Yöntem makalesi

Postoperatif Kognitif Disfonksiyonu Modellemek İçin Yaşlı C57BL/6J Farelerde L5 Lumbar Laminektomi

48 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/71733

⸱

22 Eylül 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Pharmacology, Zhejiang University School of Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, lokomotor bozulmayı minimize ederek postoperatif bilişsel disfonksiyon modeli oluşturmak amacıyla yaşlı C57BL/6J farelerde standartlaştırılmış bir L5 lomber laminektomiyi tanımlamakta ve böylece perioperatif nörobilişsel bozuklukların davranışsal, histolojik ve mekanistik çalışmalarını desteklemektedir.

Özet

Postoperatif kognitif disfonksiyon (POCD), cerrahi işlem ve anestezi sonrası, özellikle yaşlı yetişkinlerde görülen yaygın bir nörolojik komplikasyondur ve iyileşmenin gecikmesi, hastanede yatış süresinin uzaması ve yaşam kalitesinin düşmesi ile ilişkilidir. Ortopedik ve spinal prosedürler, nispeten yüksek POCD riski ile bağlantılıdır; ancak spinal cerrahinin perioperatif özelliklerini yakından yansıtan preklinik modeller sınırlı kalmaktadır. Laparotomi ve tibial fraktür dahil olmak üzere yaygın olarak kullanılan modeller, kognitif davranışsal sonuçların yorumlanmasını karmaşıklaştırabilen kalıcı lokomotor bozukluklara ve uzun süreli periferik inflamasyona yol açabilir. Bu protokol, 18 aylık erkek C57BL/6J farelerinde sevofluran anestezisi altında L5 lomber laminektomi kullanılarak POCD'yi modellemek için standartlaştırılmış, düşük maliyetli bir protokol tanımlamaktadır. İşlem, rutin cerrahi aletler kullanılarak gerçekleştirilir ve kalıcı motor defisitleri minimize ederken kontrollü bir cerrahi yaralanma oluşturur. Kognitif fonksiyonlar; yeni nesne tanıma testi, yeni kollu Y-labirenti ve Barnes labirenti kullanılarak değerlendirilirken, hipokampal nöronal hasar ve nöroinflamatuar değişiklikler sırasıyla Nissl boyama ve Iba1 immünofloresansı ile değerlendirilir. Temsili sonuçlar; cerrahi sonrası korunmuş lokomotor aktiviteyi, bozulmuş kognitif performansı, azalmış hipokampal nöronal bütünlüğü ve artmış hipokampal nöroinflamasyonu göstermektedir. Bu standartlaştırılmış ve erişilebilir model, omurga cerrahisi ile ilişkili kognitif disfonksiyonun altında yatan mekanizmaları araştırmak ve aday perioperatif nöroprotektif müdahaleleri değerlendirmek için klinik olarak ilgili bir platform sağlamaktadır.

Giriş

Postoperatif bilişsel disfonksiyon (POCD), anestezi ve cerrahi sonrası öğrenme ve hafıza, dikkat, işlem hızı ve yürütücü işlevlerde meydana gelen bir gerileme olarak tanımlanır1; ağırlıklı olarak yaşlı hastaları etkileyen bu durumun bildirilen insidansının, cerrahi bağlama ve hasta popülasyonuna göre değişiklik gösterdiği görülmektedir2,3. POCD'nin, elektif ortopedik cerrahi geçiren yaşlı yetişkinler arasında sıklıkla meydana geldiği bildirilmiştir4. Klinik olarak POCD, cerrahi sonrası haftalarca veya aylarca sürebilir ve uzamış hastaneye yatış süresi ile artan mortalite ile ilişkilendirilmiştir5,6,7. Dünya genelinde devam eden nüfus yaşlanması ve artan cerrahi işlem hacmiyle birlikte POCD, önemli bir halk sağlığı ve perioperatif bakım sorunu haline gelmiştir.

Patofizyolojik olarak POCD, cerrahi travma ve anestezik maruziyet tarafından tetiklenen multifaktöriyel bir sendrom olarak kabul edilmektedir; nöroinflamasyon, oksidatif stres, otofaji disregülasyonu ve sinaptik disfonksiyon, hipokampus gibi bilişle ilgili bölgelerdeki nöronal disfonksiyonun temelinde yatan önerilen mekanizmalar arasındadır8. Bu mekanizmaları incelemek ve aday müdahaleleri değerlendirmek için bir dizi preklinik POCD paradigması geliştirilmiştir. Preklinik paradigmalar arasında sadece anestezi uygulanan modeller, abdominal cerrahi tabanlı modeller ve tibial kırık gibi ortopedik yaralanma modelleri yer almaktadır9. Bu modeller alanı geliştirmiş olsa da, omurga cerrahisiyle ilgili perioperatif özellikleri tam olarak yansıtmayabilirler ve bazıları, bilişsel okumaları ve mekanistik yorumlamayı karmaşıklaştıran kalıcı lokomotor defisitler ile uzamış doku inflamasyonu gibi karışık değişkenler ortaya çıkarabilir.

Mevcut cerrahi stratejiler arasından, standardize edilmiş ve omurga ile ilgili bir cerrahi bağlamda erken dönem postoperatif bilişsel bozukluğu incelemek için L5 lomber laminektomi modelini seçtik. Bu prosedür, inhalasyon anestezisi altında kontrollü ve lokalize bir cerrahi travma sağlayarak, belirgin bir lokomotor bozukluğa yol açmadan postoperatif nöroenflamatuar yanıtların ve bilişsel disfonksiyonun araştırılmasına olanak tanır. Temel operatif adımların geliştirilmesiyle bu protokol, omurga cerrahisiyle ilişkili bilişsel bozukluğun araştırılması ve perioperatif nöroprotektif stratejilerin değerlendirilmesi için standardize, pratik ve maliyet etkili bir yöntem sunmaktadır.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirilmiş ve Zhejiang Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır (Etik onay numarası: ZJU20260153).

