Ekstraksiyon edilen insan premolarlarında kalıntı periodontal ligamentin intraoral tarama kullanılarak zararsız 3D nicel analizi

Özet

Bu protokol, çekilen dişlerde kalıntı periodontal bağların değerlendirilmesi için yıkıcı olmayan, nicel bir 3D dijital yöntemi detaylandırır. Intraoral tarama ve ters mühendislik yazılımı kullanarak, periodontal değerlendirme için ex vivo bir iş akışı oluşturduk ve preklinik araştırmalarda ekstraksiyon tekniklerini karşılaştırmak için metodolojik bir temel sağladık.

Özet

Kasıtlı diş yeniden dikilme, endodontik lezyonlara sahip doğal dişlerin korunması için değerli bir tedavidir. Başarısı, kritik olarak kalıntı periodontal ligamentin (PDL) canlılığı ve yapısal bütünlüğüne bağlıdır. Histolojik kesitleme veya iki boyutlu fotoğrafçılık gibi geleneksel değerlendirme yöntemleri ya yıkıcıdır ya da projeksiyon hatalarıyla sınırlıdır. Bu sınırlamaları gidermek için, bu protokol, yüksek hassasiyetli ağız içi tarama kullanarak kalıntı PDL'yi değerlendirmek için yıkıcı olmayan, nicel bir yöntem sunmaktadır. Çıkarılmış dişler PDL dokusunu görselleştirmek için boyanmış ve yüksek hassasiyetli dijital modeller oluşturmak için üç boyutlu taranmıştır. Veriler, ilgi alanının tanımlandığı ve kalan PDL kapsamı renk eşik eşiğiyle nicel edildiği ters mühendislik yazılımı kullanılarak analiz edildi. Bu yaklaşım, PDL'nin gerçek 3D kapsama alanını biyolojik numuneyi ödünden düşürmeden hesapladı. Bu protokolün hassasiyetini ve faydasını değerlendirmek için, periotomlarla yapılan minimal invaziv (MI) ekstraksiyonları geleneksel forseps ekstraksiyonlarıyla karşılaştırmak için kullanıldı. Dijital analiz, MI yönteminin geleneksel yönteme (%50,46) kıyasla anlamlı şekilde daha fazla PDL dokusunu (%61,99) koruduğunu gösterdi. Ayrıca, sonraki hücre canlılığı testi dijital bulguları doğruladı ve MI grubunda metabolik aktivitenin önemli ölçüde daha yüksek olduğunu gösterdi. Sonuç olarak, bu çalışma, ex vivo nicel PDL değerlendirmesi için bir kavram kanıtı iş akışı oluşturmakta ve preklinik araştırmalarda ekstraksiyon tekniklerini karşılaştırmak için sağlam bir metodolojik temel sağlar.

Giriş

Kasıtlı diş yeniden dikintisi, doğal dişleri korumak için umutsuz sayılabilecek bir tedavi yöntemi olarak giderek daha fazla kabul edilmektedir. Kalıcı periapikal lezyonların, erişilemeyen kanal perforasyonlarının veya cerrahi olmayan şekilde yönetilemeyen geniş rezorpsiyonlu lezyonların tedavisinde^{belirtilir 1,2}. Standart prosedür, etkilenen dişin kasıtlı olarak çekilmesini, ardından oral dışı görsel muayene, terapötik müdahale (kök ucu rezeksiyonu, hazırlığı ve dolgusu dahil) ve ardından orijinal^{yuva 1,2'ye} yeniden yerleştirilmeyi içerir.

