Bu çalışmada bitkilerin kullanımı için tüm yerel, ulusal ve uluslararası yönergeler ve mevzuatlara uyuldu. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.
Deneysel düzen ve materyal
Pakistan'daki Khwaja Fareed Mühendislik ve Bilgi Teknolojileri Üniversitesi'nin tarım mühendisliği bölüm binasının çatısında (28.42° K, 70.30° D) bir pot deneyi, 2023–2024 kış mevsiminde buğday ürünündeki kadmiyum (Cd) toksisitesini azaltmak için vermikülit ve Azospirillum brasilense'nin rolünü araştırdı. Bu deney için tamamen rastgele bir tasarım (CRD) kullanıldı ve üç tekrarlama yapıldı. Yerel bölgeye uygun olan onaylı bir "Dilkash-20" buğday çeşidi, Rahim Yar Khan'daki Sahiplenme Araştırma Çiftliği'nden temin edilmiştir. 12 kg toprak içeren 1 x 1 x 1 feet (30,48 cm × 30,48 cm × 30,48 cm) bir saksı ölçüsü kullanıldı. Tohum sterilizasyonu, deneyden önce agronomi laboratuvarında %70 etanol ile gerçekleştirildi. Tohumlar 10 Kasım 2023'te ekildi. Her saksıya 8 buğday tohumu yerleştirildi ve 4 bitki işleme aşamasında korundu. Vermikülit, yerel pazardan temin edilip, toprak ekleme sırasında 150 g/kg toprak oranında uygulanmıştır. Azospirillum brasilense, Pakistan'ın Lahor kentindeki Devlet Koleji Üniversitesi (GCUL)'dan temin edilmiştir. Azospirillum brasilense, buğday ürününde tohum aşılamasıyla birlikte standart prosedürle uygulandı; bu, Zaheer ve ark.17'nin bildirdiği gibi. Deney 9 tedaviden oluşuyordu (T0 = Kontrol (Toprak değişikliği yok, Cd toksisitesi yok), T1 = Cd toksisitesi 100 mg/kg toprak, T2 = Cd 100 mg/kg toprak + Vermikülit, T3 = Cd 100 mg/kg toprak + A. brasilense, T4 = Cd 100 mg/kg toprak + Vermikülit + A. brasilense, T5 = Cd toksisitesi 200 mg/kg toprak, T6 = Cd 200 mg/kg toprak + Vermikülit, T7 = Cd 200 mg/kg toprak + A. brasilense, T8 = Cd 200 mg/kg toprak + Vermikülit + A. brasilense). Deneysel alanda ortalama aylık sıcaklık °C cinsinden ve nem %'de Tablo 1'de gösterilmiştir. Deney başlamadan önce toprak analizi yapılmış ve toprak özellikleri Tablo 2'de gösterilmiştir. Sulama işlemleri, toprak işleme, azatlama, antezis ve tahıl doldurma aşamalarında gereksinimlere göre uygulanmış, gübreler de önerilere uygun olarak eşit şekilde uygulanmıştır. Sulama manuel olarak bir su kavanozu kullanılarak uygulanıyor ve her saksıda toprak neminin %70'ini koruyarak kuraklık stresi yaşamıyordu. Gübreler tarım departmanının önerilerine göre uygulanmıştır (120-80-60 kg NPK ha-1). Gübreler, her saksının boyutuna göre hesaplanıyordu. Tam doz P ve K ile yarım doz N ekim zamanında uygulanırken, kalan yarım doz N işleme aşamasında uygulanır. Kök ve sürgün uzunluğu ölçümleri için yıkıcı örnekleme (ekimden 30 gün sonra) erken aşama hasat için ayrılmış ayrı saksılarda gerçekleştirildi; Bu kaplar nihai verim ölçümleri için kullanılmadığı için erken yıkıcı örnekleme sonraki verim verilerini etkilemedi. Deneyin şematik zaman çizelgesi şöyledir: 0. Gün (toprak hazırlığı, Cd yükseltme, vermikülit karıştırma, tohum aşılama, ekim), 10–30. Gün (qPCR için kök örnekleme), 30. Gün (kök ve sürgün uzunluğu), 85. Gün (antez: fizyolojik ölçümler) ve 120. Gün (hasat: verim parametreleri). Bitki örnekleri üç zaman noktasında toplandı. Ekimden 10, 20 ve 30 gün sonra (DAS), kökler ayrı saksılardan toplandı. 30 DAS'ta, kök ve sürgün uzunluğu açısından ayrı saksılar yıkıcı şekilde hasat edildi. 85 DAS (antez) seviyesinde, fizyolojik parametreler yıkıcı olmayan şekilde ölçüldü. 120 DAS'ta nihai verim parametreleri kaydedildi. Erken yıkıcı örnekleme için kullanılan potlar (10–30 DAS) verim ölçümleri için kullanılmadı.
