Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Akut Lösemide Ölçülebilir Kalıntı Hastalık Değerlendirmesi için Standartlaştırılmış Çok Renkli Akış Sitometri Protokolü

143 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/71756

⸱

7 Ağustos 2026

1Department of Clinical Laboratory, The Second People's Hospital of Neijiang

Bu makalede

Özet

Bu protokol, akut lösemide ölçülebilir kalıntı hastalık değerlendirmesi için standartlaştırılmış çok renkli akış sitometrisi iş akışını tanımlar; kontrollü örnek işleme, uyumlu alım parametreleri, ardışık kapı stratejileri ve payda ayarlı yorumu entegre ederek rutin klinik laboratuvarlarda analitik tekrarlanabilirliği artırır.

Özet

Ölçülebilir kalıntı hastalık (MRD), akut lösemi yönetiminde önemli bir prognostik göstergedir. Ancak, rutin çok renkli akış sitometri (MFC) değerlendirmesi, hemodilutasyon, tutarsız alım derinliği ve öznel yorum gibi ön-analitik ve analitik değişkenliğe karşı savunmasızdır. Bu makale, B-hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) ve akut miyeloid lösemi (AML) için rutin MRD değerlendirmesi için standartlaştırılmış bir operasyonel iş akışını sunmaktadır. Protokol, entegre hemodilisyon değerlendirmesi ile katı örnek kabul kriterlerini içerir ve kemik iliği ile periferik kan örnekleri için toplu kırmızı kan hücresi lizisi yöntemi kullanır. Analitik standartlaştırma, hastalığa özgü iki tüplü, sekiz renkli antikor panelleri, en az 500.000 CD45 pozitif olayı gerektiren uyumlu edinim hedefleri ve sabit ardışık kapı stratejileriyle sağlanır. Ayrıca, iş akışı hedefe dayalı üç kademeli bir raporlama sistemini desteklemek için paydaya göre ayarlanmış tespit sınırları (LOD) ve nicelik (LOQ) uygular. 197 klinik örnek üzerinde yapılan doğrulama, güçlü tekrarlanabilirlik, sağlam seyreltici doğrusal ve eşleştirilmiş ortogonal moleküler testlerle yüksek uyumluluk göstermiştir. Toplu olarak, bu protokol standartlaştırılmış MRD izleme için pratik bir çerçeve sağlar. rutin klinik laboratuvarlarda kontrollü ön analitik işlem ve uyumlu analitik parametrelerin entegre edilmesiyle standartlaştırılmış MRD izleme için.

Giriş

Morfolojik remisyona ulaştıktan sonra bile, akut lösemi hastalarının nüks riskini doğru değerlendirmek için ölçülebilir kalıntı hastalığı (MRD) için sürekli izleme gerekmektedir. Geleneksel morfolojik ve sitopatolojik muayeneler, düşük seviyeli kalıntı lökemik popülasyonları tespit etmek için gereken hassasiyetten yoksundur. Sonuç olarak, MRD değerlendirmesi hem akut miyeloid lösemi (AML) hem de B-hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) hastalık izlemesinde vazgeçilmez bir bileşen haline gelmiştir. Avrupa LeukemiaNet tarafından yapılan son öneriler, AML'de güvenilir MRD değerlendirmesinin basit test kullanılabilirliğinden ziyade teknik standartlaşmaya ve gözlemciler arası tekrarlanabilirliğe bağlıolduğunu vurgulamaktadır 1,2. B-ALL'de, çok renkli akış sitometrisi (MFC), stabil moleküler hedefleri olmayan hastalar için özellikle önemlidir. Önceki çalışmalar, yapılandırılmış antikor panel tasarımları kullanılarak standartlaştırılmış çok renkli akış sitometrik yaklaşımların tekrarlanabilir ve hassas kalıntı hastalık tespitisağlayabileceğini göstermiştir 3. Akış sitometrisi, geniş uygulanabilirliği, hızlı dönüş süresi ve maliyet etkinliği nedeniyle yaygın olarak kullanılmaktadır. Test performansı, standartlaştırılmış numune hazırlığı, satın alma parametreleri ve veri yorumuna büyük ölçüde bağlıdır4.

