Yöntem makalesi

Farelerde Diz Osteoartriti için Elektroakupunktur Tedavisinin Multimodal Değerlendirmesi

13 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/71901

⸱

6 Ekim 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Acupuncture and Moxibustion, Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 3Institute of Science and Technology for Brain-Inspired Intelligence, Fudan University, 4Renji Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, kıkırdak boyama ve Uluslararası Osteoartrit Araştırma Derneği (OARSI) skorlaması da dahil olmak üzere, elektroakupunktur sonrası osteoartritli farelerin multimodal ve boylamsal değerlendirmesi için davranışsal ve görüntüleme tekniklerini birleştirmektedir.

Özet

Osteoartrit; yaygın olarak dizi etkileyen; ağrı, şişlik, sertlik ve fonksiyonel kısıtlılığa neden olan kronik dejeneratif bir eklem hastalığıdır. Sinovyal inflamasyon ve periartiküler kaslardaki değişiklikler, hastalığın başlangıcına ve ilerlemesine katkıda bulunur. Klinik kanıtlar, elektroakupunkturun lokal inflamasyonu hafifletebileceğini ve kıkırdak metabolizmasını modüle edebileceğini göstermektedir. Bu çalışmada, farelerde medial menisküsün cerrahi destabilizasyonu ile diz osteoartriti indüklenmiştir. Sonuçlar; rotarod testi, ultrason, kızılötesi termografi, manyetik rezonans görüntüleme ve histolojik boyamadan oluşan multimodal bir protokol kullanılarak değerlendirilmiştir. Eklem boşluğu hacmi ve cilt sıcaklığı boylamsal olarak izlenmiş; periartiküler kas sinyal değişikliklerini ve kıkırdak patolojisini değerlendirmek için son nokta manyetik rezonans görüntüleme ve Safranin O-Fast Green boyaması kullanılmıştır. Elektroakupunktur; iyileşmiş motor performans, azalmış eklem şişliği, daha yüksek lokal cilt sıcaklığı, manyetik rezonans görüntülerinde daha az belirgin periartiküler kas sinyal değişiklikleri ve daha düşük kıkırdak dejenerasyonu skorları ile ilişkilendirilmiştir. Bu bulgular, preklinik bir fare modelinde elektroakupunktur ile ilişkili sonuçları değerlendirmek için bu multimodal protokolün kullanımını desteklemektedir.

Giriş

Diz osteoartriti (KOA), dünya çapında yaklaşık 250 milyon kişiyi etkileyen en yaygın osteoartiküler hastalıktır1. Patolojik özellikleri arasında progresif kıkırdak dejenerasyonu ve sinovyal proliferasyon yer alır ve klinik olarak ağrı, şişlik ve fonksiyonel bozulma ile kendini gösterir2,3.

Osteoartrit (OA) uzun süre inflamatuar olmayan bir eklem bozukluğu olarak kabul edilmiştir, ancak günümüzde çoğu hastada saptanabilen sinovit ile birlikte inflamatuar bir bileşene sahip olduğu bilinmektedir. İnterlökin (IL)-1β ve IL-18 gibi pro-inflamatuar sitokinlerin, reaktif oksijen türleri ve biyomekanik stresle birlikte patolojik sürece katkıda bulunduğu düşünülmektedir4. İnflamasyona sıklıkla, klinik olarak kızarıklık, sıcaklık ve şişkinlik şeklinde kendini gösteren artmış lokal kan akışı eşlik eder5. İnflamasyon, kıkırdak yıkımını ve fonksiyonel kaybı hızlandırmanın ötesinde, özellikle hastalığın erken evrelerinde aktif olabilir. Bu nedenle, inflamatuar durumun zaman içinde izlenmesi, temel mekanizmayı hedefleyen tedavi stratejilerini bilgilendirebilir ve evreye uygun yönetime olanak sağlayabilir6,7. Fare dizlerinde ultrason (US) taraması kullanan önceki çalışmalar, tibial ve femoral kondiller arasında üçgen bir bölge tanımlamıştır. Histolojik analizler, bu bölgenin sinovyum, menisküs ve yağ pedi dahil olmak üzere yumuşak dokuları ve aynı zamanda sinovyal sıvı ile dolu boşlukları içerdiğini doğrulamıştır. Ultrasonla saptanan bu bölge, yukarıda belirtilen yumuşak doku alanlarını kapsayan interartiküler hacim olarak tanımlanmaktadır8.

Ayrıca sıcaklık, eklem inflamasyonunun ilerlemesini doğrudan yansıtan temel bir fiziksel parametredir. Lokal sıcaklık artışı, inflamasyonun dört temel belirtisinden biridir ve termografik görüntüleme, bu termal değişimlerin hassas bir şekilde tespit edilmesini ve nicelendirilmesini sağlar9. Yakın tarihli bir sistematik inceleme, cilt yüzey sıcaklığı ile hem inflamatuar hem de dejeneratif eklem hastalıkları arasındaki korelasyonun altını çizmiş10 ve kızılötesi termografinin (IRT) artrit araştırmaları ve klinik yönetimindeki faydasını daha da kanıtlamıştır11. Dahası IRT, doku perfüzyonu ve metabolik aktivite ile ilişkili dolaylı bir ölçüm sağlar ve terapötik yanıtların izlenmesinde yararlı olabilir.

Bu çalışmada, OA fare modelinde elektroakupunkturun (EA) etkilerini değerlendirmek için rotarod testi, US, IRT ve manyetik rezonans görüntülemeyi (MRI) birleştirdik. Bu multimodal yaklaşım; motor performansın, eklem morfolojisinin, termal değişikliklerin ve yumuşak doku inflamasyonunun eş zamanlı olarak değerlendirilmesine olanak sağlamış olup, bu veriler yalnızca histoloji ile elde edilememektedir. Önemli bir nokta olarak bu panel, minimum ek maliyet veya iş gücü ile birden fazla biyolojik düzeyde tamamlayıcı bilgiler sunmaktadır. Bu yönüyle, özellikle incelenen müdahalenin yalnızca mütevazı etkiler üretmesinin beklendiği veya yanıtın zamansal profilinin belirsiz olduğu durumlarda, zaman içinde tekrarlanan, noninvaziv izleme gerektiren preklinik çalışmalar için oldukça uygundur. Bildiğimiz kadarıyla bu çalışma, OA'da elektroakupunktura verilen terapötik yanıtı takip etmek için eklem boşluğu hacmi, kas inflamasyonu ve lokal sıcaklığı kapsayan bu özel teknik kombinasyonunu kullanan ilk çalışmadır. Tanımladığımız protokol pratik ve yeniden üretilebilirdir; benzer deneysel ortamlarda gelecekteki boylamsal, gerçek zamanlı etkinlik değerlendirmeleri için faydalı bir referans teşkil edebileceğine inanıyoruz.

Protokol

Tüm deneysel prosedürler, Wuchuang Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. Laboratuvar Hayvan Etik Komitesi tarafından incelenmiş ve onaylanmıştır (Etik Onay Numarası: WTPZ20260209001). Bu çalışmada kullanılan tüm hayvanlar, ticari bir tedarikçiden satın alınan, yaklaşık 20 g ağırlığında, 8 haftalık C57BL/6 farelerdir (bkz. Materyaller Tablosu). Deneye 24 fare dahil edilmiştir. 1 hafta süreyle alıştırma döneminden sonra hayvanlar rastgele paylaştırılmış ve dört deneysel koşulun her birine altışar fare atanmıştır. Bu koşullar; yalancı cerrahi (sham), medial menisküs destabilizasyonu (DMM), yalancı akupunktur (SA) ve elektroakupunkturdan (EA) oluşmaktadır. Kullanılan hayvan sayısı, prospektif bir örneklem büyüklüğü hesaplaması yapılmadan belirlenmiş; bunun yerine grup büyüklüğü, benzer osteoartrit modelleri ve sonlanım noktalarını kullanan önceki elektroakupunktur çalışmaları referans alınarak ve 3R prensibi doğrultusunda seçilmiştir.

