Yöntem makalesi

NOD farelerde indol üreten zayıflatılmış brücella'nın tek intravenöz dozu: Tip 1 diyabet başlangıcının ve adacığın bağışıklık yeniden şekillendirilmesinin değerlendirilmesi

123 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/71193

⸱

26 Mayıs 2026

 ,  ,  , 
1Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A'M University Health Science Center, 2Department of Veterinary Pathobiology, College of Veterinary Medicine ' Biomedical Sciences, Texas A'M University, 3Bond Life Sciences Center, The University of Missouri

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, NOD/ShiLtJ farelerine indol üreten zayıflatılmış Brucella melitensis suşunun damar içi uygulanmasını, ardından uzunlamasına diyabet izleme, pankreas histolojisi ve isteğe bağlı yüksek plex uzamsal proteomikler ile tek hücreli RNA dizileme işlemlerini açıklayarak adacığı bağışıklık yeniden programlamasını değerlendirir.

Özet

Tip 1 diyabet (T1D), pankreas β hücrelerinin otoimmün yok edilmesinden kaynaklanır ve mevcut tedaviler kalıcı bağışıklık toleransını geri kazanamıyor. Metabolik olarak mühendislik yoluyla tasarlanmış ve immünomodülatör metabolitler üreten bakteriler, umut verici tek dozlu terapötik bir strateji sunar. Burada, bu makale, prediyabetik kadın NOD/ShiLtJ farelerde otoimmün diyabetin başlangıcı üzerindeki etkileri değerlendirmek için indol üreten zayıflatılmış Brucella melitensis suşunun BmΔvjbR::tnaA'nın tek intravenöz uygulamasının kullanıldığı kapsamlı bir protokol sunmaktadır.

Protokol, donmuş gliserol stoklarından BmΔvjbR::tnaA'nın hazırlanması, seçici ortamda orta günlük faza kadar yetiştirilmesi ve optik yoğunluğa göre koloni oluşum birimlerinin hesaplanmasıyla başlar. <5 haftalık dişi NOD fareleri, anestezi olmadan kısıtılır ve fosfatla tamponlu tuzlu bir salinle belirli bir bakteri dozla lateral kuyruk damarı üzerinden damar içi enjekte edilir; bu doz ısıtıcı pedlerde tutulur. Kan şekeri, 70–105 gün boyunca 2 saatlik oruçtan sonra haftada 2 kez izlenir; diyabet, üst üste iki ölçümde glukoz ≥250 mg/dL olarak tanımlanır. Deneysel son noktalarda, hasat edilen pankreas nötr tamponlu formalinde 72 saat sabitlenir, parafinle gömülülür ve hematoksilin ile eozin boyama, insülin immünohistokimyası ve toplam adacığı alanının ölçüsümü için kesitlenir. Formalin sabitli parafin gömülü kesitler, düzenleyici ve efektör bağışıklık popülasyonlarını görselleştirmek için 25 işaretleyici antikor paneliyle mekansal proteomikler için sunulur. Son olarak, taze pankreas dokusu tek hücreli izolasyon, 3' kütüphane hazırlığı, dizileme ve Seurat tabanlı biyoinformatik analizlerden geçerek bağışıklık ve stromal popülasyonlar arasında transkripsiyonel değişiklikleri profillemektedir.

Bu entegre protokol, tekrarlanabilir tek dozlu bakteriyel tedavi sunumunu ve adacığı bağışıklık yenilemesinin çok modlu karakterizasyonunu sağlar; otoimmün modellerde metabolitle mühendislik edilmiş mikropların test edilmesi ve dokuya özgü bağışıklık mekanizmalarının tek hücre çözünürlükte incelenmesi için bir çerçeve sağlar.

