Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Burada, otomatik görüntüleme ve analiz iş akışlarını kullanarak tekrarlanabilir hücre canlılığı analizi gerçekleştirmek amacıyla, propidyum iyodür (PI)/Hoechst 33342 ile boyanmış hücrelerin standartlaştırılmış yüksek içerikli görüntülemesi ve veri işlemesi için bir protokol sunmaktayız.
Bilimsel araştırma görüntülemesindeki operasyonel varyasyonlardan kaynaklanan düşük tekrarlanabilirlik sorunlarını ve geleneksel yöntemler kullanılarak çok sayıda örneğin analiz edilmesinin karmaşıklığını gidermek amacıyla, HT22 hücrelerinin PI ve Hoechst 33342 ile boyanması, ardından High-Content Imaging System kullanılarak görüntülenmesi ve verilerin analiz edilmesi için bir protokol sunuyoruz. Bu iş akışı, sağlam görüntüleme ayar parametreleri ve sıkı kalite kontrol standartları oluşturmayı amaçlamaktadır. Çalışma, cihazın görüntüleme ayarlarını ve cihaz tarafından sağlanan üç farklı görüntü işleme yöntemi olan Çok Dalga Boylu Hücre Skorlaması (Multi), Canlı-Ölü (Live) ve Özel Modül Düzenleyici (CME) için iş akışını göstermektedir. Görüntü işleme yöntemlerinin etkinliğini sağlamak için geleneksel yöntem olan ImageJ ile karşılaştırmaları ve doğrulamaları yapılmıştır. Çalışma sonuç olarak, PI ve Hoechst çift boyama yöntemini kullanarak hücre canlılığını belirlemek için High-Content Imaging System kullanımına yönelik bir iş akışını özetlemektedir. Tüm görüntüleme ve veri işleme iş akışını standartlaştırarak bu çalışma, bilimsel araştırma görüntülemesinin tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini önemli ölçüde artırmakta, böylece laboratuvarlar arası veri karşılaştırması için sağlam metodolojik destek sağlayarak bilimsel araştırmaları ileriye taşımaktadır.
Yüksek İçerikli Görüntüleme Sistemi, hasarlı veya hasarsız hücrelerin yüksek hızlı görüntülenmesini ve çok parametreli değerlendirmesini sağlayarak modern bilimsel araştırmalarda kritik bir araç görevi görür1,2,3. Çeşitli disiplinlerde yeri doldurulamaz bir rol oynamaktadır. Yaşam bilimleri alanında, araştırmacıların hücrelerin ve dokuların mikroskobik dünyasını keşfetmelerine yardımcı olur4,5. Örneğin, hücre içindeki floresan işaretli moleküllerin ve yapıların hassas bir şekilde tespit edilmesi, hücresel ince yapılar....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu protokol, ticari bir hücre hattı (HT22, ATCC) kullanmaktadır ve insan denekleri veya primer insan dokularını içermemektedir. Bu çalışmada hayvan kullanılmamıştır.
1. Standardize edilmiş numune hazırlama
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Standartlaştırılmış hazırlığın görüntüleme kalitesi üzerindeki etkisi
Cihazın hücre görüntü katmanını güvenilir bir şekilde konumlandırabilmesini sağlamak için plaka parametreleri yapılandırılmıştır. Orta derecede konfluensle tek bir hücre katmanı şeklinde hazırlanan örnekler, farklı objektif büyütmelerinde görüntü odağını kolaylaştırmış; görüntü tanıma ve kantitatif analizi iyileştirmiştir. Standardize edilmiş örnek hazırlama ve optimize edilmiş plaka parametreleri; kenar etk.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Hücre canlılığını belirlemek için PI ve Hoechst çift boyama yönteminin kullanılması durumunda, örneğin yüksek içerikli analiz cihazı, yerleşik algoritma modüllerini kullanarak aynı partideki hücre canlılığını hızlı ve yüksek verimlilikte hesaplayabilir. Bu yöntemin düşük örnek hacmi, düşük maliyet, minimum hücre hasarı, zayıf floresan ağarma, sönümlenmeye karşı direnç ve birden fazla görüntü yakalayabilme yeteneği gibi çeşitli avantajları vardır. Ek olarak, 96 kuyucuklu bir plaka için görüntüleme süresi genellikle sadece.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler. Makalenin çevirisi sırasında Zhipu AI, yalnızca çeviri amacıyla kullanılmış; araştırma verileri, deneysel sonuçlar veya temel akademik içerik oluşturmak için kullanılmamıştır. Yazarlar, makalenin içeriğiyle ilgili tüm sorumluluğu üstlenmektedir.