Kadmiyum, kadmiyum klorür olarak uygulandı (CdCl₂•2.5H₂O, analitik kalite, ≥%98 saflık). 100 mg Cd kg⁻1 toprak ve 200 mg Cd kg⁻1 toprak hedef konsantrasyonları için gerekli miktarlar, toprak kuru ağırlığına göre hesaplandı (saksı başına 12 kg). CdCl₂, saksılar başına 500 mL deiyonize suda çözündürüldü ve mekanik bir mikser kullanılarak toprakla 15 dakika iyice karıştırıldı, böylece homojen dağılım sağlandı. Karıştırmadan sonra, çivili toprak plastik kaplı saksılara yerleştirilir ve oda sıcaklığında (25 ± 2 °C) 14 gün boyunca dengelenir, bu da Cd türleşmesini stabilize eder ve yaşlanmasına izin verir. Dengeleme döneminde toprak nemi saha kapasitesinin %70'inde korundu. Denge noktasından sonra, temsil edici toprak örnekleri (saksı başına 10 g) toplanmış, hava yoluyla kurutulmuş, HNO₃/HClO₄ (4:1, v/v) ile sindirilmiş ve gerçek Cd seviyeleri doğrulanmak için atomik soğurma spektrofotometresi kullanılarak toplam Cd konsantrasyonu analiz edilmiştir. Ölçülen Cd konsantrasyonları 100 mg kg⁻1 tedavisi için 98,4 ± 3,2 mg kg⁻1 ve 200 mg kg⁻1 tedavisi için 197,6 ± 5,1 mg kg⁻1 olarak belirlenmiş olup, hedef seviyelerin ulaşıldığını doğrulamıştır. Bu çalışmada kullanılan vermikülitin fizikokimyasal özellikleri ve ağır metal içeriği Tablo 3'te gösterilmiştir.
| Ay | Sıcaklık (°C) | Nem (%) |
| Kasım, 2023 | 28 | 56 |
| Aralık, 2023 | 18 | 62 |
| Ocak 2024 | 17 | 63 |
| Şubat 2024 | 18 | 32 |
| Mart 2024 | 21 | 25 |
| Nisan 2024 | 24 | 20 |
Tablo 1: 2023–2024 yılları arasında deneysel alanın ortalama sıcaklık ve nem oranı.
| Parametreler | Değerler (2023-24) |
| Organik madde | 0.56% |
| pH | 7.42 |
| EC | 227 μS/cm |
| T.S.S. | 0.54% |
| Available-P | 5.21 ppm |
| Available-K | 119 ppm |
| Doygunluk yüzdesi | 34 |
| Toprak ayrılır: Kum, Çamur, Kil (%) | 36%, 40 %, 24 % |
Tablo 2: Ürün ekilmeden önce deneyde kullanılan toprak özellikleri.
| Mülkiyet | Değer | Metal | Konsantrasyon (mg kg⁻¹) |
| Derecesi | Bahçecilik derecesi | Kadmiyum (CD) | < 0.01 (tespit sınırının altında) |
| Parçacık boyutu | 2-4 mm | Lead (Pb) | 2.1 |
| pH (1:5 in H₂O) | 7.2 | Bakır (Cu) | 1.8 |
| Katyon değişim kapasitesi (CEC) | 85.4 cmolc kg⁻¹ | Çinko (Zn) | 5.3 |
| Su tutma kapasitesi (WHC) | %450 (w/w) | - | - |
| Toplu yoğunluk | 0,12 g cm-3 | - | - |
| Uygulama oranı | 150 g kg⁻¹ toprak (%15 kyaz/kyaz) | - | - |
| Saksı başına miktar (12 kg toprak) | 1,8 kg | - | - |
Tablo 3: Bu çalışmada kullanılan vermikülitin fizikokimyasal özellikleri ve ağır metal içeriği.
İncelenmiş özellikler
Bitki, büyüme ile ilgili tüm parametreler, örneğin bitki yüksekliği, sivri ucu uzunluğu, bir sivri ucu başına tane, 1000 tane ağırlığı ve bitki başına tane verimi, standart bir prosedürle ölçü çubuğu ve ağırlık dengesi kullanılarak manuel olarak kaydedildi. Biyokimyasal analiz (antioksidan enzim aktivitelerinin belirlenmesi) ve fizyolojik analiz (fotosentez hızı, stoma iletkenliği, klorofil içeriği, elektrolit sızıntısı (EL), ürün büyüme hızı (CGR) ve yaprak alan indeksi (LAI)) ekimden 85 gün sonra antezis aşamasında alındı. Kök ve sürgün uzunluğu, 30 gün buğday bitkisi büyümesinden sonra, 20 günlük ekimden sonra saksıda 4 bitkiyi korumak için bitkiler çıkarıldığında fark edilmiştir. Fotosentez hızı, stoma iletkenliği ve klorofil içeriğini gözlemlemek için kızılötesi gaz analizörü (Cl-340) ve klorofil ölçer (CL-1) kullanıldı. Elektrolit sızıntısı (EL), Mussell veStaples 18 tarafından bildirilen denklemle ölçüldü; standart prosedür Zaheer ve ark.14 tarafından bildirildi. EL şu şekilde hesaplandı: EL (%) = (Başlangıç EC / Son EC) × 100; burada Başlangıç EC, 24 saatlik kuluçkadan sonra 25 °C'de ölçülen elektrik iletkenliğidir, Nihai EC ise örneklerin 121 °C'de 20 dakika otoklavlanmasından sonra ölçülen iletkenliktir.
Çözünmüş organik azot (DOC), çözünmüş organik karbon (DOC) ve toprak organik karbonu (SOC) standartprosedür 19 ile ölçüldü. LAI ve CGR prosedür20 uyarınca fark edildi. Buğday fabrikasının N, P ve K alımı, önceki rapor21'de belirtilen prosedürde bildirildiği gibi, fark edilmiştir.
İstatistiksel analiz
Bu araştırma için tüm veriler üç tekrardan toplanmış, derlenmiş ve ortalaması alınmıştır. Veriler, Statistic 8.1 ve Microsoft Excel 2010 kullanılarak istatistiksel olarak analiz edilmiştir. Veriler tek yönlü ANOVA kullanılarak analiz edildi ve ardından Fisher'ın En Az Anlamlı Farkı (LSD ) testi p ≤ 0.05'te ortalama ayrım için yapıldı. Veriler/sonuçlarla birlikte farklı harfler gösterildiğinde, her tedavi arasındaki istatistiksel fark gösterilir.