Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İnsan göbek damarı endotel hücrelerini kullanan mikrotaşıyıcı boncuk tabanlı üç boyutlu anjiyogenez modeli

131 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/71877

⸱

7 Ağustos 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Yunnan First People's Hospital, 2The Affiliated Hospital of Kunming University of Science and Technology, 3The Affiliated Stomatology Hospital of Kunming Medical University, 4Yunnan Key Laboratory of Stomatology, Kunming Medical University, 5Kunming Stomatological Hospital North City District Branch, 6Shiyan Key Laboratory of Comprehensive Prevention and Treatment of Oral Cancer, Department of Stomatology, Taihe Hospital, Hubei University of Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, insan göbek damarı endotel hücreleri kullanılarak mikrotaşıyıcı boncuk tabanlı üç boyutlu anjiyogenez modelini tanımlar. Bu test, endotel filizlenmesinin ve lümen benzeri yapı oluşumunun doğrudan görselleştirilmesine olanak tanır ve anjiojenik mekanizmalar ile terapötik müdahalelerin çalışmalarına uygulanabilir.

Özet

Anjiyogenez, endotel hücre aktivasyonu, göç, uzama, lümen oluşumu, dallanma ve anastomozu içeren çok aşamalı biyolojik bir süreçtir. Geleneksel iki boyutlu kültür sistemleri, ilaçların, genlerin veya kültür koşullarının ön değerlendirmesinde faydalıdır, ancak üç boyutlu ekstrasellüler bir matriks içinde endotel morfogenezinin mekansal organizasyonunu yeterince özetleyemezler. Mevcut protokol, insan göbek ven endotel hücreleri (HUVEC) kullanılarak mikrotaşıyıcı boncuk tabanlı üç boyutlu anjiyojenez testini tanımlar. HUVEC'ler önce kimyasal olarak bağlanmış asit-denatüre domuz tip I kolajen içeren mikrotaşıyıcı boncuklara tohumlanır ve ardından bazaz zar matrisine gömülür. Daha sonra jelin üzerine oral mukozal fibroblastlar ekilir; böylece endotel filizlenmesi ve damar benzeri yapı oluşumu için parakrin destek sağlanır. Kültür ortamı her 2 günde bir değiştirilir ve filizlenme davranışı ile anjiojenik fenotipler ters mikroskopi ile izlenir. Uygun kültür koşullarında, endotel filizleri birkaç gün içinde ortaya çıkar, ardından lümen benzeri yapılar ve filizler arası bağlantılar oluşur. Bu yöntem, endotel morfogenezinin in vitro çalışmaları için pratik ve tekrarlanabilir bir platform sağlar ve gen manipülasyonu, farmakolojik müdahale ve hastalık modellemesi araştırmalarında da uygulanabilir.

Giriş

Endotel filizlenmesi, anjiyogenezde önemli bir olaydır ve mevcut damar yapılarından endotel hücrelerinin ortaya çıkışı, göçü, çoğalması ve hizalanmasını içerir; ardından lümen oluşumu ve birbirine bağlı damarvari ağlarınkurulmasını içerir 1,2. Geleneksel iki boyutlu kültür sistemleri ve jel bazlı tüp oluşum testleri teknik olarak basit olsa da, endotel hücrelerinin mekânsal yeniden yapılanmasını üç boyutlu bir mikro ortamda yeniden şekillendirme kapasitesisınırlıdır 3,4. Klasik mikrotaşıyıcı boncuk tabanlı üç boyutlu filizlenme testi, endotel filizlenmesi, uzama, lümen oluşumu ve ağ montajı dahil olmak üzere anjiyogenezin in vitro birkaç aşamasını yeniden üretir ve bu nedenle anjiyogenez araştırmalarında yaygın olarak kullanılan bir yöntem haline gelmiştir.