1. Ameliyat öncesi hazırlık

  1. Deney hayvanları, grup tahsisi, analjezi ve körleme
    1. 30–34 g ağırlığında, 18 aylık erkek C57BL/6J fareler kullanın. Fareleri, yiyecek ve suya serbest erişimin olduğu 12 s saatlik ışık/karanlık döngüsünde barındırın.
    2. Farelerin cerrahi işlemden önce en az 7 gün boyunca barındırma koşullarına alışmasına izin verin. Alışma sürecinden sonra fareleri rastgele L5 laminektomi grubu veya kontrol grubuna ayırın.
    3. Deney prosedürlerinden önce her fareye kodlanmış bir kimlik numarası atayın. Davranışsal değerlendirmelerin tedaviye kör şekilde gerçekleştirilebilmesi için grup tahsis kodunu saklayın.
    4. L5 laminektomi grubundaki farelere sevofluran anestezisi uygulayın ve ardından L5 lomber laminektomi gerçekleştirin. Kontrol grubundaki fareleri sevofluran anestezisine, cerrahi bölge hazırlığına veya cerrahi müdahaleye maruz bırakmayın.
    5. Her iki gruptaki farelere 2 mg/kg dozunda meloksikamı deri altına uygulayın. İlk dozu, L5 laminektomi grubunda anestezi indüksiyonundan sonra, kontrol grubunda ise cerrahinin bitişine karşılık gelen zaman noktasında uygulayın.
    6. Her iki gruptaki farelere sonraki meloksikam dozlarını 48 saat boyunca her 24 s saatte bir 2 mg/kg dozunda deri altına uygulayın. Deney süresi boyunca her iki grubu da aynı koşullar altında barındırın, yönetin ve izleyin.
    7. Tüm davranışsal değerlendirmeleri her iki grup için aynı deneysel programa göre gerçekleştirin. Davranışsal değerlendirmeleri yapan araştırmacının grup tahsisine karşı kör kaldığından emin olun.
  2. Tüm cerrahi aletleri sterilize edin ve cerrahi çalışma alanını dezenfekte edin. Anestezi sırasında vücut sıcaklığını korumak için bir ısıtma pedi önceden ısıtın. Perioperatif uygulama için meloksikamı hazırlayın.
  3. Gaz anestezi cihazını açın ve fareyi bir indüksiyon haznesine yerleştirin. 1 L/min oksijen akış hızını korurken 3–5% sevofluran ile 3–5 dk boyunca genel anesteziyi indükleyin.
  4. Anestezize edilmiş fareyi cerrahi platforma aktarın. Anesteziyi, bir anestezi maskesi aracılığıyla 0,5–0,8 L/min oksijen akış hızında verilen 1,5–3% sevofluran ile sürdürün. 2 mg/kg dozunda meloksikamı deri altına uygulayın. Sevofluran indüksiyonunun başlangıcından itibaren ölçülen toplam anestezi süresi yaklaşık 4 s saattir. Stabil bir cerrahi anestezi düzlemini korumak için sevofluran konsantrasyonunu gerektiği gibi ayarlayın.
  5. Fareyi, lomber omurgası yukarı bakacak şekilde prone (yüzüstü) pozisyona getirin. Hayvanı stabilize etmek ve L5 cerrahi alanına engelsiz erişim sağlamak için ön ekstremiteleri bantla nazikçe sabitleyin.
  6. Pedal geri çekilme refleksinin yokluğunu doğrulayarak anestezi derinliğinin yeterli olduğunu onaylayın. Kornea kurumasını önlemek için oftalmik pomad uygulayın.
  7. Küçük hayvan tüy düzeltici kullanarak orta hat lomber bölgesindeki (yaklaşık L3–S1) tüyleri temizleyin. Açığa çıkan cildi önce %75 etanol, ardından povidon-iyot ile dezenfekte edin ve aseptik koşulları sağlamak için işlemi 2–3 kez tekrarlayın.

2. L5 lumbar laminektomi cerrahisi

NOT: Mevcut protokolde, tüm cerrahi adımlar stereomikroskop veya büyütücü luplar olmadan doğrudan görselleştirme altında gerçekleştirilmiştir.

  1. Anestezize edilmiş fareyi, önceden ısıtılmış bir cerrahi platform üzerine yüzüstü (prone) pozisyonda yerleştirin. Gövdeyi stabilize etmek ve lumbar bölgeyi tamamen açığa çıkarmak için ön bacakları bantla sabitleyin (Şekil 1).
  2. Yüzeyel işaret noktalarını kullanarak L5 vertebra seviyesini belirleyin. Bilateral iliak kanatları (iliac crests) palpe edin ve bunların en yüksek noktalarını birleştiren hayali bir transvers hat çizin.
  3. Transvers hattı, L5–L6 intervertebral boşluk için yaklaşık bir işaret noktası olarak kullanın. L5 lamina'yı hedeflemek için planlanan cilt insizyonunu bu hattın biraz kraniyaline merkezleyin.
  4. Cerrahi bölgeyi dezenfekte edin. L4–L6 bölgesini açığa çıkarmak için önceden belirlenmiş L5 seviyesi üzerinden yaklaşık 1,5–2,0 cm uzunluğunda orta hat boyunca longitudinal bir cilt insizyonu yapın.
  5. Cilt kenarlarını steril penslerle geri çekin. Dorsal fasyayı açığa çıkarın ve orta hat fasyal raphe'sini belirleyin.
  6. Omurgayı açığa çıkardıktan sonra vertebra seviyesini onaylayın. Lumbosakral bileşkeyi ve en kaudal lumbar vertebra'yı belirleyin.
  7. C57BL/6 fareleri tipik olarak altı lumbar vertebra'ya sahip olduğu için, L6'nın hemen kraniyalindeki vertebra olarak L5'i tanımlayın. Lumbosakral bileşkeden kraniyale doğru iki vertebra sayarak seviyeyi teyit edin.
  8. Orta hat fasyal raphe boyunca küçük bir açıklık oluşturun. Paraspinal kasları direkt vizüalizasyon altında bilateral olarak geri çekin.
  9. Alttaki lamina'yı açığa çıkarmak için L5 spinöz çıkıntısına komşu kasları ayırın. Pozisyonu, her üç spinöz çıkıntı net bir şekilde görünene kadar kraniyalde L4 spinöz çıkıntısına ve kaudalde L6 spinöz çıkıntısına kadar genişletin.
  10. Pamuklu çubuklar veya ince pensler kullanarak öncelikle küt, kemik komşuluğu olan bir disseksiyon gerçekleştirin. Keskin disseksiyonu sadece fasyal yapışıklıkları serbest bırakmak ve kanamayı minimize etmek için gerekli olduğunda kullanın.
  11. L5 lamina'yı ve L5–L6 interlaminar boşluğu tamamen açığa çıkarmak için pamuklu çubuklarla lateral retraksiyonu sürdürün. İşleme devam etmeden önce vertebra seviyesini tekrar teyit edin.
  12. L5 spinöz çıkıntısını pensle nazikçe kavrayın ve L5–L6 interlaminar boşluğu genişletmek için spinöz çıkıntıyı ve komşu lumbar omurgayı cerrahi platforma göre yaklaşık 30°'lik bir açıyla kaldırın.
  13. Oftalmik makasın kapalı uçlarını, direkt vizüalizasyon altında L5–L6 interlaminar boşluğa yerleştirin. Makası, L5 lamina'nın kaudal kenarının hemen altındaki sığ bir düzlem boyunca ilerletin.
  14. İlk kemik açıklığını oluşturmak için makası hafifçe açın. Laminar kenarlar boyunca sırayla küçük kemik fragmanlarını kaldırarak laminektomi penceresini genişletin. Kemik kaldırma işlemini dorsal L5 lamina ile sınırlandırın ve kemik penceresini lateralde bilateral faset eklemlere doğru genişletmekten kaçının.
  15. Dural hasarı önlemek için aşırı yerleştirme derinliğinden ve aşırı kesme kuvvetinden kaçının.
  16. Dura mater kemik penceresinden net bir şekilde görünene kadar lamina'yı kademeli olarak çıkarmaya devam edin.
  17. Cerrahi alanı dikkatlice inceleyin. Aktif kanama olmadığını onaylayın ve dura mater'in sağlam kaldığını doğrulayın.
  18. Cerrahi bölgeyi ılık steril salin ile yıkayın. Nazik kompresyon kullanarak hemostaz sağlayın.
  19. Yarayı katmanlar halinde kapatın. Cildi 6-0 naylon sütürlerle kapatın ve insizyon bölgesini dezenfekte edin.
  20. Yara kapatıldıktan sonra, toplam anestezi süresi yaklaşık 4 h olana kadar sevofluran anestezisine devam edin. Ardından sevofluran uygulamasını kesin ve postoperatif bakıma geçin.

