$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Doğrulama çalışması – yöntemler
Bu doğrulama çalışmasında, Clinical and TranslationalMedicine 2'de yayımlanan önceki çalışmalarımızın sonuçlarını yeniden üretiyoruz. 328 BM smear üzerinde geleneksel optik mikroskopi ve ADM yapıldı. Analiz için verisler, analiz edilen tüm hücreler için görüntü bilgileri ve nadir ve atipik morfolojik vakalar dahil olmak üzere sınıflandırma sonuçlarını içeriyordu. Vakalar altı tanısal gruba ayrıldı: miyelodisplastik neoplazmalar (MDN: %15), multipl miyelom (MM: %14), olgun B/T-hücreli neoplazmalar (B/T-lenfoma: %13), akut lösemi ve kronik miyelomonositik lösemi (AL+CMML: %9), miyeloproliferatif neoplazmalar (MPN: %8) ve reaktif hematopoez (reaktif: %41). ADM hücre tanıma (sınıflandırma) yetenekleri, hücreleri 25 kategoriden birine doğru şekilde sınıflandırma yeteneği değerlendirilerek değerlendirildi; bağımsız rızaya dayalı uzman açıklaması ile çift okuma2.
Her vaka iki uzman tarafından incelendi ve hücrelerin %>99'unda uyum sınıflandırması (notasyon) yapıldı. Uzmanlar çok deneyimliydi ve düzenli olarak başarılı dış kalite değerlendirmelerine katılıyorlardı. Farklı sınıflandırmalara sahip hücreler için (%<1), gözlemciler arasında uzlaşmaya varıldı. Tutarlılık analizinin ilkesi, her hücrenin otomatik ön sınıflandırması ile her hücrenin nihai uzman sınıflandırmasının karşılaştırılmasıydı; Uzlaşmaya dayalı uzman sınıflandırması gerçek sınıflandırma referansı (temel gerçeklik) olarak kabul edildi.
Hücresel ve klinik sınıflandırma tutarlılığı değerlendirildi ve kritik yanlış sınıflandırmalar tespit edildi. Hücresel sınıflandırma tutarlılığı, bireysel hücre tipleri için sınıflandırma anlaşmasına dayanarak karışıklık matrisinden belirlendi. Standart istatistiksel yöntemler ve görsel veri madenciliği uygulandı. Matthews korelasyon katsayısı (MCC) her hücre tipi için ve ortalama bir değer olarak hesaplandı ve standart bir şekilde yorumlandı. 0.400 ve üzeri bir MCC değeri 2,18 olarak tatmin edici olarak değerlendirildi.
Her hasta için, klinik sınıflandırma tutarlılığı, sınıflandırılamaz hücreler eliminasyonundan sonra vakada değerlendirilen tüm hücreler arasında doğru şekilde önceden sınıflandırılmış elementlerin yüzdesi olarak belirlendi. Uzman sınıflandırması gerçek referans (temel gerçek) olarak kabul edildi.
Yanlış sınıflandırmalar, tanı açısından nötr olduklarında ve nihai teşhisi etkilemediklerinde önemsiz sayılır. Bunlar arasında lenfoblast, miyeloblast ve monoblast arasında karşılıklı yanlış sınıflandırmalar bulunur; nötrofilik, eozinofilik ve bazofil promiyelosit/miyelosit; miyelosit/metamyelosit; metamyelosit/band; bant/segmentli nötrofil; proerythroblast/erken eritroblast; erken/orta ve orta/geç eritroblast; promonosit/monosit; prolimfosit/lenfosit; plazmablast/olgunlaşmamış plazma hücresi; ve olgunlaşmamış plazma hücresi/olgun plazma hücresi. Diğer tüm yanlış sınıflandırmalar ilgili olarak kabul edilir; çünkü bunlar tanı olarak kabul edilemezdir ve ciddi klinik sonuçlara yol açabilir (Şekil 4)2.
Genel klinik sınıflandırma tutarlılığı, yalnızca ilgili hücre yanlış sınıflandırmaları dikkate alınarak bireysel vaka değerlerinin medyanı olarak hesaplandı. Kritik yanlış sınıflandırma, bireysel klinik sınıflandırma tutarlılık değerinin %80'in altında olduğu bir vaka olarak tanımlandı. Bu keyfi sınır, sitomorfolojiturları 2'de dış kalite değerlendirmesinin minimum gereksinimleri dikkate alınarak uzman uzlaşmasıyla belirlenmiştir.
Platforma özgü temel farklılıklar arasında iki aşamalı BM iş akışı (40× ve 100× hedefi), PB protokolünde olmayan ek karmaşıklık, farklı hücre sayısı hedefleri (PB'de 100 hücre, BM'de 500 hücre) ve farklı sınıflandırma kategorileri yer alır. Platformlar arası ve örnek türleri karşılaştırılabilirliğinin en kritik ortak belirleyicisi, smear hazırlama prosedürüdür.
Bildirilen nicel performans metrikleri, Yöntemler'de tanımlanan doğrulama kohortuyla açıkça bağlantılıdır (n = 328 BM smear). Tüm sınıflandırılmış hücreler arasında doğru sınıflandırılan ilgili hücrelerin yüzdesi (hücresel sınıflandırma tutarlılığı) %95,4'tü. MCC'nin belirttiği gibi tatmin edici korelasyon değerleri, 25 hücre tipinden 22'si (%88,0) için ≥0.400 iken, 25 hücre tipinden (%12.0) 3'ü (lenfoblastlar, prolimfositler ve promonositler) için tatmin edici olmayan MCC değerleri (<0.400) gözlemlendi. Genel ilgili klinik tutarlılık %97,1 (medyan) olup, vakaların %94,5'inde tutarlılık oranları %80 ile %100 arasında gösterilmiştir. Hastaların %5,5'inde, neoplastik hücrelerin tanınmaması nedeniyle ilgili klinik tutarlılık değerleri %36 ile %79 arasında değişen kritik yanlış sınıflandırmagözlemlenmiştir 2.
Hücresel yanlış sınıflandırma, ADM'nin BM analizindeki güvenilirliğini zayıflatır ve tanısal hemato-onkolojide yöntemin önemli bir sınırlamasını oluşturur (Tablo 1). İlgili yanlış sınıflandırma vakalarında, doğru ve yanlış sınıflandırılan hücrelerin morfolojisi incelendi. Doğru sınıflandırılan hücreler genellikle tipik sitomorfolojik özellikler gösterir. Buna karşılık, yanlış sınıflandırmalar en çok morfolojik olarak benzer veya atipik hücreler, özellikle atipik lenfositler ve blastlar arasında ayrım yapılırken meydana gelir; miyeloblastlar ve lenfositler; lenfoblastlar ve lenfositler; monoblastlar veya promonositler ve promieliositler; ve olgunlaşmamış plazma hücreleri ve blastlar. Yanlış sınıflandırılan hücreler sıklıkla atipik sitomorfoloji gösterir. Lenfositik neoplazmalarda, marjinal bölge lenfoma ve tüylü hücreli lösemi gibi yanlış sınıflandırılan neoplastik lenfositler, genellikle orta boyutlu, bol bazofilik veya açık sitoplazma, sitoplazmik çıkıntılar ve nükleoluslu ince kromatin içerir. Bu özellikler, doğru sınıflandırılmış neoplastik hücrelerden farklıdır. Manto hücreli lenfomada, atipik lenfositler blastoid görünümü gösterebilir ve bu da yanlış sınıflandırma olasılığını artırır. Benzer şekilde, kronik lenfositik löseminin pleomorfik varyantında, neoplastik lenfositler blast olarak yanlış tanımlanabilir. Nitel temsilci örnekleri Şekil 4 ve Şekil 5'te gösteriyoruz.
Akut lösemi ve kronik miyelomonositik lösemi (CMML) ortamında yanlış sınıflandırılan lenfoblastlar ve miyeloblastlar küçüktür; yüksek nükleer-sitoplazmik orana, daha kaba kromatin ve nükleollere sahiptir. Çok sayıda granül monoblast promiyelosit olarak yanlış sınıflandırılabilir. CMML'de, yanlış sınıflandırma sıklıkla displastik monositik hücrelerle ilişkilidir. Çoklu miyeloda, özellikle plazmablastlar ve olgunlaşmamış plazma hücreleri dahil olmak üzere, plazma hücre soyunda yanlış sınıflandırmalar meydana gelir. Şekil 5'te niteliksel temsilci örnekler gösteriyoruz.