1. Ameliyat öncesi bakım ve modelleme

NOT: Tüm modelleme prosedürleri deneyimli bir cerrahi teknisyen tarafından gerçekleştirilmiştir. Hayvanlar ancak ısıtmalı bir ped üzerinde kendilerine geldikten sonra kafeslerine geri döndürülmelidir.

  1. Deney başlamadan önce fareleri en az 7 gün boyunca deneysel ortama alıştırın.
  2. Cerrahi işlemden önce tüm cerrahi aletleri sterilize edin. Cerrahi alanı iyice dezenfekte edin.
  3. Gaz anestezi ekipmanını çalıştırın. Fareyi indüksiyon haznesine yerleştirin ve %2–3 isoflurane ile 5 dk boyunca genel anestezi indüksiyonu gerçekleştirin.
  4. Anestezi indüksiyonu tamamlandıktan sonra fareyi ameliyat masasına transfer edin. Cerrahi işlem tamamlanana kadar bir anestezi maskesi aracılığıyla sürekli olarak %1–1,5 isoflurane vererek anesteziyi sürdürün.
  5. Fareyi, diz eklemi yukarı bakacak şekilde sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Pozisyonun stabil olduğundan ve cerrahi bölgenin tamamen açık olduğundan emin olun. Sağ arka ekstremitede bir model oluşturmak için DMM kullanın12. Sham grubu için, aynı bölgeye bir insizyon yapın ve ardından dikişle kapatın.
    1. DMM cerrahi işlemi
      1. Diz eklemini açığa çıkarmak için 1 cm uzunluğunda longitudinal medial parapatellar bir insizyon yapın.
      2. Adım 1.5.1.1'de oluşturulan medial parapatellar insizyon aracılığıyla, eklem kapsülünde longitudinal bir açıklık oluşturun. Kapsülü çevre dokulardan yeterince ayırmak için forseps kullanın. Ardından, distal arka patiyi aşırı basınç uygulamadan sol elinizle destekleyin ve patellayı ve patellar ligamanı lateral olarak kaydırarak diz eklemini açığa çıkarmak için forseps kullanın. Yaralanmayı önlemek için bu işlem boyunca patiyi dikkatli bir şekilde tutun.
        NOT: Eklem kapsülünün yeterince serbest bırakılması, patellanın minimum kuvvetle yer değiştirilmesine olanak tanır.
      3. Kurumayı önlemek için operasyon sırasında eklem kıkırdağı yüzeyine steril salin damlatın.
      4. Medial femoral kondil ile medial tibial plato arasındaki boşlukta medial menisküsü bulun. Lateral yönünden, medial meniskotibial ligamanı tibial interkondiler eminense tutunma noktasına kadar takip edin. Arka patiyi elinizle nazikçe sabitleyin ve medial menisküsün altındaki kıkırdağa temas etmemeye dikkat ederek ligamanı No. 10 cerrahi bıçakla kesin. NOT: Eklem kıkırdağının ve diğer ligamanların zarar görmediğinden emin olun. Birçok durumda, ligamanı tanımlamak için üzerindeki yağ yastığının geri çekilmesi ancak çıkarılmaması gerekir.
      5. Diz eklem kapsülünün kenarlarını yaklaştırın ve 6-0 emilebilir sütür materyali kullanarak sabitleyin.
      6. Cildi 6-0 ipek sütür ile kapatın12.
  6. Postoperatif bakım için, lokal analjezi amacıyla cerrahi bölgeye bir damla %0,25 bupivacaine damlatın ve fareleri yiyecek ve suya ad libitum erişimle tutun.
    NOT: Anestezi sırasında oksijen akış hızını 0,5–1 NL/min aralığında tutun. Başarılı anestezi; düzeltme refleksinin kaybı, ayak parmağı sıkıştırmasına karşı çekilme yanıtlarının yokluğu ve stabil, düzenli solunum ile onaylanmıştır. Cerrahi boyunca, kıkırdak hidrasyonunu korumak için irrigasyon solüsyonu olarak steril fosfat tamponlu salin (PBS) kullanın. Eklem kapsülü kapatılması için kullanılan emilebilir sütürün ve cilt kapatılması için kullanılan ipek sütürün spesifik boyutları ve özellikleri Materyaller Tablosu'nda detaylandırılmıştır.

2. Elektroakupunktur tedavisi

NOT: SA ve EA gruplarındaki müdahaleler, model oluşturulduktan 1 hafta sonra başlatılmıştır (Şekil 1A). Her iki grup, 4 hafta boyunca, haftada üç kez, gün aşırı olarak seans başına 15 dk tedavi almıştır. Sham ve DMM grupları, iğneleme veya elektriksel stimülasyon olmaksızın, aynı takvimle aynı anestezi ve immobilizasyon prosedürlerine tabi tutulmuştur. Tüm operatörler, akupunktur noktası seçimi, yerleştirme açısı ve derinliğinde tutarlılığı sağlamak amacıyla deney öncesinde eğitim almıştır.

  1. Fareleri indüksiyon odasına yerleştirin ve isoflurane ile anestezi indüksiyonundan sonra dışarı çıkarın.
  2. Sessiz ve stabil bir durum sağlamak için, tüm elektroakupunktur seansı boyunca fareleri isoflurane (100% O₂ içinde 1.5–2.0%) ile sürekli inhalasyon anestezisi altında sırtüstü pozisyonda tutun.
  3. Farelerdeki akupunktur noktalarını hassas bir şekilde belirleyin. Alt ekstremitelerdeki ST36 (Zusanli) ve SP10 (Xuehai) akupunktur noktalarına iki adet tek kullanımlık steril iğneyi (0.16 mm × 25 mm), 5 mm deri derinliğine kadar yerleştirin13 (Şekil 1B).
    ​NOT: ST36, tibia'nın anterior tüberkülünün 1 mm lateralinde, fibula başının 3 mm altında ve doğrudan diz ekleminin altında yer alır. SP10, diz fleksiyondayken medial uylukta, patella'nın superomedial kenarının 3 mm üzerinde, quadriceps kasının medial çıkıntısında yer alır.
    1. SA grubunda, iğneleri ST36 veya SP10 yerine komşu akupunktur dışı bölgelere yaklaşık 1 mm derinlikte yüzeysel olarak yerleştirin ve akım verilmeden EA cihazına bağlayın14.
      NOT: Böylece SA grubu, iğne yerleşimi, yerleştirme derinliği ve elektriksel stimülasyonun yokluğu açısından EA grubundan farklıdır ancak diğer tüm prosedürel parametreler açısından eşleştirilmiştir. DMM grubuyla karşılaştırıldığında, SA grubu yüzeysel akupunktur dışı iğneleme ve akımsız cihaz bağlantısı alırken, DMM grubu sadece anestezi ve immobilizasyon almaktadır.
  4. İğneyi elektronik akupunktur cihazına bağlayın ve hafif kas titremeleri oluşturmak için 2/100 Hz ve 2 mA değerlerinde stimülasyon uygulayın. Model oluşturulmasından 7 gün sonra başlayarak, haftada 3 kez, 15 dakika boyunca EA stimülasyonuna başlayın ve 4 hafta boyunca devam edin.
  5. Tedaviden sonra fareyi bir ısıtma pedine yerleştirin ve bilinci yerine geldiğinde kafesine geri koyun.