3. Ameliyat sonrası bakım

  1. Laminektomi grubundaki cerrahinin sona erdiği zaman noktasında, kontrol grubundaki farelere 2 mg/kg dozunda meloksikamı deri altına uygulayın. Laminektomi grubundaki her fareyi sıcaklık kontrollü bir ısıtma pedine yerleştirin ve fare bilincini geri kazanıp stabil spontan solunum ve motor aktivite sergileyene kadar vücut sıcaklığını koruyun.
  2. Laminektomi grubundaki her fareyi, anesteziden tamamen çıktıktan sonra kendi kafesine geri koyun. Ardından, normal ambulasyon gözlemlenene kadar hayvanı izleyin. Her iki gruptaki farelere 48 saat boyunca her 24 saatte bir 2 mg/kg dozunda sonraki meloksikam dozlarını deri altına uygulayın.
  3. Cerrahi insizyonu ve dikiş bütünlüğünü postoperatif 3. güne kadar günlük olarak kontrol edin. Gerekiyorsa fareyi tekrar anestezi altına alın ve gevşemiş veya kopmuş olan dikişleri değiştirin.
  4. İnsizyonu günlük olarak şişlik, kanama, akıntı veya lokal inflamasyon belirtileri açısından inceleyin.
  5. Postoperatif dönem boyunca vücut ağırlığını, temizlenme davranışını, spontan aktiviteyi, yiyecek ve su alımını izleyin.
  6. Aşağıdaki önceden tanımlanmış insani sonlandırma kriterlerinden herhangi biri karşılanırsa, planlanan deneysel bitiş noktasından önce fareyi insancıl yöntemlerle ötanize edin: ameliyat öncesi vücut ağırlığının ≥%20 kaybı; 24 saat boyunca tam anoreksi veya 3 ardışık gün boyunca yiyecek alımının normal miktarın %50'sinin altında olması; anesteziden çıktıktan sonra 24 saat boyunca ayakta duramama veya yiyecek ve suya erişimde belirgin isteksizlik; veya 37 °C'nin altındaki vücut sıcaklığı ile birlikte seyreden belirgin depresyonla karakterize moribund durum.