Giriş

Tip 1 diyabet (T1D), insülin üreten pankreas β hücrelerinin bağışıklık aracılı yok oluşuyla karakterize edilen kronik bir otoimmün hastalıktır; bu hastalık ömür boyu insülin bağımlılığına ve damar komplikasyonlarının artmasına yol açar. NOD/ShiLtJ faresi, insan otoimmün diyabetinin spontan insulitis ve açık diyabete ilerlemesi gibi temel özelliklerini özetlemekte olup, mekanik ve tedavi çalışmaları için yaygın olarak preklinik model olarakkullanılmaktadır 1,2,3. Mevcut T1D tedaviler—immünosupresif ilaçlar, monoklonal antikorlar ve benimsenen düzenleyici T-hücre (Treg) tedavileri dahil—hastalığın ilerlemesini geçici olarak yavaşlatabilir ancak genellikle bağışıklık toleransının kalıcı geri kazanmasını veya β-hücrekütlesinin 1,2,4,5,6,7,8,9,10. 11.

Tregs ve diğer düzenleyici popülasyonları hedeflemek, otolog poliklonal Treg infüzyonları, mühendislik amaçlı antijen-spesifik Tregler ve IL-2 bazlı 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11 gibi yeni T1D tedavilerinin ana odağı olmuştur . Ancak, pankreas adaciklerinde pro-inflamatuar bir mikro ortam, bu yaklaşımların etkinliğini zayıflatabilir ve doku kaynaklı bağışıklık ağlarının lokal olarak yeniden programlanması gerekliliğinivurgular 2,7. Mikrobiyal kaynaklı triptofan metabolitleri, özellikle indol ve ilgili bileşikler, düzenleyici T hücresi farklılaşmasını teşvik ederek, anti-inflamatuar makrofaj polarizasyonunu tetikleyerek ve Th17 yanıtlarını bastırarak hem doğuştan hem de adaptif bağışıklığımodüle edebilir 12,13. Canlı mikrobiyal tedaviler ve metabolik olarak mühendislik yoluyla tasarlanmış bakteriler, immünomodülatör metabolitleri yerinde sunmak ve doku bağışıklığınıyeniden şekillendirmek için umut verici bir strateji temsil eder 12,13,14,15,16,17,18.

Daha önce, metabolik olarak tasarlanmış Brucella melitensis sürünü geliştirdik; BmΔvjbR::tnaA, indol üretir ve Tregs'i genişleterek ve inflamatuar mikro ortamları yeniden şekillendirerek otoimmün artriti kontroleder 14,15,16. BmΔvjbR gibi zayıflatılmış Brucella suşları, aşı platformları olarak kapsamlı şekilde tanımlanmış ve immünoregulasyon yükü taşıyacak şekilde genetik olarakdeğiştirilebilen 14,15,16.

Burada, NOD/ShiLtJ modelinde tek bir damar içi doz BmΔvjbR::tnaA değerlendirmesi için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz; bu protokol bakalım, standart damar içi uygulama, diyabet izleme ve pankreas dokusunun histoloji, yüksek plex mekansal proteomik ve tek hücreli RNA sekmesi ile çoklu modal analizini içermektedir. Bu iş akışı, organ-spesifik otoimmünitede metabolitle mühendislik edilmiş mikropların tek dozlu immünoterapi olarak test edilmesi için pratik bir çerçeve sağlar. Önceki doz-yanıt analizi, zayıflatılmış suşun 1 ×10-10 CFU'ya kadar güvenlik ve tolere edilebilirliğini göstermiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, etik yönergelere sıkı şekilde uygun olarak yapılmış ve Texas A&M Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış (Protokol Numarası: 2021-0123).