3. EA etkinliğinin dinamik değerlendirmesi

NOT: Tüm değerlendirmeler (rotarod testi, US, IRT, MRI ve OARSI puanlaması), grup dağılımına karşı körleme uygulanan araştırmacılar tarafından gerçekleştirilmiş ve grup kimlikleri tüm veri analizleri tamamlanana kadar gizli tutulmuştur. Görüntüleme ve veri analizi ayrı kişiler tarafından yürütülmüş, histolojik değerlendirme ise tedavi gruplarına karşı körleme uygulanan iki patolog tarafından bağımsız olarak gerçekleştirilmiştir. Değerlendiricilerin hiçbiri hayvan atamalarına veya elektroakupunktur müdahalesine katılmamıştır.

  1. Rotarod yorulma testi
    1. Resmi testlerden önce farelerin deney düzeneğine alışmalarını sağlamak için ön eğitim yapın.
    2. Resmi test sırasında, her bir fareyi, fare düşene kadar dakikada 4 devir hızla hızlanan rotarod üzerine tek tek yerleştirin.
    3. Her bir farenin çubuk üzerinde kaldığı süreyi derhal kaydedin. Her fare için denemeler arasında 30 dakikalık bir ara bırakın ve üç tekrarlı denemeden ortalama değeri hesaplayın.
      NOT: OA modelinin oluşturulmasından önce ve EA tedavisinin tamamlanmasından sonra motor koordinasyonu değerlendirmek için rotarod testini kullanın. Ameliyat sonrası ağrıyı en aza indirmek için, cerrahi sonrası ilk hafta boyunca rotarod veri toplama sıklığını azaltın.
  2. Küçük hayvanlarda US incelemesi
    ​NOT: Ultrasonografi görüntüleme ve eklem boşluğu sınırlandırmasına ilişkin adım adım prosedür şurada gösterilmiştir: Şekil 2.
    1. Resmî veri toplama işleminden önce, fare motor fonksiyonlarını kaybedene kadar bir anestezi odasına yerleştirin ve ardından sağ diz eklemindeki tüyleri temizlemek için epilasyon kremi kullanın. Fare tüyü temizlenirken olabildiğince nazik olun; farenin irite olmasını en aza indirmek için bölgeyi ılık suyla nazikçe silin.
      NOT: Tüm hacim ölçümleri tamamlanana ve istatistiksel analiz için grup bilgileri açıklanana kadar, yalnızca hayvan kodlarını ve zaman noktalarını görüntüleyerek analiz sırasında körlemeyi koruyun.
    2. Ultrasoundsistemini açın, küçük hayvan ultrason probunu takın ve uygun fare inceleme protokolünü ayarlayın. Aynı zamanda, fareyi sürekli anestezi için bir kafese yerleştirin.
    3. Anestezi tamamlandığında, fareyi kontrol platformuna aktarın ve nasal maske aracılığıyla izofluran inhalasyon anestezisi uygulayın. Fareyi, başı operatörden uzağa, kuyruğu ise operatöre bakacak şekilde konumlandırın.
    4. Diz eklemini bükün, fareyi sabitleyin ve patellar ligaman üzerindeki cilde US kuplaj ajanı uygulayın.
    5. Probu ayarlayın ve diz eklemine paralel olacak şekilde konumlandırın.
    6. Ayarlayın tarama mesafesi -e / -a 4 mm ve adım boyutu şu yöne / -e, -a 0,04 mmAnatomik konumuna dayanarak görüntü üzerindeki eklem boşluğunu bulun. Prob taraması sırasında hayvanı hareket ettirmeyin.
    7. Görüntüleri edinin. Eklem boşluğunu tanımlayın: femur, tibia ile üzerindeki deri ve kaslar arasında belirgin sınırları olan üçgen bir bölge.
    8. Tarama sonuçlarını adlandırıp kaydedin, ardından orijinal klasör yapısını koruyarak analiz bilgisayarına aktarın.
    9. Diz eklemi boşluğu hacmini yazılım kullanarak analiz edin. Şunları girin: Çalışma modül ve şuna tıklayın İçe Aktar işlev
    10. Veri klasörüne göz atıp seçin, içe aktarılacak veri dosyalarını kontrol edin ve açmak için çift tıklayın.
    11. İçinde görüntüleme mod, seçmek Görüntü İşleme | 3D'ye Yükle | Kesit Görünümü | Hacim Ölçümü | Başlat sırasıyla.
    12. Fare tekerleğini veya kesit sürgüsünü kullanarak proksimalden distale doğru kesitlerde ilerleyin ve eklem boşluğunun ilk kez göründüğü kesiti bulun (bu bölge tipik olarak femur, tibia ile üzerindeki cilt ve kas dokusu arasında net sınırlara sahip üçgen bir bölge olarak görünür).
    13. Eklem boşluğunun ilk göründüğü kesitte iz sürme işlemine başlayın. Konturu çizmeye başlamak için sol tıklayın.
    14. Eklem boşluğu tamamen kaybolana kadar, kapalı bir kontur çizmek için eklem boşluğunun kenarı boyunca nokta nokta takip edin.
    15. Tıklayın Tamamla; sistem, 3 boyutlu segmentlere ayrılmış bir hacim oluşturacak ve hacim ölçüm sonuçlarını çıktı olarak verecektir.
    16. Görüntüyü TIFF formatında bir görüntü bölgesi dosyası (.tif) olarak dışa aktarmak için istenen dosya türünü seçin.
  3. Küçük hayvan kızılötesi termografisi
    ​NOT: Ölçümler; OA'lı farelerde ameliyattan 1 gün önce, ameliyattan 7 gün sonra ve tedavi sonunda yapılmıştır. IRT'yi, tedavi sonrası 6. saatte, sıcaklık kontrollü bir odada (22–24 °C), görüntüleme öncesinde fareler 30 dakika boyunca aklimatize edilmiştir.
    1. Hayvanı, arka ekstremiteler uzatılmış şekilde sırtüstü pozisyona getirin ve dizlerin tutarlı bir şekilde açığa çıkmasını sağlamak için tüm ekstremiteleri bantla masaya sabitleyin. Fareyi bir indüksiyon haznesine yerleştirin ve tamamen anestezi gerçekleşene kadar sürekli olarak izofluran uygulayın.
    2. Anestezi uygulanmış fareyi ameliyat masası üzerinde sırtüstü (supine) pozisyonda sabitleyin ve sabit bir ortam sıcaklığı sağlayın.
    3. Sağ diz eklemini ekstansiyona getirmek için farenin arka ekstremitesini nazikçe tutun ve ardından bölgedeki görüntüleri yakalamak ve sıcaklıkları ölçmek için bir kızılötesi termal görüntüleyici kullanın.
    4. Varsayılan cilt emisyon değerini (0,98) kullanın. Görüntüleri, derin anestezi sonrası 3. dakikada edinin. Diz ilgi alanını (ROI), femoral-tibial eklemedeki medial eklem hattı; ayak bileği ROI'sini ise tibiotalar eklemin dorsal yüzeyi olarak tanımlayın. Tüm ROI'leri, bu anatomik işaret noktalarına dayanarak eğitim almış tek bir operatör aracılığıyla manuel olarak belirleyin.
    5. Diz eklemi ve çevresindeki deriden sıcaklık verilerini okumak için görüntüleri cihazın beraberindeki yazılımı kullanarak analiz edin ve sıcaklık gradyanlarının azaldığı ayak bileği ile diz eklemlerine ölçüm kontrol noktaları yerleştirin.
  4. Küçük hayvan MRI
    ​NOT: EA uygulamasının ardından, her gruptaki farelerin diz eklemlerindeki lokal inflamasyonu değerlendirmek için küçük hayvan MRI'ı kullanılmıştır.
    1. Fareyi anestezi için anestezi kutusuna yerleştirin. Motor fonksiyon kaybı gerçekleştiğinde, her iki diz eklemine tüy dökücü krem uygulayın.
    2. 1 dakika sonra, her iki diz eklemindeki tüy alma işlemini tamamlamak için tüy alma kremini ılık suyla nemlendirilmiş gazlı bezle silerek temizleyin.
      ​NOT: Farenin tüylerinin mümkün olduğunca fazla temizlendiğinden emin olun ve toplama işlemini anestezi altında gerçekleştirin.
    3. Fare boyutundaki bir gantry kullanarak uygun protokolü kurun.
      1. Konumlandırma cihazının üç düzlemli hızlı gradyan eko sekansı (TR/TE = 50/3 ms, görüş alanı (FOV) = 30) kullandığından emin olun. × (30 mm, kesit kalınlığı 1 mm) diz eklemini görüntünün merkezine getirmek için; fare diz eklemini taramak için T2-ağırlıklı hızlı spin ekosu (T2WI) sekansı kullanın.
      2. Şu tarama parametrelerini kullanın: 2.500 ms tekrarlama süresi (TR), 8 ms eko süresi (TE), 20 görüş alanı (FOV) × 20 mm, 256'lık matris × 256, 0,5 mm kesit kalınlığı, kesitler arası boşluk yok ve femoral kondilden tibial platoya kadar olan bölgeyi kapsayan 10 ardışık kesit; tek bir taramanın süresinin yaklaşık 8 dakika 20 saniye olması beklenir.
      3. İnceleyin diz kıkırdağındaki, sinovyumdaki, eklem boşluğundaki ve çevre yumuşak dokulardaki morfolojik değişiklikleri gözlemlemek için elde edilen T2 ağırlıklı görüntüler ve değerlendirmek eklem efüzyonu, sinovyal kalınlaşma ve lokal inflamasyon.
    4. Fareyi gantry üzerine yerleştirin, maske aracılığıyla isoflurane ile inhalasyon anestezisi uygulayın ve dizlerin tutarlı bir şekilde yukarı yönlü konumlandırılmasını sağlamak için ekstremiteleri tıbbi bantla sabitleyin.
    5. Görüntüleme için gantriyi MRI tarayıcısının içine sürün.
      1. Üç düzlemli lokalizasyon görüntüsünde; diz eklem boşluğunun koronal düzleme paralel olduğunu, slab merkezinin eklem boşluğu ile hizalandığını ve süseptibilite artefaktlarını önlemek için bağırsak kıvrımlarının veya hava boşluklarının FOV dışında kaldığını doğrulayın; konumlandırma hatalıysa, yeniden lokalizasyon yapın ve taramayı tekrarlayın.
    6. Kalitatif değerlendirme için elde edilen çok ekolu T2 ağırlıklı görüntüleri DICOM veya NIfTI formatında dışa aktarın.
    7. Diz eklemi ve periartiküler yumuşak dokulardaki hiperintens alanların sinyal yoğunluğunu ve dağılımını görsel olarak inceleyerek MR görüntülerini değerlendirin ve dışa aktarılan bu görüntülere dayanarak gruplar arasındaki inflamatuar sinyalleri karşılaştırın.

