Yöntem makalesi

Intellicage Test Sistemi Aracılığıyla Sosyal Olarak Barındırılan Farelerde Otomatik Operant Aralıklı Alkol İçme

146 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/71345

⸱

5 Haziran 2026

 ,  ,  , 
1Section on Neurobiology of Compulsive Behaviors, National Institute on Mental Health, Intramural Research Program, National Institutes of Health

Bu makalede

Özet

Bu protokol, IntelliCage test sistemi aracılığıyla sosyal olarak barındırılan farelerde alkol içme davranışlarının yüksek verimli, otomatik değerlendirmesi için yöntemler sunar. Sağlanan, operant, aralıklı alkol içme paradigması için ayrıntılı bir metodoloji, ortaya çıkan verileri analiz etmek için deneysel dosyalar ve kodlar ile birlikte sunulmaktadır.

Özet

Kemirgen davranışında sosyal izolasyonun bilinen karışıklıklarına rağmen, birçok araştırmacı, alkol kullanım bozukluğunun (AUD) preklinik modellerinde alkol tercihini değerlendirmek için tek başına farelere dayanır. Bu protokol, farelerde alkol içme davranışlarının sosyal izolasyonun yarattığı stresin karıştırıcı etkileri olmadan yüksek verimlilikli, otomatik değerlendirmesini sağlayan sosyal alkol içme görevini tanımlar. IntelliCage test sistemi, araştırmacıların her biri deri altı implante edilmiş radyofrekans tanımlama (RFID) transponderi ile benzersiz şekilde tanımlanan 16 aynı cinsiyetten farede operant alkol içme davranışını aynı anda değerlendirmelerini sağlar. Sipper şişelerine erişim yazılım kontrolündedir ve her fare için ayrı ayrı ayarlanabilir. Bu kronik, aralıklı alkol içme paradigmasında, fareler altı hafta ardışık olarak %20 alkol içeren sipper şişelerine gönüllü olarak operant burun dürtme yaparlar. Alkol şişeleri sadece 24 saat boyunca her iki günde bir erişilebilir ve cezasız içmeyi değerlendirmek için isteğe bağlı olarak kinin ile karıştırılabilir. Her bir fare için her operant köşeye yapılan ziyaretler, burun dürtmeleri ve yalama verileri otomatik olarak kaydedilir. Ayrıntılı deneysel yöntemler ve kaydedilen verileri analiz etmek için açık kaynak kodu, araştırmacıların AUD ile ilgili alkol içme davranışlarını giderek daha verimli ve etolojik olarak anlamlı bir şekilde değerlendirmelerini sağlayacaktır.

Giriş

Preklinik modellerdeki çalışmalar, alkol kullanım bozukluğu (AUD) benzeri davranışların altında yatan nörobiyolojik mekanizmaların daha derin anlaşılması için kritik öneme sahiptir. Ancak, kemirgenlerde alkol içme için yapılan geleneksel ölçütler, örneğin iki şişeseçimi 1,2 ve karanlıktaiçme 3,4,5 testleri, tek başına yaşayan kemirgenler arasında sıvı hacimlerinin manuel ölçülmesini gerektirir; bu düşük verimlilik ve hata eğilimli bir yöntemdir. Yakın zamanda kapasitif 6,7,8,9,10 veya fotoelektrik11,12 teknolojisini kullanarak yalama sayımı otomatikleştiren açık kaynaklı likkometer sistemlerinin benimsenmesi, alkol içme metodolojisinin verimliliği, doğruluğu ve teknik hassasiyetinde önemli bir ilerlemeyi temsil etmektedir. Ancak, çoğu ev kafesi lickometer sistemi hala kemirgenlerin tek başına yerleştirilmesini gerektirir ve bu da izolasyonstresine yol açar 13,14. Bildirilen bulgular büyük farklılıklargösterse de 15,16, kemirgenler genellikle tek başına kaldıklarında alkole daha fazla tercihederler 17,18,19,20. Ancak, sosyal izolasyonun alkol içme üzerindeki etkileri hayvan yaşı, cinsiyet, barınma ortamı ve önceki stres maruziyetine göredeğişir 20,21,22. Sosyal izolasyon, değerlendirilen AUD benzeri davranış sonuçlarının geçerliliğini sınırlamak için deneysel manipülasyonlarla önemli ölçüde etkileşime girme potansiyeline sahiptir.

IntelliCage test sistemi (TSESystems 23,24,25) veya açık kaynak alternatifler LIQ PARTI20 ve FARESHARE 26 gibi yeni, tam otomatik ev kafesi izleme sistemleri, bu sorunu lickometri ile çoklu grup hayvanlarının radyofrekans tanımlama (RFID) takibi birleştirerek çözüyor. Bu ev-kafes izleme sistemleri, sosyal izolasyonun yarattığı stres karmaşaları olmadan alkol içme alışkanlıklarının daha verimli ve tekrarlanabilir niceliklerini sağlar. Bu nedenle, AUD benzeri davranışlara karşı savunmasızlığı etkileyen deneysel manipülasyonların yüksek verimliliğine sahip, doğrulayıcı çalışmalar için idealdirler. Bunlar arasında, IntelliCage test sistemi, programlanabilir, operant köşeler kullanarak içici şişeye erişimi kapalı olarak benzersiz bir özellik sunuyor; bu da araştırmacıların ilaç erişimi olmadan arama davranışlarını değerlendirmesi, bireysel hayvanlar için operant oranlarını modüle etmesi ve daha fazlasını sağlıyor.

Burada, yazarlar IntelliCage test sistemi aracılığıyla sosyal olarak barındırılan fareler arasında çalışan bir aralıklı alkol içme paradigmasınısunmaktadır (27,28). Bu paradigma, her biri deri altına implante edilmiş RFID transponderleriyle benzersiz şekilde tanımlanan 16 eşcinsel farede alkol içiminin uzun vadeli, otomatik değerlendirilmesine olanak tanır. Aşağıda açıklandığı gibi, fareler sabit oranda (FR)-3 üzerinde operasyonel burun dürtme yaparak sipper şişelerine erişmek üzere eğitilmiştir. Kısa bir eğitim döneminden sonra, dört operant köşeden ikisindeki sipper şişeleri %20 alkolle (musluk suyunda %95 etanol [190 proof], v/v) ile değiştirilir. Fareler sürekli suya erişimi vardır, ancak 24 saat (12:30-12:30 arası) her iki günde bir ara alkol erişimi vardır. Alkol lick'leri altı hafta boyunca ölçülür; deneyin ortasında iki günlük kinin karıştırma (0,5 mM, 1,0 mM) testi uygulanarak ceza duyarsız içmeyi değerlendirir. Her fare için ziyaret, burun dürtme ve yalama verileri kaydedilir (Şekil 1), TSE'nin özel yazılımı kullanılarak çıkarılır ve daha sonra açık kaynak boruhattı 29 kullanılarak analiz edilir ve AUD benzeri davranışlar hakkında içgörüler elde edilir.

Bu protokol, IntelliCage test sisteminin AUD benzeridavranışları değerlendirmek için yayımlanmış diğer kullanımlarını tamamlar 30,31,32,33,34,35,36,37,38,39 ve diğer madde kullanımı bozukluğuna benzer davranışları 40,41,42 . Aralıklı erişim programlarının kemirgenlerde gönüllü alkol tüketiminiartırdığını öne süren raporlarla uyumlu olan 1,43,44,45,46,47, bu protokol çoğu farede gönüllü alkol tüketiminin yüksek seviyeleri ortaya koymaktadır. Buna rağmen, yazarların protokol boyunca belirttiği gibi, deneysel parametreler deneysel soruları ele almak için kolayca değiştirilebilir. Genel olarak, bu metodoloji, araştırmacıların AUD'nin altında yatan mekanizmaları incelemesi için verimli ve esnek bir çözüm sunar.

figure-introduction-1
Şekil 1: Fare ziyaretlerini, burun dürtmelerini ve yalamalarını benzersiz RFID tanımlama ile tam otomatik olarak takip etmek. (A) Fare RFID transponder implantasyonunun çizgi film diyagramı. RFID transponderler, otomatik bir ev kafesi izleme sisteminde bireysel takip yapılmasını sağlamak için dorsoservikal bölgeye deri altı yerleştirilir. (B) Otomatik, operant aralıklı alkol paradigması sırasında veri toplama aşamalarının şeması. Hayvan kimliği okunur ve köşe ziyareti, çift RFID halka anten ve sıcaklık sensörü okumaları ile kaydedilir; ziyaretin kaydedilmesi için her ikisinin de pozitif olması gerekir (sol). Sonrasında fareler, ortadaki sipper şişelerine erişmek için FR-3 programında burun dürtme yapmayı öğrenir. Başarılı burun dürtme, 5 saniyelik sipper şişesine erişim sağlar ve bu noktada fare yalamaları kapasitans tabanlı lickometer (sağda) kullanılarak kaydedilir. Lucy Anderson tarafından değiştirilmiş BioRender şablonlarından yapılmış çizgi filmler, CC BY 4.0 (https://BioRender.com/ko79xuy) lisanslı. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Protokol

Tüm deneysel prosedürler NIH Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı ve laboratuvar hayvanlarının insancıl bakımı ve kullanımı politikasına uygun şekilde Kamu Sağlığı Servisi politikasına uydu.