1. BmΔvjbR::tnaA'nın hazırlanması ve karakterizasyonu

  1. Bakteriyel suş arka planı ve depolanması
    NOT: BmΔvjbR::tnaA, daha önce tanımlandığı gibi, vjbR virülans düzenleyicisinin silinmesi ve Escherichia coli tnaA geninin konduksiyon indol üretimi için eklenmesiyle Brucella melitensis 16M'den türetilmiştir.
    1. Gliserol stoklarını %20 gliserolde −80 °C seviyesinde tutun.
  2. Seçici agar üzerinde bakteriyel kültür
    1. −80 °C depodan donmuş bir gliserol stoku alın. 10–20 μL'yi triptik soya agar (TSA) plakalarına kloramfenikol (25–30 μg/mL) takviye edilmiş şekilde izle.
    2. Plakaları 37 °C'de, çevresel CO₂ koşullarında 48–72 saat boyunca kuluçka yapın, ta ki bireysel koloniler (2–3 mm çapında) görünene kadar.
      DIKKAT: Brucella suşlarıyla çalışmak için uygun biyogüvenlik seviyesi tesisler (minimum BSL2) gereklidir. Kurumsal biyogüvenlik protokollerine ve gerekli onaylara uyun.
  3. Sıvı kültür hazırlığı
    1. Yeni bir TSA tabağı seçin (≤1 haftalık). Steril bir döngü kullanarak 2–3 izole koloni seçin.
    2. 10 mL triptik soya suyu (TSB) ile takviye edilmiş kloramfenikol (25–30 μg/mL) ile steril 15 mL bir tüpte aşılayın. 37 °C'de inkuluçka yapın ve ortam CO₂ koşullarında 250 rpm'de sallayın.
      NOT: Ölçek büyütme için 250 mL baffled Erlenmeyer şişesi kullanın.
  4. Büyüme izleme ve hasat
    1. Spektrofotometreyi kloramfenikol takviyesi olan steril TSB ile boşaltın.
    2. Her 2–3 saatte bir aşırı doz ₆₀₀ ölçün.
    3. Kuluçkaya devam edin, ta ki OD₆₀₀ 2.0 ± 0.2'ye (yaklaşık 18–24 saat) ulaşana kadar.
      KRİTİK ADIM: Tutarlı bakteri konsantrasyonu ve canlılık için OD₆₀₀ = 2.0 ± 0.2 ile hasat yapın.
      NOT: Bu koşullar altında, OD₆₀₀ ≈ 2.0, orta ve geç günlük faza karşılık gelir.
  5. CFU tahmini
    1. Bakteri konsantrasyonu şu ilişkiyle tahmin edin:
      OD₆₀₀ = 1, 5 ×10 9 CFU/mL ile karşılık gelir.
      NOT: OD₆₀₀₀ = 2.0 seviyesinde 10 mL kültür yaklaşık 1 ×10 11 CFU içerir.
    2. İSTEĞE BAĞLI: Steril PBS'de 10 kat seri seyreltme (10⁻6 ila 10⁻9) hazırlayın. TSA'ya 100 μL plaka eklenerek kloramfenikol eklendi. 37 °C'de 48–72 saat kuluçka yapın. CFU'yu doğrulamak için kolonileri say.
  6. Bakteriyel hasat ve yoğunlaştırma
    1. 10 mL kültürü steril 15 mL'lik konik bir tüpe aktarın.
    2. Oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 3.000–4.000 g × santrifüj.
    3. Süpernatantı dikkatlice aspire edin ve pelleti rahatsız etmeden atın.
  7. Enjeksiyon için yeniden süspansiyon
    1. Bakteriyel pellete 1 mL steril, endotoksin içermeyen 1× fosfatla tamponlanmış salin (PBS, pH 7.4) ekleyin. Görünür kümeler olmadan homojen bir süspansiyon elde edilene kadar 10–15 kez pipet ile nazikçe yeniden süzülür.
      NOT: Nihai konsantrasyon yaklaşık 1 × 1011 CFU/mL'dir.
  8. Depolama ve kullanım
    1. Bakteriyel süspansiyonu kapalı bir tüpte buz üzerinde tutun. Hazırlıktan sonra 4 saat içinde damar içi enjeksiyonlar için süspansiyonu kullanın.
      NOT: Bakteriyellerin canlılığı azaldığı için gece boyunca dondurmayın veya saklanmayın.
      DURAKLAMA NOKTASI: Bakteriler buzda 4 saate kadar tutulabilir; Aynı gün kullanımı önerilir.

