Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İltihap kaynaklı metabolik değişiklikleri incelemek için interlökin-10 nakavt farelerinde piroksikamla hızlandırılmış enterokolit modeli

74 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/71448

⸱

11 Ağustos 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, The University of Texas Southwestern Medical Center, 2Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center

Bu makalede

Özet

Bu protokol, interlökin (IL-10)-knockout fare modelinde kolit gelişimini hızlandırmak için piroksicam kullanır. Protokol, kolit senkronizasyonunu sağlar ve cinsiyet, arka plan gerginliği veya vivaryum koşullarından bağımsız sıkı ve tekrarlanabilir sonuçlar elde eder. Bağırsak iltihabı sırasında metabolik değişiklikleri incelemek için faydalı bir model olarak hizmet eder.

Özet

İltihap bağırsak hastalığı (IBD), dünya genelinde 10 milyondan fazla kişiyi etkileyen sindirim sisteminin kronik bir inflamatuar hastalığıdır. Kapsamlı araştırmalar IBD'nin altında yatan immünolojik mekanizmalar ve sonuçlara odaklanmış olsa da, mukozal iltihabın metabolik düzensizliğe nasıl katkıda bulunduğu (kilo kaybı ve iştahın azalması) hakkında daha az bilgi vardır. Burada, yazarlar, inflamasyonla tetiklenen metabolik düzensizliği incelemek için interleukin-10-knockout (IL-10-KO) farelerinde piroksicam hızlandırılmış enterokolit fare modelini tanımlıyor. IL-10-KO farelerinin spontan enterokolit geliştirdiği ve enfeksiyonlar veya ilaçlar tarafından tetiklenen enterokolite karşı yüksek yatkınlıkları olduğu bilinmektedir. Ancak, bu modelde vivaryum koşulları ve suş arka planı kolit gelişiminde karıştırıcı faktörler olarak bildirilmiştir. Piroksikam, steroid olmayan bir anti-enflamatuar ilaç (NSAID) olarak, hayvan modellerinde mukozanın luminal bakterilere maruziyetini artırarak enterokoliti tetiklediği veya hızlandırdığı gösterilmiştir. Bu protokolde, erkek ve dişi IL-10-KO fareleri, normal chow diyeti yerine piroksikamla güçlendirilmiş bir diyet verildi. Gıda alımı ve vücut ağırlığı, tüm vücut metabolik değişikliklerini ve ishal ve rektal kanama gibi enterokolitin klinik belirtilerini yansıtmak için günlük olarak ölçüldü. Protokol verimli ve tekrarlanabilir olup, birden fazla farede aynı anda enterokolit indüki ve inflamatuar bağırsak hastalığı modelinde metabolik düzensizlik değerlendirmesine olanak tanır. Bu protokolü kullanan daha ileri çalışmalar, enterokolitin enerji harcaması ve vücut bileşimi gibi metabolik düzensizliğin diğer bileşenleri üzerindeki etkilerini inceleyerek inflamatuar bağırsak hastalığı ile konak metabolizması arasındaki daha geniş bağlantıları ortaya koyabilir.

Giriş

Crohn hastalığı ve ülseratif kolit, topluca inflamatuar bağırsak hastalığı (IBD) olarak bilinir, gastrointestinal yolun kronik otoimmün hastalıklarıdır ve mukozal iltihaplanma ile karakterize edilir; klinik belirtileri karın ağrısı, kilo kaybı, hematokezzi ve ishal gibi belirtilerdir. IBD, dünya genelinde milyonlarca kişiyi etkiler ve en yaygın oran Batılı toplumlarda1. ABD'de ise 3 milyondan fazla kişininetkilendiği tahmin edilmektedir 2,3, özellikle çocuklar vegençler arasında 4,5 oranında yaygınlık ve yaygınlık artışı vardır.

