8. Uçtan uca küçük bağırsak anastomozu (Şekil 4)

1. Anastomoz için çift kollu, resorbasyon olmayan monofilament 6-0 dikiş kesim kullanabilirsiniz. İğneyi her iki bağırsak ucunun antitimenarik kenarından geçirin. Henüz düğümü sıkmayın, ancak görselleştirmeyi korumak için bağırsak uçları arasındaki dikiş segmentine bir kelepçe yerleştirerek paraşüt tekniği kullanın (Şekil 4A.3–4A.6).
2. Her iki bağırsak ucunun mezenterik kenarından ve kelepçeden benzer şekilde bir dikiş yerleştirin (Şekil 4A.7–4A.10).
3. Her iki küçük bağırsak ucunun ön duvarından iki dikiş yerleştirerek daha sonra kapanmayı kolaylaştırabilir ve dikiş uçlarını kelepçelerle sabitleyin (Şekil 4B.1–4B.4).
4. Her iki bağırsak ucunu yukarı yansıtarak arka küçük bağırsak duvarını ortaya çıkarın. Ön duvara benzer şekilde, arka duvardan iki dikiş yerleştirilin ve dikiş uçlarını kelepçelerle sabitleyin (Şekil 4C.1–4C.4).
5. Tüm dikişler yerleştirildikten sonra, altı dikişin tamamını sırayla bağlayın (Şekil 4D.1–4D.6).
6. Mezenterik defekti, sonraki fıtığı önlemek için 2–3 kesintili hızlı resorbable polifilament 4-0 dikiş ile kapatın (Şekil 4F.1–4F.8).

Şekil 4: Uçtan uca küçük bağırsak anastomozu ve mezenterik defekt kapanması. (A) Hizalama dikişlerinin antimeserik ve mezenterik sınırlara yerleştirilmesi (A.1–A.10). (B) İki ön duvar yaklaşım sütürünün yerleştirilmesi (B.1–B.4). (C) Arka duvarın açığa çıkması ve iki arka duvar yaklaşım dikişinin yerleştirilmesi (C.1–C.4). (D) Anastomozu tamamlamak için altı dikişin tamamının ardışık bağlanması (D.1–D.6). (E) Uçtan uca büyümüş anastomoz (E.1–E.2). (F) İç fıtığı önlemek için kesintili dikişlerle mezenterik defektin kapanması (F.1–F.8). (G) Uçtan uca küçük bağırsak anastomozunun şematik çizimi. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

9. Son adımlar ve dikkate alınanlar

1. Daha önce yayımlanmış 29,30,31 protokollerine uygun olarak, steril koşullarda karın duvarını çok katmanlı şekilde kapatın.
2. Hayatta kalmama işlemleri veya takipten sonra planlı abort için, hayvanları derin anestezi altında keskin kardiektomi, servikal dislokasyon veya giyotin kafası kesme yoluyla ötenazi yapın.
3. Gerekirse, mesane sonraki anatomik değerlendirme (örneğin, mesane büyüme bölgesi ve bağırsak-mesane anastomozu değerlendirmesi), biyomoleküler analizler veya histopatolojik görüntüleme için kesi çıkarılabilir.
4. Bu amaçla, doğrudan görselleştirme altında dikkatli adımlı diseksiyon yapılarak artırılmış mesane en bloc çıkarılır; çevredeki yapışmaların nazikçe serbest bırakılması, doğal mesane, büyütülmüş bağırsak yaması ve anastomozik sınırların tanımlanması, ardından distal mesane çıkışı ve bitişik mezenterik veya bağırsak bağlantılarının kesilmesi gerekirse alınır; örneğin sıkıştırılması veya bozulmasından kaçınarak doku mimarisi sonraki analiz için korunur.

Sonuçlar

Bu protokolden sonra doku yaşamlılığını doğrulamak için, işlem sırasında sekiz sıçan üzerinde doku oksijenasyonu ve perfüzyon değerlendirildi (Tablo 1). Enterosistoplastiden önce, doku oksijen doygunluğunu (StO₂) ve perfüzyonu (NIR) görselleştirmek için ince bağırsakta hiperspektral görüntüleme (HSI) yapıldı (Şekil 5A.1). Negatif kontrol olarak, maksimum hipoperfüzyon aortanın sıkışmasıyla indüklenmiştir (Şekil 5A.2

Tartışma

Bu çalışma, orta hat laparotomisi, ekstrakorporeal kanülasyon ve detübüler ileal segmentin dahil edilmesi ile sıçanlarda tekrarlanabilir cerrahi protokol sağlar. Teknik, Tizzoni ve Foggi tarafından mesane büyütme için tanımlanan prensipleri takip eder ve hassas anestezi, aseptik hazırlık, idrar saptırma için dışa dönük kanülasyon ve damarlanmış bir ince bağırsak yamasının toplanmasını birleştirerek kemirgen modeline uyarlar.

Bu protokol, hayatta kalma olmayan ...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Atraumatic preparation forceps	Aesculap	FB395R	DE BAKEY ATRAUMATA atraumatic forceps, straight
Blunt overholt clamps	Aesculap	BJ012R	BABY-MIXTER preparation and ligature clamp, bent, 180 mm
Cannula tube foley for flusing and diversion	Mdk Mart	23-CA-CD-UL-CD	Cannula G18 (only the tube is used to flush the diversion cannula)
Carprofen	cp pharma	115	Carprofen 0,5% (5% with 50 mg/mL diluted 1:10) (Carprosol)
Cotton whool swabs	Amazon	ASIN: B0FPDB8ZGS	Non-sterile cotton whool swabs (autoclave for survival experiments)
Fast resorbable polyfilament 4-0 sutures	COVIDIEN	SV-494	Single-armed polyfilament surgical suture from resorbable polyglactin with one P-13 needle
Fixation rods	legefirm	‎500343896	Tuning forks used as y-shaped metal fixation rods
Foley catheter	B. Braun	4242010-02	20 Gauge 50 mm Introcan Safety 2 Catheter as diversion cannula
Gauze swabs	Medrull	ASIN: B09164D1JG	Sterile gauze swabs
Heating pad	Royal Gardineer	IP67	Royal Gardineer Heating Pad Size S, 20 Watt
Hyperspectral imaging camera system	Diaspective Vision	TIVITA Tissue Halogen	HSI system for validation
Isoflurane	Piramal Critical Care	PZN / EAN 09714675 / 4150097146757	100% isoflurane 250 mL
Isoflurane vaporizer	UNO ROESTVASTSTAAL BV	180000002	Isoflurane vaporizer
Isotonic sodium chloride solution	B. Braun	ASIN: B007PZJOQ4	0,9% sodium chloride solution
Ketamine	cp pharma	1202	Ketamine 10% (100 mg/mL)
Metal cannula	BD (Beckton, Dickinson)	301300	BD Microlance 3 cannula 20 Gauge as preparation hooks
Neontal face mask	asia connection	ME03016-0	Neontal face mask size #0 for neonate
Non-resorbable monofilament 4-0 sutures	COVIDIEN	SP-670	Single-armed monofilament surgical suture from non-resorbable poly-propylene with one C-16 needle
Non-resorbable monofilament 6-0 sutures	COVIDIEN	VP-733-X	Double-armed monofilament surgical suture from non-resorbable poly-propylene with two CV-22 needles
Ophthalmic ointment	Bayer Vital GmbH	1578681	5% dexpanthenol
Plastic perfusor tube	M. Schilling GmbH	S702NC150	Connecting tube COEX 150 cm
Preparation scissors	Aesculap	BC177R	JAMESON preparation scissors, bent, fine model, blunt/blunt, 150 mm (6")
Rat induction chamber	wpiinc	EZ-1785	Induction chamber for narcosis
Steel plate	Maschinenbau Feld GmbH	C010206	Galvanized sheet plate, 40 x 50 cm, thickness 4.0 mm
Xylazine	cp pharma	1206	Xylazine 0,2% (2% with 20 mg/mL diluted 1:10) (Xylavet)