4. Patolojik ve morfolojik gözlemler

  1. Fare dizlerinin fiksasyonu ve kesit alınması
    1. Farelerden alınan her iki diz örneğini %10 paraformaldehit içinde 48 sa boyunca fikse edin. Ardından, örnekleri fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 30 dk bekletin ve durulayın.
    2. Fazla nemi kuruladıktan sonra, örnekleri derhal taze hazırlanmış dekalsifikasyon solüsyonuna (pH 7,2–7,4) aktarın ve solüsyonu her 3 günde bir değiştirin;
    3. Dekalsifikasyona 2 hafta boyunca devam edin, örnekleri akar su altında durulayın ve ardından 2 sa boyunca %75 etanol içinde bekletin.
    4. Bir doku işlemcisinde 18 sa boyunca otomatik gradyan dehidrasyon gerçekleştirin.
    5. Dehidrasyondan sonra, örneği bir parafin gömme makinesinde önceden ısıtılmış parafin mumunda 2 sa boyunca bekletin, ardından gömme işlemine geçin;
    6. Diz ekleminin sagital gömmesi sırasında, medial eklem yüzeyi ilk olarak kesilecek şekilde aşağıya gelecek şekilde konumlandırın.
    7. Doku bloğunu mikrotoma yerleştirin ve 4 µm kalınlığında sürekli kesitler alın. Menisküs ayrımının orta noktasına ulaştıktan sonra, ardışık 21 kesit toplayın.
    8. Kesitleri bir kesit yayıcı üzerine yayın. Su yüzeyindeki örnekleri ayırmak için pens kullanın ve her lamellerle toplayın, her lamelle iki örnek toplayın;
    9. Nemle tamamen buharlaşmasını sağlamak için lamları bir lam kurutucusuna 1 sa'dan fazla süreyle düz bir şekilde yerleştirin. Lamları bir örnek kutusuna yerleştirin ve 60 °C'deki bir fırında 8 sa boyunca dewaks işlemi yapın. Daha sonraki kullanım için kenara ayırın.
      ​NOT: Tüm paraformaldehit fiksatifi, dekalsifikasyon solüsyonu ve etanol yıkamaları tehlikeli atık olarak toplanmalı ve kurumsal kılavuzlara uygun olarak imha edilmelidir.
  2. Safranin O-Fast Green boyama
    1. Boyanmamış kesitleri bir boyama rafına yerleştirin ve fırında 5 dk ısıtın. Bu süre zarfında, boyama solüsyonunu bir çeker ocak altında hazırlayın.
    2. Kesitlerin oda sıcaklığına dönmesini bekleyin, ardından rutin olarak suya kadar dewaks işlemi yapın.
    3. Kesitleri ıslak kutuya aktarın ve taze Weigert solüsyonu (Kısım A + Kısım B) ile 5 dk boyunca boyayın.
    4. Su ile 3 x 1 sn boyunca durulayın.
    5. Etanol içindeki %1 hidroklorik asit ile 15 sn boyunca diferansiye edin, ardından distile su ile 10 dk boyunca durulayın.
    6. Fast Green solüsyonu ile 4 dk 55 sn boyunca boyayın.
    7. Kalıntı Fast Green'i uzaklaştırmak için kesitleri %1 asetik asit solüsyonu ile 10-15 sn boyunca hızlıca yıkayın ve ardından havada kurutun.
    8. Safranin O boyası içinde 4 dk 35 sn boyunca bekletin.
    9. Kesitleri %95 etanol ile 3-5 sn boyunca hızla dehidrate edin, ardından mutlak etanol ile 2 x 1 dk boyunca durulayın.
    10. Ksilen ile şeffaflaştırın, nötr reçine ile monte edin ve ksilenin buharlaşması için 4 sa boyunca bir çeker ocak altına yerleştirin.
    11. Kesiti önizleyin ve bir tüm lam tarayıcı ile tarayın.
      NOT: Ksilen, asit-alkol, asetik asit, paraformaldehit ve Weigert solüsyonu, Fast Green ve Safranin O dahil olmak üzere bu çalışmada kullanılan boyama solüsyonları tehlikeli maddelerdir. Tüm işlemler, nitril eldiven, laboratuvar önlüğü ve koruyucu gözlük dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipman giyilerek bir çeker ocak altında gerçekleştirilmelidir. Kullanılmış reaktifler ve yıkamalar dahil olmak üzere tehlikeli atıklar ayrıştırılmalı, ksilen atıkları sulu atıklardan ayrı tutulmalı, belirlenmiş kaplarda toplanmalı ve kurumsal düzenlemelere uygun olarak imha edilmelidir.