Mevcut protokolde, normal insan göbek ven endotel hücreleri kullanılarak üç boyutlu mikrotaşıyıcı boncuk tabanlı filizlenme modeli oluşturulmuştur. Daha önce bildirilen endotel mikrotaşıyıcı boncuk filizlenmetestleri 5,6,7'ye dayanarak, bu yöntem endotel hücre kaplamasının temel çerçevesini mikrotaşıyıcı boncuklara yerleştirerek, üç boyutlu bir matrise gömülmesini ve fibroblast örtü kültürünü korurken, prosedürü basitleştirmek ve rutin görüntülemeyi kolaylaştırmak için geleneksel fibrin jelinin yerine bazal membran matrisi koymaktadır. Bu değiştirilmiş protokolde bazal zar matrisi, birkaç pratik ve biyolojik nedenle seçilmiştir. Deneysel olarak, fibrin jeli hazırlamak için gereken ek polimerizasyon adımları olmadan hızlı jel oluşumu, basit boncuk gömümü ve pratik rutin mikroskobik gözlem sağlayan kullanıma hazır üç boyutlu bir matriks sağlar. Biyolojik olarak, bazal zar matris, endotel hücre yapışmasını, göçü, filiz uzanmasını ve lümen benzeri yapı oluşumunu destekleyen ekstrahücre matris bileşenleri içerir. Bu nedenle, bu modifikasyon, endotel filizlenme davranışının doğrudan görselleştirilmesi, anjiyojenik fenotiplerin karşılaştırılması ve üç boyutlu kültür ortamında farmakolojik veya genetik müdahalelerin değerlendirilmesi gerektiren çalışmalar için uygundur. Ancak, bazal membran matrisi matris bileşimi, mekanik özellikleri, bozunabilirliği ve biyoaktif ipuçları açısından fibrin jelinden farklı olduğundan, mevcut test, klasik fibrin tabanlı testin doğrudan yerine modifiye edilmiş bir mikrotaşıyıcı boncuk tabanlı filizlenme modeli olarak yorumlanmalıdır. Bu matrisle ilgili farklılıklar, filizlenme kinetiklerini, lümen kararlılığını ve ağ morfolojisini etkileyebilir ve farklı üç boyutlu anjiyogenez sistemleri arasındaki sonuçları karşılaştırırken dikkate alınmalıdır. Bu model, endotel filizlenme davranışını üç boyutlu gözlemlemek için uygundur ve farmakolojik müdahale, gen manipülasyonu ve anjiojenik mekanizmalar çalışmalarına da uygulanabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu protokolte kullanılan insan göbek damarı endotel hücreleri, Yunnan Eyaleti İlk Halk Hastanesi Doğum Bölümü'nden toplanan insan göbek kordonu dokularından izole edilip kültürlenmiştir. Örnek toplamadan önce tüm bağışçılardan yazılı bilgilendirilmiş onay alındı. İnsan kaynaklı materyallerle ilgili tüm prosedürler, Yunnan Eyaleti İlk Halk Hastanesi'nin Tıbbi Etik Komitesi tarafından onaylandı (onay no. KHLL2023-KY198). İnsan ağız mukozal fibroblastları (HOMF'ler), Kunming Tıp Üniversitesi Bağlı Stomatoloji Hastanesi'nde Dr. Jiemei Zhai'nin araştırma grubu tarafından nazikçe sağlanmıştır. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Hücre hazırlığı

  1. İnsan göbek damarı endotel hücrelerinin (HUVEC) kültürü, ek fetal sığır serumu (FBS) ile takviye edilip, %5 CO₂ içeren nemlendirilmiş bir kuluçka içinde, 37 °C'de %10 nihai konsantrasyona ulaşın. Test için kullanılan hücreler kontaminasyondan arınmış, stabil büyüme göstermeli ve logaritmik büyüme aşamasında olmalıdır. 4–6. pasajlarda hücreler kullanılır.
  2. İnsan ağız mukoza fibroblastları (HOMF) yüksek glikozlu bazal ortamda, %10 fetal sığır serumu (FBS) ile 37 °C'de nemlendirilmiş bir kuluçka içinde, %5 CO₂ ile kültürlenmelidir. 4–6. pasajlarda hücreler kullanılır.
  3. Mikrotaşıyıcı boncuk kaplamasından önce, her iki hücre tipinin uygun birleşimde olduğunu doğrulayın. Aşırı birleşen kültürlerden veya aşırı enzimatik sindirimden kaçının, çünkü bunlar sonraki filizlenmeyi olumsuz etkileyebilir.