Kök yüzeyinde canlı kalıntı periodontal bağ (PDL) dokusunun varlığı ve bütünlüğü, diş yeniden dikme sonrası iyileşme desenini belirleyen en kritik prognostik^{faktörlerdir 3,4}. Sağlıklı ve sağlam bir PDL bariyeri, fizyolojik hareketliliğin yeniden tesis edilmesi ve revizyon rezorpsiyonu (ankiloz) veya inflamatuar kök rezorpsiyonu gibi komplikasyonların önlenmesi için gereklidir. Ancak, bir dişin alveolar yuvadan açılması, ister travmatik ister kasıtlı olsun, PDL lif bağlanmasını doğal olarak bozar ve nörovasküler beslemeyi^kopar. Sonuç olarak, PDL'nin biyolojik rekonstrüksiyonu, yeniden dikilen dişlerin periodontal iyileşmesi için kritik^{öneme sahiptir 3}. Kapsamlı araştırmalar, oral dışı klinik işlemler sırasında kalıntı PDL dokusunun canlılık ve hacminin maksimize edilmesinin kritik bir prognostik faktör oluşturduğunu ve yeniden dikilen dişlerin uzun vadeli fonksiyonel hayatta kalma için öneminin^{literatürde iyi belgelendiğini ortaya koymuştur 6,7}.

Ekstraksiyonun PDL tutunmasını doğal olarak bozduğu göz önüne alındığında, ekstraksiyon tekniğinin seçimi kök yüzeyinde kalan kalıntı PDL dokusunun hacmini ve canlılığını doğrudan etkiler. Geleneksel forseps ile ekstraksiyon, PDL'yi alveolar kemiğe karşı ezebilir veya sürtünme yoluyla soyabilir, dönme ve çekiş kuvvetleri uygular. Bu travmayı en aza indirmek için minimal invaziv (MI) ekstraksiyon yöntemleri geliştirilmiştir. Önceki çalışmalar, MI yöntemlerinin etkilenen dişlerin periodontyumuna cerrahi travmayı önemli ölçüde azaltabileceğini^{bildirmiştir 8}. PDL bağlantısını kesmek için periotomlar kullanan teknikler veya kaldıraç kuvvetlerini önleyen dikey çıkarma sistemleri, kök yüzeyindeki kalıntı PDL'yi korumak için geliştirilmiştir. Örneğin, vaka raporları, MI sistemleri kullanıldığında kasıtlı diş yeniden dikme ve cerrahi ekstrüzyonda klinik sonuçların iyileşmesini^{belgelemiştir 9,10}. Bu bulgular, ekstraksiyon travmalarının en aza indirilmesinin, kök yüzeyinde kalan PDL dokusunun tutulmasını iyileştirebileceğini göstermektedir.

Ancak, travmatik ekstraksiyonun faydaları konusunda klinik uzlaşıya rağmen, MI yöntemleri kullanıldığında korunan kalıntı PDL dokusunun kapsamını geleneksel tekniklere kıyasla niceleyen sınırlı doğrudan kanıt bulunmaktadır. Bu bilgi boşluğu büyük ölçüde mevcut değerlendirme metodolojilerinin sınırlamalarından kaynaklanmaktadır. Mevcut araştırmalar ağırlıklı olarak kök yüzeyindeki kalıntı PDL'yi değerlendirmek için öznel veya yıkıcı değerlendirme yöntemleri kullanmaktadır. Histolojik kesitleme, hücresel analiz için standart^{olmaya devam etmektedir 11}, ancak doğası gereği yıkıcıdır ve örneği sonraki çalışmalar için kullanılamaz hale getirir. Alternatif olarak, kalıntı PDL^12'nin karakterizasyonu için iki boyutlu (2D) fotoğraflama ile boyama kullanımı da kullanılmıştır. Ancak, bu yöntemler tüm kök yüzeyinin kalıntı PDL dokusunu nicelendirmek için yetersizdir. Bir 2D fotoğraf, karmaşık, eğri üç boyutlu bir kökün yüzey alanını doğru şekilde haritalayamaz; kaçınılmaz olarak projeksiyon hataları ve bozulmalar getirerek yanlış niceliklere yol açar.