5. İstatistiksel analiz

  1. Aksi belirtilmedikçe sürekli verileri ortalama ± standart sapma (SD) olarak raporlayın; OARSI skorları medyan (P25, P75) olarak raporlanır.
  2. Ortalama ± SD olarak raporlanan sonuçlar için, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve ardından Tukey post hoc testleri kullanarak çoklu grup karşılaştırmaları gerçekleştirin. OARSI skorları, Kruskal-Wallis testi ile analiz edilmiş ve ardından iki grup arasındaki ikili karşılaştırmalar için tek yönlü Mann-Whitney testi kullanılarak post hoc testler uygulanmıştır15.
  3. < 0.05 olan P değerlerini istatistiksel olarak anlamlı kabul edin ("ns" anlamlı bir fark olmadığını belirtir).

Sonuçlar

Rotarod testi, EA grubunda DMM grubuna göre daha uzun düşme gecikmesi olduğunu göstermiştir (P < 0.05); buna karşın SA grubu DMM grubundan önemli bir farklılık göstermemiştir (Şekil 1C ve Tablo 1). Modelleme öncesinde, diz ekleminin boylamasına ultrason taramaları (tarama mesafesi, 4 mm; adım boyutu, 0.04 mm), gruplar arasında eklem boşluğu hacmi açısından anlamlı bir fark olmadığını göstermiştir (Şekil 3A,B ve Tablo 2). Modellemeden bir hafta sonra, üç boyutlu rekonstrüksiyon, DMM, SA ve EA gruplarında eklem boşluğu hacminin Sham grubuna göre anlamlı derecede daha yüksek olduğunu göstermiştir (P < 0.05); DMM, SA ve EA grupları arasında ise anlamlı bir fark saptanmamıştır (P > 0.05) (Şekil 3A,C). 4 haftalık EA tedavisi sonrası, eklem boşluğu hacmi EA grubunda DMM grubuna göre anlamlı derecede daha düşük çıkmıştır (P < 0.05) (Şekil 3A,D), bu durum eklem boşluğu şişkinliğindeki azalma ile uyumludur.

IRT, bir görüş alanı içindeki odak düzlemi sıcaklık bilgilerini toplamak ve yüzey sıcaklık dağılımlarını yalancı renk formatında görüntülemek için kullanılan bir tekniktir16. Modelleme öncesinde veya modellemeden 1 hafta sonra gruplar arasında deri yüzey sıcaklığı açısından anlamlı bir fark görülmemiştir (Şekil 4A-C ve Tablo 3). Ancak, EA tedavisinin ardından DMM grubundaki deri yüzey sıcaklığı, Sham grubuna göre anlamlı derecede daha düşüktü. Buna karşılık, EA grubundaki deri yüzey sıcaklığı DMM grubundakinden anlamlı derecede daha yüksekti (Şekil 4A,D); bu durum, EA'nın DMM'ye göre daha yüksek lokal deri yüzey sıcaklığı ile ilişkili olduğunu, SA'nın ise olmadığını göstermektedir.

MRI görüntüleri, Sham grubunda görünür bir periartiküler kas sinyal anomalisi olmadığını, DMM grubunda daha belirgin sinyal değişiklikleri, EA grubunda daha az belirgin değişiklikler ve SA ile DMM gruplarında benzer değişiklikler olduğunu göstermiştir (Şekil 5A). EA tedavisi sonrası sağ diz eklemleri hasat edilmiş, parafine gömülmüş ve 4 µm kalınlığında sagital olarak kesilmiştir. Kesitler Safranin O-Fast Green ile boyanmış ve OARSI histopatolojik sistemi kullanılarak derecelendirilmiştir. Sham grubu ile karşılaştırıldığında, DMM grubu daha fazla eklem kıkırdağı aşınması ve daha yüksek OARSI skoru göstermiştir. EA grubu, DMM grubuna göre daha az kıkırdak dejenerasyonu ve daha düşük OARSI skoru sergilemişken (P < 0.05), SA grubu DMM grubundan anlamlı bir farklılık göstermemiştir (Şekil 5B,C ve Tablo 4).

figure-results-1
Şekil 1: OA'lı farelerde deneysel zaman çizelgesi, akupunktur noktası diyagramı ve rotarod testi. (A) Deneysel zaman çizelgesi. (B) Akupunktur noktalarının diyagramı. (C) Rotarod testi. Grup başına n = 6. Her fare üç denemeyi tamamlamıştır. Veriler ortalama ± SD olarak sunulmuştur. ### Sham ile DMM karşılaştırması, P < 0.001; ns, SA ile DMM karşılaştırması, P > 0.05; ** EA ile DMM karşılaştırması, P < 0.01. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 2: Adım adım ultrason muayenesi. (A) Fareyi anestezi için bir indüksiyon haznesine yerleştirin. (B) Arka bacağa tüy dökücü krem uygulayın. (C) Kremi eşit şekilde uyguladıktan sonra 1 dk bekleyin. (D) Fazla tüy dökücü kremi ve tüyleri gazlı bezle silin. (E) Tüyleri temizlenmiş arka bacağı kontrol edin. (F) Görüntüleme öncesinde, fareyi anestezi için indüksiyon haznesine geri yerleştirin. (G) Arka bacağa ultrason iletim jeli uygulayın ve probu, arka bacağın uzunlamasına eksenine paralel olana kadar döndürün. (H) Ultrason görüntülerini elde edin. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-3
Şekil 3: OA'lı farelerde küçük hayvan ultrasonografik incelemelerinden elde edilen temsilci görüntüler ve kantitatif sonuçlar. (A) Ameliyat öncesi, ameliyattan 1 hafta sonra ve EA tedavisi sonrası diz ekleminin üç boyutlu ultrason rekonstrüksiyonları (tarama mesafesi, 4 mm; adım boyutu, 0.04 mm). Ölçek çubukları = 2 mm. (B) Ameliyat öncesi eklem boşluğu hacmi (grup başına n = 6). (C) Ameliyattan 1 hafta sonra eklem boşluğu hacmi (grup başına n = 6). (D) EA müdahalesi sonrası eklem boşluğu hacmi (grup başına n = 6). ### Sham vs DMM, P < 0.001; ns, SA vs DMM, P > 0.05; *** EA vs DMM, P < 0.001. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-4
Şekil 4: OA olan farelerde temsili kızılötesi termogramlar ve kantitatif cilt sıcaklığı sonuçları. (A) Cerrahi öncesi, cerrahiden 1 hafta sonra ve EA tedavisi sonrası alt ekstremite termogramları. Her termogram, kızılötesi kamera yazılımının otomatik sıcaklık aralığı kullanılarak görüntülenmiştir; bu nedenle renkler paneller arasında doğrudan karşılaştırılamaz. Kantitatif karşılaştırmalar B-D panellerindeki dağılım grafiklerine dayanmalıdır.(B–D) Femurotibial eklemdeki medial eklem hattı olarak tanımlanan diz eklemi ilgi bölgesinin (ROI) kantitatif cilt sıcaklığı analizi.(B) Cerrahi öncesi alt ekstremite cilt sıcaklığı (grup başına n = 6). (C) Cerrahiden 1 hafta sonra alt ekstremite cilt sıcaklığı (grup başına n = 6). (D) EA müdahalesi sonrası alt ekstremite cilt sıcaklığı (grup başına n = 6). Veriler ortalama ± SD olarak sunulmuştur. ### Sham vs DMM, P < 0.001; ns, SA vs DMM, P > 0.05; ** EA vs DMM, P < 0.01. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-5
Şekil 5: OA'lı farelerde periartiküler kas sinyal değişikliklerinin temsili MRI görüntüleri, diz eklemi histolojik kesitleri ve kantitatif sonuçlar. (A) Her gruptan temsili MRI görüntüleri. (B) Temsili Safranin O-Fast Green boyalı diz kesitleri. Ölçek çubukları = 1 mm. (C) OARSI kıkırdak patoloji skorları (grup başına n = 6). OARSI skorları medyan (P25, P75) olarak sunulmuştur. ### Sham vs DMM, P < 0.001; ns, SA vs DMM, P > 0.05; ** EA vs DMM, P < 0.01. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