1. Cihazın hazırlanması

NOT: Her IntelliCage test sistemi cihazı, içinde 16 aynı cinsiyetten farenin kalabileceği büyük plastik bir ev kafesinden (39 cm x 58 cm x 21 cm) oluşur. Önceki gruplar 8–16 fare/kafes arasında değişiyordu. Cihaz, dört operant köşeye sahiptir ve bunların hepsi üst kapaktaki merkezi bir mikroişlemciye bağlanır. Kemirgen yemeği, kapağın ortasında yerleştirilmiş büyük bir metal hopperden erişilebilir. Kafes içinde fareler, operant köşeler ile yatak ve zenginleştirici malzemelerle donatılmış merkezi bir yaşam alanı arasında serbestçe dolaşır. Her operant köşede, fiziksel olarak yalnızca bir fare girişi mümkün olan küçük dairesel bir giriş vardır. Farenin kimliği, çift RFID halka anten ve sıcaklık sensörü okumalarına dayanarak okunur ve kaydedilir; ziyaretin kaydedilmesi için her ikisinin de pozitif olması gerekir. Her operant köşede, farelere iki burun sokma portu sunulur; her biri iki motorlu kapıdan birine erişimi kontrol eder. Bu programlanabilir, motorlu kapılar iki içici şişeden birine erişim sağlar. Araştırmacılar, sipper şişesine erişim koşullarını ve kapasitans tabanlı lickometrelerin hassasiyetini manuel olarak programlar. Ziyaret, burun sokma ve yalama verileri her fare için ayrı ayrı kaydedilir ve merkezi bir mikroişlemci aracılığıyla TSE'nin özel yazılım sisteminin yüklendiği bir bilgisayara aktarılır. Bu protokolde tartışılmasa da, her operant odada aleyif koşullandırmada kullanılmak üzere programlanabilir bir hava üfleme valfi de bulunur.

  1. Plastik ev kafesine beş sıkıştırılmış pamuk lifi ped (15,24 x 25,4 cm), iki küçük pamuk kare (5,08 x 5,08 cm) ve yatak ile zenginleştirme için dört plastik kazma yapısı takın.
    NOT: Sıkıştırılmış pamuk lifli pedlerin kullanımı iki nedenle önerilir: (1) yaygın kullanılan yatak malzemelerinin kapı mekaniğine zarar verme potansiyeli olan toz veya pul pullarının kapı mekaniğine müdahale etmesini önlemek ve (2) hayvanlar arasında kavgaların daha kolay tanımlanmasını sağlamak için.
  2. Üst kapağı operant köşelerle plastik ev kafesine yerleştirin.
  3. Bağlantı kesilirse, tüm operant köşeleri sağlanan kablolarla merkezi mikroişlemciye bağlayın ve ardından merkezi mikroişlemciyi, TSE yazılımıyla önceden yüklenmiş bir bilgisayara CAN kabloları kullanılarak bağlayın.
    1. Birden fazla cihaz kullanıyorsanız, tüm kafesleri aynı bilgisayara seri olarak bağlayın.
  4. Mikroişlemciyi güç kaynağına bağlayın ve her köşedeki LED ışıkların açıldığından ve sekiz motorlu kapının hepsinin hareket ettiğinden emin olun.
  5. Sekiz yudumlu şişeleri ~250 mL musluk suyu (veya başka bir sıvı) ile doldurun, kapalı sıkıca bastırarak doğru kapatma sağlanır ve ardından lickometer açıklıklarına nazikçe döndürerek lickometre ile sıkı bir bağlantı sağlanır.
    NOT: Ziyaret, burun dürtme ve yalama sensörünün hassasiyeti isteğe bağlı olarak pilot deney ile optimize edilebilir. Her köşenin hassasiyetini ayarlamak için, "Kontrolcü" programının "Yardım" dosyasında açıklanan üretici talimatlarını takip edin. Tüm çalışmalar aşağıdaki ayarları kullanmıştır: ziyaret- 816 ON/768 KAPALı; Nosepoke- 21 OYUN/26 KAPAMAK; lickometer- 69 AÇIK/80 KAPA/15 mola.
  6. Yemek haznesini kemirgen yemeği ile doldurun.
  7. Bilgisayarı açın, "Kontrolör" uygulamasını açın ve istediğiniz deney dosyasını yükleyin.

2. Hayvanların hazırlanması

NOT: Hayvanlara, davranışsal testlerin başlamasından en az bir hafta önce RFID transponderleri yerleştirilmelidir ki yeterli iyileşme süresi sağlansın. En az ~50 günlük yaşlanmış fareler ve vücut ağırlığı 15 gramdan fazla olsun. Daha küçük farelerin implantasyonu, enjeksiyon sırasında farenin yaralanma riskini artırır. Fare hattına bağlı olarak, grup ortamında yapılan koşullarda, özellikle erkekler arasında, agresiflik sorun haline gelebilir. Bu riski, ergenlik döneminde tüm fareleri bir arada barındırarak azaltın. Yazarlar, yetişkin (~PND 80–150) vahşi tip C57BL/6 farelerle yapılan çalışmalarda belirgin saldırganlık gözlemlemediler, ancak bu protokolün diğer genotiplere, yaşlara veya barınma düzenlemelerine genellenebilirliğini garanti etmez.

  1. Benzersiz tanımlama için dorsoservikal bölgeye RFID transponderleri bulunan fareleri deri altı olarak implante edin.
    1. Tüm deneysel hayvanların listelendiği bir veri tablosunu yazdırın; her hayvan kimliğinin yanına bir boşluk bırakarak RFID kodlarını gösteren bir barkod etiketi yerleştirin.
    2. Tüm hayvanları ve gerekli malzemeleri toplayın: RFID transponderlar, yeniden yüklenebilir RFID transponder enjektör ve izofluran indüksiyon sistemi.
    3. İlk fareyi indüksiyon odasına yerleştirin ve buharlaştırılmış izofluran (oksijen akış metresi: 1,5 mL/dakika, izofluran: %1,5–3,5) ile anestezi yapın, ta ki fare büyük, hıçkırıklı nefesler alıp ayak sıkışmasına tepki vermeyince.
      1. Farenin anestezi olmasını beklerken, önceden yüklenmiş iğneyi enjektör tabanına vidalayarak RFID transponderini enjektöre yükleyin ve ardından mikroçipin hareket ettiğini görene kadar enjektörü yavaşça dışarı atın.
      2. RFID kodunu tanımlayan barkodu, uygun hayvan kimliğinin yanındaki basılı veri tablosuna uygulayın.
    4. Fareyi indüksiyon odasından çıkarın ve önceden yüklenmiş RFID transponderini deri altı olarak dorsoservikal bölgeye yerleştirin.
      1. Farenin parmak sıkışmasına tepki vermediğini ilk olarak kontrol ettikten sonra, baskın olmayan elin başparmağı ve işaret parmağını kullanarak farenin omlak kazını doğrudan omuz kemiklerinin üzerinde sıkın.
      2. Baskın eli kullanarak, enjektör iğnesini farenin püşkü kısmının arka ucuna deri altı olarak sokun; iğneyi omurga ile paralel ve üzerinde kaldırarak farenin zarar vermemesini sağlayın.
      3. Şırınganın ucu farenin sapı içinde ve başparmak ile işaret parmağı arasında sıkıca sabitlenmişken, baskın eli dikkatlice hareket ettirerek enjektör pistonu bastırabilsin.
      4. RFID transponder'ı çıkarın, baskın olmayan elin parmaklarını pırtılın etrafında sıkıştırarak mikroçip şırınganın ucundan çıktıktan sonra hissedilebilsin.
      5. Spurf'u sıkıştırarak enjektörü yavaşça çıkarın. Transponderin düşmesini önlemek için enjektör tamamen çıkarıldıktan sonra scruff'u serbest bırakın.
        NOT: Isteğe bağlı olarak, fare anestezi altındayken cildi kapatmak için tek bir dikiş düğümü eklenebilir.
    5. Faresi ev kafesine geri götürün ve anesteziden tamamen harekete geçene kadar iyileşmeyi izleyin.
    6. Fareyi kısmi felç, topallama veya dairesel dolaşma gibi fiziksel bozukluk belirtileri için izleyin; bunlar hedefin yanlış enjeksiyonuna işaret edebilir. Eğer bozukluklar 24 saatten fazla sürerse veya hayvan refahını ciddi şekilde etkilerse, insancıl bir şekilde ötenazi yapın.
      1. RFID transponder okuyucuyu farenin dorsoservikal bölgesinin üzerine yönlendirin ve başarılı yerleştirmeyi doğrulamak için tarama yapın.
    7. İstek üzerine genotipleme için bir doku örneği alın.
      1. Tüm deneysel farelerle tekrarlayın.
  2. İlk RFID transponder implantasyonundan bir gün sonra, hiçbir farenin RFID transponderlarını kaybetmediğini doğrulamak için RFID transponder okuyucusunu kullanın. Eğer herhangi bir farede transponderları kaybedildiyse, işlemi yeni bir transponderle tekrarlayın ve kayıtları buna göre güncelleyin.
    NOT: Genellikle, bir farenin RFID transponderi düşecekse, bu implantasyondan sonraki 24 saat içinde gerçekleşir. Bu, RFID transponderının yanlış yerleştirilmesi ve/veya enjeksiyon bölgesinde farenin bakım/tırmalanması nedeniyle meydana gelebilir. Önceki enjeksiyon yaralarına tekrar enjeksiyon yapmaktan kaçının ve üç başarısız RFID transponder implantasyonundan sonra fareleri dışlayın.
  3. Fareleri IntelliCage cihazına yeniden yerleştirmeden önce, tüm RFID transponderlarının başarılı şekilde okunabildiğinden emin olun. Tüm farelerin vücut ağırlıklarını tartın ve kaydedin.