2. NOD/ShiLtJ fare tedarik, barındırma ve hazırlığı

  1. Dişi NOD/ShiLtJ fareleri edinin. Deneyden önce fareleri en az 7 gün boyunca aklimasyon altına alın.
    NOT: Daha yüksek ve tutarlı diyabet insidansı nedeniyle dişi fareler kullanın.
  2. Belirli patojensiz koşullarda bireysel olarak havalandırılan kafeslerde ev fareleri. Her kafeste en fazla beş fare bulundurun.
  3. Yatak malzemesi, çevresel zenginleştirme, yiyecek ve su ile libitum sağla. Sıcaklık 20–24 °C, nem %40–60 ve 12 saat ışık/karanlık döngü olarak korun.
  4. 5 haftadan küçük fareler kullanın. Vücut ağırlıklarını kaydettik.
  5. Kafes seviyesinde fareleri tedavi ve kontrol gruplarına randomize edin. Her fareye benzersiz tanımlayıcılar (kulak etiketi veya kuyruk dövmesi) atan.
    NOT: Tüm fareler ve grup atamalarının ana kaydını tutun.
  6. Enjeksiyondan en az 30 dakika önce kafesleri işlem odasına aktarın. Kafesleri, kuyruk damarlarının genişlemesini teşvik etmek için 37–40 °C sıcaklığına ayarlanmış ısıtma pedlerine yerleştirin.

3. Lateral kuyruk ven yoluyla damar içi uygulama

  1. Steril teknikle, bakteriyel süspansiyondan 100 μL sterlin insülin şırıngalarına (29G–30G) alın. Her şırıngayı ilgili fare kimliğiyle etiketleyin.
  2. 100 μL steril PBS içeren kontrol enjektörlerini hazırlayın.
    NOT: Enjeksiyondan hemen önce şırıngaları hazırlayın.
  3. Her fareyi bir tutucuya yerleştirin, böylece kuyruğun erişimini sağlayın.
    NOT: Kuyruk damarı enjeksiyonlarında anestezi kullanmayın.
  4. Kuyruğu %70 etanol ile silin ve hava kurumasına izin verin.
  5. Yan kuyruk damarlarını yeterli aydınlatma altında görselleştirin.
    İPUCU: Damarlar görünmüyorsa kuyruğu ısıtın.
  6. Kuyruğun distal üçte birini nazikçe gergin tutun. İğne eğimli eğimlikleri yan damara sığ bir açıyla (10–15°) sokun.
  7. 100 μL yavaşça, 5–10 saniye boyunca enjekte edin. İğneyi çekin ve steril gazlı bezle nazikçe basın.
    KRİTİK ADIM: Direnç, şişlik veya beyazlaşma olmadan damar içi enjeksiyonun başarılı olduğunu doğrulayın.
  8. Fareyi kafesine ısıtıcı pedin üzerine geri koyun. Sıkıntı belirtileri için 5–10 dakika gözlemleyin. Herhangi bir olumsuz etkiyi kaydedin.
  9. Tüm fareler için 2 saat içinde rastgele sırayla enjeksiyonlar yapılabilir.

4. Kan şekeri izleme ve diyabet tanımı

  1. Enjeksiyondan 7 gün sonra glikoz izlemeye başlayın. Kan şekerini haftada 2 kez ölçerek çalışma son noktasına kadar yapın.
  2. Su erişimini koruyarak ölçümden 2 saat önce yiyecekleri çıkarın.
  3. Fareyi tutun. Kuyruk ucunu %70 etanol ile temizleyin.
  4. Kuyruğu steril lancet veya iğne ile kesin. İlk damla kanı at. İkinci damlayı bir glukometre test şeridine toplayın. Kan şekeri değerlerini, fare kimliği ve tarihle birlikte kaydedin.
    NOT: Kuyruk ucu yara izleri oluşursa yeni bir yer kullanın.
  5. Diyabet, ardışık iki ölçümde en az 24 saat arayla kan şekeri 250 mg/dL ≥ olarak tanımlayın.
  6. Kurumsal yönergelere göre ciddi hastalık belirtileri gösteren fareleri ötenazi yapın.