Akış sitometrik MRD değerlendirmesindeki başlıca teknik zorluklardan biri, nadir olay tespitidir; bu durum, alım derinliği ve toplam olay sayısından güçlü şekilde etkilenir. Aynı antikor panelleri, tutarsız payda boyutlarında alınan örnekleralındığında farklı analitik hassasiyetler üretebilir. 5. Bu nedenle standartlaştırma, antikor seçiminin ötesine geçer ve uyumlu numune işleme, toplu kırmızı kan hücresi lizisi, enstrüman telafisi, edinim hedefleri ve kapı stratejileri gerektirir. Kemik iliği örneklerinde, hemodilusiyon ayrıca çevresel kan kontaminasyonunun görünen kalıntı lökemik yükü yapay olarak azaltabileceği için önemli bir ön analitikdeğişkendir 6,7. Ayrıca, düşük frekanslı olayların yorumlanması, örnek özgül alım derinliğine dayalı olarak net tanımlanmış raporlama eşikleri gerektirir. Son çalışmalar, akış sitometrik MRD yorumunun tutarlılığını artırmak için paydaya göre ayarlanmış tespit sınırları (LOD) ve nicel (LOQ) öneminivurgulamıştır 8.

Bu protokolün genel amacı, B-ALL ve AML'de rutin MFC tabanlı MRD değerlendirmesi için standartlaştırılmış bir iş akışı sağlamaktır. Protokol, örnek kabul kriterlerini, hemodilisyon değerlendirmesini, hastalığa özgü antikor panel tasarımını, toplu liz örneği hazırlığını, uyumlu edinim hedeflerini, sabit ardışık kapı stratejilerini ve paydaya göre ayarlanmış raporlama kriterlerini tek bir operasyonelçerçevede entegre eder 9,10. Standartlaştırılmış ön analitik ve analitik prosedürleri birleştirerek, bu yöntem MRD izlemenin rutin klinik laboratuvar uygulaması için pratik ve tekrarlanabilir bir yaklaşım sağlar. Şekil 1, bu çalışmada uygulanan genel standartlaştırılmış ön analitik ve analitik iş akışını göstermektedir. Tablo 1, önceden belirlenmiş izleme aralıkları (İndüksiyon Sonu, Konsolidasyon ve Ön HSCT) doğrulama döneminde kayıtlı B hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) ve akut miyeloid lösemi (AML) hastalarının kohort ve örnek özelliklerini özetlemektedir.

figure-introduction-1
Şekil 1: Rutin çok renkli akış sitometrik MRD değerlendirmesi için standartlaştırılmış iş akışı. (A) Önceden tanımlanmış izleme aralıkları boyunca örnek taraması ve kalite değerlendirmesini gösteren ön analitik iş akışı. (B) Toplu kırmızı kan hücresi lizisi ve antikor boyamalarından ardışık gating, payda ayarlı yorumlama ve nihai MRD raporlaması yoluyla analitik iş akışı. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Tablo 1: Konsolide hasta demografisi, klinik örnek özellikleri ve rutin alım metrikleri. Bu tek revize tablo, B hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) ve akut miyeloid lösemi (AML) vakalarını içeren kayıtlı kohortun temel klinik özelliklerini özetler ve hasta düzeyindeki demografik yapıları örnek düzeyindeki özellikler, tedavi izleme aralıkları, canlılık, hemodilisyon puanları, alım derinlikleri ve paydaya göre ayarlanabilir kalıntı hastalık sınıflandırmalarıyla birleştirir. Bu tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