3. Deneysel dosyaların hazırlanması

NOT: IntelliCage test sistemi, TSE tarafından sağlanan grafiksel kullanıcı arayüzleri aracılığıyla kontrol edilir ve işletilmektedir. IntelliCage deneylerini çalıştırmak için üç uygulama kullanılır: "Tasarımcı," "Kontrolör" ve "Analizör." Deneyin farklı aşamaları, "Designer" uygulamasında tasarlanan ve ardından "Kontrolör" uygulamasında çalıştırılan farklı deney dosyaları aracılığıyla çalıştırılır. Deney dosyalarının nasıl tasarlanacağı ve uyarlanacağı hakkında ayrıntılı bilgiler daha önceaçıklanmıştır 48,49. Çalışmada kullanılan dört deney dosyasının şablonları (Habituation.experiment, Water Training.experiment, Intermittent Alcohol.experiment, Open Bar.experiment) protokol çoğaltımına yardımcı olmak için sağlanmıştır. Bu dosyalarda faz değişiklikleri saat 12:30'da gerçekleşir. Yazarlar bu zamanlamayı seçti çünkü hayvanlar 6:00 sabah ile 18:00 arasında ışık döngüsünde barındırıldı. Bu, içki alışkanlıklarını ölçmek için kesintisiz bir karanlık dönem sağladı. Ancak araştırmacılar, bu zamanlamayı diğer alkol içme yöntemleriyle uyumlu hale getirmek isteyebilir; örneğin "karanlıkta içmek"prosedürleri 50.

  1. "Designer" uygulamasında deney dosyalarını kurun.
    NOT: Şablon dosyalarıyla çalışıyorsanız, mevcut kohorta girmeden önce dört örnek hayvanı silin. Ayrıca, grup isimlerini deneysel tasarıma yeniden adlandırın ve gerekirse gruplar ekleyin. Yeni grupların hepsinin şablondakilerle aynı kümeyle başladığından emin olun.
    1. "Designer" uygulamasında Habituation.experiment dosyasını açın ve her fare için hayvan kimliğini, RFID transponder kodunu ve deneysel grup/genotipi dikkatlice girin. Dosyayı yeni bir isimle kaydederek şablon dosyasını koruyun.
      NOT: RFID transponder kodları yanlış yazılırsa, veri kaydedilmez. Hayvanların ilgili deneysel gruplara atanması, davranışlarının izlenmesine ve nihayetinde verilerin analiz edilmesine yardımcı olacaktır.
    2. Hayvan bilgilerini hayvan dosyası olarak dışa aktarın.
    3. Deneyin her aşaması için, ilgili deney dosyasını açın ve hayvan dosyasını yükleyin. Kaydedin ve uygun şekilde adlandırın.
    4. Dosyaları ayrı bir bilgisayarda tasarlarsanız, deney dosyalarını davranış odasına taşınmak için taşınabilir bir flash belleğe indirin.
  2. Tüm deney dosyalarını IntelliCage cihazına bağlı bilgisayara indirin ve "Kontrolör" uygulamasında ilk dosyayı açın. Tüm bilgilerin doğru yüklendiğinden emin olun.
  3. Ya kağıt üzerinde ya da elektronik olarak, deneyin farklı aşamalarını başlatıp durdurabileceğin tarihi ve zamanı not eden bir deneysel günlük dosyası oluşturun. Bu, analizde büyük katkı sağlayacaktır, çünkü bazı uyuşturucu koşulları (örneğin, kininle karıştırılmış alkol) IntelliCage arşiv dosyalarında kaydedilmez.

figure-protocol-1
Şekil 2: Operant, aralıklı alkol içme paradigması için deneysel zaman çizelgesi. (A) IntelliCage cihazının şeması, dört köşeden ikisinde alkol içeren şişeler. (B) Tüm deneysel aşamaların takvimini gösteren deneysel zaman çizelgesi, öncekiyayında kullanılan 23. 1. grup, aralıklı alkol içmeyi tamamladıktan sonra kininli alkol testi yaptı, 2. ve 3. gruplar ise sahtelikten sonra aralıklı alkol içmeye geri döndü. (C) Tüm deneysel aşamalar için yazılım değişikliklerini gösteren ayrıntılı deneysel takvim: alışkanlık, su eğitimi, aralıklı alkol içme, kininli alkol testi ve "açık bar"/serbest erişimli alkol içme. "Alkol Erişimi AÇ" modülü tamamlandıktan sonra kafes değişiklikleri haftada en az bir kez planlanmıştır. Lucy Anderson tarafından değiştirilmiş BioRender şablonlarından yapılmış çizgi filmler, CC BY 4.0 (https://BioRender.com/ko79xuy) lisanslı. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

4. Deneyi yürütmek

NOT: Operant, aralıklı alkol içme paradigması beş aşamadan oluşur: (1) alışkanlık, (2) su eğitimi, (3) aralıklı alkol içme, (4) kinin karıştırılmış alkol testi ve (5) "açık bar"/serbest erişim alkol içme. Deneyin her aşaması, aralıklı alkol içme ve kininli alkol testi dışında farklı deney dosyalarında çalıştırılır; her ikisi de Aralıklı Alkol.deney dosyasında belirtilen parametreleri kullanır. Kafes değişiklikleri dışında, deney yapanların fareleri haftada en az üç kez kontrol etmesi ve hayvanların iyiliğini değerlendirmesi ve yazılımın düzgün çalıştığından emin olmaları gerekir. Yaralı/hasta olduğu tespit edilen fareler deneyden çıkarılmalıdır. Örnek deneysel program için Şekil 2'ye bakınız.