5. Pankreas hasadı, fiksasyonu ve işlenmesi

  1. Fareleri onaylanmış protokollere göre ötenazi yapın. Pankreası dikkatlice kesin ve toplayın, tüm loblar dahil.
  2. Pankreası %10 nötr tamponlu formaline en az 10:1 fiksatif ve doku hacmi oranında yerleştirin. Oda sıcaklığında 72 saat sabitle.
    DIKKAT: Formalini uygun PPE'lerle kimyasal bir buhar davlumbazında kullanın.
  3. Fiksasyondan sonra dokuları %70 etanole aktarın.
  4. Parafin gömme, pozitif yüklü slaytlarda 5 μm kalınlıkta kesitleme, hematoksilin ve eozin boyama ile insülin immünohistokimyasi için sabit dokuları histoloji çekirdek tesisine gönderin.
    NOT: Ek aşağı akış analizleri planlanıyorsa lekesiz bölümler talep edin.

6. Histolojik değerlendirme ve ada alanı nicelendirilmesi

  1. Bir slayt tarayıcı veya mikroskop kullanarak tüm slayt görüntüleri alın.
  2. Referans edilen yazılımda görüntüleri açın. Uygun araçlarla adacıqları manuel olarak not edin.
  3. Iscik alanını annotasyon araçlarıyla ölçün.
  4. Analiz için ölçümleri ihracat.
    NOT: Toplam adacik alanı endokrin ve infiltrasyon hücrelerini içerir.

7. Çeşitli aşağı akış analizleri

  1. Fare başına ortalama adacık alanı hesaplayın. Uygun istatistiksel testlerle grupları karşılaştırın.
  2. Isteğe bağlı: Mekânsal proteomik analizi ( bkz. Ek Tablo S1)
    1. Pozitif yüklü slaytlarda FFPE bölümleri hazırlayın. Örnekleri bir mekansal proteomik hizmet sağlayıcısına gönderin. Antikor panel spesifikasyonlarını sağla.
  3. Isteğe bağlı: Tek hücreli RNA dizilemesi ( bkz. Ek Tablo S2)
    1. Pankreası toplayıp soğuk ortama yerleştirin.
    2. Örnekleri tek hücre izolasyonu ve kütüphane hazırlığı için genomik çekirdek tesisine gönderin.
    3. Uygun boru hatları (örneğin, Cell Ranger, Seurat) kullanılarak dizileme verilerini işliyor.
    4. Yayınlanmadan önce kamu deposunda dizileme verilerini yatırmak.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu makalede tanımlanan daha geniş protokol daha sonra tek dozlu önleyici rejime optimize edilmiş olsa da, bu pilot sonuçlar burada yalnızca bu iş akışıyla elde edilebilecek beklenen histolojik ve glisemik okumaları göstermek için sunulmuştur.

Genel hastalık bağlamı ve sağlıklı ile tip 1 diyabetik pankreas arasındaki kontrast Şekil 1A'da şematik olarak gösterilmiştir. Bu şemada gösterilen β hücrelerin otoimmün yok oluşu ve bunun so...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada sunulan temsil sonuçların kritik bir sınırlaması, analitik son noktaları göstermek için sağlanan verilerin (Şekil 3) iki dozlu bir program kullanılarak erken pilot bir kohorttan türetilmiş olmasıdır. Bu protokol tek doz önleyici bir rejime dönüştürüldüğü için, burada açıklanan optimize edilmiş tek doz protokolünü kullanarak gelecekteki daha büyük ölçekli çalışmalar, resmi istatistiksel etkinliği belirlemek için gereklidir.