2. Mikrotaşıyıcı boncukların hazırlanması

  1. 0,5 g kuru mikrotaşıyıcı boncukları 50 mL PBS ile en az 3 saat hidretleyin. Yıkamadan sonra, boncukları 50 mL PBS ile yeniden askıya alın ve yaklaşık 3 × 10⁴ boncuk/mL olarak 10 mg/mL mikrotaşıyıcı boncuk süspansiyonu elde edilir.
  2. Süspansiyonu silikonlu cam şişeye aktarın, 115 °C'de 15 dakika otoklavla sterilize edin ve 4 °C'de kullanana kadar saklayın.
  3. Endotel hücre kaplamasından önce, depolama çözümünü çıkarın ve boncukları steril PBS ile yıkayın. Boncukları endotel hücresi büyüme ortamında 37 °C'de en az 30 dakika dengelendirin.
  4. Dengelenmiş boncukları hemen kullanmadan önce nazikçe tekrar askıya alın, böylece tortul oluşması ve boncuk birikmesini önleyin.
  5. Hücre kaplamasından önce, boncuk süspansiyonunun küçük bir aliquotunu ters mikroskop altında inceleyin. Boncuklar tamamen nemlenmiş, eşit şekilde asılı ve görünür agregalar veya parçalanmış parçacıklardan arınmış olduğunda devam edin.

3. Endotel hücrelerini mikrotaşıyıcı boncuklara kaplamak

  1. HUVEC'leri tripsin kullanarak ayırın ve hücreleri endotel hücre büyüme ortamına yeniden süsküyer.
  2. Mikrotaşıyıcı boncukları her boncuk başına 1.500 hücre yoğunluğuyla kaplayın. 3 ×10 6 HUVEC, 2.000 mikrotaşıyıcı boncukla 1,5 mL endotel hücresi büyüme ortamında karıştırın.
  3. Hücre-boncuk karışımını mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve hücre kültüründe 12 saat kuluçka yapın. Tam 12 saatlik kuluçka dönemi boyunca, hücreler ile boncuklar arasında yeterli temas sağlamak ve endotelyal hücrelerin tekiz tutunmasını sağlamak için tüpü her 20 dakikada bir nazikçe ters çevirin.
  4. 12 saat sonra, kaplı boncukları 4 mL endotel hücre büyüme ortamı içeren 25cm 2 hücre kültür şişesine aktarın ve endotel hücrelerinin mikrotaşıyıcı boncuk yüzeyine sıkı tutunmasını sağlamak için gece boyunca kuluçkaya devam eder.
  5. Gömülmeden önce, temsil eden kaplamalı boncukları ters bir mikroskop altında inceleyin. Yalnızca incelenen boncukların %80'inden fazlası boncuk yüzeyinde sürekli ve nispeten düzgün endotel hücre tabakası gösterdiğinde, minimum serbest yüzen hücreler, belirgin hücre kümeleri yok ve ciddi boncuk toplanması olmadığında matris gömülmesine devam edin. Gömülme için düzensiz kaplamalı, büyük hücre kümeleri veya geniş toplanmış boncuklar kullanılmamalıdır.
  6. Eğer boncuklar şişenin dibine yapışırsa, şişeyi hafifçe sallayarak serbest bırakın. Güçlü pipetlemeden kaçının; bu boncuk toplanması veya hücre ayrılmasına neden olabilir.

4. Kaplamalı boncukların üç boyutlu bir matrise gömülmesi

  1. Endotel hücresi kaplı mikrotaşıyıcı boncukları 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın ve boncukların yerçekimiyle yerleşmesine izin verin. Fazla ortamı çıkarın ve uygun miktarda taze medium ekleyin.
  2. Mikrotaşıyıcı boncuk süspansiyonu, önceden soğutulan bazaz membran matrisi ile 1:1 (v/v) oranında karıştırarak nihai boncuk konsantrasyonu 500 boncuk/mL elde edilir.
  3. 24 kuyuluğa sahip bir plakanın her kuyusunun ortasına 100 μL matris boncuk süspansiyonu eklenerek karışımın kuyu duvarına temas etmeden tek bir kubbe şeklinde jel damlası oluşturmasını sağlar. Süspansiyonu dağıtmadan hemen önce nazikçe karıştırın ve hava kabarcıkları oluşmamasını önleyin.
  4. 24 kuyruklu plakayı oda sıcaklığında 5 dakika bekleyin ki jelleşme ve jel damlasının stabilizasyonu sağlansın. Daha sonra plakayı 37 °C'de %5 CO₂ içinde dik pozisyonda 15 dakika kuluçka altına alın, ardından tam jelleşme ve doğru jel oluşumunu sağlamak için ters pozisyonda ek 15 dakika kuluçka yapın.
  5. Jel tamamen katılaştıktan sonra hemen fibroblast örtü kültürüne geçin.