GrupN5. Hafta
Plasebo/Kontrol (Sham)6101.300 ± 5.416
DMM670.280 ± 3.363###
Selamun Aleyküm670.060 ± 7.796
EA684.390 ± 9.504**
Not: ### Sham ve DMM, P < 0,001; ** EA'ya karşı DMM, P < 0.01.

Tablo 1: Rotarod testi (ortalama ± SD; grup başına n = 6). ### Sham ve DMM arası, P < 0.001; ** EA ve DMM arası, P < 0.01.

GrupN0. Hafta1. Hafta5. Hafta
Plasebo (Sham)62.029 ± 0.0552.056 ± 0.0712.061 ± 0.079
DMM62.058 ± 0.0682.591 ± 0.056###2.926 ± 0.088###
SA62.056 ± 0.0452.592 ± 0.0762.915 ± 0.112
EA62.032 ± 0.0592.548 ± 0.0742.177 ± 0.110***
Not: ### Sham ile DMM, P < 0,001; *** EA'ya karşı DMM, P < 0.001.

Tablo 2: Eklem boşluğu hacmi (ortalama ± SD; grup başına n = 6). ### Sham ile DMM karşılaştırması, P < 0.001; *** EA ile DMM karşılaştırması, P < 0.001.

GrupN0. Hafta1. Hafta5. Hafta
Plasebo/Sham (Kontrol)635.517 ± 1.36635.717 ± 0.54635.650 ± 0.701
Dijital Multimetre635.783 ± 1.29235.033 ± 0.78132.967 ± 1.223###
SA635.583 ± 1.78035.283 ± 0.86133.267 ± 0.501
EA635.500 ± 1.51035.417 ± 0.88234.533 ± 0.929**
Not: ### Sham ile DMM karşılaştırması, P < 0,001; ** EA'ya karşı DMM, P < 0.01.

Tablo 3: Cilt sıcaklığı (ortalama ± SD; grup başına n = 6). ### Sham ile DMM karşılaştırması, P < 0.001; ** EA ile DMM karşılaştırması, P < 0.01.

GrupN5. HaftaMedyan
Plasebo60.000 (0.000, 0.250)0
DMM64.000 (3.000, 4.250)###4
SA64.000 (3.000, 4.250)4
EA62.500 (1.750, 3.000)**2.5
Not: ### Sham'a karşı DMM, P < 0,001; ** EA'ya karşı DMM, P < 0.01.

Tablo 4: OARSI skoru [medyan (P25, P75); grup başına n = 6]. ### Sham vs DMM, P < 0.001; ** EA vs DMM, P < 0.01.

Tartışma

Diz osteoartriti (KOA), ilerleyici dejeneratif bir hastalıktır ve mevcut terapötik müdahaleler, hastalığın temel ilerlemesini durdurmada sınırlı etkinlik sunmaktadır17. Bozulmuş kas fonksiyonu ve azalmış fiziksel performans, semptom şiddetinin klinik olarak anlamlı öngörücüleridir. Bu nedenle, değiştirilebilir risk faktörlerinin aktif olarak yönetilmesi, KOA ilerlemesini geciktirmek için gereklidir18. Çok modlu bir değerlendirme sistemi kullanan bu çalışma, EA'nın OA'lı farelerde iyileşmiş motor performans, azalmış eklem boşluğu hacmi, daha yüksek lokal cilt yüzey sıcaklığı, daha az belirgin periartiküler kas MRI sinyal değişiklikleri ve daha düşük OARSI skorları ile ilişkili olduğunu göstermiştir.

IRT bulguları bu entegre görüşü daha da desteklemektedir. Cerrahi sonrası 1. haftada, Sham grubu da dahil olmak üzere gruplar arasında cilt sıcaklıkları farklılık göstermemiştir; bu durum, muhtemelen geçici vazokonstriksiyon ve cilt yüzeyinden ısı yayılımını geçici olarak azaltan yüzeysel ödem ile karakterize edilen cerrahi travmaya verilen tekdüze bir yanıtı yansıtmaktadır. Buna karşılık, tedavi sonrası gözlenen belirgin termal farklılık, EA'nın anti-inflamatuar ve mikrosirkülasyon etkilerinin anlık olmaktan ziyade kümülatif olduğunu ve ancak tekrarlanan seanslardan sonra belirginleştiğini göstermektedir. Bu sonuç ölçümleri birbiriyle ilişkili olabilir. Eklem boşluğu şişliği genel olarak sinovyal inflamasyonun ve efüzyonun boyutunu yansıtırken, lokal mikrosirkülasyon durumu inflamasyon sırasında vasküler geçirgenlikteki değişikliklerle yakından ilişkilidir19. Deneylerimizde, EA uygulaması sonrası eklem hacmindeki azalma, lokal sıcaklıktaki artışla eş zamanlı gerçekleşmiştir. IRT doğrudan kan akışını ölçmese de, eş zamanlı değişimler lokal kan akışındaki artışın inflamatuar mediyatörlerin temizlenmesini kolaylaştırabileceğini ve böylece sinovyum ile çevre kaslardaki inflamatuar infiltrasyonu azaltabileceğini düşündürmektedir. Motor fonksiyondaki sonraki iyileşme, şişliğin azalması ve inflamasyonun hafiflemesinin birleşik faydalarından kaynaklanıyor olabilir. Genel olarak, bu parametrelerde gözlenen değişimler izole olaylardan ziyade birbirine bağlı yanıtlar gibi görünmektedir. Bu örüntü, EA'nın tek bir mekanizma üzerinden hareket etmek yerine birden fazla patolojik süreci entegre bir şekilde modüle edebileceğini düşündürmektedir20.

Geleneksel uç nokta histolojik değerlendirmeleriyle karşılaştırıldığında, bu çalışmada kullanılan multimodal dinamik izleme sistemi belirgin pratik avantajlar sunmaktadır. Küçük hayvan ultrasonu, radyasyon maruziyeti olmaksızın eklem efüzyonunun boylamsal ve noninvaziv takibine olanak tanıyarak uç nokta doku örneklemesinde doğal olarak bulunan hayvanlar arası değişkenliği ortadan kaldırır21. Küçük hayvan MRI, periartiküler kaslardaki sinyal değişikliklerinin detaylı görselleştirilmesini sağlayarak US'yi tamamlar. Bu durum, tek başına US'nin tam olarak yakalayamayabileceği kas inflamasyonunun kalitatif değerlendirmesine imkan tanır. Lokal cilt sıcaklığının gerçek zamanlı ölçümü için IRT ile eşleştirilen bu yaklaşım, inflamasyonun çözülmesine dair dolaylı bir gösterge sağlar. Bu görüntüleme modalitelerinin mevcut olması, tedavi süreci boyunca tekrarlanan ölçümleri mümkün kılar. 3R prensiplerine uyum sağlamanın ötesinde, bu boylamsal tasarım her bir hayvan içinde tekrarlanan gözlemlere izin vererek bireyler arası değişkenliğin etkisini minimize eder. Bildiğimiz kadarıyla, OA için akupunkturu değerlendiren daha önceki hiçbir hayvan çalışması; US, MRI, termografi, davranışsal testler ve histopatolojiyi tek bir deneysel çerçevede entegre etmemiştir. Bu çok seviyeli yaklaşım; fonksiyonel, morfolojik ve histolojik alanlarda tamamlayıcı veriler sağlayarak, herhangi bir tekil uç noktanın sunabileceğinden daha kapsamlı bir değerlendirme sunar.

Bazı kısıtlamalar kabul edilmelidir. İlk olarak, bu çalışma hayvan deneylerinden elde edilen gözlemsel verilere dayanmaktadır ve in vitro çalışmalardan gelen mekanistik kanıtlardan yoksundur. EA'nın NOD benzeri reseptör ailesi pyrin alanı 3 (NLRP3)/kaspaz-1/IL-1β yoluyla etkileşime girip girmediği bilinmemektedir. IL-1β ve IL-18, sinovyal ve kas inflamasyonunun temel mediyatörleridir ve olgunlaşmaları NLRP3 inflamazom aktivasyonu gerektirir22. Ayrıca, gözlemlenen dolaşım iyileşmelerinin vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) veya endotelyal nitrik oksit sentaz (eNOS) ekspresyonundaki değişikliklerle ilişkili olup olmadığını belirleyemiyoruz23. İkinci olarak, iki akupunktuna (ST36 ve SP10) uygulanmış tek bir EA parametresi (2/100 Hz) kullandık. Farklı ayarların veya alternatif akupunkt kombinasyonlarının daha üstün sonuçlar verip vermeyeceği daha fazla araştırma gerektirmektedir24. Üçüncü olarak, tüm görüntüleme verileri tek bir operatör tarafından alınmıştır. Bu yaklaşım teknik tutarlılığı sağlamış olsa da, gözlemciler arası güvenilirlik değerlendirilmemiştir ve bu durum görüntüleme bulgularının genellenebilirliğini potansiyel olarak sınırlamaktadır. Dördüncü olarak, yalnızca kısıtlamaya tabi tutulan bir kontrol grubuna yer verilmemiştir; bu durum anestezi, immobilizasyon ve uygulama etkilerini EA'nın terapötik etkilerinden tamamen ayırmayı zorlaştırmaktadır. Beşinci olarak, SA prosedürü, akupunktlara, derin dokulara ve elektriksel stimülasyona özgü etkileri azaltmak için minimal bir kontrol olarak tasarlanmıştır. Ancak, gerçek ve sham müdahaleler arasındaki iğneleme derinliği farkı, derinliğin tek başına katkısını izole etmemizi engellemektedir. Sonuç olarak, bulgularımız, elektriksel stimülasyonun tek başına katı bir değerlendirmesinden ziyade, tam EA protokolü ile minimal bir sham prosedür arasındaki bir karşılaştırma olarak yorumlanmalıdır. Altıncı olarak, kamera mesafesi, görüntüleme açısı ve mutlak ROI alanı resmi olarak belgelenmemiştir ve bu durum teknik bir kısıtlamadır. Son bir kısıtlama ise, her zaman noktası için ayrı ANOVAs kullanılmasıdır; bu durum tekrarlanan ölçümler korelasyonlarını ve zaman ile grup etkileşimini ihmal etmekte ve böylece dinamik değişikliklere karşı duyarlılığı azaltmaktadır.

Özetle, EA, DMM ile indüklenen KOA fare modelinde anti-inflamatuar ve fonksiyonel sonuçlarla ilişkilendirilmiştir. Modaliteler arası değişken çözünürlük, US ve IRT'nin operatöre bağımlılığı, yüksek MRI maliyetleri ve tekrarlanan ölçümlerden kaynaklanan potansiyel stres gibi kısıtlamalara rağmen, protokol boylamsal multimodal değerlendirme için uygulanabilir bir platform olmayı sürdürmektedir. Entegre sistem, preklinik değerlendirme için bir çerçeve sunmaktadır. Gelecekteki çalışmalar, mekanizmaları aydınlatmak ve bireyselleştirilmiş tedavilere yön vermek için elektriksel parametreleri optimize etmeli; organoid, organ‑on‑chip ve AI platformlarından yararlanmalıdır25,26. Klinik çeviriyi geliştirmek için geliştirilmiş sham kontrollerine, standartlaştırılmış protokollere ve daha uzun takip sürelerine de ihtiyaç vardır.

Açıklamalar

Yazarlar beyan edilecek herhangi bir çıkar çatışması olmadığını belirtmişlerdir.