  1. Kafes değişiklikleri
    NOT: Haftada en az bir kez kafes değişimi yapın. Alkol içme sırasında, bu değişiklikleri sadece 12:30'dan sonra "SADECE SUYA ERIŞIM" bölümünde yapın ki alkol içmeyi kesintiye uğratmasın. Bunu kolaylaştırmak için, Aralıklı Alkol.deney ve Open Bar.deney dosyaları her zaman "Sadece Su Erişimi" ile başlar. Kafeslerin büyüklüğü nedeniyle, dolu kafesleri tek başına yönetmek zordur. Yazarlar, kafes değişikliklerinde en az bir ek araştırmacının yardımcı olmasını önerir. Her kafes değişiminden 24 saat sonra farelerde yazılımın doğru çalıştığını ve kafes değişiminin stresine karşı herhangi bir saldırganlık/kavga yaşamadığından emin olmak için kontrol edin.
    1. Kafes değiştirmeye başlamadan önce, yeni yatak ve yuva malzemeleriyle yeni, temiz bir plastik kafes hazırlayın. Her sekiz sipper şişesi/kafesi ~250 mL musluk suyu veya %20 alkolle doldurun (musluk suyunda %95 etanol [190 proof], v/v).
      NOT: Isteğe bağlı olarak, araştırmacılar yeni, temiz kafese az miktarda eski yatak malzemesi ekleyebilir. Bu, yerleşik grup hiyerarşilerinin bozulmasını en aza indirir ve kavga riskini azaltabilir.
    2. "Kontrolör" uygulamasında deneyi durdurun. Operant köşelerde fare olmadığından emin olduktan sonra, metal yiyecek haznesini çıkarın. Bir kişi, metal mikroişlemci cihazını o kadar yukarı kaldırır ki ikinci kişi plastik kafesi altından kaydırabilir. Doğru fare sayısını doğrulayın.
    3. Kirli kafesten fareleri teker teker çıkarın, RFID transponder'ı tarayın ve vücut ağırlığını kaydedin. Her fareyi yaralanma veya hastalık belirtileri açısından görsel olarak inceleyin.
      NOT: Yazarlar, vücut ağırlığının analiz hattına kolayca okunabilmesi için elektronik bir tabloya (csv) kaydedilmesini önerir.
    4. Vücut ağırlıklarını kaydettikten sonra fareleri geçici olarak temiz bir saklama kabına yerleştirin.
    5. Üst kısmı ve köşeleri dezenfektanla ıslatılmış ıslak bir havluyla temizleyin. Elektronik parçalara sıvı sızmasına izin vermeden köşe plakasının yüzeyini ve alt çıkıntısını özellikle silmeye özen gösterin.
    6. Metal mikroişlemci cihazını yeni, temiz plastik kafesi yerine kaydıracak kadar yukarıya kaldırın.
    7. Yeni sipper şişelerini lickometer açıklıklarına nazikçe döndürerek lickometreye sıkı bir bağlantı sağlandığından emin olun.
    8. Fareleri yeni, temiz bir cihaza aktarın.
    9. Yemek haznesini yeni, temiz bir hazne ve taze kemirgen yemeği ile değiştirin.
    10. Aynı deneyi "Kontrolör" uygulamasında yeniden başlatın veya yeni bir deney dosyasını yükleyip başlatın.
    11. Programın düzgün çalıştığından ve tüm farelerin ziyaretlerini, burun dürtmelerini ve yalamalarını uygun şekilde kaydettiğinden emin olun.
      NOT: "Kontrolör" programı, bir hayvanın 12 saat içinde kaydedilmiş yalama yapmadığında otomatik olarak uyarılar sunar.
    12. Kirli ekipmanları temizleyin. Plastik kafesler, sipper şişeleri ve plastik kazma yapıları genellikle tipik kafes yıkama sistemleriyle yıkanabilir.
  2. Gün 0: Alışkanlık
    NOT: Alışma aşaması Habituation.experiment dosyası kullanılarak çalıştırılır. Bu aşamada, tüm sipper şişelerinde musluk suyu bulunur. Fareler, operant burun dürtmeleri olmadan tüm şişelere ücretsiz erişim sağlar. Motorlu kapılar, fareler operant köşeye girdiğinde açılır ve sipper şişe memelerine erişim sağlar.
    1. RFID aktarıcısının varlığını doğruladıktan ve fare vücut ağırlıklarını kaydettikten sonra, sekiz sipper şişesini ~250 mL musluk suyu ile doldurun ve yavaşça lickometer açıklıklarına çevirin.
    2. Hazırlanan IntelliCage cihazına 16 eşcinsel fareyi yerleştirin.
    3. Habituation.experiment dosyasını "Kontrolleyici" uygulamasına yükleyin ve kayda başlayın.
    4. Bir fare operant köşeye girdiğinde tüm motorlu kapıların doğru şekilde açıldığını ve her fare için tüm ziyaretlerin, burun dürtmelerinin ve yalamaların başarıyla kaydedildiğinden emin olun. Eğer 6 saat içinde bir fare için ziyaret, burun dürtme veya yalama kaydedilmediyse, .animal dosyasında hatalar için kontrol edin.
  3. 1-3. Gün: Su eğitimi
    NOT: Su eğitim aşaması Water Training.experiment dosyası kullanılarak yürütülür. Tüm sipper şişelerinde sadece musluk suyu içermeye devam etmeli. Bu aşama, fareleri FR-1 üzerinde burun dürtmeye ve ardından FR-3 programında supper şişe memelerine erişmeye yönlendirecektir. Başarılı burun dürtmesinden sonra, motorlu kapılar açılarak sipper şişeyine 5 saniye erişim sağlanır. Bireysel bir fare %60 veya daha yüksek başarı oranına ulaştığında, program süresinin geri kalanında FR-3 programına taşınır. Genellikle fareler 24–72 saat içinde FR-3 programına geçer. "Kontrolör"de hayvanların performansını izleyin. Bir hayvan 72 saat içinde FR-3 programına ulaşmazsa, onu daha fazla deneyden dışlayın.
    1. Eğer tüm fareler 24 saatlik alışkanlıktan sonra susuz ve yaralanmamış görünüyorsa, Habitatuation.experiment dosyasını çalıştırmayı bırakın ve Water Training.experiment dosyasını çalıştırmaya başlayın.
    2. Her fare için yazılım tarafından başarıyla kaydedilen ziyaretler, burun dürtmeleri ve yalamalar kontrol edin ve tüm motorlu kapıların doğru açıldığını kontrol edin.
  4. 4+ Gün: Aralıklı alkol içme
    NOT: Aralıklı alkol içme aşaması, Intermittent Alcohol.experiment dosyası kullanılarak çalıştırılır. Bu aşamada, dört operant köşeden ikisindeki sipper şişeleri %20 alkolle değiştirilir. Su ve alkol köşeleri, deney dosyasındaki "Kümeler" özelliği aracılığıyla önceden belirlenmiştir. Şablonda su, birinci ve üçüncü köşelerde ("nötr" olarak etiketlenmiş) teslim edilirken, alkol ikinci ve dördüncü köşelerde ("yanlış" olarak etiketlenmiştir). Fareler suya sürekli erişim sağlar, ancak 24 saat (12:30-12:30) arada bir alkol erişimi vardır. FR-3 ile tüm köşeler için 5 saniyelik sipper şişe erişimi sağlanmaktadır. Deneyin bu aşamasında, alkol içmeyi kesintiye uğratmamak için "SADECE SUYA ERIŞIM" dönemlerinde kafes değişiklikleri yapın. Araştırmacılar, ara alkol içme için alkol köşeleri atamadan önce deneysel grupların su eğitimi sırasında dört köşenin tamamına yaklaşık eşit tercihler gösterdiğinden emin olmalıdır. Her bir kohortta, deneysel gruplar su eğitimi sırasında dört köşede yaklaşık eşit ziyaretler ve yalamalar sergilediler. Bu nedenle, yazarlar köşe atamalarını gruplar arasında sabit tutmuştur. Deneyciler, "Kontrolör" programı aracılığıyla köşeler arasındaki lick ve ziyaretlerin oranını kolayca görebilirler. Deney boyunca düzenli olarak ziyaret ve verileri yalayın, böylece herhangi bir sorun çıkmasın (örneğin, ekipman arızaları veya farelerin bazı köşeleri "işgal etmesi" gibi).
    1. Tüm fareler bir FR-3 programını başarıyla tamamladıktan sonra, şişelere erişim için %20 alkol (musluk suyunda %95 etanol [190 proof], v/v; ~250 mL/şişe) hazırlayın.
    2. Water Training.experiment dosyasını çalıştırmayı bırakın.
    3. Sipper şişelerini operant köşe ikinci ve dördüncü (veya deney dosyasında belirttiğiniz köşeler, farklıysa) çıkarın ve her birini ~250 mL %20 alkolle değiştirin.
    4. Yeni alkollü sipper şişelerini lickometer açıklıklarına nazikçe çevirerek lickometreye sıkı bir bağ sağlandığından güvence alın.
    5. Intermittent Alcohol.experiment dosyasını yükleyin ve kayda başlayın.
    6. Her fare için yazılım tarafından başarıyla kaydedilen ziyaretler, burun dürtmeleri ve yalamalar kontrol edin ve tüm motorlu kapıların doğru açıldığını kontrol edin.
    7. Ertesi gün saat 12:30'dan sonra, programın "SADECE SU ERIŞIMİ"nden "Alkol Erişimi Açık" modülüne başarıyla geçtiğini ve alkol içeren operant köşelerde yalamaların kaydedildiğini doğrulayın.
  5. 16+ Gün: Kininli alkol testi
    NOT: Kinin-karıştırılmış alkol test aşaması, Intermittent Alcohol.experiment dosyası kullanılarak çalıştırılır. Bu aşamada, daha önce %20 alkol içeren iki operant köşedeki içici şişeler 0,5 mM ile değiştirilir ve ardından 1 mM kinin, %20 alkolle karıştırılmış şekilde ceza duyarsız içmeyi değerlendirir. Bu kinin konsantrasyonları, sırasıyla %0,016 ve %0,032 kinin (w/v) olarak karşılık verir, daha önce27,28 ve diğerleri tarafından yapılan testlerde olumsuz olduğu bulunmuştu.31 Fare suya sürekli erişime sahiptir, ancak 24 saatlik periyotlar boyunca kininli alkole aralıklı olarak erişebiliyorlar (örneğin, bir gün 0,5 mM kinin, bir gün sadece suya erişim, bir gün 1.0 mM kinin). Tüm virajlar için FR-3 programı ile erişim sağlanmaktadır. Bu çalışmada, fareler bu görev aşamasını 16 veya 24 gün ardışık aralıklı alkol içmekten sonra gerçekleştirdiler. Stresin kafa karıştırıcı etkilerini önlemek için su gününde hamle testleri arasında kafes değişiklikleri yapılmadı. Deneyin bu aşamasından sonra, fareler ya "açık bar"/serbest erişim alkol içmeye başlayabilir ya da arada bir içmeye dönerek sahtelik sonrası geri dönüş içmeye devam edebilir.
    1. 0,5 mM ve 1 mM kininle karıştırılmış %20 alkol (musluk suyunda %95 etanol [190 proof], v/v; ~250 mL/şişe) hazırlayın.
    2. Kafes değişimi yapın, tüm yudum şişelerini çıkarın.
    3. Her bir sipper şişesini, ~250 mL 0,5 mM kininle karıştırılmış %20 alkol çözeltisi ile alkol köşelerine doldurun.
    4. Yeni alkollü sipper şişelerini lickometer açıklıklarına nazikçe çevirerek lickometreye sıkı bir bağ sağlandığından güvence alın.
    5. Intermittent Alcohol.experiment dosyasını yükleyin ve kayda başlayın.
    6. Her fare için yazılım tarafından başarıyla kaydedilen ziyaretler, burun dürtmeleri ve yalamalar kontrol edin ve tüm motorlu kapıların doğru açıldığını kontrol edin.
    7. Saat 12:30'dan sonra, programın "SADECE SU Erişimi"nden "Alkol Erişimi Açık" modülüne başarıyla geçtiğini ve alkol içeren operant köşelerde yalamaların kaydedildiğini doğrulayın.
    8. Ertesi gün saat 12:30'tan önce, alkol köşesindeki her şişeyi ~250 mL 1 mM kininle karıştırılmış %20 alkollü çözeltiyle değiştirin. Şişe anahtarı için deneyi durdurmaya gerek yok.
    9. Ertesi gün saat 12:30'dan önce, içinde sahte alkol içeren sipper şişelerini çıkarın ve her birini ~250 mL saf %20 alkolle değiştirin.
  6. 20+ Gün: "Açık bar"/alkol içmeye ücretsiz erişim
    NOT: Bir kişi isteğe bağlı olarak bir gün "açık bar"/ücretsiz alkol içme işlemi yapılabilir; bu da işlevsiz bir kontrol olarak hizmet eder. Bu aşama Open Bar.experiment dosyası kullanılarak çalıştırılır. Bu aşamada, dört operant köşeden ikisindeki sipper şişelerinde %20 alkol bulunur ve fareler bu alkolü bir 24 saat (12:30 PM:30 - 12:30 PM) erişebilir. Köşe ziyareti kapıları burun dürtmeden açar. Bu çalışmada, fareler bu görev aşamasını aralıklı alkol içme veya kinin karıştırılmış alkol test aşamalarından sonra gerçekleştirmiştir.
    1. Gerekirse, musluk suyunda %20 alkol (%95 etanol [190 proof], v/v; ~250 mL/şişe hazırla.
    2. Ertesi gün saat 12:30'tan önce, mevcut deney dosyasını çalıştırmayı bırak.
    3. Gerekirse, alkol köşelerindeki sipper şişelerini çıkarın ve her birini ~250 mL %20 alkolle değiştirin.
    4. Yeni alkollü sipper şişelerini lickometer açıklıklarına nazikçe çevirerek lickometreye sıkı bir bağ sağlandığından güvence alın.
    5. Open Bar.experiment dosyasını yükleyin ve kayda başlayın.
    6. Her fare için yazılım tarafından ziyaret işlemleri, burun dürtmeleri ve yalamaların başarıyla kaydedildiğini ve tüm motorlu kapıların serbest açık olduğunu doğrulayın.
    7. Saat 12:30'dan sonra, programın "SADECE SU Erişimi"nden "Alkol Erişimi Açık" modülüne başarıyla geçtiğini ve alkol içeren operant köşelerde yalamaların kaydedildiğini doğrulayın.

