Bu çalışma, Heyuan Halk Hastanesi Tıbbi Araştırma Etik Komitesi tarafından incelenip onaylandı (Onay Numarası: YXYJLL-SFKJ202461; Onay Tarihi: 15 Mayıs 2024). Etik sertifika ek dosya olarak yüklenmiştir. Reşit olmayan bir hasta, ebeveyn veya vasi, kayıt sırasında "Klinik biyolojik örneklerim ve verilerim, tanımlanabilir kişisel bilgiler kaldırıldıktan sonra Tıbbi Araştırma Etik Komitesi tarafından onaylanan bilimsel araştırma, teknolojik yenilik ve klinik araştırmalar için kullanılacak" şeklinde bir beyanname imzalamıştır; bu analiz hasta için ek risk oluşturmayacak ve ilgili düzenlemelere uygundur. Bu çalışmada kullanılan tüm materyaller Materyaller Tablosu'nda listelenmiştir.
Konular
Ocak 2021 ile Aralık 2024 arasında Heyuan Halk Hastanesi ayaktan tedavi bölümünü ziyaret eden ve HPV testi geçiren toplam 1.559 erkek hasta çalışmaya dahil edildi. Katılımcıların yaşı 2 ile 80 arasındaydı (Çalışma popülasyonu, 2021 ile 2024 yılları arasında bu tıp kurumunda yapılan ayaktan tedavi ziyaretlerinden geçerli HPV nüklein asit test sonuçlarına sahip tüm erkek hastalardan oluşmaktadır; Ana hedef, bölgedeki erkek hastalar arasında HPV testi ve enfeksiyon kalıplarına kapsamlı bir genel bakış sunmaktır; Ayrıca, HPV enfeksiyonunun yolları sadece cinsel aktiviteyi değil, aynı zamanda cilt yüzeyi ve mukoza zarlarıyla sürtünme veya temas ile anneden çocuğa dikey bulaşmayı da içerir. Bu nedenle, ortalama yaş kısıtlamaları getirilmedi ve ortalama yaş (34,2 ± 10,7) idi.
Yöntemler
Bu çalışma, hastanemizin ayaktan tedavi bölümünü ziyaret eden ve HPV testi geçiren tüm erkek hastaları analiz etmek için retrospektif kesitsel bir tasarım kullandı; Tekrar test edilenler için yalnızca ilk seçme sonuçları dahil edildi.
Örnek koleksiyonu
Eksfoliasyon edilen hücre örnekleri, eğitimli klinisyenler tarafından steril, özel örnekleme fırçaları kullanılarak alındı. Toplama alanları arasında penisin dorsal ve ventral yüzeyleri, iç ve dış koronal sulkuslar, glans penisi, distal üretra ve görünür verrukoz lezyonlar yer alıyordu; yer seçimi bireysel hasta bulgularına göre belirlendi; Toplandıktan sonra, fırça başları özel bir örnek koruma çözümünde kırıldı. Numune koruma koşulları: Örnekleme sonrası örnekler hemen 2–8 °C sıcaklıkta buzdolabında saklandı ve test 3 gün içinde tamamlandı.
DNA çıkarımı
Her örnek salınıp karıştırıldıktan sonra, 200 μL sıralı olarak nüklein asit ekstraksiyonu veya saflaştırma reaktifine eklendi. DNA çıkarımı, SP96 tam otomatik nükleik asit çıkarma cihazında ekstraksiyon reaktifiyle manyetik boncuk teknolojisi kullanılarak gerçekleştirildi.
HPV tespiti
HPV-DNA testi, HPV genotipleme için PCR tabanlı in vitro amplifikasyon ve DNA ters nokta lekesi hibritizasyonunun kombinasyonunu kullanan insan papilloma virüsü genotipleme (tip 23) tespit kiti kullanılarak gerçekleştirildi. HPV genetik özelliklerine dayanarak özel primerler tasarlandı ve 23 HPV genotipinden hedef parçalar amplifikasyon yapıldı. Amplifikasyonlu ürünler, membrana sabitlenmiş tipleme problarıyla hibritize edildi; bunlar arasında 17 HR-HPV (HPV16,51,52,53,18,58,59,31,33,45,56,66,35,39,68,73,82) ve 6 LR-HPV (HPV6,11,42,43,81,83) yer almaktadır. Hibritleşme sinyallerinin varlığı veya yokluğuna dayanarak, bu HPV genotiplerinin enfeksiyon durumu belirlendi. Özel laboratuvar prosedürü, PCR reaksiyon karışımına ekstraksiyon edilmiş DNA'nın 5 μL eklenmesiyle filtrelenmiş pipet ucu kullanılarak toplam hacmi 25 μL'ye ulaştı. Sonrasında PCR amplifikasyonu yapıldı. Amplifikasyondan sonra, tüm amplifikasyonlu ürünler kolorimetrik hibritizasyon için membran şeritleri içeren izotermal hibritizatora eklendi. Renk geliştirme tamamlandıktan sonra sonuçlar yorumlanabilir.
İstatistiksel analiz
İstitisel analiz için SPSS 23.0 yazılımı kullanıldı. Sayım verileri vaka sayısı (n) ve yüzde (%) olarak ifade edildi. Gruplar arasındaki karşılaştırma χ2 testiyle yapıldı. P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi. 23 HPV genotipi arasında, herhangi bir tek genotipin pozitifliği HPV enfeksiyonunu gösterir; Sadece bir genotip için pozitiflik tek bir enfeksiyonu gösterir; ve iki veya daha fazla genotipin pozitifliği çoklu enfeksiyonu gösterir. Birden fazla enfeksiyon, birlikte var olan genotiplerin sayısına göre çift enfeksiyon, üçlü enfeksiyon, dörtlü enfeksiyon, pentuple enfeksiyon, heksüple enfeksiyon ve daha yüksek olarak sınıflandırılır." "Toplam tespit sıklığına oranı" toplam genotip tespit sayısı (1.238) olarak hesaplandı; çünkü birden fazla enfeksiyona sahip hastalar birden fazla genotipe katkıda bulundu.