IBD patogenezinin tam olarak bilinmediği halde, hastalığın genetik olarak hassas bireylerde bağırsak mikrobiyotasına karşı abartılı bir bağışıklık yanıtından kaynaklandığı yaygın olarak düşünülmektedir. İltihabi yanıtları modüle eden sitokinler, bağırsak homeostazının korunmasında ve IBD gelişiminde kritik roller oynar. Bunlar arasında, interleukin-10 (IL-10), hem doğuştan hem de adaptif bağışıklık yanıtı kollarını düzenleyerek insanlarda immünolojik homeostazın korunmasına yardımcı olan, iyi incelenmiş bir anti-inflamatuarsitokindir 6,7. Özellikle, IL-10 ve reseptöründeki (IL-10RA/B) polimorfizmalar, çok erken başlangıçlı IBD (VEO-IBD) olan bebeklerde tespit edilmiştir ve klasik olarak hayatın ilk birkaç ayında perianal hastalıkla ortayaçıkmaktadır 8. Bu ilişki, Crohn hastalığı olan yetişkin hastaların geniş ölçekli ekzom dizileme ile desteklenmektedir; bu dizileme, IL-10RA'nın monojenik olmayanIBD 9'da hastalık duyarlılık lokusu olarak tanımlanmasıdır. Ayrıca, VEO-IBD hastalarında IL-10 nötralize edici antikorları içeren genetik olmayan bir yol tanımlanmış ve bu yolun mukozal bağışıklıkhomeostazı 10'u korumadaki önemini daha da vurgulamaktadır.

IL-10'un IBD'de rol oynadığını gösteren insan çalışmalarına dayanarak, interleukin-10-knockout (IL-10-KO) fareleri, IL-10'un IBD'deki rolünü incelemek için bir model olarak geliştirilmiştir. IL-10-KO farelerinin, genellikle 8–12 haftalık 11 yaşlarında başlar ve uyarılara aşırı CD4+ Th1 yanıtıyla spontan enterokolit geliştirdikleri bilinmektedir. Ancak, IL-10-KO farelerinde spontan enterokolit gelişimi, hızlandırıcıbir ajan 12,13,14 olmadan genetik suş, mikrobiyota bileşimi ve barınma koşullarına bağlı olarak öngörülemez olabilir 15,16. Koliti indüklemek için güvenilir bir protokolün kullanılması, IL-10-KO modelinin pratik olarak faydalı olması için kritik öneme sahiptir. Önceki çalışmalar, IL-10-KO farelerinde enterokolit indükte etmek için piroksicam gibi steroid olmayan anti-inflamatuar ilaçlar (NSAID'ler) kullanmıştır 17,18. Ancak, bu çalışmalar öncelikle immünolojik değişikliklere odaklanmış olup, enterokolitin metabolizma üzerindeki etkileri veya cinsiyetin kolit şiddetindeki rolü üzerine nispeten az vurguyapılmıştır 19. Yazarlar, IL-10-KO farelerinde enterokolit indükte piroksikamla güçlendirilmiş bir diyetin kullanımını ve bu modelde hem erkek hem de dişi farelerle metabolik düzensizlik ve mukoza inflamatuar yanıtlarını karakterize etmeyi tanımlamaktadır. Bu protokol, vücut ağırlığı ve gıda alımını ölçerek tüm vücut metabolik değişikliklerini, kolitin klinik belirtilerini ve mukozal iltihabı yansıtan histolojik ve transkriptomik değişiklikleri yansıtır. Bu verimli ve tekrarlanabilir model, IBD ile konak metabolizması arasındaki bağlantıyı araştırmak için değerli bir araç sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Teksas Üniversitesi Güneybatı Tıp Merkezi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanan protokole uygun olarak, "Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi" [Onay Numarası: 2017-102011] uyarınca gerçekleştirilmiştir. Ötenazi, kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Yapılan işlemler için anestezi gerekmemiştir. Malzemelerle ilgili özel detaylar Malzeme Tablosu'nda açıklanmıştır.