5. Fibroblast örtü kültürü

  1. 3 × 10⁴ insan ağız mukozal fibroblastını (HOMF) 1 mL endotel hücre büyüme ortamına askıya alın ve hücre süspansiyonunu her kuyunun duvarı boyunca nazikçe ekleyin; böylece hücreler jel yüzeyine doğrudan zarar vermeden dağılmasına olanak tanır.
  2. %5 CO₂ içeren nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 37 °C sıcaklıkta endotel hücre büyüme ortamında kuluçkaya devam edin. İnsan ağız mukozal fibroblastları, endotel filizinin uzanması, stabilizasyonu ve üç boyutlu kültür sisteminde damar benzeri yeniden yapılanmanı destekleyen stromal türevli parakrin sinyaller sağladıkları için destek hücreleri olarak kullanılır.

6. Kültür bakımı ve mikroskobik gözlem

  1. Kültür ortamını her 2 günde bir değiştirin. Ara madde değişimleri sırasında, kullanılmış ortamı yavaşça aspire edin ve jelin bozulmaması için kuyunun duvarına taze kültür ortamı ekleyin.
  2. Kültürleri her gün veya iki günde bir parlak alan veya faz kontrastı modunda ters mikroskop altında gözlemleyin. Boylamasına nicel analiz için, 7. günde her kuyunun birden fazla görüş alanı seçin ve aynı önceden tanımlanmış alanları 9. ve 11. günlerde fotoğraflayın.
  3. Optimal kültür koşullarında, belirgin endotel filizlenme genellikle 4–6. günlerde gözlemlenir, lümen benzeri yapılar 5–7. günlerde ortaya çıkar ve 7. günden sonra birbirine bağlı mikrovasküler benzeri ağlar yavaş yavaş oluşur.
  4. Başarılı filizlenmeyi, boncuk yüzeyinden çevresindeki üç boyutlu matrise radyal olarak büyüyen çoklu endotel uzantılarının varlığı olarak tanımlayın. Bir filiz, yalnızca boncuk yüzeyinin dışına net bir şekilde uzandığında ve boncukla ilişkili endotel hücre tabakasına bağlı kaldığında sayılmalıdır.
  5. Lumen benzeri yapı oluşumunu, görünür merkezi bir boşluk veya tüp benzeri morfolojiye sahip uzun endotel yapılarının ortaya çıkışı olarak tanımlayın. Filizler arası bağlantılar, bitişik filizler arasında oluşan doğrudan temaslar veya sürekli yapılar olarak tanımlanır.
  6. Yoğun hücre ölümü, şiddetli boncuk toplanması (boncuk) birikmesi, jel yapısı bozulmuş, bol kabarcıklar, matriks çöküşü veya sadece kısa, düzensiz hücre çıkıntıları olan kültürler optimal olmayan olarak değerlendirilmeli ve nicel analizden dışlanmalıdır.

7. Görüntü edinimi ve nicel analiz

  1. 7. günde her kuyunun birden fazla görüş alanını seçin ve 9. ve 11. günlerde aynı önceden tanımlanmış alanlardan görüntüler alın. Görüntüler, her zaman aynı büyütme, pozlama ayarları ve görüntüleme koşullarıyla toplanmalıdır.
  2. Mikrotaşıyıcı boncuk başına filizlenme sayısını ve vaskülerleşmiş alanı nicelikle ölçün.
    1. Vaskülerize alan ölçümü için açık kaynak görüntü analiz yazılımı kullanın. Alınan görüntüyü açın ve damarlanmış ilgi bölgesinin (ROI) sınırını poligon veya serbest el seçim aracıyla manuel olarak belirleyin. Seçilen yatırım getirisini ROI yöneticisine ekleyin.
    2. Görselleştirme için, önerilen yatırım getirisini göstermek için ilgi alanına bağlı bir görselleştirme eklentisi kullanın. Ölçüm ayarlarında alan ölçümü etkinleştirin ve damarlanmış alanı elde etmek için seçilen yatırım getirisi ölçün. Tüm görsellere aynı analiz ayarlarını uygulayın.
    3. Anjiojenik hız analizi için, 7. günün vaskülerleşmiş alanını temel olarak kullanın ve 9. ve 11. günlerdeki vaskülerize alandaki göreli değişimi hesaplayın.
  3. Üç gözlemci tarafından bağımsız olarak bireysel filizlenme sayısını sayın ve analiz için ortalama değeri kullanın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Üç boyutlu HUVEC modelinde anjiyogenez

Başarılı kültürlerde, endotel hücreleri mikrotaşıyıcı boncukların yüzeyinde eşit şekilde dağılımlıdır ve belirgin bir boncuk toplanması gözlemlenmez. Dinamik gözlem, 7, 9 ve 11. günlerde ilerleyici endotel filizlenmesi ve mikrovasküler benzer ağ oluşumunu gösterdi (Şekil 1A). Nicel analiz, bu modeldeki ilerleyici anjiojenik yanıtı daha da doğruladı. 7. gün temel alındığında, ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mevcut protokol, mikrotaşıyıcı boncuklara dayalı modifiye edilmiş üç boyutlu endotel filizlenme modelini tanımlamaktadır. Şekil 3, deneysel iş akışının şematik bir genel bakışını sunar. Protokol, Nakatsu ve Hughes tarafından bildirilen klasik anjiyogenez testinden uyarlanmış ve mevcut çalışmanın 8,9 hedeflerine uygun optimize edilmiştir. Klasik sistemde, endotel hücreleri kollajen kaplı mikro...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Yazarlar, Yunnan Eyaleti Zhang Yi Uzman Çalışma Merkezi'nden (202305AF150444) ve Kunming Tıp Üniversitesi Lisansüstü Eğitim İnovasyon Fonu'ndan (2025S234) maddi destek almaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1.5 mL mikrosantrifüj tüpüBeyotimeFTUB306Berrak, nükleaz içermeyen
15 mL santrifüj tüpüHaier311005Konik tabanlı, steril, torba paketli
24 kuyu hücre kültür plakasıHaier612003Düz tabanlı, doku kültürü için işlem görmüş, bireysel olarak sarılmış, yapışkan hücre kültürü için
Otomatik hücre sayım slaytıCountstar12-0005-50Otomatik hücre sayacı için tek kullanımlık slayt, kutuda 50 slayt
CO2 hücre kültür inkübatörüThermo Fisher Scientific311037 °C ve %5 CO2 ile hücre kültürü için kullanılır
Cytodex 3 mikro taşıyıcılarCytiva17048503Kuru toz; kollajen kaplı dekstran mikro taşıyıcı boncuk
Noktalı Çizgi eklentisiYokYokEtkilenilmesi gereken bölge görselleştirme eklentisi, çevrelenmiş vaskülerize alanların görüntülenmesi için kullanılır
Dulbecco'nun Modifiye Edilmiş Kartal Ortamı (DMEM), yüksek glukozEvaCell (EVA Life Sciences)E2102DMEM temel (1×), 4.5 g/L D-glukoz, L-glutamin ve 110 mg/L sodyum pirüvat içerir, 500 mL
Endotelyal Hücre Ortamı (ECM)ScienCell Research Laboratories1001Ek FBS ile takviye edilmiş endotel hücre kültürü ortamı, kullanımdan önce nihai konsantrasyon %10 olacak şekilde
Fetal boğa serumu (FBS)Gibco10099141CKalifiye, tek kullanımlık format, Avustralya menşeli, 500 mL
İnsan oral mukoza fibroblastları (HOMF)Jiemei Zhai araştırma grubu, Kunming Tıp Üniversitesi Bağlı Diş Hekimliği HastanesiYokİnsan oral mukozadan izole edilmiş primer fibroblastlar; başka bir laboratuvar tarafından sağlanmıştır
İnsan göbek kordonu ven endotel hücreleri (HUVEC)Kendi laboratuvarımızYokİnsan göbek kordon damarlarından izole edilmiş primer endotel hücreler; katalog numarası yok
ImageJ yazılımıUlusal Sağlık Enstitüleri (NIH), ABDYokAçık kaynak yazılım; sürüm 1.54p
Ters çevrilmiş mikroskopOlympus, JaponyaYokParlak alan, faz kontrastı ve floresan görüntüleme için
Lazer taramalı konfokal mikroskopNikon, JaponyaYokKonfokal görüntüleme için; model belirtilmemiş
Matrigel bazal membran matrisiCorning354262Yüksek konsantrasyon (HC), fenol kırmızısız, LDEV içermeyen, 10 mL
Penisilin-Streptomisin (Pen-Strep)Gibco15140-122Hücre kültürü için penisilin-streptomisin çözeltisi, 100×, 100 mL
Fosfat tamponlu salin (PBS)LiJi BioAC08L0111×, steril, 500 mL
T25 hücre kültürü şişesiABCBIOABC707008T25, havalandırmalı kapak, doku kültürü için işlem görmüş, yapışkan hücre kültürü için
Tripsin-EDTA (%0.25)Gibco25200-056%0.25 tripsin-EDTA çözeltisi, 100 mL

