Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bu protokol, akut lösemide ölçülebilir kalıntı hastalık değerlendirmesi için standartlaştırılmış çok renkli akış sitometrisi iş akışını tanımlar; kontrollü örnek işleme, uyumlu alım parametreleri, ardışık kapı stratejileri ve payda ayarlı yorumu entegre ederek rutin klinik laboratuvarlarda analitik tekrarlanabilirliği artırır.
Ölçülebilir kalıntı hastalık (MRD), akut lösemi yönetiminde önemli bir prognostik göstergedir. Ancak, rutin çok renkli akış sitometri (MFC) değerlendirmesi, hemodilutasyon, tutarsız alım derinliği ve öznel yorum gibi ön-analitik ve analitik değişkenliğe karşı savunmasızdır. Bu makale, B-hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) ve akut miyeloid lösemi (AML) için rutin MRD değerlendirmesi için standartlaştırılmış bir operasyonel iş akışını sunmaktadır. Protokol, entegre hemodilisyon değerlendirmesi ile katı örnek kabul kriterlerini içerir ve kemik iliği ile periferik kan örnekleri için toplu kırmızı kan hücresi lizisi yöntemi kullanır. Analitik standartlaştırma, hastalığa özgü iki tüplü, sekiz renkli antikor panelleri, en az 500.000 CD45 pozitif olayı gerektiren uyumlu edinim hedefleri ve sabit ardışık kapı stratejileriyle sağlanır. Ayrıca, iş akışı hedefe dayalı üç kademeli bir raporlama sistemini desteklemek için paydaya göre ayarlanmış tespit sınırları (LOD) ve nicelik (LOQ) uygular. 197 klinik örnek üzerinde yapılan doğrulama, güçlü tekrarlanabilirlik, sağlam seyreltici doğrusal ve eşleştirilmiş ortogonal moleküler testlerle yüksek uyumluluk göstermiştir. Toplu olarak, bu protokol standartlaştırılmış MRD izleme için pratik bir çerçeve sağlar. rutin klinik laboratuvarlarda kontrollü ön analitik işlem ve uyumlu analitik parametrelerin entegre edilmesiyle standartlaştırılmış MRD izleme için.
Morfolojik remisyona ulaştıktan sonra bile, akut lösemi hastalarının nüks riskini doğru değerlendirmek için ölçülebilir kalıntı hastalığı (MRD) için sürekli izleme gerekmektedir. Geleneksel morfolojik ve sitopatolojik muayeneler, düşük seviyeli kalıntı lökemik popülasyonları tespit etmek için gereken hassasiyetten yoksundur. Sonuç olarak, MRD değerlendirmesi hem akut miyeloid lösemi (AML) hem de B-hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) hastalık izlemesinde vazgeçilmez bir bileşen haline gelmiştir. Avrupa LeukemiaNet tarafından yapılan son öneriler, AML'de güvenilir MRD değerlendirmesinin basit test kullanılabilirliğinden ziyade tekn....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
İnsan örnekleriyle ilgili tüm prosedürler, kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi ve Neijiang İkinci Halk Hastanesi Etik Komitesi tarafından onaylandı (Onay No. PXTS887192). Çalışma, rutin tanı testlerinden sonra elde edilen kimliği dekimsiz kalıntı klinik örnekleri kullandı. Bilgilendirilmiş onay, çalışma hasta bakımını, tedavi tahsisini veya örnek toplama prosedürlerini etkilemediği için muafilik verdi. Protokolde kullanılan kimyasallar, reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.