Teşekkürler

Bu araştırma, Şangay Bilim ve Teknoloji İnovasyon Eylem Planı (JMC'ye 23YF1447900) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (LQY'ye U23A20508, HSC'ye 82575196 ve HX'e U24A6013) tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%1 asetik asit çözeltisiSolarbioCat# G1371Boyama için farklılaştırma/yıkama çözeltisi
Etanol içinde %1 hidroklorik asitSolarbioCat# G1371Asit-alkol farklılaştırma çözeltisi
7T Küçük Hayvan MRIShanghai Chenguang7T MRI NOVALKüçük hayvan manyetik rezonans görüntüleme sistemi
Akupunktur iğneleri (0.16 mm × 25 mm)Wuxi Jiajian Medical Instrument, Wuxi, Chinalot no. 491226Steril akupunktur iğneleri
yapışkanlı mikroskop lamlarıJiangsu ShitaiMH0662Doku kesitleri için mikroskop lamları
Susuz etanolShanghai Titan Technology Co., Ltd.64-17-5Dehidrasyon için etanol
C57BL/6 farelerShanghai Silaike Laboratory Animal Co., Ltd.https://www.slaccas.com/Deney hayvanları
Lam örtüleriJiangsu ShitaiNot providedDoku kesiti toplama ve montaj
Dekalsifikasyon çözeltisiSerivebioG1105-500mlKemik ve eklem dekalsifikasyon reaktifi, pH 7.2-7.4
Elektrikli terapi cihazıSuzhou Medical Supplies Factory Co., Ltd.SD-ZElektroakupunktur stimülatörü
Etilendiamintetraasetik asitShanghai Titan Technology Co., Ltd.60-00-4Şelatlama reaktifi
Fiji (ImageJ)National Institutes of Health (NIH)ImageJ bundled with 64-bit Java 8.Görüntü analiz yazılımı
Gazlı bezWeizhe MedicalType A1: Standard Gauze Pads (Sterile)Tüy alma ve temizleme malzemesi
Tüy alma kremiVEETNot providedDepilatuar krem
Kızılötesi görüntü analiz yazılımıFLIRVersion not providedKızılötesi termal görüntüleyici ile birlikte verilen yazılım
Kızılötesi termal görüntüleyiciFLIR435-0007-03 (Early Batch)Kızılötesi termografi sistemi
Küçük hayvanlar için inhalasyon anestezi sistemiMatrx07149Küçük hayvan gaz anestezi sistemi
İzofluran (inhalasyon anestezisi)RWD217140901İnhalasyon anestezisi
Naisikang Medikal Su Geçirmez Elastik Bant (3.81 cm × 4.57 m)Naisikang™732MRI için ekstremite konumlandırma malzemesi
Modifiye Safranin O ve Fast Green Boyama Kiti (kemik için)SolarbioCat# G1371Kıkırdak ve kemik boyama kiti
İğne tutucuRWDF21001-12İntraoperatif kenetleme ve sütürleme
Nötr rezin montaj ortamıbiosharp23338664Histolojik montaj ortamı
OksijenNot providedNot providedİnhalasyon anestezisi için taşıyıcı gaz
Parafin gömme cihazıLEICAEG1150CParafin gömme sistemi
Parafin mikrotomuLEICARM2235Rotary mikrotom
Parafin mumuepredia151534Gömme ortamı
ParaformaldehitSinopharm Reagents Co., Ltd.80096618Doku fiksatörü
PBSServicebioG0002Fosfat tamponlu salin
Rotarod cihazıPanlabLE8205Rotarod yorgunluk testi sistemi
Küçük hayvan ultrason görüntüleme platformuFujiVevo 3100Küçük hayvan ultrason sistemi
Sodyum hidroksitShanghai Titan Technology Co., Ltd.G19852HLaboratuvar reaktifi
StereomikroskopOlympusSZ61Diseksiyon mikroskobu
İplikli Sütür İğneleri (6-0 emilebilir sütür ve 6-0 ipek sütür)Ningbo Medical Suture Co., Ltd.Cosmetic Needles 1/2 4X12 40Postoperatif sütürleme
Cerrahi bıçaklar (10#)Hangzhou Nuoyang Biotechnology Co., Ltd.20090120Medial menisküs ligamentinin insizyonu
Doku dehidratörüLEICATP1020Otomatik doku işlemcisi
Doku kurutucuLEICAHI1220Lam kurutucu
Doku gömme bloklarıJiangsu ShitaiREF31050102WGömme sarfları
Doku yayma cihazıLEICAHI1210Kesit yayma sistemi
Ultrason analiz yazılımı (Vevo Lab 3.1.0)OpticVersion 3.1.0Üç boyutlu ultrason analiz yazılımı
Ultrason coupling ajanıHu Qingyu TangYY0299-2008Ultrason coupling jeli
Tüm lam tarayıcıOlympusVS200Dijital lam tarama sistemi
KsilenSinopharm Reagents Co., Ltd.10023418Şeffaflaştırma reaktifi

Kaynaklar

  1. Lee BJ et al. Association between metabolic syndrome and knee osteoarthritis: a cross-sectional nationwide survey study. J Rehabil Med. 2019;51(6):464-70.
  2. Glyn-Jones S et al. Osteoarthritis. Lancet. 2015;386(9991):376-87.
  3. Hunter DJ, Bierma-Zeinstra S. Osteoarthritis. Lancet. 2019;393(10182):1745-59.
  4. Rahmati M, Mobasheri A, Mozafari M. Inflammatory mediators in osteoarthritis: a critical review of the state-of-the-art, current prospects, and future challenges. Bone. 2016;85:81-90.
  5. Fokam D, Lehmann C. Clinical assessment of arthritic knee pain by infrared thermography. J Basic Clin Physiol Pharmacol. 2019;30(3):20170218.
  6. Ren G et al. Serum and synovial fluid cytokine profiling in hip osteoarthritis: distinct from knee osteoarthritis and correlated with pain. BMC Musculoskelet Disord. 2018;19(1):39.
  7. Siqueira MB et al. Comparison of synovial fluid cytokine levels between traumatic knee injury and end-stage osteoarthritis. J Knee Surg. 2017;30(2):128-33.
  8. Xu H et al. Utilization of longitudinal ultrasound to quantify joint soft-tissue changes in a mouse model of posttraumatic osteoarthritis. Bone Res. 2017;5:17012.
  9. Tattersall GJ. Infrared thermography: a non-invasive window into thermal physiology. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 2016;202:78-98.
  10. Schiavon G et al. Infrared thermography for the evaluation of inflammatory and degenerative joint diseases: a systematic review. Cartilage. 2021;13(2_suppl):1790S-801S.
  11. De Marziani L et al. Infrared thermography in symptomatic knee osteoarthritis: joint temperature differs based on patient and pain characteristics. J Clin Med. 2023;12(6):2319.
  12. Zhao Y, Liu B, Liu CJ. Establishment of a surgically-induced model in mice to investigate the protective role of progranulin in osteoarthritis. J Vis Exp. 2014;(84):e50924.
  13. Jiang Y et al. Electroacupuncture ameliorates cerebrovascular impairment in Alzheimer’s disease mice via melatonin signaling. CNS Neurosci Ther. 2023;29(3):917-31.
  14. Wang Z et al. Effect of electroacupuncture on the kisspeptin system in a pubertal rat model of polycystic ovary syndrome. Acupunct Med. 2021;39(5):491-500.
  15. Brochard S, et al. A single intraarticular injection of a tranexamic acid-modified hyaluronic acid (HA/TXA) alleviates pain and reduces OA development in a murine model of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis. Front Pharmacol. 2024;15:1456495.
  16. Mi B et al. A preliminary study on the diagnostic value of infrared thermography in children with idiopathic thrombocytopenic purpura. Sheng Wu Yi Xue Gong Cheng Xue Za Zhi. 2020;37(4):652-60.
  17. Bannuru RR et al. OARSI guidelines for the non-surgical management of knee, hip, and polyarticular osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 2019;27(11):1578-89.
  18. Oliveira MC, Vullings J, van de Loo FAJ. Osteoporosis and osteoarthritis are two sides of the same coin paid for obesity. Nutrition. 2020;70:110486.
  19. Ramezanpour S et al. Impact of sustained synovitis on knee joint structural degeneration: 4-year MRI data from the Osteoarthritis Initiative. J Magn Reson Imaging. 2023;57(1):153-64.
  20. Zhao M et al. Electroacupuncture alleviates osteoarthritis and is associated with activation of the Nrf2/HO-1 pathway and reduced ferroptosis-related changes. Front Mol Biosci. 2026;13:1764620.
  21. Blackshear CP et al. Three-dimensional ultrasound versus computerized tomography in fat graft volumetric analysis. Ann Plast Surg. 2018;80(3):293-6.
  22. Karmakar V et al. Targeting the NLRP3 inflammasome as a novel therapeutic target for osteoarthritis. Inflammopharmacology. 2025;33(2):461-84.
  23. Wilson TG et al. Circulating miR-126-3p is a mechanistic biomarker for knee osteoarthritis. Nat Commun. 2025;16(1):2021.
  24. Wang J et al. Effects of electroacupuncture on knee osteoarthritis in rats through suppressing p38 MAPK/ERK/CREB pathway. J Inflamm Res. 2026;19:581985.
  25. Cao JC, et al. Electrostrategies in orthopaedic research. Biomater Transl. 2025;6(3):294-313.
  26. Wei Y, et al. Organoids in aging research: Bridging cutting-edge biotechnology with the wisdom of traditional Chinese medicine.Organoid Res. 2026;2(1):025460035.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Fare ModeliSinovyal İnflamasyonRotarod TestiManyetik Rezonans GörüntülemeKızılötesi TermografiKıkırdak PatolojisiHistolojik Boyama
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.