Yazarlar, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Okul Vakfı tarafından sağlanan destek için teşekkür ederler. Yazarlar, MPRC2022034 hibe desteği için teşekkür ederler. Bu finansman, basit obez fareleri tedavi etmek için Erchen Dekoksiyonu içindeki bağırsak bakterileri için 3B dinamik görüntüleme yöntemi geliştirmek amacıyla kullanılmıştır. Yazarlar, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Çin Tıbbı ve Eczacılığı İnovatif Enstitüsü ile Disiplinlerarası Çalışmalar Enstitüsü tarafından sağlanan araştırma platformunu takdirle karşılamaktadır.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1,5 mL Santrifüj Tüpü | Labigic Technology Co., Ltd. | MCT-001-150 | |
| 1000 µL Pipet Ucu | Labigic Technology Co., Ltd. | 35423003E | |
| 15 mL Santrifüj Tüpü | Labigic Technology Co., Ltd. | CT-002-15A | |
| 2,5 µL Pipet Ucu | Qingdao Haier Biomedical Co., Ltd. | B10T | |
| 200 µL Pipet Ucu | Labigic Technology Co., Ltd. | T-001-200 | |
| 50 mL Santrifüj Tüpü | Labigic Technology Co., Ltd. | CT-002-50A | |
| 96 Kuyucuklu Hücre Kültür Plakası | Corning Incorporated | 3599 | |
| Ayarlanabilir Tek Kanallı Pipet, 0,1–2,5 μL | Eppendorf SE | 3120000216 | |
| Ayarlanabilir Tek Kanallı Pipet, 100–1000 μL | Eppendorf SE | 3120000267 | |
| Ayarlanabilir Tek Kanallı Pipet, 20–200 μL | Eppendorf SE | 3120000259 | |
| Ayarlanabilir Tek Kanallı Pipet, 2–20 μL | Eppendorf SE | 3120000232 | |
| Hücre Kültür Kabı | Corning Incorporated | 430167 | |
| Kriyojenik Tüpler | Labigic Technology Co., Ltd. | BS-20-ST | |
| Dimetil sülfoksit (DMSO) | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | D8371 | |
| Dulbecco Modifiye Eagle Besiyeri (DMEM) | Life Technologies Limited | 11966-025 | Bu çalışmada, tam DMEM; %10 FBS, %1 Penisilin-Streptomisin Çözeltisi ve %89 DMEM kullanılarak hazırlanmıştır. |
| ESCO CelCulture CO2 İnkübatörü | Esco Micro Pte. Ltd. | CCL-170B-8 | |
| Fetal Bovin Serum (FBS, Süper İnce) | Procell Life Science & Technology Co.,Ltd. | 164210-50 | |
| Hoechst 33342 Floresan Boyaları | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | B8040 | |
| HT22 hücresi | Procell Life Science & Technology Co.,Ltd. | CL-0697 | |
| ImageJ | National Institutes of Health | ImageJ, makalede kullanılan görüntü işleme yazılımlarından biridir. | |
| ImageXpress Micro Konfokal Yüksek İçerikli Görüntüleme Sistemi | Molecular Devices, LLC | ImageXpress Micro Confocal | Makalede, cihaz ismi yerine "Yüksek İçerikli Görüntüleme Sistemi" ifadesini kullanın. |
| Düşük hızlı dondurma santrifüjü | Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd. | L530R | |
| MetaXpress Yüksek İçerikli Görüntüleme ve Analiz Yazılımı | Molecular Devices, LLC | Yazılım, ImageXpress® Micro Konfokal Yüksek İçerikli Görüntüleme Sistemi'nin tamamlayıcısıdır. Makalede "Cihazla birlikte sağlanan analiz yazılımı" ifadesi bu yazılıma atıfta bulunmaktadır. | |
| OptiMair Dikey Laminer Akış Kabini | Esco Micro Pte. Ltd. | ACB-4E1 | |
| Parafilm M | Pechiney Plastic Packaging Inc. | PM996 | |
| PBS | Shanghai Yuchun biology science and technology co., ltd | YC-5013 | |
| Penisilin-Streptomisin Çözeltisi | Procell Life Science & Technology Co.,Ltd. | PB180120 | |
| Propidyum İyodür Çözeltisi (PI) | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | C0080 | |
| Trypsin-EDTA Çözeltisi | BasalMedia Technology Co.,Ltd. | S310KJ |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında