Fare Dorsal Kök Gangliyonlarının Diseksiyonu ve İzolasyonu

Özet

Dorsal kök ganglionları (DRG), birincil duyusal nöron hücre gövdelerini içerir ve çevresel duyusal sinyalleri omuriliğe iletir. Bu protokol, yapısal olarak sağlam gangliyonların standartlaştırılmış izolasyonunu, anatomik segmental tanımlamayı, yeni başlayanlar için sezgisel rehberliği ve prosedürel doku hasarını azaltmayı destekleyen fare DRG diseksiyon yöntemini tanımlar.

Özet

Dorsal kök ganglionları (DRG), birincil duyusal nöronların hücre gövdelerini içerir ve çevresel dokulardan omuriliğe duyusal sinyallerin iletiminde kritik bir aktarma yapısı olarak hizmet verir. Ağrı, sinir hasarı ve nörodejeneratif hastalıklar üzerine çalışmalarda önemli roller oynarlar. Sağlam DRG dokusunun edinimi, duyusal nöronların fonksiyonel özellikleri, moleküler ifadesi ve patolojik değişikliklerinin araştırılması için kritik öneme sahiptir. Ancak, küçük boyutları ve omurga kanalında derin konumları nedeniyle, DRG'nin doğru tanımlanması ve izolasyonu önemli teknik zorluklar yaratmaktadır. Bu çalışmada, fare DRG'sinin izolasyonu için standartlaştırılmış bir protokol geliştirdik. Bu yöntem, DRG'nin anatomik lokalizasyonu, omurga kanalının maruziyeti ve ganglion izolasyonunda yer alan temel adımların ayrıntılı bir tanımını sunar. Tüm süreç, temsil eden görüntüler ve video kayıtlarıyla gösterilmiştir. Bu yaklaşım, segmental tanımlama için anatomik rehberlik ile yapısal olarak sağlam DRG'nin edinilmesini destekler ve H&E boyama ile immünofluoresans analizi için uygundur. Önceki DRG diseksiyon yöntemleriyle karşılaştırıldığında, bu yöntem segmental olarak tanımlanmış ganglionların standartlaştırılmış iyileşmesini sağlar, yeni başlayanlar için sezgisel anatomik rehberlik sağlar ve prosedürel doku hasarını azaltır.

Giriş

Dorsal kök ganglionları (DRG), birincil duyusal nöronların hücre gövdelerini içerir ve mekanik, termal ve nosiseptif uyarıclar dahil çevresel duyusal sinyallerin omuriliğe^{iletilmesi için temel yapılardır 1,2,3}. DRG'yi tanımlayan yüksek kaliteli kaynaklar mevcut olmasına rağmen, DRG'nin tek bir örnek içinde torasikten sakral segmentlere doğru tanımlama ve izolasyonu için ayrıntılı prosedürel rehberlik gereklidir; ayrıca doku toplama sırasında DRG hasarı riskini en aza indirmek için gereklidir.

DRG nöronları çevresel duyusal yolun temel bileşenleridir. Aksonları ikiye ayrılır; bir dal periferik dokulara uzanırken, diğeri omuriliğin dorsal boynuzuna doğru ilerler; böylece ağrı iletimi, sinir hasarı, iltihap yanıtları ve çeşitli nörolojik bozuklukların patogenezinde kritik roller^{oynar 4}. Ayrıca, DRG sinir hasarı onarımı, kronik ağrı mekanizmaları, duyusal nöron plastisitesi ve nöroimmün düzenleme gibi araştırma alanlarında da önemli ilgi^{çekmiştir 5,6}. Birçok deneysel çalışma, immünohistokimyasal boyama, RNA dizileme analizi, birincil nöronal kültür ve elektrofizyolojik çalışmalar gibi uygulamalar için sağlam DRG dokusu gerektirir⁷. Bu nedenle, yapısal olarak sağlam ve doğru segment olarak tanımlanmış DRG dokusunun edinimi, duyusal sinir devreleri, nöronal moleküler özellikler ve patolojik değişiklikler için temel bir yapı oluşturur.

DRG, omurgalar arası foraminaya yakın konumdadır ve sırt kökleri aracılığıyla omuriliğe bağlıdır. Küçük boyutları, kemik yapılar içindeki kapalı oluşları ve çevresindeki anatominin karmaşıklığı nedeniyle, sağlam izolasyon önemli teknik zorluklar teşkil eder. Ayrıca, net anatomik işaretlerin ve standart prosedürlerin olmaması, doku toplama sırasında yapısal hasar veya segmental yanlış tanımlama riskini artırır.

Mevcut fare DRG diseksiyon yöntemleriyle karşılaştırıldığında, bu çalışmada belirlenen yöntemin çeşitli avantajları vardır. İlk olarak, daha önce bildirilen fare DRG izolasyon yöntemleri genellikle hayvandan omurga sütununun çıkarılmasını gerektirir, ardından izole omurganın segmentasyonu ve orta hat açılması yapılır; ardından DRG'ler omurgalar arası foraminden disseksiye edilir. Bu süreçte, omurga kolonunun kesimi ve tekrar eden kesim, DRG'de mekanik hasara kolayca yol açabilir ve ayrıca bazı segmentlerin atlanmasına veya belirsiz segmental^{tanımlamaya yol açabilir 8}. Buna karşılık, yöntemimiz doğrudan farede yerinde uygulanır; önceden izolasyon veya omurga kolonunun kesimlenmesi yapılmadan, böylece doku toplama sırasında DRG kaybı riski azalır. İşlem boyunca, enstrümanlar öncelikle DRG'yi çevreleyen kemik yapıları ve bağ dokularına uygulanır; gangliyonun doğrudan tutunması veya çekilmesi yerine, böylece onun bütünlüğü korunur.

İkinci olarak, mevcut yöntemler genellikle farklı DRG segmentlerini tanımlamak için net ve stabil anatomik işaretlerden yoksundur. DRG'ye bağlı sinirler, omurga kolonunun çıkarılması sırasında sık sık kesinlediği için, sinir yolu ve dallanma desenlerine göre bireysel DRG'nin segmental kökenini doğru olarak belirlemek zorlaşır. Buna karşılık, yöntemimiz doğrudan fare içinde yerinde uygulanır ve böylece DRG, bağlı sinirler ve çevredeki yapılar arasındaki doğal anatomik ilişkileri korur; böylece sinir bağlantıları ve yerel anatomik işaretlere göre farklı DRG segmentlerinin tanımlanmasına olanak tanır. L2 ve L3'ün morfolojik özelliklerinin ana anatomik referans noktaları olarak kullanılmasını, L3–L5 ile siyatik sinir arasındaki anatomik ilişkiyi ve ardından hem rostral hem de kaudal yönlerde bitişik segmentlerin ardışık olarak tanımlanmasını öneriyoruz.

Ayrıca, bu yöntem omurga kolonunun ve omurga kanalının maruz kalması, omurga kanalının açılması ve ardından omuriliğin maruz kalması, DRG'nin maruz kalması ve stereomikroskop rehberliğinde lokalizasyon ve diseksiyon gibi temel adımların nispeten sistematik bir tanımını sağlar. İş akışı nettir ve anatomik dönüm noktaları iyi tanımlanmıştır; bu da özellikle yeni başlayanlar için prosedürel standartlaştırmayı ve tekrarlanabilirliği artırabilir. Bu yöntemle elde edilen DRG, iyi doku bütünlüğünü korur ve bu nedenle immünfloresans ve H&E boyama gibi sonraki analizler için oldukça uygundur.

Bu çalışmada, fare DRG için standartlaştırılmış bir diseksiyon ve izolasyon yöntemi oluşturduk ve örnekleme prosedürünün temsil görüntüleri ve video dokümantasyonuyla birlikte anatomik lokalizasyon için şematik çizimler sağladık. Bu yöntem, tek bir örnekte DRG'nin torasikten sakral seviyelere kadar izole edilmesini desteklerken, doku toplama sırasında DRG hasarı riskini azaltır.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Şanghay Doğu Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan protokole sıkı şekilde uygun şekilde gerçekleştirildi. Bu çalışmada tanımlanan diseksiyon prosedürleri, yetişkin C57BL/6 fareleri (erkek veya dişi, 12 haftalık, 25–30 g) kullanılarak gerçekleştirildi. Şekil 1, bu protokolde kullanılan diseksiyon aletlerini göstermektedir.

1. Hazırlık

NOT: Perfüzyon sabitli örneklerde, fiksasyon maddesine maruz kalmamak için uygun koruyucu önlemler alın. Diseksiyonu bir duman davlumonunda veya iyi havalandırılan bir bankta yapın ve işlem boyunca eldiven, koruyucu giysiler ve koruyucu gözlükler dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipman takın.

1. Fareleri yaklaşık 24 °C ortam sıcaklığında ve %55 bgöreli nemde 12 saat ışık/12 saat karanlık döngü altında tutun, yiyecek ve suya imik erişim sağlanır.
2. Diseksiyona başlamadan önce, fareyi solunum tamamen durana kadar karbondioksit odasında ötenazi yapın. Ölümü doğrulayın, ardından hayvanı bir diseksiyon tahtası üzerinde sırtüstü pozisyona yerleştirin ve uzuvları iğnelerle sabitleyerek sabit bir duruş elde edin.
3. Tüyleri torakoabdominal bölgeye %70 etanol ile püskürterek saç kontaminasyonunu azaltın ve ameliyat alanını temiz tutun.
4. Göğüs ve karın orta hattı boyunca deriyi makasla açın. Kesiyi ventral orta hat boyunca kranial olarak uzatarak torasik kafesi tamamen açığa çıkarın. Göğüs kasık alt ucunu yükseltin ve kostal kemerin her iki tarafındaki torasik duvarı keserek torakal boşluğu açın ve kalbi açığa çıkarın. Kalbi net görmek için gerekirse göğsüň ve kaburgaların bir kısmını çıkarın.
5. Sağ atriyumda makasla küçük bir kesi açın, böylece kan ve perfüzyon için bir çıkış yeri oluşturun. 20 mL'lik bir şırıngayı önceden soğutulmuş PBS (4 °C) ile doldurun ve iğneyi yavaşça kalbin zirvesine yakın sol ventriküle yerleştirin. İğneyi stabilize edin ve ventriküler duvardan delin.
6. Perfüz, PBS'yi yavaş ve eşit şekilde önceden soğutmuş, karaciğer solgunlaşana kadar, çıkış berrak geçene ve kanın çoğu yıkanana kadar. Sonra, PBS'yi 20 mL önceden soğutulmuş %4 paraformaldehit (4 °C) ile değiştirin ve perfüzyon yavaş ve sabit bir hızda devam eder; ta ki uzuvlar sertleşe, kuyruk kıvrılır ve dokular kırmızıdan soluk renge geçer; bu da fiksasyonun büyük ölçüde tamamlandığını gösterir.
7. Perfüzyondan sonra iğneyi çekin, torakik boşluğun kalıntısını çıkarın ve hemen doku toplama sürecine geçin. Eğer sabitlenmemiş doku sonrası analizler için gerekiyorsa, sadece önceden soğutulmuş PBS ile perfüze edilmesi ve %4 paraformaldehit fiksasyon adımını atlayın.
   NOT: İşlem boyunca kalp yırtılmasını veya aşırı basınçtan kaynaklanan doku şişmesini önlemek için yavaş, sabit ve eşit bir perfüzyon oranı koruyun. Yukarıdaki tüm işlemleri oda sıcaklığında gerçekleştirin.

2. DRG ve bitişik sinirler (Şekil 2)

1. Omurga sütunu ve omurga kanalının açığa çıkışı (3–5 dakika)
   1. Faresi yatağa pozisyona getirin ve diseksiyon tahtasına sabitleyin. Dorsal derinin orta hattı boyunca makasla boyuna bir kesi yapın ve kesiyi kuyruğun boyuna doğru uzatın.
   2. Dorsal cildi alttaki bağ dokusundan ayırmak için makas kullanın ve deriyi her iki taraftan yan yanlara yansıtarak dorsal kasları tamamen açığa çıkarın. Bağlayıcı dokunun yüzeyine yapışan saçları emici kağıtla silin veya ameliyat alanını temiz tutmak için ameliyat alanını salinle durulayın.
   3. Sırt kaslarını ve bağ dokusunu omurganın her iki tarafı boyunca uzunlamasına keserek omurga yapılarını tamamen açığa çıkarın.
      NOT: Dorsal dokuların kesilmesi sırasında makasın torakal veya karın boşluğuna çok derin girmesini engelleyin, çünkü bu sonraki diseksiyon işlemlerini etkileyebilir.
   4. Omuriliği kaplayan bağ dokusu ve kalıntı kasları kemik rongeuruyla dikkatlice temizleyin. Eğer kalıntı doku görselleştirmeyi engelliyorsa, omurga kolonunun tam açığa çıkması için gerektiği gibi makasla kesin. Sonra, sırt taraftan servikal omurları makasla keserek omurganın kafa ucunu baştan ayırın ve aşağıdaki adımları kolaylaştırın.
2. Omurga kanalını açın ve omuriliği açığa çıkarın (Şekil 3; 8–10 dakika).
   1. Omurga kanalına servikal seviyede mikro kavisli makas yerleştirin ve kanalı açmak için laminaların her iki tarafından kesin.
      NOT: İşlem sırasında omuriliğe zarar vermemeye özen gösterin.
   2. Sırt laminalarını çıkarın ve omuriliğin dorsal kısmı yavaş yavaş ortaya çıkarılır.
   3. Omuriliğin boyuna ekseni boyunca mikro kavisli makasla dorsal laminaları kesmeye devam edin; torakikten sakral bölgeye doğru kademeli olarak uzanarak omuriliğin dorsal kısmını tamamen açığa çıkarın.
3. DRG'nin Maruz Kalınlığı (Şekil 4; 8–10 dk.)
   1. Omuriliğin dorsal yüzeyi tamamen açığa çıktıktan sonra, kemik rongeur kullanarak omurga kanal yapılarını her iki tarafta nazikçe açın ve manipülasyonu sol ile sağ taraf arasında dönüşümlü yapın.
   2. Omurga kanalı her iki taraftan tamamen ayrıldıktan sonra, omurgalar arası foraminada bulunan DRG'yi stereomikroskop altında gözlemleyin.
4. DRG'nin Tanımlanması (Şekil 5; 8–10 dk.)
   1. Omurga kanalı tamamen iki taraflı olarak yansıtıldıktan ve omurilik tamamen açığa çıktıktan sonra, omuriliğin dorsal yüzeyinden çıkan dorsal kök sinir demetlerini stereomikroskop altında inceleyin. Dorsal kökleri yanladan takip edin ve omurtebral foramina yakınındaki DRG'yi oval veya oval yapılar olarak tanımlayın.
   2. Tanımlama sırasında DRG'nin omurga sinirinin dorsal kökü ile omurgalar arası foramen arasındaki arayüzde olduğunu doğrulayın ve her omurga segmentinde çift çift olarak düzenlendiğini gözlemleyin. DRG'yi, duyusal nöronların hücre gövdelerinden oluşan bir ganglion olarak tanımlayın; bir tarafı omuriliğin dorsal boynuzuna, diğer tarafı ise periferik dokulara uzanır.
   3. DRG'yi soluk sarı veya gri-beyaz, hafif şişmiş, daha dolgun bir şekle ve nispeten belirgin sınırlara sahip bir yapı olarak stereomikroskop kullanarak tanımlayın.
5. DRG'nin segmental tanımlaması ve diseksiyon yapılması (Şekil 6; 8–10 dk.)
   1. Mikrocerrahi pensleri stereomikroskop altında kullanarak dorsal kök sinir demetini nazikçe yükseltin ve böylece bağlı DRG'nin tam açığa çıkmasını sağlasın.
   2. DRG'nin segmental kimliğini belirlemek için aşağıdaki özellikleri kullanın: çoklu dallanmış sinir liflerine (>2 dal) bağlı DRG'yi L2 ve daha fazla kraniyal DRG olarak adlandırın, ikiye bölünmüş sinir liflerine bağlı (sadece iki dal) DRG'yi L3 ve daha kuyruk DRG'leri olarak adlandırın. Sonra, kalan DRG segmentlerini, omurgalar arası foraminanın konumlarına göre üst ve alt sıralarla belirleyin.
      NOT: L3–L5 DRG'den çıkan sinir lifleri birleşerek siyatik siniri oluşturur.
   3. Mikrocerrahi kavisli makas veya mikrocerrahi forseps kullanarak DRG'yi çevreleyen bağ dokusu ve sinir liflerini dikkatlice ayırın ve gangliyonu omurgalar arası foramen çevresindeki dokulara tutumlarından kademeli olarak kurtarın.
   4. DRG'yi omuriliğe bağlayan dorsal kök sinir liflerini kesin ve gangliyonu izole etmek için periferiye doğru uzanan sinir demetini aynı anda kesin.
   5. DRG'yi mikrocerrahi forseps ile dikkatlice izole edin. Uzun süreli koruma ve ardından immünofluoresans analizi gerekirse, izole edilen DRG'yi hemen %4 paraformaldehit içeren 0,5 mL santrifüj tüpüne yerleştirin ve dokuyu 3 saat sabitleyin. Fiksasyondan sonra, dokuyu 3 × 5 dakika boyunca 0,1 M PBS (ana bileşenler: NaCl, KCl, Na2HPO4 ve KH2PO4) ile yıkayın ve dokuyu dipte batana kadar dehidrasyon için %30 sakaroz çözeltisine aktarın. Son olarak, dokuyu OCT'ye gömüp uzun vadeli koruma için −80 °C'de depolayın.

3. Ganglion bileşenlerini onaylayın.

1. H&E boyama sonuçları (Şekil 7)
   1. İzole DRG'yi hemen geleneksel bir histolojik fiksatorda, örneğin %4 paraformaldehit ile sabitleyin. Fiksasyondan sonra, doku 0,1 M fosfat tamponunda durulanır, standart histolojik prosedürlere göre dehidrasyon, temizleme ve parafin gömülmesi yapılır ve 4–6 μm doku kesitleri aşağı akış boyama analizi için hazırlanır.
   2. DRG'nin genel yapısını ve hücresel morfolojisini değerlendirmek için kesitlerde hematoksilin ve eozin (H&E) boyama işlemi yapıldı. Gangliyonun hücresel bileşenlerini ve doku organizasyonunu belirlemek ve elde edilen DRG'nin kalitesini belirlemek için boyalı bölümleri kullanın.
   3. H&E boyalı bölümleri mikroskop altında inceleyin ve DRG'nin ağırlıklı olarak çok sayıda duyusal nöronal hücre gövdesinden oluştuğunu doğrulayın. Büyük, yuvarlak veya oval somata sahip nöronları tanımlayın ve onların açıkça görülen çekirdeklerini ile bazı nöronlarda bulunan belirgin nükleolları gözlemleyin. Ayrıca, nöronları çevreleyen yakın eşleşmiş uydu glial hücrelerinin karakteristik halka benzeri bir düzende varlığını doğrulayın.
   4. Gangliyonun iç kısmını inceleyin ve sinir lifi demetlerini ile bağ dokusu septasını belirleyerek genel doku mimarisinin sağlam ve net bir şekilde organize olduğunu doğrulayın. Hücresel sınırların iyi tanımlandığını ve belirgin doku bozulması veya yapısal düzensizliğin olmadığını doğrulayın.
   5. H&E boyamasında DRG izolasyonunun korunmuş genel yapı, iyi tanımlanmış hücresel morfoloji ve belirgin mekanik hasar olmaması ile teyit olun. Diseksiyon veya işlem sırasında ortaya çıkan hücresel mimarinin bozulmuş olduğunu, belirsiz doku kenarlarını veya lokal doku tahribatı gözlemleyerek örnek hasarını tespit edin. Bu H&E bulgularını, DRG toplama kalitesi ve dokunun bütünlüğü değerlendirmek için pratik bir temel olarak kullanın.
2. TUBB3 immünoflüoresans boyama sonuçları (Şekil 8)
   1. İzole DRG'yi hemen %4 paraformaldehit ile 3 saat boyunca düzeltin. Fiksasyon tamamlandıktan sonra, mendiliyi 0.1 M PBS ile üç kez durulayın, her yıkama için 5 dakika bekleniyor. Sonra, dokuyu %30 sakaroz çözeltisine yerleştirin ve dipte yerleşene kadar yerleştirin, OCT'ye gömülüp 8–12 μm hassasiyetinde donmuş kesitleri keserek aşağı akış immünfloresan boyama yapılmasını sağlar.
   2. Bölümleri oda sıcaklığına ısıtın, PBS'de 3 × 5 dakika durulan ve Tris-EDTA antijen toplama çözeltisiyle antijen toplama işlemi yapın. Bölümlerin doğal olarak oda sıcaklığına soğumasına izin verin, tekrar 3 × 5 dakika PBS ile yıkayın ve oda sıcaklığında %5 BSA ile 30–60 dakika boyunca bloklayın. Bloklama aşamasından sonra, florofor etiketli TUBB3 birincil antikoru uygulayın ve bölümleri gece boyunca 4 °C'de kuluçka edin. Ertesi gün, bölümleri PBS ile üç kez yıkayın, çekirdekleri DAPI ile boyayın, kesitleri monte edin ve floresan mikroskobu ile görüntü alın.
   3. DRG bölümlerini inceleyin ve iyi korunmuş örneklerin belirgin bir ganglion hattı, sağlam doku yapısı ve düzenli hücresel düzen gösterdiğinden emin olun. TUBB3 immünfloresansını özellikle duyusal nöron hücre gövdelerinde ve sinir liflerinde gözlemleyerek ganglion içindeki genel nöronal dağılımını tanımlayın. DAPI karşı boyama kullanarak daha büyük TUBB3-pozitif hücreleri duyusal nöronlar olarak tanımlayın ve bu hücrelerin etrafında dağılmış küçük DAPI-pozitif çekirdeklerin uydu glial hücre çekirdekleriyle uyumlu morfolojik bir desen gösterdiğini not edin. Doku sürekliliğinin bozulması, düzensiz TUBB3 sinyal lokalizasyonu, kötü tanımlanmış nöronal morfoloji veya arka plan sinyalindeki odak artışları nedeniyle diseksiyon veya işleme kaynaklı hasarı tespit edin.
   4. DRG doku bütünlüğünün ek göstergesi olarak TUBB3 immünoflüoresans boyama uygulayın. Korunmuş bir ganglion konturunun varlığı, duyusal nöron hücre gövdelerinde ve sinir liflerinde belirgin floresan sinyalleri, net hücresel morfolojisi ve minimum arka plan boyama ile başarılı DRG izolasyonunu tanımak.