Son yıllarda, intraoral dijital tarama teknolojisi önemli ölçüde ilerledi ve yüksek hassasiyet ile hızlı veri toplama imkanı sundu. Dijital yöntem, daha önceki çalışmalarda izlenimleri ve yumuşak doku değişikliklerini ölçmek veya genç bireylerde diş aşınmasını değerlendirmek için^{kullanılmıştır 13}. Uygulamalar, ağız cerrahisinde yüz şişmesinin değerlendirilmesi gibi karmaşık hacimsel analizlere de^{genişlemiştir 14}. Bu teknolojiler, ters mühendislik yazılımında manipüle edilebilen ve ölçülebilen yüksek hassasiyetli üç boyutlu (3D) modellerin oluşturulmasına olanak tanır ve yıkıcı olmayan, nicel analiz için potansiyel bir çözüm sunar. Ancak, bugüne kadar çekilmiş dişlerin kalıntı PDL'sini değerlendirmek için intraoral taramanın potansiyel uygulaması henüz araştırılmamıştır.

Bu protokolün genel amacı, biyolojik boyamayı yüksek hassasiyetli ağız içi tarama ve 3D ters mühendislikle birleştiren standartlaştırılmış, yıkıcı olmayan bir iş akışı oluşturmaktır. Renk dokulu yüzey haritalarıyla yüksek hassasiyetli dijital modeller oluşturularak, bu yöntem tüm kök yüzeyinde kalıntı PDL'nin daha nesnel ve tekrarlanabilir ölçümünü sağlar. Bu çalışma, önerilen iş akışını, insan premolarlarında periotom destekli MI ekstraksiyonu ile geleneksel forseps ekstraksiyonu olan iki ekstraksiyon tekniğinin kalıntı PDL kapsamını karşılaştırmak için uygulamaktadır. MI yönteminin, geleneksel yönteme göre daha fazla kalıntı PDL kapsamasını koruduğu varsayımlıdır.

Önemli olarak, bu protokol tamamen laboratuvar veya preklinik ortamlar için bir ex vivo araştırma aracı olarak tasarlanmıştır. Bu prosedür, boyama, hava ile kurutma, dijital tarama ve yazılım tabanlı segmentasyonu içerir; toplam analiz süresi, kasıtlı yeniden dikme sırasında ameliyat içi kullanımla uyumsuz olur; çünkü dış zaman en aza indirilmelidir. Sonuç olarak, bu yöntem (i) kontrollü koşullarda farklı ekstraksiyon tekniklerinin PDL koruyucu etkinliğini karşılaştırmak; (ii) eğitim ve kalibrasyon; ve (iii) dijital PDL kapsama metriklerini biyolojik sonuçlarla ilişkilendiren doğrulama çalışmaları. Karmaşık anatomilere sahip çok köklü dişlere uygulanabilirliği daha fazla araştırma gerektirir.

Protokol

Araştırma protokolü, Pekin Üniversitesi Stomatoloji Fakültesi Etik Komitesi'nin (PKUSSIRB-202054022) yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Hasta seçimi ve grup dağılımı

1. Ortodontik amaçlarla premolar ekstraksiyonu gereken hastaları seçin. Premolarların çürük veya periodontal hastalık olmadan dahil etme kriterlerini karşıladığından emin olun.
2. Yüksek tansiyon, diyabet, sigara geçmişi veya 16 yaşından küçük veya 45 yaş üzerindeki hastaları hariç tutun.
3. Premolarları rastgele iki deneysel gruba ayırın: Kontrol Grubu (konvansiyonel ekstraksiyon) ve Minimal İnvaziv (MI) Grup (periotom destekli ekstraksiyon).
4. Her gruptaki dişleri rastgele olarak ya 3D tarama analiz yoluna ya da biyolojik doğrulama (CCK-8) yoluna atanır, böylece her değerlendirme yöntemi için bağımsız örnekler kullanılır.