Neoplastik lenfositler, küçük lenfoblastlar/miyeloblastlar, granül monoblastlar, displastik promonositler ve monositler, plazmablastlar ve olgunlaşmamış plazma hücrelerinin kritik yanlış sınıflandırmaları—hepsi atipik morfoloji gösterebilir—yanlış teşhis riski taşır. Lenfomayı akut lösemi ile karıştırmak ve tam tersi olmak, hasta yönetimi için ciddi veya hatta ölümcül sonuçlar doğurabilir. Akut miyeloid lösemiyi (özellikle akut promiyelositik lösemi) tanımaması veya CMML veya multipl miyeloma yanlış teşhisi koymak gibi yanlış negatif sonuçlar, uygun olmayan tedavi kararlarına veya tedavide gecikmelere yol açabilir.

Şekil 1. Otomatik boyama, ana ekran simgeleri. Sysmex'in izniyle; Üretici Bilgi Materyalleri (Temel Kullanım Kılavuzu). Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2. PB beyaz kan hücrelerinin yanlış sınıflandırmaları. Yazılımın ekran görüntülerinde, yanlış sınıflandırılmış hücreler kırmızı kutularda vurgulanıyor. EBV enfeksiyonunda, reaktif lenfositler monositler (A, kırmızı kutu) olarak yanlış sınıflandırılmıştır. Kronik lenfositik lösemide, bazı lenfositler blast (B, kırmızı kutu) olarak yanlış sınıflandırılmıştır. CMML'de, displastik monositler yanlışlıkla segmentli nötrofiller (C, kırmızı kutu) olarak sınıflandırılmış, bir monoblast ise displastik miyelosit (D, kırmızı kutu) olarak yanlış sınıflandırılmıştır. PB, CellaVision DC-1, İnceleme Yazılımı, Sysmex SP-50 boyacı ile May–Grünwald ve Giemsa–Romanowski otomatik boyama, büyütme 1000×, uzman: sertifikalı teknisyen. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3. BM'de neoplastik lenfositlerin yanlış sınıflandırılması. Yazılımın ekran görüntüsü. BM'deki yüksek dereceli B hücreli lenfomada neoplastik lenfositler, myeloblastlar olarak yanlış sınıflandırılmıştır. Önerilen alternatif sınıflandırma, en olası beş seçenekle ("ilk beş liste") ve yüzde olasılıkları da dahil olmak üzere sarı bir okla işaretlenmiştir. Sarı kutudaki hücre için etiket, miyeloblast, monoblast, lenfoblast, proeritroblast ve erken eritropblast için yüzde olasılıklarını gösterir, lenfosit için ise seçenek yoktur. BM, Morphogo, Review Software, Sysmex SP-50 boyama ile May–Grünwald ve Giemsa–Romanowski otomatik boyama, büyütme 1000×, uzman: sertifikalı bilim insanı, sertifikalı doktor. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4. İlgisiz ve ilgili hücre yanlış sınıflandırmaları. (A) Miyeloid ve eritroid hatlarında ilgisiz yanlış sınıflandırma örnekleri, uzman sınıflandırması ile ADM öncesi sınıflandırması arasındaki karşılaştırmada gösterilmiştir. (B) Limfoid, plazma hücresi ve monositik soylardaki ilgili yanlış sınıflandırma örnekleri, uzman sınıflandırması ile ADM ön sınıflandırması arasındaki karşılaştırmada gösterilmiştir. Bazı unsurların kategorize edilmesi bir uzman için bile zordu. Hücre görüntüleri yazılımdan çıkarıldı. BM, Morphogo, Review Software, Sysmex SP-50 boyama ile May–Grünwald ve Giemsa–Romanowski otomatik boyama, büyütme 1000×, uzman: sertifikalı bilim insanı, sertifikalı doktor. Her hücreye bir ölçek çubuğu eklendi. Ölçek çubukları 10 μm'yi temsil eder. Kalibrasyon ToupCam kameraya (1.85 μm piksel boyutu) ve 100× Olympus Plan N objektif ile yapılmıştır.