İnsan örnekleriyle ilgili tüm prosedürler, kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi ve Neijiang İkinci Halk Hastanesi Etik Komitesi tarafından onaylandı (Onay No. PXTS887192). Çalışma, rutin tanı testlerinden sonra elde edilen kimliği dekimsiz kalıntı klinik örnekleri kullandı. Bilgilendirilmiş onay, çalışma hasta bakımını, tedavi tahsisini veya örnek toplama prosedürlerini etkilemediği için muafilik verdi. Protokolde kullanılan kimyasallar, reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Örnek toplama ve ön analitik değerlendirme

  1. Kemik iliği aspirasyonlarını ölçülebilir kalıntı hastalık (MRD) değerlendirmesi için tercih edilen örnek tipi olarak toplayın. Periferik kan örneklerini yalnızca kemik iliği aspirasyonu klinik olarak kontrendikasyon olduğunda veya seçilmiş gözetim ve karşılaştırıcı analizler sırasında kullanın.
  2. Kemik iliği örneğini mümkün olduğunca ilk aspirat çekiminde toplayın. Çevresel kan kontaminasyonunu ve düşük seviyeli kalıntı hastalığı küçümsemesini azaltmak için sonraki aspirat çekimlerinden kaçının.
  3. Örnekleri topladıktan hemen sonra dipotasyum etilendiamintetraasetik asit (K2-EDTA) veya sodyum-heparin antikoagülan tüplere aktarın. Örnekleri oda sıcaklığında (18–25 °C) depolayıp taşıyabilir ve doğrudan güneş ışığından korur.
    DIKKAT: Örnekleri buzdolabına koymayın.
  4. Tüm örnekleri toplandıktan sonra 24 saat içinde işleyin. Stabilite çalışmaları için, oda sıcaklığında depolama koşullarını koruyarak 24 saat ve 48 saat tekrar analizi için aliquotlar tutulur.
  5. Hasta tanımlayıcısını, antikoagülan türünü, numune bütünlüğünü ve numune alındığında toplanma süresini doğrulayın. Yaygın pıhtılaşma, ağır hemoliz veya belirgin hücresel dejenerasyon gösteren reddedilen örnekler
  6. Son yorumdan önce kemik iliği örneklerinde hemodilasyon açısından değerlendirin. Periferik kan kontaminasyonunu tahmin etmek için 0.00 ile 1.00 arasında yarı nicel bir hemodilution puanı hesaplayın.
  7. Bu değeri, olgun lenfositlerin oranını CD34-pozitif öncüller, olgunlaşmamış granülositler ve olgun lenfositlerin toplamına bölerek belirleyin; burada daha yüksek oran daha yüksek seyreltme etkisini gösterir.
    NOT: Skoru aşağıdaki formülle hesaplayın:
      figure-protocol-1
    burada daha yüksek puan, daha fazla periferik kan kontaminasyonunu gösterir.
  8. Hemodilisyon puanlarını şu şekilde sınıflandırın: <0.20, kabul edilebilir; 0.20–0.39, hafif hemodilasyonlu; ve ≥0.40, önemli ölçüde hemodilasyonlu.
    NOT: Belirgin şekilde hemodilutelenmiş örneklere, yeterli payda boyutu ve korunmuş ilik öncü mimarisi doğrulanmadıkça kesin MRD-negatif yorumlar atanmayın.

2. Hastalığa özgü antikor panel hazırlama

  1. B-ALL ve AML analizi için standartlaştırılmış hastalık spesifik iki tüplü, sekiz renkli antikor panelleri hazırlamak. Stabil popülasyon kapıtımı için tüm tüplerde sabit omurga işaretleyicilerine sıkı sıkı şekilde bağlı kalarak panel standartlaştırmasını sağlamak.
  2. İlgili soy antijenleri için tutarlı florokrom konjugatları kullanın ve lotlar arası floresans değişkenliğini en aza indirmek için üretici tarafından önerilen titrasyon hacimlerini sıkı bir şekilde takip edin.
  3. Belirteç kombinasyonları, florokrom atamaları, antikor klonları, boyama hacimleri ve alım parametreleri için Ek Tablo 1'e bakabilirsiniz.
  4. B-ALL değerlendirmesi için, öncü popülasyonları ve olgunlaşma desenlerini tanımlamak için her iki tüpte de CD19, CD45, CD34, CD10 ve CD20 omurga belirteçleri olarak kullanılır. CD38, CD58 ve CD81'i Tube 1'e ekleyin.
  5. Başlangıç değerlendirmesinde belirlenen tanısal lösemi ilişkili immünofenotipe göre CD66c, CD123 ve CD73 veya CD304 Tüp 2'ye eklenir.
  6. AML değerlendirmesi için, blast ve olgunlaşmamış miyeloid popülasyonları tanımlamak için her iki tüpte de CD45, CD34, CD117, CD13, CD33 ve HLA-DR omurga belirteçleri olarak kullanılmalıdır.
  7. Çapraz antijen ekspresyonunu değerlendirmek için CD7 ve CD56'yı Tüp 1'e ekleyin. Miyeloid olgunlaşma anormalliklerini değerlendirmek için Tüp 2'ye CD11b ve CD15 ekleyin.

3. Toplu liz hazırlama ve boyama

  1. 2,0 mL iyi karışmış kemik iliği veya periferik kan örneğini 15 mL'lik polipropilen tüpte aktarın. Örnek hacmi sınırlıysa, minimum giriş hacmi 1.0 mL kalın.
  2. Numuneye 10 mL önceden ısıtılmış amonyum klorür lizis tamponu ekleyin. Süspansiyonu oda sıcaklığında 10 dakika kuluçka altına geçirerek kırmızı kan hücrelerini lizize edin.
  3. Örneği 500 × g ile 5 dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatantı çekirdekli hücre pelletini rahatsız etmeden dikkatlice atın.
  4. Pellet, %0,5 sığır serum albümini (BSA) ve 2 mM etilen diamintetraasetik asit (EDTA) içeren 2 mL fosfatla tamponlanmış tuzlu süzene (PBS) yeniden süzülür. Kalıntı hemoglobin kontaminasyonu görünürse yıkama adımını bir kez tekrarlayın.
  5. Otomatik hematoloji analizörü veya tripan mavisi dışlama ile manuel hemositometre sayısı kullanarak çekirdekli hücre konsantrasyonunu belirleyin. Standart alım için minimum çekirdekli hücre konsantrasyonu 5 × 106 hücre/mL olarak değerlendirin.
    NOT: Hücresel verim bu eşiğin altına düşerse, örneği 500 × g üzerinde 5 dakika boyunca ek bir santrifüjle yoğunlaştırın ve hücre yoğunluğunu maksimize etmek için yeniden süspansiyon tampon hacmini dikkatlice azaltın.
  6. Aliquot 5 × rutin boyama için tüpte 106 çekirdekli hücre vardır. Örnek kurtarma izin verdiğinde yüksek hassasiyetli analiz için boru başına girdiyi maksimum 1 × 107 hücreye çıkarmak.
  7. Her tüpte, doğrulanmış boyama paneli konfigürasyonuna göre her tüpte tek tek titrlenmiş antikor kokteylini ve Malzeme Tablosu'nda belirtilen sabitlenebilir canlılık boyasını ekleyin. Rutin doğrulanmış panel, üretici önerisi farklı bir antikor-spesifik hacim göstermediği sürece florokrom konjuge antikor başına 5 μL kullanır.
  8. Optimal antikor-antijen stoichiometry'nin korunması için her test başına son boyama reaksiyonu hacminin 100 μL olarak sıkı tutulduğundan emin olun. Örnekleri oda sıcaklığında karanlıkta 15 dakika kuluçka altına alın.
  9. Boyalı hücreleri yıkama tamponu ile bir kez yıkayın ve son peleti 500 μL toplama tamponunda tekrar askıya alın.
  10. Numune alındığı gün tazminat boncukları kullanarak tek boyalı tazminat kontrolleri hazırlayın.