5. Veri Analizi

NOT: Her deneyin verileri, program durdurulana kadar dahili olarak saklanır. O zaman, sıkıştırılmış bir veri arşiv dosyası oluşturulur ve C:\Documents\NewBehavior\IntelliCage Plus\Archives içinde yerel sabit diskte saklanır. Dosya adı, programın başladığı tarih ve saatten oluşur ve .zip'de sona erer.  Veri arşivi dosyaları, köşe ziyaretleri (başlangıç zamanı, bitiş zamanı, süre, ziyaret dizisi), burun dürtmeleri (başlangıç zamanı, bitiş zamanı, süre), licks (başlangıç zamanı, bitiş zamanı, süre), ışık ve karanlık zamanlar ve sıcaklık verileri dahil olmak üzere tüm ilgili bilgileri içerir. Bu veri arşivi, "Analyzer" programı ile okunabilir ve analiz edilebilir. IntelliCage veri çıktılarını analiz etmek için başka açık kaynak paketler de mevcuttur (Ruffini ve ark., 2021; Gastaldi ve ark., 2025), yazarlar, aralıklı alkol içme paradigmasından verileri analiz etmek için tidyverse'den halka açık paketleri kullanarak R'de bir veri analiz boru hattı oluşturmuşlardır. Pipeline, fare başına köşe doluluğunun analizi gibi birden fazla kalite kontrol adımını içerir; sirkadiyen ritim boyunca ortalama ziyaret, burun dürtme ve yalama sıklığı; fare başına FR-3 lick alma oranı; ve fare başına günlük yalama sayıları. Ayrıca, yazarlar alkol içme ölçümlerinin temel analizlerini sunmaktadır. Temel, veri dosyalarını işleyen ve hayvan kohortlarına özgü varyasyonlar için uyarlanabilen Quarto işaretleme dilini kullanan bir R defteri şablon dosyasıdır. Analiz, RStudio'nun ücretsiz sürümü kullanılarak yapılır. R için bir proje şablonu dosyası GitHubdeposu 29'da bulunmaktadır.

  1. Tüm verileri, "Kontrolleyici" uygulaması tarafından çıkarılan zip dosyaları ve fare vücut ağırlığı verilerini içeren CSV dosyası dahil olmak üzere derleyin.
    NOT: Ağırlıklar, vücut ağırlığına göre alımı normalleştirmek için gereklidir. Bu iş akışında, ağırlık verilerini her deney dosyasına eklemektense ayrı bir dosyada toplamak daha mantıklıydı. İlk sütunun, arşiv dosyalarındaki Hayvan Kimliği ile eşleşmesi gerekir.
  2. R projesi şablonunu GitHub deposundan indirin.
    1. Projenin adını deneye uygun şekilde değiştirin.
    2. Şablon, analizin nasıl çalıştığını göstermek için örnek veri dosyalarıyla birlikte gelir ve bunlar data/C1 alt klasöründe yer alır. Arşiv dosyalarını kişiselleştirilmiş veri arşivleriyle değiştirin.
  3. RStudio'yu başlatın ve projeyi açın.
    1. RStudio'nun sağ alt köşesindeki pencerenin dosyalar bölümünde qmd klasörüne gidin ve IC_template.qmd dosyasını açın.
    2. Şablon dosyasını çoğaltın ve deneye uygun şekilde adını değiştirin.
    3. Çoğaltılan dosyanın YAML başlık kısmındaki meta verileri ve ilk kod parçasını ayarlayın.
    4. R dizinindeki IC_Commons.R dosyasındaki grup isimlerini deneysel gruplara uyduracak şekilde ayarlayın. (Şablon iki grup kullanır: Kontrol ve LBN.)
  4. Defter dosyasını çalıştır.
    NOT: Daha ayrıntılı talimatlar GitHub deposunda README.md dosyalarla birlikte verilmektedir.

figure-protocol-2
Şekil 3: Tüm fareler arasında eğitim ve aralıklı alkol içme aşamalarında operant köşelere benzer erişim. Birinci farelerarasında 23, farenin her köşede (A) alışkanlık ve su eğitimi sırasında toplam süre ile (B) ilk dört gün ara alkol içme süresi (n = 15 F, 16 M) göstermektedir. Koyu kırmızı renkler ise günde köşede daha fazla zaman geçirmeyi gösterir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

figure-protocol-3
Şekil 4: Fareler, sirkadiyen ritme uyumlu ziyaretler, burun dürtme ve yalamalar yapar ve FR-3 programında operant sipper şişeyine başarıyla erişim sağlar. Birinci kohortfareleri arasında 23 yaşında, testin ilk sekiz günü boyunca seans süresi boyunca operant köşe (A) ziyaretleri, (B) burun dürtmeleri ve (C) yalamalarının ortalama yoğunluğu. (D) Su eğitimi sırasında her farenin FR-3 oranında başarılı bir şekilde yalamasına kadar olan süre. (E) Fareler arasında alışkanlık ve su eğitimi sırasında (solda) (solda) ziyaretin başarı oranı (= yalama / toplam ziyarete yol açan ziyaretler) ile arada ara alkol içme ilk dört gününe (sağ). Daire sembolleri dişileri gösterir (n = 15); kare semboller erkekleri gösterir (n = 16). Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

figure-protocol-4
Şekil 5: Fareler, eğitim ve aralıklı alkol içme aşamalarında günlük olarak benzer bir yalama oranına sahiptir. (A) dişi (n = 15) ve (B) erkek (n = 16) kohort bir farede23, alışkanlık ve su eğitimi sırasında toplam günlük su (mavi) ve alkol (kırmızı) alma sayısı (gün -4–0) ile aralıklı alkol içme (1–4. günler) arasında. C kontrol yetiştirme anlamına gelir; L, LBN yetiştirmeyi ifade eder. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

figure-protocol-5
Şekil 6: Erken yaşamda zorluklara maruz kalan fareler, operant, aralıklı alkol içme paradigmasında kontrollerden daha fazla alkol tüketir. (A) Kontrol (gri; sol) ve LBN yetiştirilen (pembe; sağ) fareler arasında 8 gün aralı alkol erişimi boyunca vücut ağırlığı (g; haftalık ölçülür) normalleştirilmiş ortalama alkol yalamaları. (B) Vücut ağırlığına göre normalleştirilmiş günlük ortalama alkol lic miktarı kinin karışımından önce, sırasında ve sonrasında (0,5 mM, 1 mM). (C) Vücut ağırlığına göre normalleştirilmiş günlük ortalama alkol yalamasını gösteren yoğunluk grafiği, tek bir FR-0 "Açık Bar" alkol erişim gününde. Daire sembolleri dişileri gösterir (n = 15); kare semboller erkekleri gösterir (n = 16). Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Sonuçlar

Yazarlar, erken yaşam zorluklarının (ELA) AUD benzeri davranışlara karşı savunmasızlığı nasıl değiştirdiğini değerlendirmek için IntelliCages üzerinden otomatik ev kafesitestleri kullandılar 27. Zorlukları tetiklemek için, öngörülemez ve parçalanmış anne bakımını tetikleyen kaynak kıtlığı modeli olan sınırlı yatak ve yuva (LBN) paradigmasınıkullandılar (51,52,53,53,54,55,56). Çalışma, sosyal olarak barındırılan farelerde alkol içme davranışları üzerindeki ELA'nın etkilerini değerlendirmede yeniydi; sosyal izolasyonun yarattığı stresin karıştırıcı etkileri olmadan. Bu, yetişkinlikte sosyal izolasyonun ELA'ya maruz kalan farelerde farklı etkileri olduğu bilindiği göz önünealındığında önemliydi 22,57. Maksimum veri verimini sağlamak için yazarlar, her cinsiyet için iki adet olmak üzere dört IntelliCage cihazında alkol içme davranışlarını aynı anda ölçtüler.

Yazarlar, ham verilerin kapsamlı kalite kontrolünü yürüterek analiz sürecini başlattılar. Burada yer alan grafikler, yayımlanmış23 çalışmasının birinci kohortundan (n = 15 F, 16 M) temsil eden verileri göstermektedir. Tüm analiz ve çizim için script GitHubdeposu 29'da yer almaktadır. Deneysel 0. gün, veri toplama sürecini bozan bir kafes değişikliği nedeniyle hariç tutuldu. Veri araştırması ve kalite kontrolü için dikkate alınan faktörler arasında, yazarlar hem eğitim (Şekil 3A) hem de aralıklı alkol içme aşamalarında (Şekil 3B) tüm farelerin tüm operant köşelere yaklaşık eşit erişime sahip olmasını sağladılar (Şekil 3B). Bu, farelerin operant köşeleri "işgal etmesinin" önemli etkilerini ortadan kaldırır ve diğer farelerin sipper şişelerine erişmesini engeller. Yazarlar daha sonra farelerin deneysel günlerde beklenen sirkadiyen ritimde ziyaretler, burun dürtmeleri ve yalamalar yaptıklarını doğruladılar (Şekil 4A–C) ve modül başladıktan sonraki altı saat içinde tüm farelerin FR-3 oranında ilk yalamayı başarıyla gerçekleştirdiğini doğruladılar (Şekil 4D). Su eğitimi aşamasının sonunda, tüm fareler nispeten yüksek bir yalama başarı oranına ulaştı (= ziyaretlerin %'si yalama / toplam ziyaretle), bu da su eğitiminin sonunda eğitimin başarılı olduğunu daha da doğruladı (Şekil 4E).