1. Örnek toplama ve ön analitik değerlendirme
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Rutin uygulama veri setinin özellikleri
Çalışma döneminde, ardışık 197 örnek uygunluk taraması ve ön analitik kalite değerlendirmesinden geçerek raporlanabilir iş akışına girmiştir. Çalışma kohortunda 98 hasta yer aldı; 62'si (%63,3) B-hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) ve 36'sı (%36,7) akut miyeloid lösemi (AML) ile izlendi. Kohort, 64 erkek (%65,3) ve 34 kadından (%34,7) oluşuyordu ve medyan yaş 32 idi (çeyreklerarası aralık [IQR], 13–.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışmanın temel amacı, akut lösemide ölçülebilir kalıntı hastalığın (MRD) çok renkli akış sitometrik değerlendirmesi için standartlaştırılmış bir iş akışı oluşturmaktı. Güvenilir MRD değerlendirmesi sadece antikor paneli seçimine değil, aynı zamanda tutarlı örnek yönetimi, toplama parametreleri ve veri yorumuna dabağlıdır 11. Bu çalışmanın sonuçları, uyumlu örnek işleme, kontrollü alım derinliği ve paydaya göre ayarlanmış raporlama kriterlerinin rutin klinik l.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Yazar, bu çalışma için laboratuvar olanakları ve teknik destek sağladığı için Neijiang İkinci Halk Hastanesi Klinik Laboratuvar Bölümü'ne teşekkür etmektedir. Yazar ayrıca laboratuvar personeli ve klinik personelin örnek işleme ve veri toplama konusundaki yardımlarını takdir etmektedir. Son olarak, yazar, bu çalışmaya katkıda bulunan kalıntı klinik örnekleri olan hastalara teşekkür etmektedir. Bu araştırma, kamu, ticari veya kar amacı gütmeyen fon kuruluşlarından özel bir fon almamıştır.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Alım tamponu | Laboratuvarda hazırlanmış | %0,5 BSA ve 2 mM EDTA içeren PBS; son süspansiyon hacmi 500 µL | Akış sitometresi alımından önce son süspansiyon |
| AML Tüp 1 anti-CD117-APC antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: 104D2; florokromun: APC; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Erken miyeloidlerin/blastların tanımlanması |
| AML Tüp 1 anti-CD13-FITC antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: L138; florokromun: FITC; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Miyeloit soy ankrajı |
| AML Tüp 1 anti-CD33-PE antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: P67.6; florokromun: PE; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Miyeloit soy ankrajı |
| AML Tüp 1 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: 8G12; florokromun: PerCP-Cy5.5; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Olgunlaşmamışlık işaretçisi |
| AML Tüp 1 anti-CD45-APC-H7 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: 2D1; florokromun: APC-H7; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Lökosit omurga işaretçisi ve payda tanımı |
| AML Tüp 1 anti-CD56-V500 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: NCAM16.2; florokromun: V500; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Anormal blast ilişkili fenotipleme |
| AML Tüp 1 anti-CD7-V450 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: M-T701; florokromun: V450; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Kesişebilirlik saptaması |
| AML Tüp 1 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: G46-6; florokromun: PE-Cy7; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Olgunlaşma ve alt tip ayrımı |
| AML Tüp 2 anti-CD117-APC antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: 104D2; florokromun: APC; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Erken miyeloidlerin/blastların tanımlanması |
| AML Tüp 2 anti-CD11b-V450 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: ICRF44; florokromun: V450; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Olgunlaşma uyumsuzluğu değerlendirmesi |
| AML Tüp 2 anti-CD13-FITC antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: L138; florokromun: FITC; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Miyeloit soy ankrajı |
| AML Tüp 2 anti-CD15-V500 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: HI98; florokromun: V500; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Normalden farklı miyeloit patern değerlendirmesi |
| AML Tüp 2 anti-CD33-PE antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: P67.6; florokromun: PE; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Miyeloit soy ankrajı |
| AML Tüp 2 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: 8G12; florokromun: PerCP-Cy5.5; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Olgunlaşmamışlık işaretçisi |
| AML Tüp 2 anti-CD45-APC-H7 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: 2D1; florokromun: APC-H7; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Lökosit omurga işaretçisi ve payda tanımı |
| AML Tüp 2 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antikoru | BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, ABD) / Beckman Coulter (Brea, CA, ABD) | Klon: G46-6; florokromun: PE-Cy7; boyama hacmi: rutin doğrulanmış panelde 5 µL/test, antikor özelinde titrasyon farklı ise | Ol |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.