4. Enstrüman kurulumu ve veri toplama

  1. Hasta örnekleri almadan önce akış sitometresinde günlük başlatma kalite kontrolü yapın. Üreticinin talimatlarına uygun olarak akışkanlık, lazer hizalama, dedektör performansı ve floresan hedef değerlerini kalibrasyon boncukları kullanarak doğrulayın.
  2. Antikor panellerinde bulunan aynı florokromları kullanarak tek boyalı telafi kontrollerini hazırlayın. Hasta alımı öncesi telafi matrisini ayarlayın ve omurga belirteçlerinin önceden tanımlanmış floresans hedef aralıkları içinde kaldığını doğrulayın.
  3. Doğrulama döneminde analiz edilen tüm örnekler için aynı satın alma şablonu, dedektör ayarları, tazminat stratejisi ve kapı hiyerarşisi kullanın.
    NOT: Tüm dedektörler için özel kalibrasyon boncukları kullanarak standartlaştırılmış hedef medyan floresans yoğunluk değerleri belirleyerek cihazlar arasında uygun uyumu sağlamak ve aynı örneklerin klinik veri toplamadan önce platformlar arasında karşılaştırılabilir floresan profilleri sağladığını doğrulamak.
  4. Çarpışma olaylarını azaltmak ve nadir olayı tespit doğruluğunu korumak için düşük ve orta akış hızında veri edinmek. Edinim sırasında olay oranını sürekli izleyin.
  5. Her rapor edilen MRD sonucu için en az 500.000 CD45 pozitif çekirdekli olay edinin. Örnek kalitesi ve olay kararlılığı izin verdiğinde, özellikle düşük seviyeli kalıntı hastalık şüphesi olduğunda, toplamda 1,0–1,5 milyon olaya kadar uzatın.
  6. Akışkanlık kararsızlık, örnek tıkanması, ani olay oranı değişiklikleri veya saçılma kalitesinde görünür bozulma meydana gelirse alım durdurma veya durdurulma. Uygun olduğunda numuneyi yeniden filtreleyebilir veya yeniden karıştırabilir ve örneği ancak stabil akış sağlandıktan sonra yeniden alınır.