Kaynaklar

  1. Shaw P, et al. VEGF signaling: role in angiogenesis and beyond. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 2024;1879(2):189079.
  2. Dudley AC, Griffioen AW. The modes of angiogenesis: an updated perspective. Angiogenesis. 2023;26(4):477-480.
  3. Naderi-Meshkin H, et al. Vascular organoids: unveiling advantages, applications, challenges, and disease modelling strategies. Stem Cell Res Ther. 2023;14(1):292.
  4. Davis GE, Kemp SS. Extracellular matrix regulation of vascular morphogenesis, maturation, and stabilization. Cold Spring Harb Perspect Med. 2023;13(4):a041156.
  5. Berndt S, et al. Angiogenesis is differentially modulated by platelet-derived products. Biomedicines. 2021;9(3):251.
  6. Eglinger J, Karsjens H, Lammert E. Quantitative assessment of angiogenesis and pericyte coverage in human cell-derived vascular sprouts. Inflamm Regen. 2017;37:2.
  7. Carpentier G, et al. Angiogenesis Analyzer for ImageJ: a comparative morphometric analysis of endothelial tube formation assay and fibrin bead assay. Sci Rep. 2020;10:11568.
  8. Boscolo E, et al. NRASQ61R mutation in human endothelial cells causes vascular malformations. Angiogenesis. 2022;25(3):331-342.
  9. Nakatsu MN, Hughes CCW. An optimized three-dimensional in vitro model for the analysis of angiogenesis. Methods Enzymol. 2008;443:65-82.
  10. Gordon E, Schimmel L, Frye M. The importance of mechanical forces for in vitro endothelial cell biology. Front Physiol. 2020;11:684.
  11. Huang X, et al. Current advances in 3D dynamic cell culture systems. Gels. 2022;8(12):829.
  12. Langhans SA. Three-dimensional in vitro cell culture models in drug discovery and drug repositioning. Front Pharmacol. 2018;9:6.
  13. Friend NE, McCoy AJ, Stegemann JP, Putnam AJ. A combination of matrix stiffness and degradability dictate microvascular network assembly and remodeling in cell-laden poly(ethylene glycol) hydrogels. Biomaterials. 2023;295:122050.
  14. Wang WY, et al. Direct comparison of angiogenesis in natural and synthetic biomaterials reveals that matrix porosity regulates endothelial cell invasion speed and sprout diameter. Acta Biomater. 2021;135:260-273.
  15. Liu J, et al. Synthetic extracellular matrices with tailored adhesiveness and degradability support lumen formation during angiogenic sprouting. Nat Commun. 2021;12(1):3402.
  16. Boos F, et al. The endothelial-enriched lncRNA LINC00607 mediates angiogenic function. Basic Res Cardiol. 2023;118(1):5.
  17. Lee S, et al. Angiogenesis-on-a-chip coupled with single-cell RNA sequencing reveals spatially differential activations of autophagy along angiogenic sprouts. Nat Commun. 2024;15:230.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

BiyolojiSayı 234Sayı 234Boş DeğerSayımikrotaşıyıcı boncuklarüç boyutlu hücre kültürüendotelyal tomurcuklanmabazal membran matrisifibroblast kokültürülümen oluşumu

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.