...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların rekabet eden finansal çıkarları yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, J.S. ve P.d.F.'ye R01CA273002 ve R21AI167793 Ulusal Sağlık Enstitüleri hibeleri ile K.D.'yi destekleyen NIH Kurumsal Ulusal Araştırma Hizmeti Ödülü (T32) ile desteklendi. Texas A&M Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi'nin kurumsal desteğini takdir ediyoruz. Dr. Yava Jones-Hall'a kör histopatoloji değerlendirmeleri için, pilot ve hayvan teknik desteği için Song laboratuvarı, tek hücreli RNA-seq kütüphanesi hazırlığı ve dizileme için Texas A&M Genom Bilimleri ve Toplum Enstitüsü (TIGSS) Moleküler Genomik Çalışma Alanı, veri analizi ve yorumlama için TIGSS Biyoinformatik Çekirdeği ve mekânsal proteomik hizmetleri için Akoya Biosciences'a teşekkür ediyoruz. Texas A&M Genom Bilimleri ve Toplum Enstitüsü (TIGSS) Biyoinformatik Merkezi'nin (TBC) desteğini takdir ediyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%10 Nötr Tamponlu Formalin (NBF)VWR10790-714
10x Genomics Krom KontrolörüTIGSS Moleküler Genomik İş Alanı, Texas A& M Üniversitesi
%70 etanolVWR89125-164
FFPE için yapışkan mikroskop slaytlarıLeica Biosystems3800084E
Akoya fare FFPE antikor paneli (~25 işaretleyici)Akoya Biosciences[Panel Kimliği/özel panel]
DNA HS kitleriyle biyoanalizör veya TapeStationTIGSS Moleküler Genomik İş Alanı, Texas A& M/ Agilent
BmΔ vjbR::tnaA bakteri suşuLaboratuvar stokları (Song/de Figueiredo labs)
Cell Ranger boru hattı10x Genomikv7.1
KloramfenikolResearch Products International56-75-7
Chromium Next GEM Tek Hücreli 3' kitTIGSS çekirdeği ile 10x Genomik
Clostridium histolyticum'dan kollajenazMillipore SigmaC7657-100MG
DAPI nükleer lekesiAkoya Biosciences[Hizmet sağlandı]
FFPE gömü, H& E boyama, insülin IHC ve slayt taramasıVMBS Histoloji Laboratuvarı, Texas A& M Üniversitesihttps://vetmed.tamu.edu/vmbs-histology-lab/
Glikoz test şeritleriEKF Tanı / Fisher Scientific22-022-649
Glikoz test şeritleri (alternatif)Ascensia Diyabet BakımıCONTOUR NEXT test şeritleri
Gliserol (toplu, 500 mL)Millipore SigmaG7893-500ML
Gliserol (steril, 100 mL)Sigma Aldrich (G Biosciences)G5516-100ml
GraphPad Prism (veya R hayatta kalma paketi)GraphPad Yazılımı / Rv10.2
Elde taşınan glukometreAscensia Diyabet BakımıKONTUR SONRAKI EZ
Illumina NextSeq 2000 sekvenserTIGSS Moleküler Genomik İş Alanı, Texas A& M Üniversitesi
İnsülin şırıngaları,29 & ndash; 30 G (U-100)VWR10002-702
Diyabet testi için lancetlerBecton, Dickinson ve Şirketi (BD)366594
Liberase TL Araştırma DerecesiMillipore Sigma5401020001
Düşük sıcaklık ısıtma pedleriDavranış BilimiRWD-69025
Miltenyi çekirdekleri/hücre izolasyon kitiTIGSS Moleküler Genomik İş Alanı, Texas A& M/ Miltenyi Biotec
Fare ısıtma pedi (alternatif)Kent ScientificRightTemp
Fare tutucularıBraintree ScientificTV-RED 150-STD
NOD/ShiLtJ fareleri (dişi, 5 haftalık)Jackson LaboratuvarıStrain #001976
P2 XLEAP 100-döngülü akış hücresi kitiTIGSS çekirdeği üzerinden Illumina
PhenoCycler veri toplama ve kalite kontrolü hizmetiAkoya Biosciences
PhenoCycler reaktifleri ve görüntüleme iş akışıAkoya Biosciences[Hizmet sağlandı]
PhenoCycler-Fusion sistemiAkoya Biosciences
Fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS), 1xThermo Fisher10010023
Koruyucu RNaz İnhibitörüMillipore Sigma3335402001
Kubit florometre ve dsDNA HS Analiz KitiTIGSS Moleküler Genomik İş Alanı, Texas A& M/ Thermo Fisher
QuPathAçık kaynakv0.4.3
R yazılımıR Projesiv4.0+
Seurat (R paketi)Satija Laboratuvarı / CRANv4.3
StarDistAçık kaynakv0.8.3
Tripton Soya Agar (TSA)VWRCA90002-706