5. Ardışık kapı ve paydaya göre ayarlanmış yorumlama

  1. Doğrulanmış akış sitometrisi analiz yazılımı kullanarak akış sitometrisi verilerini analiz edin. Tüm örnekler için aynı ardışık kapı stratejisini kullanarak operatörler arası değişkenliği azaltabilirsiniz.
  2. En az 20 normal veya yenilenen kemik iliği örneği referans bankasını bağımsız olarak edinip analiz ederek temel ifade şablonu olarak kullanılacak şekilde normal ve yenileyici olgunlaşma desenleri oluşturun.
  3. Öne saçılma ve yan saçılma parametreleriyle döküntüleri dışlayın. Tek hücreleri öne saçılma alanı ile ileri saçılma yüksekliği gating uygulamasıyla izole edin.
  4. Malzemeler tablosunda listelenen canlılık boya kapısı kullanılarak cansız hücreleri hariç tutun. Bu canlı olmayan hücreleri rutin olarak ortadan kaldırın çünkü spesifik olmayan antikor bağlanması gösterirler ve yapay olarak arka plan gürültüsünü yükseltebilir veya nadir anormal popülasyonları taklit edebilirler.
    NOT: Optimal aşağı akış analizi için %75 minimum yaşamlılık eşiği gerekmek, bu değerin altına düşen örneklerin olası nadir olay artefaktları konusunda dikkatli yorumlanmayı gerektirdiğini belirtmek. Lökosit paydasını uygun yan saçılma özelliklerine sahip geçerli CD45-pozitif olaylar üzerinde geçiş yaparak tanımlayın.
  5. B-ALL örnekleri için analizi CD19-pozitif öncü bölme ile sınırlandırın. Anti-CD19 hedefli tedaviler alan hastalar için alternatif bir kapı çerçevesi uygulamak.
  6. Birincil değerlendirmeyi CD22, CD24 veya CD34 pozitif bölmelere kaydırarak CD19 ekspresyonundan bağımsız olarak lökemik popülasyonu yakalamak. CD34, CD10 ve CD20 olgunlaşma kalıplarını değerlendirin ve CD38, CD58, CD81, CD66c, CD123 ve CD73 veya CD304 ifade kalıplarını kullanarak anormal popülasyonları belirleyin.
  7. AML örnekleri için, CD45, yan saçılım, CD34 ve CD117 ekspresyonları kullanılarak blast veya öncül bölge tanımlanır.
  8. CD13, CD33, HLA-DR, CD7, CD56, CD11b ve CD15 dahil miyeloid ve çapraz hatt belirteçlerinin anormal veya asenkron ifadesini değerlendirin.
  9. Elde edilen geçerli CD45-pozitif olayların toplam sayısını payda olarak kullanarak örnek spesifik tespit sınırı (LOD) ve nicelendirme sınırı (LOQ) hesaplayın:
     figure-protocol-2
      figure-protocol-3
  10. Nihai MRD yorumunu üç kategoriden birine ayırın: MRD-pozitif, LOD'un altında veya analitik olarak sınırlı.
    1. Sonucu MRD-pozitif olarak atanmak, net, bitişik bir anormal olay kümesi örnekle spesifik LOD'u aşıyorsa ve normal veya yenilenen hematopoietik popülasyonlardan farklı dahili tutarlı bir immünofenotip gösterdiğinde.
      NOT: Dağınık, kümelenmemiş olayları MRD-pozitif olarak sınıflandırmayın. Başlangıç tanı örnekinden takip edilen lösemi ile ilişkili immünofenotipi (LAIP) ile normalden farklı (DfN) desen tanıma stratejilerini birleştiren entegre bir analiz yaklaşımı kullanın.
    2. Nadir şüpheli olaylar ortaya çıktığında ancak örnekle ilgili rapor eşiğine ulaşmadığında, sonucu LOD'un altında atanın.
    3. Payda yeterli değilse, hemodilyusiyon belirsizse, örnek kalitesi zayıfsa veya analitik öncesi veya analitik sınırlamalar güvenli olumsuz yorumu engelliyorsa sonucu analitik olarak sınırlı olarak atanır.
  11. Tüm MRD-pozitif ve sınırda düşük seviyeli vakaları ikinci bir nitelikli analist tarafından bağımsız olarak inceleyin.
  12. Moleküler karşılaştırıcı verilerini, nicel polimeraz zincir reaksiyonu veya yeni nesil dizileme sonuçları dahil olmak üzere eşleştirilmiş moleküler karşılaştırıcı verilerini incelemeden önce akış sitometrisi yorumunu tamamlayın.

6. Analitik doğrulama metodolojisi

  1. Aynı liz sonrası hücre süspansiyonundan tekrarlanan aliquotlar hazırlayarak analitik tekrarlanabilirliği değerlendirin. En az 30 çift örneği bağımsız olarak edinin ve analiz edinin.
  2. Beklenen düşük yük aralığında altı seviyede seri sulandırmalar hazırlayarak seyreltme doğrusallığını değerlendirin. Gözlemlenen MRD değerleri, seyreltme serisi boyunca beklenen MRD değerleri ile karşılaştırın.
  3. Birden fazla nitelikli operatör ve uyumlu akış sitometreleri arasında referans örnekleri analiz ederek operatörler arası ve enstrümanlar arası tekrarlanabilirliği değerlendirin.
  4. Akış sitometrik ve eşleştirilmiş moleküler MRD yüzdelerini log10 dönüşümü ile dönüştürün, ardından istatistiksel karşılaştırma. Korelasyon analizi ve Bland-Altman analiziyle nicel uyumu değerlendirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Rutin uygulama veri setinin özellikleri