Alışma, su eğitimi ve aralıklı alkol içmeye başlandığında, fareler günlük yalama sayısı yaklaşık olarak karşılaştırılabilir oldu (Şekil 5A–B). Bazı fareler, deneysel gün -3'te operant su eğitiminin başında günlük toplam yalama miktarlarında düşüş gösterse de (örneğin P241260-1), çoğu fare, temel yalama oranlarını koruyacak kadar hızlı bir şekilde FR-1 ve FR-3 burun sokma programı edinmiştir. Bu nedenle, farelerin su eğitimi sırasında aşırı susuzluk yaşaması pek olası değildir. Tüm fareler FR-3 programını makul bir hızda öğrendi. Deneysel ilk günde aralıklı alkol içmeye başladığında, neredeyse tüm fareler farklı oranlarda da olsa alkol içmeyi tercih etti. Genel olarak, fareler alkol tüketirken günlük toplam yalama miktarını anlamlı şekilde artırmadı. Bunun yerine, fareler artan alkol tüketimine uyum sağlamak için daha az su yalamaya başladı.

Aralıklı alkol içme günlerinin tamamında, birinci gruptaki fareler vücut ağırlığına göre günlük alkol içme miktarlarında büyük farklılıklar göstermiştir (Şekil 6A). Yazarlar, LBN paradigmasından geçen farelerin çapraz yetiştirilen kontrol testine göre çok daha küçük vücutağırlıklarına sahip olduğunu buldular 23. Bu nedenle, alkol içme grup farklılıklarını incelerken, günlük alkol yalamalarını vücut ağırlığına göre normalleştirmeyi tercih ettiler ve yazarlar kafes değişiklikleri sırasında haftalık olarak bunu değerlendirdiler. LBN ile yetiştirilen fareler, hem aralıklı içme (Şekil 6A) hem de kinin karıştırma sırasında (Şekil 6B) genellikle kontrol organlarına göre vücut ağırlığının gramı başına daha fazla alkol içerlerdi. Bu eğilim, operasyonel olmayan açık erişimin tek bir günü boyunca devam etti (Şekil 6C). Birinci kohorttan elde edilen bu bulgular, ELA'ya maruz kalan farelerin aralıklı erişim sırasında çapraz bakıcılıklı kontrol gruplarına göre vücut ağırlığının gramı başına sürekli olarak daha fazla alkol içtiklerini bildiren sonuçlarla tutarlıdır; bu etki özellikle erkeklerdebelirgindi 23.

Otomatik ev-kafes izleme sistemlerinin verimliliği sayesinde, yayımlanan çalışma, sosyal olarak barındırılan ELA'ya maruz kalan kemirgenler arasında, her iki cinsiyet de dahil olmak üzere son derece sağlam örneklem boyutlarında (n = 54 kontrol, 43 LBN) alkol tüketiminin arttığını doğruladı. Bu sonuçlar, olumsuz çocukluk deneyimi geçmişi olan AUD hastalarında görülen AUD benzeri davranışların modellenmesinde bir ileriyedoğru bir adım temsil etmekte 58,59,60,61,62 ve ELA'dan sonra AUD hassasiyetinde artan nörobiyolojiyi belirleyen gelecekteki mekanik çalışmaların kapısını açmaktadır.

Tartışma

Yazarların IntelliCages kullanarak ELA27'ye maruz kalan farelerde AUD benzeri davranışları sağlam şekilde değerlendirmesi ve transgenikçizgiler 28'deki önceki çalışmaları örnek olarak, otomatik ev-kafes izleme sistemleri, AUD'nin preklinik modellerini incelemek için verimli ve esnek bir çözüm sunar. Eşzamanlı olarak 16 birlikte barındırılan farenin değerlendirilmesi, alkol içme metodolojisinin verimliliğini önemli ölçüde artırırken, sosyal izolasyonun yarattığı stresin kafa karıştırıcı etkilerinden kaçınır. Operant, aralıklı alkol içme paradigması, deneycilerin tek bir ~5–6 hafta içinde aşırı alkol, zamanla artış ve cezasız içki içme gibi AUD benzeri davranışların birden fazla yönünü incelemelerine olanak tanır. Paradigma, AUD benzeri davranışı değerlendirmek için bir yöntem sunsa da, tasarım aralıklı içmeyi daha kronik ölçümlere, hava puffuna karşı ceza duyarsız içmeyi test etmek veya değişken operant oranı eklemek gibi olasılıklar arasında kolayca uyarlanabilir. Genel olarak, otomatik ev-kafes izleme sistemleri, araştırmacıların AUD benzeri davranışları değerlendirme verimliliğini ve özgüllüğünü önemli ölçüde artırır; bu da yeni temel devrelerin ve tedavilerin belirlenmesini sağlar.

Tüm teknolojilerde olduğu gibi, yazarlar zaman zaman mekanik ve teknik arızalar yaşar. Sistemin denetimsiz çalışmasına izin verme cazibesine rağmen, araştırmacıların cihazın düzgün çalışmasını sağlamak için düzenli olarak izlemeye devam etmeleri kritik öneme sahiptir. Manyetik kapıların ara sıra mekanik arızaları nedeniyle içme şişeleri farelerin erişemez hale gelmesine neden olurdu. Bu, uygun temizlik ve bakım ile nadiren gerçekleşir ve genellikle veri toplamada minimum düzeyde zarar görürdü. Hataları hızlıca tespit etmek için, simper şişelerinde benzer sıvı azalmalarını izlemek ve "Kontrol" uygulamasını düzenli olarak kontrol ederek tüm hayvanlar için yalamaların her köşede kaydedildiğini doğrulamak önemlidir. Daha kapsamlı tavsiyeler için Masuda ve meslektaşları, IntelliCages48'de bakım yapılması ve kurulumu hakkında mükemmel bir açıklama sunuyor.

Ayrıca, kavga veya diğer kafa karıştırıcı davranışları için hayvan davranışlarını düzenli olarak gözlemlemek de önemlidir. Yazarlar bu paradigmayı C57/BL6 fareleriyle çalıştırırken dövüşte büyük sorunlar yaşamamış olsalar da, daha agresif genotiplere sahip erkekleri birlikte barındırmak önemli sorunlara yol açmıştır. Özellikle kafes değişimlerinden sonra kurumuş kan, topallayan hayvanlar veya diğer kavga belirtilerini düzenli olarak izleyin. Bu işaretleri fark ederseniz, sorunlu hayvan(lar)ı derhal çıkarın ve onları daha fazla deneyden dışlayın. Verilen kodun "Bireysel fare performansı" bölümünü kullanarak saldırganlığın bireysel farelerin içki davranışını etkileyip etkilemediğini ve ne kadar süre etkidiğini değerlendirebilirsiniz. Etkilenen tüm günleri analizden hariç tutun. Daha önce belirtildiği gibi, yazarlar protokolün farklı genotiplere veya konut düzenlemelerine genelleştirilebilirliğini garanti edemezler.

İlgili olarak, yazarlar zaman zaman farelerin saatlerce aynı köşede uyuyarak ya da başka şekilde aynı köşede kalarak "işgal etmesi" sorunları yaşamışlardır. Bu davranış, diğer farelerin o köşedeki sipper şişelerine erişmesini engeller. Bu durumlar, analizde doğru şekilde hesaba katılırsa içki sonuçlarını karıştırma potansiyeline sahiptir. Verilen kodun "Köşe Dalışı (Ziyaret Süreleri)" ve "Bireysel fare performansı" bölümlerini kullanarak "hogging"in fare davranışını belirli deneysel günleri hariç tutacak kadar etkileyip etkilemediğine karar verebilirsiniz. Genel olarak, deneyler sırasında sosyal davranışların kaydedilemesi veya nicelendirilememesi, bu otomatik izleme sisteminin büyük bir sınırlamasıdır.

Son olarak, gelişmiş nörobilimsel yöntemlerde giderek daha fazla olduğu gibi, otomatik ev kafesi izleme sistemleri büyük miktarda veri üretir. Buradasunulan ve diğerleritarafından geliştirilen 63,64 gibi açık kaynak kodlar sayesinde, deneyciler çıkış verisini organize etmek ve analiz etmek için birden fazla araçla ellerinde bulunuyor. Ancak, burada sunulan protokolde yapılan değişiklikler kodun uyarlanmasını gerektirecektir. Ayrıca, burada sunulmayan çıktı veri hazinesi üzerinde çok sayıda ek analiz yapılabilir.

Örneğin, araştırmacılar alkol tüketimini (fare ağırlığı başına günlük g alkol) niceliklendirmekle ilgilenebilirler. Yazarlar bunu kısaca tartışıyor ve GitHubdeposu 29'da bu analizi gerçekleştirmek için bazı ön kodlar sunuyor. Burada yazarlar, Kasia Radwanska ve meslektaşları30,37 hesaplamalarıyla tutarlı olarak 1.94 μL/lick bir lick-hacim dönüşüm faktörü kullanmaktadır. Bu lick dönüşüm faktörü, alandaki diğer kişilerin alkol tüketimini tahmin etmekiçin kullanılmış olsa da (30,37,38,39), ancak su tüketimi ölçülerek hesaplanmıştır. Bu nedenle, su ile alkol arasındaki yüzey gerilimindeki farklar nedeniyle %20 alkol tüketiminin doğru ölçümü olmayabilir. Alandaki diğer kişiler ise 3 μL/lick 31,34,36,38 lick dönüşüm faktörü kullanmış, bu da bu ölçümün çözülmesi gerektiğini vurgulamaktadır. Farelerin farklı boyutlarda lickler yapma ihtimalini tamamen göz ardı edemez ve bu hesaplamayı daha da karmaşıklaştırıyor. Araştırmacılar alkol tüketiminin doğru bir ölçümünü (g/kg/gün) almak istiyorlarsa, yazarlar deneysel tasarıma uygun bir lick-hacim dönüşüm faktörü hesaplamalarını önerirler.