Kaynaklar

  1. Bender, C., et al. A phase 2 randomized trial with autologous polyclonal expanded regulatory T cells in children with new-onset type 1 diabetes. Sci Transl Med. 16, eadn2404 (2024).
  2. Yang, S. J., et al. Pancreatic islet-specific engineered Tregs exhibit robust antigen-specific and bystander immune suppression in type 1 diabetes models. Sci Transl Med. 14, eabn1716 (2022).
  3. . NOD/ShiLtJ (001976) datasheet Available from: https://www.jax.org/strain/001976 (2026)
  4. Raeber, M. E., et al. Interleukin-2 immunotherapy reveals human regulatory T cell subsets with distinct functional and tissue-homing characteristics. Immunity. 57 (9), 2232-2250.e10 (2024).
  5. Efe, O., et al. A humanized IL-2 mutein expands Tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Invest. 134 (5), e173107 (2024).
  6. Haque, M., et al. Stem cell-derived tissue-associated regulatory T cells suppress the activity of pathogenic cells in autoimmune diabetes. JCI Insight. 4 (7), e126471 (2019).
  7. Su, W., et al. Protein prenylation drives discrete signaling programs for the differentiation and maintenance of effector Treg cells. Cell Metab. 32 (6), 996-1011.e17 (2020).
  8. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624 (2025).
  9. Chen, X., et al. Differential roles of human CD4+ and CD8+ regulatory T cells in controlling self-reactive immune responses. Nat Immunol. 26 (2), 230-239 (2025).
  10. Huang, Q., Zhu, J. Regulatory T cell-based therapy in type 1 diabetes: latest breakthroughs and evidence. Int Immunopharmacol. 140, 112724 (2024).
  11. Passerini, L., Forlani, A., Gregori, S. Advances in regulatory cell therapy for type 1 diabetes: emerging strategies and future directions. Eur J Immunol. 55 (5), e202451722 (2025).
  12. Singh, N. P., et al. Dietary indoles suppress delayed-type hypersensitivity by inducing a switch from proinflammatory Th17 cells to anti-inflammatory regulatory T cells through regulation of microRNA. J Immunol. 196 (3), 1108-1122 (2016).
  13. Krishnan, S., et al. Gut microbiota-derived tryptophan metabolites modulate inflammatory response in hepatocytes and macrophages. Cell Rep. 23 (4), 1099-1111 (2018).
  14. Das, J. K., et al. A metabolically engineered bacterium controls autoimmunity and inflammation by remodeling the pro-inflammatory microenvironment. Gut Microbes. 14 (1), 2143222 (2022).
  15. Plocica, J., et al. Engineering live attenuated vaccines: old dogs learning new tricks. J Transl Autoimmun. 6, 100198 (2023).
  16. Bender, E. Could a bacteria-stuffed pill cure autoimmune diseases?. Nature. 577, S12-S13 (2020).
  17. Chen, G., Wang, C., Wan, Q., Dong, F., Radstake, T. Editorial: next generation therapeutic modality to cure autoimmune diseases. Front Immunol. 16, 1631995 (2025).
  18. Adedokun, A. I., et al. Exploring immunotherapeutic strategies for bacterial and viral diseases. Explor Immunol. 5, 100320 (2025).
  19. Bankhead, P., et al. QuPath: open source software for digital pathology image analysis. Sci Rep. 7 (1), 16878 (2017).
  20. Satija, R., Farrell, J. A., Gennert, D., Schier, A. F., Regev, A. Spatial reconstruction of single-cell gene expression data. Nat Biotechnol. 33 (5), 495-502 (2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

ndol reten Brucellantraven z EnjeksiyonTek H cre SekanslamaUzamsal Proteomikns lin mm nohistokimyasBakteriyel TerapiOtoimm n Diyabet
Video yakında

İlgili makaleler