2. Diş çekim prosedürleri

1. Tüm ekstraksiyonları standart lokal anestezi altında yapın.
2. Yöntem A: Geleneksel ekstraksiyon (Kontrol grubu)
   1. Diş boynunun etrafında diş ayrımı yapın.
   2. Diş pensepslerini diş kronunun servikal bölgesine yerleştirin.
   3. Diş gevşeene kadar dönme kuvvetleri uygulayın. Penseps kullanarak dişi alveolar yuvadan çıkarın.
3. Yöntem B: Minimal invaziv ekstraksiyon (MI grubu)
   1. Diş ayrımı yapın.
      DIKKAT: Yumuşak doku yaralanması veya alet kırılmasını önlemek için periotomu dikkatlice kullanın.
   2. PDL boşluğuna mümkün olduğunca derin bir periotom, kök uzunluğunun en az üçte ikisine kadar yerleştirin.
   3. Periotomla kök etrafındaki PDL liflerini çevresinden kesin. Dişi gevşet.
   4. Dişi alveolar yuvadan diş forsepsiyle dikey olarak çekin.

3. Numune hazırlama ve boyama

1. Diş çekiminin hemen ardından dişleri steril salinle 10 dakika boyunca durulayarak kan ve kalıntıları temizleyin.
   DIKKAT: Toluidin mavisi tehlikeli bir kimyasaldır. El tutarken uygun kişisel koruyucu ekipman (eldiven, gözlük) giyin.
2. Kök yüzeyini, dişi %0,1 toluidin mavisi çözeltiye (fosfatla tamponlanmış salin, PBS ile hazırlanmış) 40 dakika boyunca daldırarak PDL dokusunu görselleştirerek boyandırın.
3. Boya çözeltisi çıkarmak için 10 dakika boyunca tuzlu bir suyla durulayın ve yüzeyi üç yollu şırıngayla nazikçe fenleyin, böylece fazla nemi giderin.
   NOT: Kök yüzeyinin eşit mavi-mor bir renk göstermesi beklenirken, açıkta kalan çimento lekesiz kalmalı ve açık bej görünmelidir.

4. 3D Dijital Tarama

1. Ağız içi dijital tarayıcıyı üreticinin talimatlarına göre kalibre ederek 0,02 mm hassasiyet sağlanır.
2. Diş kronunu hemostatik forseps kullanarak kök yüzeyinin görüşünü engellemek için sabitleyin.
3. Tüm kök yüzeyini standart tarama koşullarında taran. 3D modeli tamamlamak için kronu tamamlayıcı tarama yapın.
4. Dijital tarama verilerini yüksek çözünürlüklü 3D nesne (OBJ) dosyası ve ilgili veri paketi olarak dışa aktarmak için tarayıcının özel yazılımını kullanın; doku görüntüsü JPG formatında kaydedilir.
   NOT: Canlı tarama önizlemesi, kök yüzeyinde herhangi bir delik veya artefakt içermeyen sürekli, yüksek yoğunluklu bir ağ göstermelidir. Doku görüntüsü, mavi lekeli bölgeleri lekelenmemiş kök yüzeyinden net bir şekilde ayırmalıdır.

5. 3D model yeniden yapılandırması ve nicel analiz

1. Görüntü ön işleme
   1. Eşik kalibrasyonu
      1. JPG doku haritasını görsel düzenleme yazılımına aktarın. Görüntüyü 8 bit gri tonlamaya dönüştürün.
      2. Threshold aracını (Image > Adjust > Threshold) açın ve histogramı inceleyerek tüm mavi boyalı PDL piksellerini yakalayan minimum gri ton değerini kaydedin. Üç bağımsız gözlemci kullanarak minimum gri ton eşiğini belirleyin.
   2. Orijinal JPG doku haritasını görsel düzenleme yazılımına aktarın. Renk aralığını seç> seçeneğine gidin. Gölgeler modunu seçin ve Aralığı 65, Toleransı %20'ye ayarlayın (5.1.1 eşik verisinden kalibre edilmiştir).
      NOT: Tüm mavi boyalı PDL bölgelerinin tamamen seçildiğini ve lekensiz kök yüzeyinin dahil edilmediğini doğrulayın.
   3. Seçilmiş, mavi lekeli bölgeleri kopyalayıp yeni bir beyaz tabakaya yapıştırarak ikili bir maske oluşturun (PDL için mavi, çıplak kök için beyaz). İşlenen doku görselini orijinal JPG dosyasının üzerine yazmak için kaydedin.
2. Nicel ölçüm
   1. İşlenen 3D modeli tersine mühendislik yazılımına aktarın.
   2. Diş eti ve periapikal dokuları hariç tutmak için İlgi Bölgesini (ROI) tanımlamak için Polygons > Trim kullanın. ROI'nin üst sınırını sementoenamel birleşiminin (CEJ) 2 mm altına koyar. Apikal 3 mm analiz dışı bırakın.
   3. ROI içindeki "gelişmiş mavi bölgeleri" seçin. Seçildikten sonra, kalan PDL dokusu kırmızı renkte vurgulanır.
   4. Analiz > Hesaplama > Hesaplama Alanı'na geçerek yatırım getirisinin toplam yüzey alanını ve mavi bölgelerin (kalıntı PDL) yüzey alanını hesaplayın.
   5. Denklem 1'i kullanarak PDL kapsamının yüzdesini hesaplayın:
      PDL kapsamı (%) = (Kalıntı PDL alanı/Toplam yatırım getirisi alanı) x 100
3. Görselleştirme
   1. Detaylı görsel değerlendirme için diş eksenine dik dört kök yüzeyinin (buccal, lingual, mesial ve distal) görüntülerini yakalayın.

6. Biyolojik doğrulama (Hücre yaşamlılık testi)

NOT: Bu bölüm, dijital analizi doğrulamak için bir alt küme örnek üzerinde (n = 8 grup başlığında) yapılan doğrulama adımlarını açıklar.

1. Çekimden hemen sonra, dişleri önceden ısıtılmış (37 °C) kültür ortamı içeren steril bir santrifüj tüpüne yerleştirin.
2. Numuneleri 1 saat içinde 4°C sıcaklıkta buz kutusunda laboratuvara taşıyın. Numune taşınması ve hücre canlılığı testi için %10 fetal sığır serumu, 100 U/mL penisilin ve 100 μg/mL streptomisin ile desteklenen Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı kullanın.
3. Dişleri hemen varılmaz bir biyogüvenlik dolabında steril fosfatlı tuzlu su (PBS) ile durulayın.
4. Hücre canlılığını en üst düzeye çıkarmak için kökün orta üçte birinden (ROI, kademeli periodontal probla tanımlanır) steril bir bistüre bıçağı ile oda sıcaklığında dikkatlice kazıyarak hücre canlılığını en üst düzeye çıkarın.
5. Toplanan dokuyu %0,25 tripsin-EDTA ile 30 dakika sindirin. Hücre süspansiyonunu 120 × g boyunca oda sıcaklığında (22–25 °C) santrifüjlenerek hücre içeren çökeltiyi elde edersiniz.
   NOT: Santrifüjlemeden sonra, tüpün tabanında belirgin bir beyaz pelet oluşmalıdır. Eğer pellet gözlemlenmezse, örnek 120 × g ile 1 dakika daha tekrar santrifüjlenmelidir.
6. Çökeltiyi üreticinin talimatlarına göre hazırlanan 1:10 oranında (v/v) 600 μL Hücre Sayma Kiti (CCK-8) çözeltisi ve ortam karışımına yeniden askıya alın.
7. Bu süspansiyonu 200 μL per kuyu ile 96 kuyu bir plakaya (örnek başına 3 teknik kopya) aldırın. Plakayı 37°C'de, %5_CO2 ile nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 3 saat boyunca kuluçka yapın.
8. Her kuyiden 50 μL süpernatantı yeni bir 96 kuyu plakasına aktarın.
9. 450 nm'de mikroplaka okuyucu kullanarak absorbansı (Optik Yoğunluk, OD) ölçün. İstatistiksel karşılaştırma için ortalama OD değerlerini kaydedin.
   DIKKAT: (i) Toluidin mavisi boyama çözeltisi toplamak ve atıkları tehlikeli kimyasal atık olarak durulamak ve kurumsal kimyasal güvenlik yönergelerine uygun olarak bertaraf etmek; (ii) PDL dokusunu biyolojik tehlikeli atık olarak (Biyogüvenlik Seviyesi 1) ele almak ve bunları kurumsal biyogüvenlik protokollerine göre otoklav veya yakmak; (iii) PPE'leri (eldivenler, pipet uçları, kağıt havlular) belirlenmiş biyolojik tehlike kaplarında atmak.

7. İstatistiksel analiz ve metodolojik doğrulama

1. Veri toplama: 3D analizden toplam kök yüzey alanı (mm²), toplam boyalı alan (mm²), PDL kapsama yüzdesi (%) ve biyolojik testten elde edilen OD değerleri dahil olmak üzere nicel verileri derleyin.
2. Normallik testi: Shapiro-Wilk testi kullanılarak normallik için veri dağılımını değerlendirin.
3. Grup karşılaştırması:
   1. MI ve Kontrol grupları arasındaki PDL kapsamı ve OD değerlerini karşılaştırın.
   2. Normal dağıtılmış veriler için eşleştirilmemiş Student's t-testi veya normal dağıtılmamış veriler için Mann-Whitney U testi kullanın.
   3. Farkın büyüklüğünü belirlemek için etki boyutunu (Cohen'in d'si) hesaplayın.
4. Metodolojik dayanıklılık analizi:
   1. "Kök Yüzey Alanı" bağımsız değişken olarak ve "PDL Kapsamı" bağımlı değişken olarak kullanılarak doğrusal bir regresyon analizi yapın.
   2. Ölçüm yönteminin diş boyutuna göre önyargılı olup olmadığını değerlendirmek için Pearson korelasyon katsayısını (r) hesaplayın. Anlamsız bir korelasyon (P > 0.05) sağlamlığı gösterir.
5. Güvenilirlik analizi:
   1. Verilerin olasılık yoğunluğu ve dağılım özelliklerini görselleştirmek için kutu grafikleriyle birleştirilen keman grafikleri oluşturun.
   2. Gruplar arasındaki veri dağılımının şeklini ve yoğunluğunu karşılaştırın.
6. Gözlemci içi ve gözlemciler arası güvenilirlik testi:
   1. Güvenilirlik değerlendirmesi için toplam veri setinden (grup başına 8 örnek) rastgele 16 örnek alın.
   2. Gözlemci içi tekrarlanabilirlik için, aynı 16 örnekte tam segmentasyon ve ölçüm prosedürünü bir haftalık aralıklarla tekrarlayın ve toplamda iki deneme yapıldı.
   3. Gözlemciler arası anlaşma için, iki ek bağımsız gözlemciye segmentasyon protokolü hakkında standartlaştırılmış eğitim sağlanır.
   4. Üç gözlemcinin de aynı 16 örnekte bağımsız olarak ROI tanımı, renk eşiği ve alan hesaplamasını gerçekleştirmesini sağla.
   5. Hem gözlemci hem de gözlemci arası karşılaştırmalar için mutlak uyumu niceltmek amacıyla %95 güven aralıklarıyla sınıf içi korelasyon katsayısı ICC(A,1) hesaplayın. ICC değerleri >0.90 mükemmel, 0.75–0.90 iyi, 0.50–0.75 orta ve <0.50 kötü olarak rapor edildi.
   6. Tüm çift karşılaştırmalar için Bland-Altman analizi yapın. Ortalama farkı (yanlılık) ve %95 uyum sınırını hesaplayın (ortalama fark +/- 1.96 SD). Anlamlı olmayan çift t-test sonucu (P > 0.05), sistematik önyargıyı önemsiz gösterir.
7. Yazılım: Tüm istatistiksel analizleri uygun yazılım kullanarak gerçekleştirin. P < 0.05'i istatistiksel olarak anlamlı olarak düşünün.

Sonuçlar

Bu çalışmada oluşturulan deneysel iş akışı, çekilen dişlerde kalıntı PDL'nin nicel değerlendirmesi için yıkıcı olmayan bir protokolü başarıyla göstermiştir. Deneysel tasarımda (Şekil 1) belirtildiği gibi, protokol klinik çıkarma prosedürlerini dijital alım ve biyolojik doğrulama ile entegre etti. Ağız içi dijital taramanın uygulanması ve ardından 3B ters mühendislik, kök yüzeyinin hassas yeniden inşası mümkün kıldı (Şekil 2). Di...

Tartışma

Kasıtlı yeniden dikmenin başarısı, kök yüzeyinde canlı PDL hücrelerinin korunmasına kritik önem verir. MI ekstraksiyon yöntemlerinin^{travma 8,9,10} azaltması için klinik olarak savunulmuş olsa da, kalıntı PDL dokusu üzerindeki biyolojik faydalarını nicelendirmek, objektif değerlendirme araçlarının eksikliği nedeniyle hâlâ bir zorluk olmuştur. Bu çalışma, kalıntı PDL dokusunu nicelendirmek için kav...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
96-well plate	Servicbio	CCP-96H	Hücre kültürü ve absorbans ölçümü için çok kuyucuklu plaka
Biosafety cabinet	Thermo Fisher Scientific	1300 Series4 A2	Steril prosedürler için Sınıf II biyolojik emniyet kabini
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) solution	MedChemExpress	HY-K0301	Hücre canlılık analiz reaktifi
Centrifuge	Ustc Zonkia Zcientific Instruments	SC-3610	Hücre çökeltme için laboratuvar santrifüjü
Culture medium	Gibco	DMEM 11965	Hücre taşıma ve inkübasyon için temel ortam
Dental forceps	Jinzhong Surgical instruments	K0F130/K0F100	Standart diş çekim aleti
Fetal bovine serum	Anhui Kangyuan Biotechnology Co., Ltd	KY-01003S	Kültür ortamı için fetal bovin serum takviyesi
Graduated periodontal probe	Jinzhong Surgical instruments	K6F040	Köklerin orta üçte birinden PDL'yi kazıma konusunda yardımcı
Hemostatic forceps	Jinzhong Surgical instruments	J31130	Tarama sırasında dişi sabitlemek için kullanılan cerrahi alet
Humidified incubator	Thermo Fisher Scientific	Forma	37°C ve %5 CO2'de korunan hücre kültürü inkübatörü
Image editing software	Adobe Systems Inc.	Adobe Photoshop CC 2018	Renk seçimi için yazılım
Image editing software	Wayne Rasband, National Institutes of Health	ImageJ2 v2.14.0	Renk eşiği için yazılım
Intraoral digital scanner	Aidite (Qinhuangdao) Technology Co., Ltd.	Aidite Cameo	3D dijital model elde etmek için optik tarayıcı
Local anesthesia	Produits Dentaires Pierre Rolland	Primacaine Articaine	Diş anestezisi maddesi (örn. Articaine veya Lidocaine)
Microplate reader	Biotek	Elx808	450 nm'de OD ölçümü için spektrofotometre
Penicillin/Streptomycin	Gibco	15070063	Kültür ortamı için antibiyotik takviyesi
Periotome	Carl Martin	LS529PT	Minimum invaziv ekstraksiyon aleti
Reverse engineering software	Geomagic Inc.	Geomagic Studio 2013	Yüzey alanı hesaplaması için 3D modelleme yazılımı
Sterile centrifuge tube	Servicbio	EP-1500-J	Numune toplama ve işleme için plastik tüp
Sterile phosphate-buffered saline (PBS)	Gibco	10010	Biyolojik örnekler için yıkama tamponu
Sterile scalpel blade	Jiayuan Medical Devices	Sterile Scalpel Blade	PDL dokusunu kazıma için bıçak
Sterile sline	Servicbio	G4702-500ML	Çekilen dişlerin durulanması için salin çözeltisi
Toluidine blue	General laboratory supplier	Toluidine blue (0.1% solution)	Periodontal ligament görselleştirme için biyolojik boya
Trypsin	Gibco	25200056	Dokunun sindirimi için enzimatik reaktif