4. POCD'nin davranışsal değerlendirmesi

  1. Açık Alan testi (Lokomotor kontrol; ameliyat sonrası 3. gün)
    1. Açık alan testini, 20 lüks aydınlatma düzeyinde, 40 cm yüksekliğinde duvarları olan 45 cm × 45 cm boyutlarında bir arenada gerçekleştirin. Video kamerasını, tüm test alanı görüş alanında kalacak şekilde arenanın merkezinin tam üzerine yerleştirin.
    2. Fareyi arenanın merkezine yerleştirin ve yerleştirmeden hemen sonra video takibini başlatın. Farelerin 5 dk boyunca serbestçe keşif yapmasına izin verin. 5 dakikalık oturumun tamamını analiz edin ve video takip sistemini kullanarak toplam katedilen mesafeyi ve ortalama hareket hızını hesaplayın.
  2. Yürüyüş analizi
    1. Ameliyat sonrası 3. günde, otomatik bir yürüyüş analiz sistemi kullanarak yürüyüş analizini gerçekleştirin.
    2. Her bir fareyi yürüyüş yolunun bir ucuna yerleştirin ve yol boyunca serbestçe ilerlemesine izin verin. Lokomosyon sırasındaki pençe izlerini, yürüyüş analiz sistemine entegre edilmiş yüksek hızlı kamera ile kaydedin.
    3. Her fare için yürüyüş denemelerini kaydedin ve sonraki analizler için yürüyüş yolu boyunca sürekli ileri hareket içeren üç geçerli deneme toplayın.
    4. Kaydedilen pençe izi verilerini yürüyüş analizi yazılımı kullanarak analiz edin. Otomatik olarak tanımlanan pençe izlerini gözden geçirin ve yürüyüş parametrelerini çıkarmadan önce gerektiğinde sağ ön pençe, sol ön pençe, sağ arka pençe ve sol arka pençenin sınıflandırmasını manuel olarak düzeltin.
    5. Adım uzunluğunu, duruş süresini, salınım hızını ve iz alanını nicelleştirin ve istatistiksel analiz için her farenin üç geçerli denemesinden elde edilen ortalama değeri hesaplayın.
  3. Barnes labirenti (Uzamsal öğrenme ve bellek; ameliyat sonrası 4–6. günler)
    ​NOT: Barnes labirenti testini, ameliyat sonrası 4. günde başlayarak üç ardışık gün boyunca günde bir kez gerçekleştirin. Sirkadyen değişkenliği minimize etmek için testleri her gün aynı zaman aralığında yapın.
    1. Kaçış kutusunu belirlenen hedef deliğin altına yerleştirin. Deney boyunca aynı hedef konumunu koruyun.
    2. Her denemeye başlamak için fareyi labirentin merkezine yerleştirin. Fareye kaçış kutusunu araması için 3 dk'ya kadar süre tanıyın. Fare kaçış kutusuna girdiğinde denemeyi sonlandırın.
    3. Fare 3 dk içinde kaçış kutusunu bulamazsa, onu nazikçe hedef deliğe yönlendirin. Görev öğrenimini pekiştirmek için farenin kısa bir süre kaçış kutusunda kalmasına izin verin.
    4. Kaçış gecikmesini ve kat edilen mesafeyi video takip sistemini kullanarak kaydedin. Farenin 3 dk içinde kaçış kutusuna giremediği denemeler için 180 s'lik bir kaçış gecikmesi atayın. İstatistiksel analize sadece 3. günün son oturumunda kaydedilen kaçış gecikmesini ve kat edilen mesafeyi dahil edin.
  4. Yeni nesne tanıma (Tanıma belleği; ameliyat sonrası 3–4. günler)
    ​NOT: Açık alan testi için açıklanan arenanın ve video takip sisteminin aynısını kullanın. Yeni nesne tanıma eğitiminden önce fareleri test arenasına alıştırmak için ameliyat sonrası 3. gündeki açık alan oturumunu kullanın.
    1. Eğitim oturumu sırasında arenanın simetrik konumlarına iki özdeş silindirik nesne yerleştirin. Farenin 5 dk boyunca serbestçe keşif yapmasına izin verin.
    2. 1 saatlik bir tutma aralığından sonra, tanıdık silindirik nesnelerden birini yeni, küp şeklinde bir nesneyle değiştirin. Potansiyel taraf tercihini minimize etmek için yeni nesnenin konumunu fareler arasında dengeleyin. Farenin 5 dk boyunca keşif yapmasına izin verin.
    3. Tanıdık ve yeni nesneler için keşif süresini video takip sistemini kullanarak kaydedin. Analize sadece toplam nesne keşif süresi en az 3 s olan fareleri dahil edin.
    4. Tercih indeksini (PI) şu şekilde hesaplayın:
      Tercih İndeksi formülü: PI = T_yeni / (T_yeni + T_tanıdık) × 100%.
      Tyeni ve Ttanıdık değerlerini sırasıyla test oturumu boyunca yeni ve tanıdık nesneleri keşfetmek için harcanan süreler olarak tanımlayın.
  5. Yeni kollu Y-labirenti (Uzamsal tanıma belleği; ameliyat sonrası 5. gün)
    1. Testi, 120° açıyla ayrılmış üç özdeş koldan oluşan Y şeklinde bir labirentte gerçekleştirin. Bir kolu opak bir kapıyla rastgele kapatın ve bu kolu yeni kol olarak belirleyin.
    2. Açık olan iki koldan birini rastgele başlangıç kolu olarak seçin. Kalan açık kolu tanıdık kol olarak belirleyin. Fareyi başlangıç kolunun ucuna yerleştirin ve erişilebilir iki kolu 5 dk boyunca serbestçe keşfetmesine izin verin.
    3. 1 saatlik denemeler arası aradan sonra opak kapıyı kaldırın ve fareyi aynı başlangıç kolunun ucuna geri döndürün.
    4. Farenin üç kolun tamamını 5 dk boyunca serbestçe keşfetmesine izin verin.
    5. Kol girişini, takip edilen vücut merkezinin merkezi bölgeden önceden tanımlanmış bir kol bölgesine girmesi olarak tanımlayın. Giriş sayısını ve her kolda geçirilen süreyi video takip sistemini kullanarak kaydedin.
    6. Zamana dayalı yeni kol tercih indeksini şu şekilde hesaplayın:
      Davranışsal çalışma için zaman hesaplama formülü; yeni koldaki zaman yüzdesini gösteren denklem.
      Tyeni, Tbaşlangıç ve Ttanıdık değerlerini sırasıyla yeni, başlangıç ve tanıdık kollarda geçirilen süreler olarak tanımlayın.
    7. Giriş sayısına dayalı tercih indeksini şu şekilde hesaplayın:
      Yeni kola giriş formülü, E_yeni/E_toplam, davranışsal deney analiz denklemi.
      Eyeni değerini yeni kola giriş sayısı, Etoplam değerini ise test denemesi sırasında üç kolun tamamına yapılan toplam giriş sayısı olarak tanımlayın.

5. Doku işleme, Nissl boyama ve immünofloresan boyama

  1. Doku işleme
    1. Belirlenen deneysel bitiş noktasında, fareyi 2 L/min oksijen akış hızında verilen %3 sevofluran ile derinlemesine anestezi altına alın.
    2. Pedal çekilme refleksinin yokluğu ile anestezinin yeterli derinlikte olduğunu doğrulayın. Derin anesteziyi koruyarak ve kardiyak arrest gerçekleşmeden önce, intravasküler kanı uzaklaştırmak için 20 mL fosfat tamponlu salin (PBS) ile transkardiyak perfüzyon gerçekleştirin.
    3. Fareye derhal 20 mL %4 paraformaldehit (PFA) ile perfüzyon yapın.
    4. Tüm beyni dikkatlice çıkarın. Beyni, postfiksasyon için 4 °C'de 24 saat boyunca %4 PFA içinde bekletin.
    5. Doku tamamen çökene kadar beyni %30 sakkarozla değiştirin.
    6. Beyni optimal kesme sıcaklığı (OCT) bileşiğine gömün.
    7. Gömülmüş dokuyu hızla dondurun ve kriyoseksiyon işlemine kadar −80 °C'de saklayın.
  2. Nissl boyama
    1. 16 µm kriyoseksiyonları oda sıcaklığına getirin. Lamları 20 dakika boyunca havada kurutun.
    2. Lamları 2 dakika boyunca PBS ile durulayın.
      NOT: Boyamadan önce doku kesitlerinin lamlara sıkıca tutunduğundan emin olun.
    3. Kesitleri tamamen toluidin mavisi boyama çözeltisi ile kaplayın. 55 °C'de 30 dakika inkübe edin.
      NOT: Aşırı boyamayı önlemek için 16 µm kesitler için boyama süresini ampirik olarak optimize edin.
    4. Lamları distile su ile 10–30 saniye boyunca kısaca durulayın.
    5. Kesitleri sırasıyla %95, %85 ve %75 etanolde 2'şer dakika boyunca diferansiye edin.
      NOT: Boyama yoğunluğunu optimize etmek için gerekirse diferansiyasyon süresini ayarlayın.
    6. Lamları taze ksilen içinde her biri 5 dakika olmak üzere iki kez şeffaflaştırın.
      NOT: Tüm ksilen adımlarını kimyasal çeker ocak altında gerçekleştirin.
    7. Kesitleri nötral balsam ile monte edin. Her kesitin üzerine nazikçe bir lamelli kapatın.
    8. Boyalı kesitleri 20× objektifli bir ışık mikroskobu kullanarak görüntüleyin. Koronal hipokampal kesitteki karakteristik kompakt piramidal hücre tabakasına göre CA1 bölgesini tanımlayın. Her fare için bir koronal kesiti analiz edin ve her hipokampal hemisferin CA1 bölgesinden çakışmayan iki alan görüntüleyin.
    9. Görüntü analiz yazılımındaki hücre sayma eklentisini kullanarak morfolojik olarak sağlam Nissl-pozitif nöronları ve Nissl cisimciklerini manuel olarak sayın. Sağlam nöronları; sağlam bir soma, görünür bir nükleol içeren yuvarlak bir çekirdek ve bol sitoplazmik Nissl maddesi ile tanımlayın; Nissl cisimciklerini ise nöronal sitoplazma içindeki yoğun bazofilik granüler veya kümeli yapılar olarak tanımlayın.
    10. Hayvan başına tek bir değer oluşturmak için analiz edilen tüm alanlardan elde edilen değerlerin ortalamasını alın. Sayımı yapan gözlemcinin grup dağılımına karşı kör kaldığından emin olun.
  3. Iba1 immünofloresan boyama
    1. Boyamadan önce beyin kesitlerinin oda sıcaklığına dengelenmesini sağlayın.
    2. Lamları sodyum sitrat antijen geri kazanım çözeltisine batırın ve 80 °C'lik su banyosunda 25 dakika boyunca antijen geri kazanımı gerçekleştirin. Antijen geri kazanımından sonra, lamların ve antijen geri kazanım çözeltisinin doğal olarak oda sıcaklığına soğumasını bekleyin.
    3. Kesitleri fosfat tamponlu salin (PBS) ile her biri 3 dakika olmak üzere üç kez yıkayın.
    4. Kesitleri oda sıcaklığında 30 dakika boyunca PBS içinde %0,2 Triton X-100 ile permeabilize edin ve ardından PBS ile her biri 3 dakika olmak üzere üç kez yıkayın.
    5. Kesitleri nemlendirilmiş bir hazne içinde oda sıcaklığında 1 saat boyunca PBS içinde %3 sığır serum albümini (BSA) ile inkübe ederek spesifik olmayan bağlanmayı bloke edin.
    6. Kesitleri PBS ile her biri 3 dakika olmak üzere üç kez yıkayın.
    7. İyonize kalsiyum bağlayan adaptör molekül 1'e (Iba1; 1:100) karşı birincil antikoru bloklama çözeltisi (PBS içinde %3 BSA) ile seyreltin ve kesitleri seyreltilmiş birincil antikorla nemlendirilmiş bir hazne içinde 4 °C'de gece boyunca inkübe edin.
    8. Kesitleri PBS ile her biri 3 dakika olmak üzere üç kez yıkayın.
    9. Kesitleri 488-konjuge keçi anti-tavşan IgG (H+L) (1:1000) ile oda sıcaklığında karanlıkta 90 dakika inkübe edin.
    10. Kesitleri karanlıkta PBS ile her biri 3 dakika olmak üzere üç kez yıkayın.
    11. Çekirdekleri karanlıkta 5 dakika boyunca DAPI (1:8000) ile karşı boyayın.
    12. Kesitleri karanlıkta PBS ile her biri 3 dakika olmak üzere üç kez yıkayın.
    13. Kesitleri solmayı önleyici montaj medyumu ile monte edin, lamelleri kapatın ve görüntüleme işlemine kadar kesitleri ışıktan koruyun.
    14. 20× objektifli konfokal floresan mikroskobu kullanarak hipokampal CA1 bölgesinin floresan görüntülerini alın. Kantitatif karşılaştırmalara dahil edilen tüm kesitler için aynı görüntüleme ayarlarını kullanın. Her fare için bir koronal kesiti analiz edin ve her hipokampal hemisferin CA1 bölgesinden çakışmayan iki alan görüntüleyin.
    15. Tüm görüntülerde aynı eşik ayarlarını kullanarak hipokampal CA1 bölgesindeki Iba1 ortalama floresan yoğunluğunu nicelleştirin. Hayvan başına tek bir değer elde etmek için tüm alanlardan gelen değerlerin ortalamasını alın.

6. İstatistiksel analiz

  1. Tüm istatistiksel analizleri istatistiksel analiz yazılımı kullanarak gerçekleştirin. Verileri ortalama ± standart sapma (SD) şeklinde sunun.
  2. Verilerin normalliğini Shapiro–Wilk testi ile değerlendirin. Varyansların eşitliğini F testi ile değerlendirin.
  3. Varyans varsayımı karşılandığında, kontrol ve L5 laminektomi gruplarını eşleşmemiş iki kuyruklu Student’s t-testi kullanarak karşılaştırın. Varyans varsayımı karşılanmadığında Welch’s t-testini kullanın.
  4. n değerini, her analizde yer alan hayvan sayısı olarak tanımlayın. P değerinin < 0,05 olmasını istatistiksel olarak anlamlı kabul edin.