Sonuç olarak, otomatik ev-kafes izleme sistemlerinin ilerlemesi ve artan erişilebilirliği, AUD araştırmacılarına alkol içme sürecini preklinik olarak değerlendirmek için yeni ve geliştirilmiş araçlar sunmaktadır. Bu tür operant aralıklı alkol içme paradigmaları, deneycilerin AUD benzeri davranışın birden fazla yönünü aynı anda çok daha yüksek verimlilikte ve geleneksel metodolojiye göre etolojik önemle değerlendirmelerini sağlar. IntelliCage test sistemleri ve açık kaynakalternatifler (20,26) sayesinde, araştırmacılar AUD ile uyumlu alkol içme davranışlarını daha verimli ve esnek bir şekilde inceleyebilir, etkili müdahalelerin belirlenmesini hızlandırabilir.

Açıklamalar

Yazarlar rekabet eden çıkarlar belirtmemektedir.

Teşekkürler

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin NIH İç Araştırma Programı'ndan V.A.A.'ya (Zia AA000421; ZIA MH002987). Bu protokolü geliştirmedeki yardımları için Miriam Bocarsly, Anoo Maskeri ve Erin Murray'ye teşekkür etmek isteriz.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Etanol, 190 ProofDecon Laboratuvarları2801G
IntelliCage Test SistemiTSE Sistemlerihttps://www.tse-systems.com/products/intellicage/1x 2000P statik kafes (Tecniplast, 2000P001) ve daha fazla içerir; 4x Fare Evi (Tecniplast, ACRE011) ve 8x Sipper Şişesi (Techniplast, ACBT0252) ve Kapağı (Techniplast, ACCP3521)
IntelliCage Software ("Tasarımcı", "Dendentör", "Analizör")TSE Sistemlerihttps://www.tse-systems.com/products/intellicage/Sürüm 3.6.9.0
ISO Pedler, 6" x 10"Braintree Scientific, Inc.ISO 6105Sıkıştırılmış pamuk lifli pedler (15,24 x 25,4 cm)
İzofluranBaxter10019-360-40
İzofluran VXP™ İyi doldurulmuş buharlaştırıcıMedVet91305535
Laboratuvar Kemirgen DiyetiLabDiet5001
Orta Kesin Mühürlü Fare/Fare İndüksiyon Odası Dünya Hassas AletleriEZ-178
NestletsAncareNES 3600Küçük pamuk kareler (5,08 x 5,08 cm)
OHAUS Compass™ CX Ölçeği - 2.200 gram x 1 gramUlineH-8110Fare vücut ağırlığı ölçümleri için
PC + EkranSupermicrohttps://www.tse-systems.com/products/intellicage/IntelliCage test sisteminin bir parçası olarak satıldı
RFID Transponder (1.25 x 7 mm)TSE Sistemleri290000-IC-60400
RFID Transponder EnjektörAVIDAVID2028
RFID Transponder OkuyucuTSE Sistemleri290000-IC-50800
RStudioPozisyonhttps://posit.co/download/rstudio-desktopSürüm 2026.01.1+403; Tidyverse (2.0.0) ve Quarto (1.9.37) ile
Tri Pour Tek Kullanımlık KabakKonsolide Plastikler45317Fare vücut ağırlığı ölçümleri için