1. IL-10-KO farelerinde piroksikamla hızlandırılmış enterokolit modelinin oluşturulması

  1. IL-10-KO farelerini, belirli bir patojensiz (SPF) tesiste, 12 saatlik ışık döngüsünde ve yemeğe ve suya imkânsız erişimle tutun.
  2. 7–8 haftalık, yaş ve cinsiyet eşleştirilmiş fareleri bireysel olarak mikroizolyatör kafeslerde barındırırlar. Deneyin başlamasından en az bir hafta önce farelerin tek bir barınma ve günlük müdahaleye alışmasına izin verin.
    NOT: Vücut ağırlıklarının erkekler için >20 g, dişiler için >17 g olduğundan ve farelerin dövüş yaralarından arınmış olduğundan emin olun.
  3. Fareleri deneysel bir grup ve kontrol grubuna atayın. Deneysel grup için, standart yemeği piroksikamla güçlendirilmiş chow ile değiştirin. Kontrol grubu için taze standart yemek sağlanır. Her kafes hopperına 50 g çow ekleyin.
    NOT: Her gruba her cinsiyet için en az beş fare ayırın. Piroksicamla güçlendirilmiş chow (200 ppm), Teklad tarafından, araştırmacılar tarafından sağlanan piroksicam kullanılarak özel laboratuvar hayvan diyeti üretimi için hazırlandı. Partiden partiye değişkenliği en aza indirmek için, belirli bir deneydeki tüm hayvanların aynı üretim partisinden yem alması önerilir. Mümkün olduğunda, aynı parti tekrarlanabilirliği artırmak için deneyler boyunca da kullanılmalıdır.

2. Vücut ağırlığı ve beslenme davranışının izlenmesi

  1. Analitik bir teraziyle her farenin vücut ağırlığını kaydedin. Her fareyi her gün aynı saatte, 7 gün üst üste her gün tek tek tartın. Günlük vücut ağırlığını 0. günde başlangıç ağırlığının yüzdesi olarak bildirin (%100 olarak ayarlanın).
    NOT: %20'nin üzerinde kilo kaybı aşırı stres ve yakın ölüm riski anlamına gelir. Bu eşik aşılırsa fareler ötenazi yapılmalıdır.
  2. Analitik bir tarağı kullanarak, piroksikle güçlendirilmiş chow'un başlangıç ağırlığı ve her kafesteki standart chow kaydolun.
  3. Sonra, her kafes bunkerinde kalan chow'u her gün aynı saatte, 7 gün ardışık olarak her gün ölçün.
  4. Günlük yemek tüketimini, önceki günün kalan yemeğinden günlük yemek ağırlığını çıkararak hesaplayın.
    NOT: Yemek miktarını rutin olarak kontrol edin ve 10 gramın altındaysa tekrar doldurun. Piroksicam chow'un lezzetliliği alımı etkilemez ve standart chow'a çok benzemelidir.

3. Hastalık aktivitesinin izlenmesi

  1. 0. ve 7. günlerde, bireysel farelerin dışkı pelletlerini görsel olarak inceleyin ve dışkıda kan varlığını belirleyin.
  2. Eğer kan görünmüyorsa, test kartına bir pelet sürerek ardından verilen geliştirici reaktifi ekleyerek fekal gizli kan testi yapın. Tablo 1'e göre puan sonuçları.
  3. 0. ve 7. günlerde, taze boşalmış dışkı pelletlerini görsel olarak inceleyerek dışkı kıvamı değerlendirin. Tutarlılığı belirlemeye yardımcı olmak için düz pensler kullanın. Tablo 1'e göre puan sonuçları.
  4. 0. ve 7. günlerde, perianal bölgeyi inceleyerek rektal sarkmanın derecesini belirleyin. Tablo 1'e göre puan sonuçları.
  5. Vücut ağırlığını yukarıda tarif edildiği gibi ölçün. Tablo 1'e göre puan sonuçları.
    NOT: Hastalık aktivite indeksi (DAI) puanlaması, tutarlılığı sağlamak, gözlemci yanlılığını en aza indirmek ve değerlendirmenin güvenilirliğini artırmak için aynı araştırmacı tarafından deney boyunca kör bir şekilde yapılmalıdır.

4. Kolon dokusunun hasadı

  1. Fareleri CO2 boğulması ve servikal disloksiyonla ötenazi yapın, başka yerlerdebildirildiği gibi 20.
  2. Faresi sırtüstü pozisyona getirin ve ventral karın bölgesine %70 etanol püskürtün.
  3. Cildi forsepsle kaldırın ve cerrahi makasla orta çizgi boyunca kesin. Periton boşluğunu açığa çıkarın ve kolonu konumlandırın.
  4. Kolon ve çekimleri küt diseksiyonla açığa çıkarın. Kolon, cecum ve anal manşet dahil olmak üzere en bloc çıkarın.
  5. Kolonu düz bir yüzeye yerleştirin ve bağ dokusunu çıkarın.
  6. Kütün uzunluğunu ölçüp kaydedin.
  7. Kolon uzunluğu ölçüldükten sonra, ceko-kolonik birleşimde keserek çekum çıkarılır.
  8. Fosfatla tamponlu tuzlu (PBS) doldurulmuş 10 mL'lik bir şırınga, takılı 22 kalibre top ucu yeniden kullanılabilir çelik gavaj iğnesi ile hazırlanır. İğneyi kolona geçirin ve bağırsak içeriğini boşaltın.
  9. Suygun kolonu PBS içeren bir Petri kabına yerleştirin ve kalan içeriği çıkarmak için durulayın. Temizlendikten sonra, sonraki testler için kullanın.

5. Histoloji analizi

  1. Kolonu cam bir kaydırığın üzerine düz bir şekilde yerleştirin. Forseps kullanarak dokuyu distal uçtan başlayarak kendi etrafına sararak "İsviçre rulosu" oluşturun. Bu şekilde, distal/anal uç iç ruloda kalır ve daha proksimal bölgeler dış ruloya uzanır.
  2. 27 kalibre iğne kullanarak, rulo kolonu tutacak şekilde sabitleyin ve gömülü bir doku kasetine yerleştirin.
  3. Dokuları düzeltmek için, doku kasetlerini %10 tamponlu formalin çözeltisine 16 saat boyunca 4 °C'de batırın.
    DIKKAT: %10 formalin ciltle temas ettiğinde zararlıdır ve ciddi cilt yanıkları ile göz hasarına neden olabilir. Koruyucu eldivenler ve bilimsel gözlüklerle dikkatli davranın. Kalan formalin kurumsal yönergeler doğrultusunda doğru şekilde bertaraf edilmelidir.
  4. Formalin fiksasyonundan sonra, parafin gömülmesi için dokuları işleyin ve cam slaytlara monte etmek üzere kesimlerinize alın.
    NOT: Örnekler, parafin doku kasetlerinin işlemesi, kaydırma montajı, hematoksilin ve eozin boyama için gerekli ekipmanlarla birlikte bir histoloji laboratuvarına gönderilmelidir.
  5. Şekillendirilen protokollere göre hematoksilin ve eozin (HE) ile boyama dokusukaydırılması 21.
  6. Tablo 2'de açıklanan histolojik puanlama sistemi kullanılarak, her bölümde aşağıdaki histolojik özellikleri değerlendirin: enterokolitten kaynaklanan doku hasarı, lamina propria inflamatuar hücre infiltrasyonu ve ilgili alan oranı. Her bölümdeki puanları birleştirerek toplam puan oluşturuldu (Tablo 2).
    Toplam puan = Özellikler × Katılım (doku hasarı) + Özellikler × Katılım (Lamina Propria İltihaplı Hücre İnfiltrasyonu) (1)
  7. Doku hasarı ve hücre infiltrasyonunun temsil histopatolojik görüntüleri Erben veark. 22 tarafından yayımlanan yayında bulunabilir.
    NOT: Histolojik puanlama, değerlendirmenin tutarlılığını ve güvenilirliğini sağlamak için tercihen eğitimli bir patolog tarafından kör bir şekilde yapılmalıdır.

6. Formalin sabitli parafinli dokunun immünofluoresan boyama

  1. Doku slaytlarını sürgü rafına yerleştirin ve parafin eritilmesi için 1 saat boyunca 55 °C'lik sürgü kurutucuya yerleştirin.
  2. Sürgüleri boyama rafına yerleştirin ve rafı sırayla 3 dakika boyunca ksilenli boyama kavanozlarına batırın. Bu adımı 3 kez tekrarlayın.
  3. Boyama rafını %100 etanol içeren boyama kavanozlarına 3 dakika batırın. Bu adımı 3 kez tekrarlayın.
  4. Boyama rafını %95 etanol içeren boyama kavanozunda 3 dakika batırın.
  5. Boyama rafını %80 etanol içeren boyama kavanozunda 3 dakika batırın.
  6. Boyama rafını deionize (DI) suyla boyama kavanozlarına 5 dakika batırın.
    NOT: Tüm önceki adımlar ksilen dumanı nedeniyle havalandırmalı bir davlumbonda yapılmalıdır. Koruyucu eldivenler ve bilimsel gözlüklerle dikkatli davranın. Kalan ksilen kurumsal yönergelere uygun şekilde bertaraf edilmelidir.
  7. Slaytları bir sürgü rafına aktarın ve 1× sitrat toplama çözeltisiyle boyama kavanozuna batırın.
  8. Boyama kavanozunu boyama kabının desteğine yerleştirin.
  9. Boyama kabı desteğini düdüklü tencere yerleştirin.
  10. Bir düdüklü tencerede 15 dakika pişirin.
  11. Kaymaları düdük tenceresinden çıkarın ve oda sıcaklığına soğumasına izin verin.
  12. Slaytları 300 μL bloklama tamponu (%3,5 keçi serumu PBS ile seyreltilmiş olarak) ile nemlendirilmiş bir odada 1 saat boyunca kuluçka yapın. Dokunun tamamen bloklayıcı tampon tarafından kaplı olduğundan emin olun.
  13. Slaytları, nemli bir odada 16 saat boyunca 4 °C'de bloklama tamponunda seyreltilmiş 300 μL primer antikora maruz bırakın. Dokunun birincil antikor tarafından tamamen kaplandığından emin olun. Aşağıdaki birincil antikor kullanılmıştır: Anti-S100A8/S100A9 (1:500).
    NOT: Antikor seyreltmeleri reaktan spesifik olacak ve tedarikçinin önerilerine uymalıdır.
  14. Sürgüleri 3 kez PBS'ye seri olarak batırarak 3 kez bir lekeli kavanozda 5 dakika boyunca durulayın.
  15. Slaytları, nemli bir odada, bloklayıcı tamponda 1 saat boyunca seyreltilmiş floresan ikincil antikorun 300 μL'sine maruz bırakın. Dokunun tamamen ikincil antikor tarafından kaplandığından emin olun. Aşağıdaki floresan ikincil antikor kullanıldı: keçi anti-Tavşan Alexa Fluor 555 (1:150 seyreltme).
    NOT: Bu noktadan itibaren, floroforların fotobeyazlanmasını önlemek için slaytlar ışıktan korunmalıdır. İkincil antikorların seyreltilmesi reaktiflere özgü olacak ve tedarikçinin önerilerine uymalıdır.
  16. Sürgüleri 3 kez PBS'ye seri olarak batırarak 3 kez bir lekeli kavanozda 5 dakika boyunca durulayın.
  17. Slaytları, 1:5000 derecesinde PBS içinde sulandırılmış Hoechst çözeltisine 20 dakika boyunca bir boyama kavanozunda batırarak nükleer boyamaya maruz bırakın.
  18. Sürgüleri 3 kez PBS'ye seri olarak batırarak 3 kez bir lekeli kavanozda 5 dakika boyunca durulayın.
  19. Slaytlardaki PBS'yi aşındırıcı olmayan bir mendil kullanarak dikkatlice silin. 50 μL antiifade montaj ortamı ve bir coverslip ekleyin.

7. RNA çıkarımı

  1. Tüm kolonu veya bir parçayı sıvı azotta anında dondurun ve ardından -80 °C'de saklayın. Alternatif olarak, 1.5 mL RNALater koruyucu çözeltiye batırın ve üreticinin talimatlarına göre depolayın.
  2. Daha önce donmuş kolonu eritin ve düz bir yüzeye yerleştirin. Elde taşınan bir homojenizatör ile dokuyu bozup homojenleştirin.
  3. Üreticinin talimatlarına uygun olarak RNA'yı kit ile izole edin.
  4. Spektrofotometre kullanarak RNA konsantrasyonunu ölçün. 1.8> 260/A280 oranları ve 2.0–2.2 oranlarında260/A230 oranları kabul edilebilir RNA saflığını gösterir.
  5. Ters transkripsiyona devam edin, ardından SYBR yeşil aralayıcı boya ile qPCR uygulanır.
  6. Sonuçları nicelik platformu veya benzeri bir araç kullanarak analiz edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Erkek ve dişi IL-10-KO fareleri, piroksim takviyeli diyete kısa bir maruz kaldıktan sonra enterokolit geliştirir (Şekil 1A–E). 2. güne gelindiğinde, piroksikamla maruz kalan fareler, aynı cinsiyetten düzenli yeme ile beslenen kontrollerine göre istatistiksel olarak anlamlı daha yüksek kilo kaybı gösterdi ve cinsiyetler arasında benzer kilo kaybı gözlemlendi (Şekil 1B). Görünür günlük gıda alımı, piroksim maruziy...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

İltihap bağırsak hastalığı, preklinik modellerin IBD patogenezine katkıda bulunan yolları incelemek ve yeni tanı ile tedavi stratejileri geliştirmek için paha biçilmez araçlar olarak hizmet ettiği karmaşık bir polijenik bozukluktur. Şu anda, birçok IBD preklinik modeli, kullanım kolaylığı nedeniyle dekstran sülfat sodyum (DSS), oksazolon ve trinitrobenzen sülfonik asit (TNBS) gibi kimyasal maruziyete dayanmaktadır. Kendiliğinden kolit geliştiren genetik modeller de mevcuttur. Bunlar aras...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ilgili açıklamalar yapmamaktadır.

Teşekkürler

Burada sunulan çalışmalara katkıda bulunan UTSW'deki temel tesislere teşekkür etmek istiyoruz. Bu çalışma, NIH'den K08DK127197'e kadar (LS-D), T32DK007745 (JW) ve Southwestern Vakfı aracılığıyla Docstars ödülü (LS-D) tarafından desteklendi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
10% buffered formalinStatLab28600-11 Galllon
27 G needlesBD305109
Anti-S100A8 + S100A9 antibodyAbcamAB288715
BalanceFisher scientificS94792DFisher Science Education Portable Balances, 300 g
Citrate bufferSigma AldrichC9999-1000mL
DI waterFisher scientificSTLSL301
Dissecting forcepsFisher scientific22-327379
Ethanol, 100% 200 proofFisher scientificNC1675398Pharmco Products ETHYL ALCOHOL 200 PROOF
Ethanol, 190 proof, 95%Fisher scientificAC615110010
Ethanol, 80%Fisher scientificT08204K7
EZ-Quick Slide Staining DishIHC worldIW-2511Staining jar
EZ-Quick Slide Staining RackIHC worldIW-2512Slide rack
Feeding needleFisher scientificNC992498622 gauge, 25 mm
Fine scissorsFisher scientific14060-11
Flat forcepsFisher scientific21-125-109
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 555Thermo FisherAB_2535849
Handheld homogenizerFisher scientific15-340-167
HemoCueDanlee Medical Products, Inc.BCK 64151AHemoccult Dev/ Single Slide Test Cards - CLIA Waived
Hoechst 33342Invitrogen62249
IL-10 KO MiceThe Jason LaboratoryStrain #: 002251IL10-KO mice, genotype: B6.129P2-IL-10tm1Cgn/J
IVC mouse cagingAllentownMouse 500
Liquid nitrogenAirgasNI UHP300
Microscope cover glassFisher scientific12541033
NanodropThermo FisherND-ONE-W
Normal Goat serumVector labsS-1000-20
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma AldrichD8537
Petri dishesFisher scientificFB0875713
PiroxicamSigma AldrichP0847supply to inotiv for preparation of custom animal diet
Piroxicam-fortified chowInotivCustom200 ppm
Primer: Mouse GAPDH forwardSigma AldrichN/A5' AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 3' forward
Primer: Mouse GAPDH reverseSigma AldrichN/A5' TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 3' reverse
Primer: Mouse IFN-G forwardSigma AldrichN/A5' ACTGGCAAAAGGATGGTGAC 3' forward
Primer: Mouse IFN-G reverseSigma AldrichN/A5' TGAGCTCATTGAATGCTTGG 3' reverse
Primer: Mouse IL-10 forwardSigma AldrichN/A5' CTTGCACTACCAAAGCCACA 3' (common)
Primer: Mouse IL-10 reverseSigma AldrichN/A5' GTTATTGTCTTCCCGGCTGT 3' (Wild type reverse)
Primer: Mouse IL-10 reverse (2)Sigma AldrichN/A5' CCACACGCGTCACCTTAATA 3' (Mutant reverse)
Primer: Mouse IL-1B forwardSigma AldrichN/A5' GCTGAAAGCTCTCCACCTCA 3' forward
Primer: Mouse IL-1B reverseSigma AldrichN/A5' AGGCCACAGGTATTTTGTCG 3' reverse
Primer: Mouse IL-6 forwardSigma AldrichN/A5' GTTCTCTGGGAAATCGTGGA 3' forward
Primer: Mouse IL-6 reverseSigma AldrichN/A5' TTTCTGCAAGTGCATCATCG 3' reverse
Primer: Mouse TNF forwardSigma AldrichN/A5' GCAGGTTCTGTCCCTTTCAC 3' forward
Primer: Mouse TNF reverseSigma AldrichN/A5' AGTGCCTCTTCTGCCAGTTC 3' reverse
QuantStudio 7 ProThermo FisherA43183
RNAlater solutionInvitrogenAM7020RNA Stabilization Solution, 100 mL
Rneasy mini kitQiagen74104
SHURDry SD-II Slide DryerGeneral dataSD-ll-120
Simport Scientific EasyDip Slide Staining RackFisher scientific22-038-494Staining rack
SlowFade Gold antifade reagentInvitrogenS36936
Staining dish supportBioSBBSB7086
Staintray IHC slide staining systemIHC worldM918-1Humidified chamber for IHC
SuperScript VILOInvitrogen11755050
SYBR Green Master mixApplied BiosystemsA46109
Tintoretriever pressure cookerBioSBBSB7008
Tissue cassettesFisher scientific 50-197-8152Research Products International Corp Tissue Processing Cassette, Pink, 500 per Case
XylenePharmco3990000001 Gallon