Sonuçlar

Tüm fareler planlanan deneysel bitiş noktasına kadar hayatta kalmış, hiçbirinde önceden tanımlanmış insani bitiş noktası kriterleri oluşmamış ve tamamı final analizlerine dahil edilmiştir. Motor fonksiyonlar, ameliyat sonrası 3. günde açık alan ve yürüyüş analizleri kullanılarak değerlendirilmiştir. Açık alan testinde kat edilen toplam mesafe ve ortalama hız gruplar arasında farklılık göstermemiş olup, bu durum karşılaştırılabilir spontan lokomotor aktiviteye işaret etmektedir (Şekil 2A). Yürüyüş analizi de benzer şekilde adım uzunluğu, duruş süresi, salınım hızı veya iz alanı açısından gruplar arasında anlamlı bir fark göstermemiştir (Şekil 2B). Birlikte değerlendirildiğinde bu bulgular, L5 laminektomi prosedürünün, sonraki bilişsel-davranışsal performans farklılıklarını açıklayacak düzeyde belirgin bir motor bozulmaya yol açmadığını göstermektedir.

Bilişsel performans; yeni nesne tanıma (NOR) testi, yeni kollu Y-labirenti ve Barnes labirenti kullanılarak değerlendirildi. NOR testinde, L5 laminektomi grubu, kontrol grubuna göre anlamlı derecede daha düşük bir yeni nesne tercih indeksi (PI) sergiledi (Şekil 3A). Yeni kollu Y-labirentinde, L5 laminektomi grubu, hem yeni kolda geçirilen süre hem de yeni kola giriş sayısı açısından anlamlı derecede daha düşük PI değerleri gösterdi (Şekil 3B). Barnes labirentinde, L5 laminektomi grubu, Barnes labirenti testinin 3. gününde daha uzun kaçış latansı ve daha fazla kat edilen mesafe sergiledi (Şekil 3C). Birlikte değerlendirildiğinde, bu davranışsal bulgular L5 laminektomi sonrası ameliyat sonrası bilişsel performansın bozulduğunu göstermektedir.

Hipokampal CA1 bölgesinde, L5 laminektomi grubu, kontrol grubuna kıyasla anlamlı derecede daha az Nissl-pozitif nöron ve anlamlı derecede daha az Nissl cisimciği göstermiştir; bu durum nöronal yapısal hasara işaret etmektedir (Şekil 4A, B). Ayrıca, L5 laminektomi grubunda Iba1 ortalama floresan yoğunluğu, artan mikroglial aktivasyonla uyumlu olarak anlamlı derecede artmıştır (Şekil 4C, D).

L4, L5, L6 vertebraların tanımlanmasını gösteren fare lomber omurga diseksiyon diyagramı ve süreci.
Şekil 1: Farelerde postoperatif kognitif disfonksiyon (POCD) modellemesi için L5 lomber laminektomi prosedürü. (A) L5 lamina'sındaki cerrahi hedef ve bitişik vertebral seviyeleri (L4–L6) kapsayan ekspozisyon aralığının gösterimi. (B) L5 lomber laminektomi prosedürünün temel adımlarını gösteren intraoperatif görüntüler. (a) Spinal orta hattın belirlenmiş olduğu, tıraş sonrası lomber bölge; oklar planlanan cilt insizyonunun yönünü göstermektedir. (b) Lomber omurga üzerinde orta hat cilt insizyonu. (c) Spinöz çıkıntıları açığa çıkarmak için paraspinöz kasların kademeli olarak ayrılmasıyla fasyanın insizyonu ve L5 lamina'sını tamamen açığa çıkarmak için L5 spinöz çıkıntısı ve lamina çevresindeki dokunun daha fazla temizlenmesi. (d) L5 lamina'sının çıkarılmasının ardından L5 laminektomisi. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Laminektomi ve kontrol çalışması; hareket yolu, sütun grafiği, yürüyüş verileri karşılaştırması, deney sonuçları.
Şekil 2: L5 lomber laminektomi sonrası lokomotor aktivite ve yürüyüşün değerlendirilmesi. (A) Toplam katedilen mesafeyi ve ortalama hızı gösteren açık alan testi (n = 10). (B) Adım uzunluğunu, duruş süresini, salınım hızını ve basma alanını gösteren yürüyüş analizi (n = 6). Veriler ortalama ± SD olarak sunulmuştur. İstatistiksel anlamlılık ns (anlamlı değil) olarak belirtilmiştir. Kısaltmalar: Control = kontrol grubu; Laminectomy = L5 laminektomi grubu. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Labirent diyagramları ve sütun grafikleri, bilişsel görev performansı üzerindeki kontrol ile laminektomi etkilerini analiz etmektedir.
Şekil 3: L5 lomber laminektomi sonrası bilişsel davranışsal değerlendirmeler. (A) Yeni nesne tanıma testi (n = 10). (B) Yeni kol Y-labirent testi (n = 10). (C) Barnes labirent testi (n = 10). Veriler ortalama ± SD olarak gösterilmiştir. İstatistiksel anlamlılık *P < 0.05, **P < 0.01 ve ***P < 0.001 olarak belirtilmiştir. Kısaltmalar: Control = kontrol grubu; Laminectomy = L5 laminektomi grubu. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Laminektomi sonuçları; kontrol ve laminektomi gruplarında IBA1 yoğunluğunun histoloji görüntüleri ve sütun grafikleri.
Şekil 4: L5 lomber laminektomi sonrası hipokampal CA1 bölgesinin histolojik değerlendirmesi. (A) Hipokampal CA1 bölgesindeki Nissl boyamasının temsilci görüntüleri. (B) Nissl-pozitif nöronların (solda) ve Nissl cisimciklerinin (sağda) nicelendirilmesi (n = 5). (C) Hipokampal CA1 bölgesindeki Iba1 immünofloresansının temsilci görüntüleri. Ölçek çubuğu = 100 µm. (D) Iba1 ortalama floresans yoğunluğunun nicelendirilmesi (n = 6). Veriler ortalama ± SD olarak sunulmuştur. İstatistiki anlamlılık **P < 0.01 ve ***P < 0.001 olarak belirtilmiştir. Kısaltmalar: Control = kontrol grubu; Laminectomy = L5 laminektomi grubu. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

Omurga cerrahisi geçiren yaşlı yetişkinlerde ameliyat sonrası kognitif disfonksiyon rapor edilmiştir10. Deneysel kanıtlar, yaşlanmanın cerrahiyle ilişkili kognitif bozulmaya ve nöroinflamatuar yanıtlara karşı duyarlılığı artırdığını göstermektedir11,12. Mevcut protokol, erken dönem ameliyat sonrası kognitif bozulmayı modellemek için yaşlı farelerde yaklaşık 4 s sevofluran anestezisini L5 laminektomisi ile birleştirmektedir. Bu protokolün temel metodolojik değeri, omurga cerrahisi sonrası davranışsal ve hipokampal histolojik değişiklikleri araştırmak için pratik ve erişilebilir bir prosedür sunmasıdır.

Preklinik POCD modelleri; sadece anestezi maruziyeti, abdominal cerrahi ve ortopedik yaralanma paradigmalarını içerir13. Sadece anestezi içeren paradigmalar, cerrahi travma olmaksızın anestetik etkilerin değerlendirilmesine olanak tanır14, ancak anestezi ve doku hasarının birleşik maruziyetini yeniden üretmezler. Abdominal cerrahi ve tibial kırık modelleri cerrahi yaralanmayı kapsar ve cerrahi ile ilişkili bilişsel bozuklukların araştırılması için kullanılmıştır15,16. Ancak, bunların operasyon bölgeleri ve doku hasarı paternleri spinal prosedurlerinkinden farklıdır. Cerrahi travmanın türü ve yoğunluğu postoperatif bilişsel sonuçları ve merkezi enflamatuar yanıtları etkileyebileceğinden9, preklinik bir model seçilirken cerrahi bağlam göz önünde bulundurulmalıdır. Bu nedenle, mevcut L5 laminektomi protokolü, yaşlı farelerde erken postoperatif bilişsel bozukluğu incelemek için omurga cerrahisi ile ilişkili deneysel bir paradigma sunmaktadır.

Bu protokoldeki temel teknik zorluk, dural yaralanmadan kaçınarak durayı net bir şekilde ortaya çıkarmak için L5 lamina bölgesinden yeterli kemiğin uzaklaştırılmasıdır. Doğrudan görselleştirme altında gerçekleştirilen bir laminektomi sırasında; enstrüman derinliğinin, kesme kuvvetinin ve oftalmik makasların yerleştirme açısının dikkatli bir şekilde kontrol edilmesi gerekir. Kemik, lamina kenarları boyunca küçük ve kontrollü kesiler yapılarak aşamalı olarak uzaklaştırılmalıdır. L5 spinöz çıkıntısının pensle kavranması ve operasyon yapılan lomber segmentin cerrahi platforma göre yaklaşık 30°'lik bir açıyla yükseltilmesi, L5–L6 interlaminar boşluğu genişletir. Bu manevra, makas uçlarının kemik kenarının altına sığ bir şekilde yerleştirilmesine izin verir ve dural temas riskini azaltır. Yetersiz kemik uzaklaştırma cerrahi görünürlüğü kısıtlayabilirken, aşırı agresif kesme veya aşırı yerleştirme derinliği dural yaralanmaya neden olabilir. Kontrol edilemeyen kanama operasyon alanını kapatabilir, postoperatif iyileşmeyi bozabilir ve davranışsal sonuçlarda değişkenliği artırabilir. İnterlaminar boşluk makas uçlarının güvenli bir şekilde yerleştirilmesi için yetersiz olduğunda, yerleştirme derinliğini artırmak yerine operasyon yapılan lomber segmentin konumu ve yükseltme açısı yeniden ayarlanmalıdır. Kanama operasyon alanını kapatırsa, yeterli görselleştirme sağlanana kadar kemik uzaklaştırma işlemi durdurulmalı ve ardından kalan kemikler kademeli olarak uzaklaştırılmalıdır.

Paraspinal kas ayrılması ve L5 laminektomi, geçici postoperatif ağrıya katkıda bulunabilir ve farelerde deneysel laminektomi sonrası mekanik hipersensitivite belgelenmiştir17. Meloksikam, önceden tanımlanmış bir analjezik rejime göre uygulanmıştır. Farelerde postoperatif ağrıyla ilişkili yüz ifadelerinin yaklaşık 36–48 sa boyunca devam ettiği bildirilmiştir18. 48 saatlik analjezik rejim, bu erken postoperatif dönemi kapsamak amacıyla planlanmış ve hemen sonrası oluşan postoperatif ağrının potansiyel etkisini azaltmak için kognitif davranışsal testlere analjezik rejimin tamamlanmasının ardından, postoperatif 3. günde başlanmıştır. Açık alan testi, spontane lokomotor aktiviteyi değerlendirmek ve azalmış lokomosyonun kognitif-davranışsal performansı etkileyip etkilemediğini belirlemek için deneysel POCD çalışmalarında kullanılmıştır19,20. Buna göre, kognitif değerlendirmeden önce, postoperatif 3. günde açık alan testi ve yürüyüş analizi gerçekleştirilmiştir. Açık alan lokomotor aktivitesinde veya yürüyüş parametrelerinde gruplar arasında anlamlı bir fark gözlemlenmemiştir; bu durum, sonraki kognitif-davranışsal farkların öncelikle belirgin bir motor bozulma ile açıklanmasının düşük bir olasılık olduğunu göstermektedir. Bununla birlikte, spontane postoperatif ağrı ve yara rahatsızlığı doğrudan değerlendirilmediğinden, bunların davranışsal performans üzerindeki kalıntı etkileri tamamen göz ardı edilemez. Gelecekteki çalışmalar, spontane postoperatif ağrının doğrudan değerlendirmelerini içerebilir.

Genel olarak bu protokol, yaşlı farelerde L5 laminektomi sonrası erken postoperatif bilişsel bozulmayı araştırmak için pratik bir deneysel yaklaşım sunmaktadır. Omurga cerrahisine bağlı bilişsel bozulmanın davranışsal sonuçlarını ve altında yatan mekanizmaları incelemenin yanı sıra, postoperatif bilişsel bozulmayı önlemeyi veya azaltmayı amaçlayan müdahaleleri değerlendirmek için kullanılabilir. Daha geniş kohortlarda ve bağımsız laboratuvarlarda yapılacak doğrulamalar, modelin stabilitesini ve tekrarlanabilirliğini daha da pekiştirecektir.

Açıklamalar

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedirler.

Teşekkürler

Teknik destekleri için Zhejiang Üniversitesi Tıp Fakültesi temel tesis platformundan Sanhua Fang'e, Zhejiang Üniversitesi hayvan merkezinden Yanhong Chen ve Xuliang Zhang'a teşekkür ederiz. Bu çalışma aşağıdaki fonlar tarafından desteklenmiştir: Çin Ulusal Doğal Bilimler Vakfı (Nos. 82575196, 82074535 ve U23A20508).

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
erkek C57BL/6J farelerSuzhou Industrial Park Ai'er Maite Technology Co., Ltd.SYXK2023-0005Hayvan modeli
ANY-maze Video Takip YazılımıStoelting Co., ABD6000Davranışsal video takibi ve analizi
Eritromisin oftalmik pomadBeijing Twinluck Pharmaceutical Co,. Ltd.H11021270Göz kuruluğunu önleme
Hassas pensetNAÇevrilecek metin sağlanmamıştır. Lütfen çevrilmesini istediğiniz metni giriniz.Cildi tıraş edin
Isıtma pediYOKNASıcaklık kontrollü
Iba1/AIF-1 (E4O4W) Tavşan Monoklonal AntikoruHücre Sinyalizasyon Teknolojisi17198Iba1 immünofloresan boyama
İnhalasyon anestezi ekipmanıRWD Life Science Co., Ltd.R581SAnestezi
MGT-PRAnhui Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd., ÇinLütfen çevirilecek kaynak metni sağlayın. Kaynak metni gönderdiğinizde, belirttiğiniz tüm akademik ve bilimsel kriterlere uygun olarak profesyonel Türkçe çevirisini gerçekleştireceğim.Yürüyüş analizi
Mikro Oftalmik makaslarNAYOKKemik uzaklaştırma
Nissl boyama solüsyonuHaoke Biotechnology Co., Ltd.HK2033Nissl boyaması
MakasShang Shou Jin Zhong Cerrahi Aletleri Jiangsu ITD.,CorpY00030Cilt insizyonu
SevofluranShanghai Hengrui Pharmaceutical Co,. Ltd.25062331Anestezi
Tek Kullanımlık Cerrahi ÖrtüJiangxi Zhizheng Medical Equipment Co., Ltd.20212140221Cerrahi operasyon platformu
Küçük hayvan tüy düzelticiYiwu Leiben Trading Co., Ltd.Lütfen çevirmek istediğiniz metni sağlayın.Tüylerin temizlenmesi
İplikli Cerrahi Sütür İğneleriShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., LTD.F603Cilt dikişi
Veet tüy alma kremiRECKITT BENCKISER (India) LtdGirdi sağlanmamıştır. Lütfen çevrilmesini istediğiniz metni giriniz.Tüy alma

Kaynaklar

  1. Zhao Q, Wan H, Pan H, Xu Y. Postoperative cognitive dysfunction-current research progress. Front Behav Neurosci. 2024;18:1328790.
  2. Kong H, Xu LM, Wang DX. Perioperative neurocognitive disorders: A narrative review focusing on diagnosis, prevention, and treatment. CNS Neurosci Ther. 2022;28(8):1147-1167.
  3. Monk TG, et al. Predictors of cognitive dysfunction after major noncardiac surgery. Anesthesiology. 2008;108(1):18-30.
  4. Li X, et al. Risk factors for postoperative cognitive decline after orthopedic surgery in elderly Chinese patients: A retrospective cohort study. Clin Interv Aging. 2024;19:491-502.
  5. Krenk L, et al. Cognitive dysfunction after fast-track hip and knee replacement. Anesth Analg. 2014;118(5):1034-1040.
  6. Yang X, et al. Identification of individuals at risk for postoperative cognitive dysfunction (POCD). Ther Adv Neurol Disord. 2022;15:17562864221114356.
  7. Suraarunsumrit P, et al. Outcomes associated with postoperative cognitive dysfunction: A systematic review and meta-analysis. Age Ageing. 2024;53(7):afae160.
  8. Lin X, et al. The potential mechanism of postoperative cognitive dysfunction in older people. Exp Gerontol. 2020;130:110791.
  9. Lu B, et al. Effects of different types of non-cardiac surgical trauma on hippocampus-dependent memory and neuroinflammation. Front Behav Neurosci. 2022;16:950093.
  10. Park S, et al. Preoperative mild cognitive impairment as a risk factor of postoperative cognitive dysfunction in elderly patients undergoing spine surgery. Front Aging Neurosci. 2024;16:1292942.
  11. Xu Z, et al. Age-dependent postoperative cognitive impairment and Alzheimer-related neuropathology in mice. Sci Rep. 2014;4:3766.
  12. Zhang ZJ, et al. Aging alters Hv1-mediated microglial polarization and enhances neuroinflammation after peripheral surgery. CNS Neurosci Ther. 2020;26(3):374-384.
  13. Eckenhoff RG, et al. Perioperative neurocognitive disorder: State of the preclinical science. Anesthesiology. 2020;132(1):55-68.
  14. Guo LY, et al. Cognitive deficits after general anaesthesia in animal models: A scoping review. Br J Anaesth. 2023;130(2):e351-e360.
  15. Qiu LL, et al. NADPH oxidase 2-derived reactive oxygen species in the hippocampus might contribute to microglial activation in postoperative cognitive dysfunction in aged mice. Brain Behav Immun. 2016;51:109-118.
  16. Cibelli M, et al. Role of interleukin-1beta in postoperative cognitive dysfunction. Ann Neurol. 2010;68(3):360-368.
  17. Yamamoto S, et al. Intraoperative spinal cord stimulation mitigates central sensitization after spine surgery in mice. Spine (Phila Pa 1976). 2023;48(11):E169-E176.
  18. Matsumiya LC, et al. Using the mouse grimace scale to reevaluate the efficacy of postoperative analgesics in laboratory mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 2012;51(1):42-49.
  19. Sun L, et al. Activation of cannabinoid receptor type 2 attenuates surgery-induced cognitive impairment in mice through anti-inflammatory activity. J Neuroinflammation. 2017;14(1):138.
  20. Zhan G, et al. Anesthesia and surgery induce cognitive dysfunction in elderly male mice: The role of gut microbiota. Aging (Albany NY). 2019;11(6):1778-1790.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Omurga Cerrahisi ModeliSevofluran AnestezisiKognitif Fonksiyon TestiHipokampal Nöronal HasarNöroinflamatuar DeğişikliklerNissl BoyamaIba1 İmmünofloresans

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.