Sonuçlar

Başarılı DRG izolasyonu, ganglionun bütünlüğünün korunmasını, belirgin bir sıkıştırma, ezilme veya yırtılma olmadan gerektirir. Yanlara bağlı sinir liflerini nazikçe kaldırın, gangliyonu çevredeki dokulardan kademeli olarak serbest bırakın ve bağlı sinir liflerini ancak gangliyon tamamen harekete geçirildikten sonra kesin, böylece sağlam şekilde çıkarılabilir. İşlem sırasında panellerle ganglion gövdesine doğrudan çekiş yapmaktan kaçının. İzolasyondan sonra, DRG'nin doğal morfolojisini i...

Tartışma

DRG, periferik duyusal sinir sisteminin temel bileşenleri olarak, mekanik, termal ve nosiseptif duyusal bilginin merkezi sinir sistemine iletiminde kritik bir rol^{oynar 9,10,11}. DRG nöronları, karakteristik bir psödounipolyar morfoloji sergiler; bir süreç periferik dokulara uzanırken, diğeri omuriliğin dorsal boynuzuna doğru uzanır ve böylece hem fizyolojik hem de patolojik koşullarda duyusal sin...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
0.5 mL santrifüj tüpü	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Sabit DRG depolama için kullanılır
20 mL şırınga	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Kardiyak perfüzyon için kullanılır
30% sükroz çözeltisi	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	OCT gömme öncesi doku kurutma için kullanılır
4% paraformaldehit	Servicebio	G1101
5% BSA	Solarbio	SW3015
70% etanol	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Diseksiyon öncesi kıl kirliliğini azaltmak için kullanılır
Emici kağıt	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Bağlayıcı dokudan kıllığı çıkarmak için kullanılır
Yetişkin C57BL/6 fare	Vital River	Belirtilmemiş	erkek veya dişi; 12 haftalık; 25–30 g
Alexa Fluor 488 konjuge edilmiş keçi anti-tavşan IgG	Servicebio	GB25303
Anti-TUBB3 antikoru	Proteintech	CL488-66375	TUBB3 immünfloresan için kullanılır
Karbon dioksit odası	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Ölüm için kullanılır
DAPI	Servicebio	G1012
Diseksiyon tahtası	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Diseksiyon sırasında fareyi sabitlemek için kullanılır
Floresan mikroskobu	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Immünfloresan boyamalı kesitlerin görüntülenmesi için kullanılır
Friedman-Pearson kemik ronörleri	RWD	S21022-14	Makaleden çıkarılmış: kemik ronör (RWD, S21022-14)
H&E boyama solüsyon kiti	Servicebio	G1005
Mikrocerrahi eğri makas	ASSI	SDCT16R8	Makaleden çıkarılmış: mikro eğri makas (ASSI, SDCT16R8)
Mikrocerrahi forseps	Fine Science Tools	11254-20	Makaleden çıkarılmış: mikrocerrahi forseps (FST, 11254-20)
OCT bileşiği	Sakura Finetek	No. 4583
PBS	Servicebio	G2156
Pimler	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Diseksiyon tahtası üzerinde bacakları sabitlemek için kullanılır
Salin	Belirtilmemiş	Belirtilmemiş	Cerrahi alanı durulamak için kullanılır
Makas	Fine Science Tools	14060-09	Makaleden çıkarılmış: makas (FST, 14060-09)
Stereomikroskop	Leica Microsystems, Wetzlar, Almanya	10447197	Makaleden çıkarılmış: stereomikroskop (Leica, 10447197)
Tris-EDTA antijen geri kazanım solüsyonu	Solarbio	C1038