Çalışma döneminde, ardışık 197 örnek uygunluk taraması ve ön analitik kalite değerlendirmesinden geçerek raporlanabilir iş akışına girmiştir. Çalışma kohortunda 98 hasta yer aldı; 62'si (%63,3) B-hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) ve 36'sı (%36,7) akut miyeloid lösemi (AML) ile izlendi. Kohort, 64 erkek (%65,3) ve 34 kadından (%34,7) oluşuyordu ve medyan yaş 32 idi (çeyreklerarası aralık [IQR], 13–...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışmanın temel amacı, akut lösemide ölçülebilir kalıntı hastalığın (MRD) çok renkli akış sitometrik değerlendirmesi için standartlaştırılmış bir iş akışı oluşturmaktı. Güvenilir MRD değerlendirmesi sadece antikor paneli seçimine değil, aynı zamanda tutarlı örnek yönetimi, toplama parametreleri ve veri yorumuna dabağlıdır 11. Bu çalışmanın sonuçları, uyumlu örnek işleme, kontrollü alım derinliği ve paydaya göre ayarlanmış raporlama kriterlerinin rutin klinik l...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Yazar, bu çalışma için laboratuvar olanakları ve teknik destek sağladığı için Neijiang İkinci Halk Hastanesi Klinik Laboratuvar Bölümü'ne teşekkür etmektedir. Yazar ayrıca laboratuvar personeli ve klinik personelin örnek işleme ve veri toplama konusundaki yardımlarını takdir etmektedir. Son olarak, yazar, bu çalışmaya katkıda bulunan kalıntı klinik örnekleri olan hastalara teşekkür etmektedir. Bu araştırma, kamu, ticari veya kar amacı gütmeyen fon kuruluşlarından özel bir fon almamıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Alım tamponuLaboratuvarda hazırlanmış%0,5 BSA ve 2 mM EDTA içeren PBS; son süspansiyon hacmi 500 µLAkış sitometresi alımından önce son süspansiyon
AML Tüp 1 anti-CD117-APC antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: 104D2; florokromun: APC; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseErken miyeloidlerin/blastların tanımlanması
AML Tüp 1 anti-CD13-FITC antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: L138; florokromun: FITC; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseMiyeloit soy ankrajı
AML Tüp 1 anti-CD33-PE antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: P67.6; florokromun: PE; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseMiyeloit soy ankrajı
AML Tüp 1 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: 8G12; florokromun: PerCP-Cy5.5; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseOlgunlaşmamışlık işaretçisi
AML Tüp 1 anti-CD45-APC-H7 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: 2D1; florokromun: APC-H7; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseLökosit omurga işaretçisi ve payda tanımı
AML Tüp 1 anti-CD56-V500 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: NCAM16.2; florokromun: V500; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseAnormal blast ilişkili fenotipleme
AML Tüp 1 anti-CD7-V450 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: M-T701; florokromun: V450; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseKesişebilirlik saptaması
AML Tüp 1 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: G46-6; florokromun: PE-Cy7; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseOlgunlaşma ve alt tip ayrımı
AML Tüp 2 anti-CD117-APC antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: 104D2; florokromun: APC; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseErken miyeloidlerin/blastların tanımlanması
AML Tüp 2 anti-CD11b-V450 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: ICRF44; florokromun: V450; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseOlgunlaşma uyumsuzluğu değerlendirmesi
AML Tüp 2 anti-CD13-FITC antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: L138; florokromun: FITC; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseMiyeloit soy ankrajı
AML Tüp 2 anti-CD15-V500 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: HI98; florokromun: V500; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseNormalden farklı miyeloit patern değerlendirmesi
AML Tüp 2 anti-CD33-PE antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: P67.6; florokromun: PE; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseMiyeloit soy ankrajı
AML Tüp 2 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: 8G12; florokromun: PerCP-Cy5.5; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseOlgunlaşmamışlık işaretçisi
AML Tüp 2 anti-CD45-APC-H7 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: 2D1; florokromun: APC-H7; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseLökosit omurga işaretçisi ve payda tanımı
AML Tüp 2 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antikoruBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD)Klon: G46-6; florokromun: PE-Cy7; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı iseOl

Kaynaklar

  1. Heuser M, et al. 2021 update on measurable residual disease in acute myeloid leukemia: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2021;138(26):2753–67.
  2. Cloos J, Heuser M, Freeman SD. 2025 update on MRD in acute myeloid leukemia: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2025;147(11):1147–64.
  3. Verbeek MWC, Lucio P, Szczepański T. Minimal residual disease assessment in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia by standardized next-generation flow cytometry. eJHaem. 2024;5(2):110–20.
  4. Virk H, Jain P, Sengar M. Flow cytometric MRD assessment in acute lymphoblastic leukemia: Practical advantages and interpretive considerations. Indian J Hematol Blood Transfus. 2023;39(3):350–62.
  5. Brando B. Rules in rare event acquisition: An overview. Cytometry B Clin Cytom. 2019;96(6):448–53.
  6. EuroFlow Consortium. Standardized EuroFlow Protocols [Internet]. EuroFlow; 2025. Available from: https://euroflow.org/protocols/ (accessed 2026 Jan 15).
  7. Tettero JM, Heidinga ME, Mocking TR. Impact of hemodilution on flow cytometry-based measurable residual disease assessment in acute myeloid leukemia. Leukemia. 2024;38(2):297–305.
  8. Buccisano F, et al. Prognostic and therapeutic implications of measurable residual disease in acute myeloid leukemia. Blood. 2012;119(2):332–41.
  9. Schuurhuis GJ, Heuser M, Freeman S. Minimal/measurable residual disease in AML: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2018;131(12):1275–91.
  10. Terwijn M, van Putten WLJ, Kelder A. High prognostic impact of flow cytometric minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia: Data from the HOVON/SAKK AML 42A study. J Clin Oncol. 2013;31(31):3889–97.
  11. Smith AB, Jones CD. Computational models, and tools for future development in flow cytometry. Cancer Metastasis Rev. 2026;45(1):88–102.
  12. Jum’ah HA, Ali S, Hwang Y. Measurable residual disease analysis by flow cytometry: Assay validation and characterization of 385 consecutive cases of acute myeloid leukemia. Cancers. 2025;17(7):1155.
  13. Theunissen P, et al. Standardized EuroFlow flow cytometric method for B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia (BCP-ALL) MRD assessment. Blood. 2017;129(3):347–57.
  14. Haaksma LH, Mocking TR, Kelder A. Flow cytometric and molecular measurable residual disease in acute myeloid leukemia. Leuk Lymphoma. 2025;66(1):45–55.
  15. Das N, Yadav P, Seth T. Analytical appraisal of hematogones in B-ALL MRD assessment using multidimensional dot-plots by multiparametric flow cytometry: A critical review and update. Indian J Hematol Blood Transfus. 2024;40(1):12–24.
  16. Korkina YS, Popov AM, Tserenov DG. False-positive flow cytometric measurable residual disease in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia. Cytometry B Clin Cytom. 2024;106(2):120–31.
  17. Mocking TR, et al. Computational measurable residual disease assessment in acute myeloid leukemia: a retrospective validation in the HOVON-SAKK-132 trial. Leukemia. 2025;39(10):2559–62.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

T pSay 234Say 234Bo De erSayB ALLAML
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.