Kaynaklar

  1. Hracs L, Windsor JW, Gorospe J, et al. Global evolution of inflammatory bowel disease across epidemiologic stages. Nature. 2025;642(8067):458-466.
  2. Dahlhamer JM, Zammitti EP, Ward BW, Wheaton AG, Croft JB. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease Among Adults Aged ≥18 Years - United States, 2015. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2016;65(42):1166-1169.
  3. Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies. Lancet. 2017;390(10114):2769-2778.
  4. Caron B, Honap S, Peyrin-Biroulet L. Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease across the Ages in the Era of Advanced Therapies. J Crohns Colitis. 2024;18(Supplement_2):ii3-ii15.
  5. Ye Y, Manne S, Treem WR, Bennett D. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease in Pediatric and Adult Populations: Recent Estimates From Large National Databases in the United States, 2007-2016. Inflamm Bowel Dis. 2020;26(4):619-625.
  6. Rubtsov YP, Rasmussen JP, Chi EY, et al. Regulatory T cell-derived interleukin-10 limits inflammation at environmental interfaces. Immunity. 2008;28(4):546-558.
  7. Shouval DS, Biswas A, Goettel JA, et al. Interleukin-10 receptor signaling in innate immune cells regulates mucosal immune tolerance and anti-inflammatory macrophage function. Immunity. 2014;40(5):706-719.
  8. Glocker EO, Kotlarz D, Boztug K, et al. Inflammatory bowel disease and mutations affecting the interleukin-10 receptor. N Engl J Med. 2009;361(21):2033-2045.
  9. Sazonovs A, Stevens CR, Venkataraman GR, et al. Large-scale sequencing identifies multiple genes and rare variants associated with Crohn’s disease susceptibility. Nat Genet. 2022;54(9):1275-1283.
  10. Griffin H, Ceron-Gutierrez L, Gharahdaghi N, et al. Neutralizing Autoantibodies against Interleukin-10 in Inflammatory Bowel Disease. N Engl J Med. 2024;391(5):434-441.
  11. Kühn R, Löhler J, Rennick D, Rajewsky K, Müller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 1993;75(2):263-274.
  12. Berg DJ, Davidson N, Kühn R, et al. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4(+) TH1-like responses. J Clin Invest. 1996;98(4):1010-1020.
  13. Mizoguchi A. Animal models of inflammatory bowel disease. Prog Mol Biol Transl Sci. 2012;105:263-320.
  14. Hart ML, Ericsson AC, Franklin CL. Differing Complex Microbiota Alter Disease Severity of the IL-10-/- Mouse Model of Inflammatory Bowel Disease. Front Microbiol. 2017;8:792.
  15. Keubler LM, Buettner M, Häger C, Bleich A. A Multihit Model: Colitis Lessons from the Interleukin-10-deficient Mouse. Inflamm Bowel Dis. 2015;21(8):1967-1975.
  16. Büchler G, Wos-Oxley ML, Smoczek A, et al. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 2012;18(5):943-954.
  17. Berg DJ, Zhang J, Weinstock JV, et al. Rapid development of colitis in NSAID-treated IL-10-deficient mice. Gastroenterology. 2002;123(5):1527-1542.
  18. Hale LP, Gottfried MR, Swidsinski A. Piroxicam treatment of IL-10-deficient mice enhances colonic epithelial apoptosis and mucosal exposure to intestinal bacteria. Inflamm Bowel Dis. 2005;11(12):1060-1069.