Değiştirildi: Ek Materyal, Starostka D, Dolezilek R, Kvasnicka HM, Kudelka M, Miczkova P, Kriegova E ve diğerleri. Kemik iliği analizinde otomatik yapay zeka destekli dijital sitomorfolojinin tanısal hemato-onkolojide faydası. Clin Transl Med. 2025; 15:e70364. https://doi.org/10.1002/ctm2.70364. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 5. Hematolojik neoplazmalı hastalarda BM hücrelerinin en sık yanlış sınıflandırılmasının temsilci örnekleri. Yanlış sınıflandırılmış neoplastik lenfositler, miyeloblastlar, lenfoblastlar, monoblastlar ve plazma hücreleri, marjinal bölge lenfoma (MZL), manto hücreli lenfoma (MCL), tüylü hücreli lösemi (HCL), kronik lenfositik lösemi (CLL), akut miyeloid lösemi (AML), akut T-lenfoblastik lösemi (T-ALL) ve multipl miyeloma (MM) vakalarında görülmektedir. Atipik lenfosit/blast hatasının yanlış sınıflandırılması en sık hata oldu. Yanlış sınıflandırılan neoplastik lenfositlerin başlıca sitomorfolojik özellikleri arasında orta boyutlu, ince kromatin (kırmızı oklar), nukleollar (mavi oklar), bol bazofilik veya soluk sitoplazma (çıkıntılar) ve blastoid görünüm (turuncu ok) yer alıyordu. Yanlış sınıflandırılan lenfoblastlar ve miyeloblastlar küçüktü, yüksek nükleer-sitoplazmik orana ve daha kaba kromatin ile nükleollere (gri oklar) sahipti. Plazmablastlar ve olgunlaşmamış plazma hücreleri lenfosit olarak yanlış sınıflandırıldı veya plazma hücre soyuna ait olarak tanınmadı ("blast, tanımlanmamış" olarak sınıflandırıldı). Hücre görüntüleri yazılımdan çıkarıldı. BM Morphogo Review Software, May–Grünwald ve Giemsa–Romanowski bölgelerinde Sysmex SP-50 boyacı ile otomatik boyama, büyütme 1000×, uzman: sertifikalı bilim insanı, sertifikalı doktor. Her hücreye bir ölçek çubuğu eklendi. Ölçek çubukları 10 μm'yi temsil eder. Kalibrasyon ToupCam kameraya (1.85 μm piksel boyutu) ve 100× Olympus Plan N objektif ile yapılmıştır.
Görüntü şu kaynaklardan değiştirilmiştir: Ek Materyal, Starostka D, Dolezilek R, Kvasnicka HM, Kudelka M, Miczkova P, Kriegova E ve diğerleri. Kemik iliği analizinde otomatik yapay zeka destekli dijital sitomorfolojinin tanısal hemato-onkolojide faydası. Clin Transl Med. 2025; 15:e70364. https://doi.org/10.1002/ctm2.70364. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
| Tanı | Vaka sayısı | Yanlış sınıflandırılmış hücreler |
| | Uzman sınıflandırması | ADM sınıflandırması |
| Olgun B-hücreli neoplazmalar | 9/43 | | |
| Marjinal bölge lenfoma | 4/8 | Atipik lenfosit | Patlat, NOC |
| Manto hücreli lenfoma | 2/5 | Atipik lenfosit | Patlat, NOC |
| CLL | 1/14 | Atipik lenfosit | Patlat, NOC |
| Tüylü hücreli lösemi | 2/2 | Atipik lenfosit | Patlama, NOC / Monocyte |
| Multipl miyelom | 5/46 | Plazma hücresi | Patlat, NOC |
| AML | 3/16 | Myeloblast / Monoblast | Lenfosit / Promieliosit |
| T-HEPSİ | 1/1 | Lenfoblast | Lenfosit |
Tablo 1: ADM tarafından kritik yanlış sınıflandırmalar. Hastaların 18/328'inde (%5,5) kritik yanlış sınıflandırma gözlemlendi. ADM'ye göre kritik yanlış sınıflandırmaların klinik grubu, olgun B-hücreli neoplazmalı 43 hastadan dokuzu, MM hastası 46 hastadan beşi, AML hastasından 16 hastadan üçü ve T-ALL hastasından birini (bir hastadan) içeriyordu. Atipik lenfositler/patlamaların yanlış sınıflandırılması en sık görülen olaydı. NOC: başka bir şekilde gizli değil.
Kaynaklardan alınmıştır: Ek Materyal, Starostka D, Dolezilek R, Kvasnicka HM, Kudelka M, Miczkova P, Kriegova E ve diğerleri. Kemik iliği analizinde otomatik yapay zeka destekli dijital sitomorfolojinin tanısal hemato-onkolojide faydası. Clin Transl Med. 2025; 15:e70364. https://doi.org/10.1002/ctm2.70364.