Kaynaklar

  1. Melendez, R. I. Intermittent (Every-Other-Day) Drinking Induces Rapid Escalation of Ethanol Intake and Preference in Adolescent and Adult C57BL/6J Mice. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 35 (4), 652-658 (2011).
  2. Xiao, T., Chen, Y., Boisvert, A., Cole, M., Kimbrough, A. Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure Paired with Two-Bottle Choice to Model Alcohol Use Disorder. Journal of Visualized Experiments (JoVE). (196), e65320 (2023).
  3. Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice. Physiology & Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).
  4. Thiele, T. E., Crabbe, J. C., Boehm, S. L. “Drinking in the Dark” (DID): A Simple Mouse Model of Binge-Like Alcohol Intake. Curr Protoc Neurosci. 68, 9.49.1-9.49.12 (2014).
  5. Huynh, N., Arabian, N. M., Asatryan, L., Davies, D. L. Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice. Journal of Visualized Experiments (JoVE). (143), e57027 (2019).
  6. Longley, M., Willis, E. L., Tay, C. X., Chen, H. An open source device for operant licking in rats. PeerJ. 5, e2981 (2017).
  7. Melo, M. C., Alves, P. E., Nogueira Cecyn, M., Eduardo, P. M. C., Abrahao, K. P. Development of an Eight-Wireless Automated Cage System with Two Lickometers Each for Rodents. eNeuro. 9 (4), ENEURO.0526-21.2022 (2022).
  8. Petersen, N., Adank, D. N., Raghavan, R., Winder, D. G., Doyle, M. A. LIQ HD (Lick Instance Quantifier Home Cage Device): An Open-Source Tool for Recording Undisturbed Two-Bottle Drinking Behavior in a Home Cage Environment. eNeuro. 10 (4), (2023).
  9. Hou, S., Soto, N. M. A., Glover, E. J., Hou, S., Soto, N. M. A., et al. Modeling Alcohol Consumption in Rodents Using Two-Bottle Choice Home Cage Drinking and Microstructural Analysis. Journal of Visualized Experiments (JoVE). (213), e67486 (2024).
  10. Wilcox, M. V., Cuzon Carlson, V. C., Sherazee, N., Sprow, G. M., Bock, R., et al. Repeated binge-like ethanol drinking alters ethanol drinking patterns and depresses striatal GABAergic transmission. Neuropsychopharmacology. 39 (3), 579-594 (2014).
  11. Godynyuk, E., Bluitt, M. N., Tooley, J. R., Kravitz, A. V., Creed, M. C. An Open-Source, Automated Home-Cage Sipper Device for Monitoring Liquid Ingestive Behavior in Rodents. eNeuro. 6 (5), (2019).
  12. Frie, J. A., Khokar, J. Y. An open source automated two-bottle choice test apparatus for rats. HardwareX. 5, e00061 (2019).
  13. Ieraci, A., Mallei, A., Popoli, M. Social Isolation Stress Induces Anxious-Depressive-Like Behavior and Alterations of Neuroplasticity-Related Genes in Adult Male Mice. Neural Plast. 2016, 6212983 (2016).
  14. Hebda-Bauer, E. K., Dokas, L. A., Watson, S. J., Akil, H. Adaptation to single housing is dynamic: Changes in hormone levels, gene expression, signaling in the brain, and anxiety-like behavior in adult male C57Bl/6J mice. Horm Behav. 114, 104541 (2019).
  15. Johnson, M. C., Zweig, J. A., Zhang, Y., Ryabinin, A. E. Effects of social housing on alcohol intake in mice depend on the non-social environment. Front Behav Neurosci. 18, (2024).
  16. Logue, S., Chein, J., Gould, T., Holliday, E., Steinberg, L. Adolescent mice, unlike adults, consume more alcohol in the presence of peers than alone. Developmental Science. 17 (1), 79-85 (2014).
  17. Holgate, J. Y., Garcia, H., Chatterjee, S., Bartlett, S. E. Social and environmental enrichment has different effects on ethanol and sucrose consumption in mice. Brain Behav. 7 (8), e00767 (2017).
  18. Panksepp, J. B., Rodriguez, E. D., Ryabinin, A. E. Sweetened-ethanol drinking during social isolation: Enhanced intake, resistance to genetic heterogeneity and the emergence of a distinctive drinking pattern in adolescent mice. Genes Brain Behav. 16 (3), 369-383 (2017).
  19. Johnson, M. C., Zweig, J. A., Zhang, Y., Ryabinin, A. E. Effects of social housing on alcohol intake in mice depend on the non-social environment. Front Behav Neurosci. 18, 1380031 (2024).
  20. Petersen, N., Adank, D. N., Quan, Y., Edwards, C. M., Hallal, S. D., et al. A Novel Mouse Home Cage Lickometer System Reveals Sex- and Housing-Based Influences on Alcohol Drinking. eNeuro. 11 (10), (2024).
  21. Lander, S. S., Linder-Shacham, D., Gaisler-Salomon, I. Differential effects of social isolation in adolescent and adult mice on behavior and cortical gene expression. Behavioural Brain Research. 316, 245-254 (2017).
  22. Kuhlman, K. R. Pitfalls and potential: Translating the two-hit model of early life stress from pre-clinical non-human experiments to human samples. Brain Behav Immun Health. 35, 100711 (2023).
  23. Lipp, H. P. High-throughput and Automated Behavioural Screening of Normal and Genetically Modified Mice. Bus Brief Future Drug Discov. , (2005).
  24. Kiryk, A., Janusz, A., Zglinicki, B., Turkes, E., Knapska, E., et al. IntelliCage as a tool for measuring mouse behavior - 20 years perspective. Behav Brain Res. 388, 112620 (2020).
  25. Iman, I. N., Yusof, N. A. M., Talib, U. N., Ahmad, N. A. Z., Norazit, A., et al. The IntelliCage System: A Review of Its Utility as a Novel Behavioral Platform for a Rodent Model of Substance Use Disorder. Front Behav Neurosci. 15, 683780 (2021).
  26. Frie, J. A., Khokhar, J. Y. FARESHARE: An open-source apparatus for assessing drinking microstructure in socially housed rats. NPP—Digit Psychiatry Neurosci. 2 (1), 1 (2024).
  27. Anderson, L. G., Tischer, A. E., Bock, R., Michaelides, M., Alvarez, V. A. Early life adversity increases striatal dopamine D1 receptor density and promotes social alcohol drinking in mice, especially males. Transl Psychiatry. , (2026).
  28. Bocarsly, M. E., Shaw, M. J., Ventriglia, E., Anderson, L. G., Goldbach, H. C., et al. Preexisting risk-avoidance and enhanced alcohol relief are driven by imbalance of the striatal dopamine receptors in mice. Nat Commun. 15 (1), 1-17 (2024).
  29. Bock, R., Anderson, L., Averbeck, T. . IntelliCage Intermittent Drinking Analysis Template [R]. , (2026).
  30. Radwanska, K., Kaczmarek, L. Characterization of an alcohol addiction-prone phenotype in mice. Addiction Biology. 17 (3), 601-612 (2012).
  31. Smutek, M., Turbasa, M., Sikora, M., Piechota, M., Zajdel, J., et al. A Model of Alcohol Drinking under an Intermittent Access Schedule Using Group-Housed Mice. PLOS ONE. 9 (5), e96787 (2014).
  32. Mijakowska, Z., Łukasiewicz, K., Ziółkowska, M., Lipiński, M., Trąbczyńska, A., et al. Autophosphorylation of alpha isoform of calcium/calmodulin-dependent kinase II regulates alcohol addiction-related behaviors. Addiction Biology. 22 (2), 331-341 (2017).
  33. Holgate, J. Y., Garcia, H., Chatterjee, S., Bartlett, S. E. Social and environmental enrichment has different effects on ethanol and sucrose consumption in mice. Brain and Behavior. 7 (8), e00767 (2017).
  34. Koskela, M., Piepponen, T. P., Andressoo, J. O., Võikar, V., Airavaara, M. Towards developing a model to study alcohol drinking and craving in female mice housed in automated cages. Behavioural Brain Research. 352, 116-124 (2018).
  35. Beroun, A., Nalberczak-Skóra, M., Harda, Z., Piechota, M., Ziółkowska, M., et al. Generation of silent synapses in dentate gyrus correlates with development of alcohol addiction. Neuropsychopharmacology. 43 (10), 1989-1999 (2018).
  36. Simmons, K. E., Healey, K. L., Li, Q., Moore, S. D., Klein, R. C. Effects of sex and genotype in human APOE-targeted replacement mice on alcohol self-administration measured with the automated IntelliCage system before and after repeated mild traumatic brain injury. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 45 (11), 2231-2245 (2021).
  37. Pagano, R., Salamian, A., Skonieczna, E., Wojtas, B., Gielniewski, B., et al. Molecular fingerprints in the hippocampus of alcohol seeking during withdrawal. Res Sq. , rs.3.rs-3337670 (2023).
  38. Stefaniuk, M., Pawłowska, M., Barański, M., Nowicka, K., Zieliński, Z., et al. Global brain c-Fos profiling reveals major functional brain networks rearrangements after alcohol reexposure. Neurobiol Dis. 178, 106006 (2023).
  39. Frycz, B. A., Nowicka, K., Konopka, A., Hoener, M. C., Bulska, E., et al. Activation of trace amine-associated receptor 1 (TAAR1) transiently reduces alcohol drinking in socially housed mice. Addiction Biology. 28 (7), e13285 (2023).
  40. Skupio, U., Sikora, M., Korostynski, M., Wawrzczak-Bargiela, A., Piechota, M., et al. Behavioral and transcriptional patterns of protracted opioid self-administration in mice. Addiction Biology. 22 (6), 1802-1816 (2017).
  41. Ismail, N. I. W., Jayabalan, N., Mansor, S. M., Müller, C. P., Muzaimi, M. Chronic mitragynine (kratom) enhances punishment resistance in natural reward seeking and impairs place learning in mice. Addiction Biology. 22 (4), 967-976 (2017).
  42. Ajonijebu, D. C., Abboussi, O., Mabandla, M. V., Daniels, W. M. U. Differential epigenetic changes in the hippocampus and prefrontal cortex of female mice that had free access to cocaine. Metab Brain Dis. 33 (2), 411-420 (2018).
  43. Kimbrough, A., Kim, S., Cole, M., Brennan, M., George, O. Intermittent Access to Ethanol Drinking Facilitates the Transition to Excessive Drinking After Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure. Alcohol Clin Exp Res. 41 (8), 1502-1509 (2017).
  44. Gage, G. A., Muench, M. A., Jee, C., Kearns, D. N., Chen, H., et al. Intermittent-Access Operant Alcohol Self-Administration Promotes Binge-like Drinking and Drinking Despite Negative Consequences in Male and Female Heterogeneous Stock Rats. Neuropharmacology. 235, 109564 (2023).
  45. Hwa, L. S., Chu, A., Levinson, S. A., Kayyali, T. M., DeBold, J. F., et al. Persistent escalation of alcohol drinking in C57BL/6J mice with intermittent access to 20% ethanol. Alcohol Clin Exp Res. 35 (11), 1938-1947 (2011).
  46. Miczek, K. A., Akdilek, N., Ferreira, V. M. M., Kenneally, E., Leonard, M. Z., et al. Excessive alcohol consumption after exposure to two types of chronic social stress: intermittent episodes vs. continuous exposure in C57BL/6J mice with a history of drinking. Psychopharmacology (Berl). 239 (10), 3287-3296 (2022).
  47. Ko, Y. E., Hwa, L. S. Serotonin regulation of intermittent and continuous alcohol drinking in male and female C57BL/6J mice with systemic SB242084 and buspirone. Alcohol Alcohol. 58 (3), 280-288 (2023).
  48. Masuda, A., Kobayashi, Y., Itohara, S. Automated, Long-term Behavioral Assay for Cognitive Functions in Multiple Genetic Models of Alzheimer’s Disease, Using IntelliCage. Journal of Visualized Experiments (JoVE). (138), e58009 (2018).
  49. Kahnau, P. General Instructions for Using the IntelliCage with Mice. Curr Protoc. 6 (2), e70314 (2026).
  50. Thiele, T. E., Navarro, M. “Drinking in the dark” (DID) procedures: a model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice. Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).
  51. Rice, C. J., Sandman, C. A., Lenjavi, M. R., Baram, T. Z. A novel mouse model for acute and long-lasting consequences of early life stress. Endocrinology. 149 (10), 4892-4900 (2008).
  52. Ivy, A. S., Brunson, K. L., Sandman, C., Baram, T. Z. Dysfunctional nurturing behavior in rat dams with limited access to nesting material: a clinically relevant model for early-life stress. Neuroscience. 154 (3), 1132-1142 (2008).
  53. Baram, T. Z., Davis, E. P., Obenaus, A., Sandman, C. A., Small, S. L., et al. Fragmentation and unpredictability of early-life experience in mental disorders. Am J Psychiatry. 169 (9), 907-915 (2012).
  54. Molet, J., Maras, P. M., Avishai-Eliner, S., Baram, T. Z. Naturalistic rodent models of chronic early-life stress. Dev Psychobiol. 56 (8), 1675-1688 (2014).
  55. Walker, C. D., Bath, K. G., Joels, M., Korosi, A., Larauche, M., et al. Chronic early life stress induced by limited bedding and nesting (LBN) material in rodents: critical considerations of methodology, outcomes and translational potential. Stress. 20 (5), 421-448 (2017).
  56. Demaestri, C., Gallo, M., Mazenod, E., Hong, A. T., Arora, H., et al. Resource scarcity but not maternal separation provokes unpredictable maternal care sequences in mice and both upregulate Crh-associated gene expression in the amygdala. Neurobiology of Stress. 20, 100484 (2022).
  57. Peña, C. J. Early-life stress sensitizes response to future stress: Evidence and mechanisms. Neurobiology of Stress. 35, 100716 (2025).
  58. Dube, S. R., Felitti, V. J., Dong, M., Chapman, D. P., Giles, W. H., et al. Childhood abuse, neglect, and household dysfunction and the risk of illicit drug use: the adverse childhood experiences study. Pediatrics. 111 (3), 564-572 (2003).
  59. Anda, R. F., Felitti, V. J., Bremner, J. D., Walker, J. D., Whitfield, C., et al. The enduring effects of abuse and related adverse experiences in childhood. Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci. 256 (3), 174-186 (2006).
  60. Pilowsky, D. J., Keyes, K. M., Hasin, D. S. Adverse Childhood Events and Lifetime Alcohol Dependence. Am J Public Health. 99 (2), 258-263 (2009).
  61. Kirsch, D., Nemeroff, C. M., Lippard, E. T. C. Early Life Stress and Substance Use Disorders: Underlying Neurobiology and Pathways to Adverse Outcomes. ADV RES SCI. 1 (1), 29-47 (2020).
  62. Leza, L., Siria, S., López-Goñi, J. J., Fernández-Montalvo, J. Adverse childhood experiences (ACEs) and substance use disorder (SUD): A scoping review. Drug Alcohol Depend. 221, 108563 (2021).
  63. Ruffini, N., Müller, M. B., Schmitt, U., Gerber, S. IntelliPy: a GUI for analyzing IntelliCage data. Bioinformatics. 37 (21), 3972-3973 (2021).
  64. Daguano Gastaldi, V., Hindermann, M., Wilke, J. B. H., Ronnenberg, A., Arinrad, S., et al. A comprehensive and standardized pipeline for automated profiling of higher cognition in mice. Cell Reports Methods. 5 (3), 101011 (2025).

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Operant DavranışIntelliCage SistemiAlkol Kullanım BozukluğuOtomatik DeğerlendirmeAralıklı Alkol ErişimiRFID TransponderGönüllü İçmeYüksek Kapasiteli Testleme

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.