  19. Holgersen K, Kvist PH, Markholst H, Hansen AK, Holm TL. Characterization of enterocolitis in the piroxicam-accelerated interleukin-10 knock-out mouse--a model mimicking inflammatory bowel disease. J Crohns Colitis. 2014;8(2):147-160.
  20. B C, K B, V B, et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. DGXT of the European Commission. Laboratory animals. 1997;31(1).
  21. Ellis JL, Yin C. Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish. J Vis Exp. 2017;(123):55630.
  22. Erben U, Loddenkemper C, Doerfel K, et al. A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7(8):4557-4576.
  23. Holgersen K, Kutlu B, Fox B, et al. High-resolution gene expression profiling using RNA sequencing in patients with inflammatory bowel disease and in mouse models of colitis. J Crohns Colitis. 2015;9(6):492-506.
  24. Ananthakrishnan AN, Adler J, Chachu KA, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Crohn’s Disease. Gastroenterology. 2023;165(6):1367-1399.
  25. Singh S, Ananthakrishnan AN, Nguyen NH, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Ulcerative Colitis. Gastroenterology. 2023;164(3):344-372.
  26. Sifuentes-Dominguez LF, Li H, Llano E, et al. SCGN deficiency results in colitis susceptibility. eLife. 2019;8:e49910.
  27. Sellon RK, Tonkonogy S, Schultz M, et al. Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice. Infect Immun. 1998;66(11):5224-5231.
  28. Bábíčková J, Tóthová Ľ, Lengyelová E, et al. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 2015;38(5):1996-2006.
  29. Wagnerova A, Babickova J, Liptak R, Vlkova B, Celec P, Gardlik R. Sex Differences in the Effect of Resveratrol on DSS-Induced Colitis in Mice. Gastroenterol Res Pract. 2017;2017:8051870.
  30. Maite CB, Roy M, Emilie V. The Effect of Sex-Specific Differences on IL-10-/- Mouse Colitis Phenotype and Microbiota. Int J Mol Sci. 2023;24(12):10364.
  31. Dokoshi T, Seidman JS, Cavagnero KJ, et al. Skin inflammation activates intestinal stromal fibroblasts and promotes colitis. J Clin Invest. 2021;131(21):e147614.
  32. Dokoshi T, Chen Y, Cavagnero KJ, et al. Dermal injury drives a skin-to-gut axis that disrupts the intestinal microbiome and intestinal immune homeostasis in mice. Nat Commun. 2024;15(1):3009.
  33. Allard C, Zizzari P, Quarta C, Cota D. Food intake and body weight in rodent studies: the devil is in the details. Nat Metab. 2022;4(11):1424-1426.
  34. M W, R L, S S, et al. Combination therapy using intestinal organoids and their extracellular vesicles for inflammatory bowel disease complicated with osteoporosis. Journal of Orthopedic Translation. 2025;53.
  35. Y G, H Z, Y Y, et al. Injectable body temperature-responsive hydrogel for encephalitis treatment via sustained release of nano-anti-inflammatory agents. Biomaterials translational. 2024;5(3).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Piroksikam Enterokolitinflamatuar Ba rsak HastalMetabolik Disreg lasyonFare ModeliNSA Kaynakl KolitMukozal nflamasyonV cut A rl KaybG da Al m l mEnerji Harcamas

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.