Elastin duyarlılığı ve perivasküler elastaz kullanarak güvenilir bir fare karın aort anevrizması modeli oluşturulması

Özet

Bu protokol, elastin hassasiyeti ve perivasküler elastaz uygulaması kullanarak C57BL/6 farelerinde abdominal aort anevrizmalarını (AAA) indüklemek için tekrarlanabilir ve güvenilir bir yöntem sunar; bu yöntem bağışıklık duyarlılığı bileşeni içeren bir AAA modelidir.

Özet

Karın aort duvarındaki elastik lameller matriksin bozulması, abdominal aort anevrizmalarının (AAA) histopatolojik bir özelliğidir. Artan kanıtlar, elastin bozulması ve ilgili konak bağışıklık yanıtlarının AAA'nın patogenezinde rol oynadığını göstermektedir. Bu süreçlerin etkili modellenmesi, bu yaygın hastalığın anlaşılması ve tedavisini geliştirmek için önemlidir. Önceki AAA modelleri anevrizma indüksiyonu için elastin bozucu teknikler kullanmış olsa da, bu modellerin çoğunda elastazın tek kullanımı, elastin ve onun bozulma ürünlerine (EDP) karşı devam eden bağışıklık yanıtını hesaba katmamaktadır. Bu devam eden bağışıklık yanıtını modellemek için, anevrizma indüksiyon ameliyatından 7 gün önce EDP'yi deri altı enjekte ederek C57BL/6 farelerini EDP'ye duyarlılaştıran bir model geliştirdik. Anevrizma indüksiyonu ameliyatı, abdominal aortun açığa çıkması ve periaort bölmesine topikal elastaz uygulanmasıyla devam eder; fare aortasına elastin ve EDP maruz bırakmak amacıyla yapılır. Bu parçalar maruz kaldığında, hayvan daha önce duyarlılaştığı bu antijenlere karşı bağışıklık tepkisi kurmalıdır. 7 gün sonra tekrar yapılan "booster" EDP enjeksiyonu bu bağışıklık yanıtını yaymaya hizmet eder. Burada, C57BL/6 farelerinde EDP ile çoklu sensitisizasyon yoluyla güvenilir şekilde AAA oluşturulması protokolünü ve ardından perivasküler elastaz uygulamasıyla AAA indüksiyon cerrahisi uygulanmasını açıklıyoruz. Bu model hızlı ve orta maliyetle oluşturul>abilir; indüksiyon sonrası ameliyat sonrası 21. günde ölçüldüğü gibi, %82'sinde video mikrometri ile %30 ve ultrason ölçümüyle %73 aort genişlemesi oluşur; %64'te video mikrometri ile %27 %>27 genişleme indüksiyonu sağlar. Bu teknik, ameliyat sırasında %95 ameliyat sonrası hayatta kalma oranıyla da ilişkilidir.

Giriş

Karın aort anevrizması (AAA) dünya genelinde >35 milyon kişiyi etkiler ve 65-80 yaş arası erkeklerin %4–^{8'i 1,2}. AAA'nın en yıkıcı komplikasyonu olan yırtma, genellikle anevrizmanın mekanik duvar gerilmesinin aort dokusunun gücünü aşması sonucu büyük kanamaya ve genel ölüm oranına %80−90 olduğunda ^{meydana gelir.} Mevcut yönetim, yüksek riskli bireylerin ultrason taraması ve yırtılma riski onarım riskini aştığında cerrahi onarım yapılması ile önlemeye yöneliktir; genellikle 5,5 cm^{çapta 5}. Ancak, çoğu AAA semptomatı yoktur ve birçoğu tesadüfen teşhis^{edilir 6}. Bu nedenle, yüksek riskli hastaların tespit edilmesi ve AAA büyümesini azaltacak cerrahi olmayan tedaviler geliştirilmesi ve dolayısıyla yırtılma riskini azaltması için çaba gösterilmelidir.

AAA için tıbbi tedaviler geliştirmek için patogenezin daha iyi anlaşılması gerekir. Şu anda anjiyotensin II^{infüzyonu 7}, ksenografting⁸, kalsiyum klorür^{uygulaması 9} ve infüzyon¹⁰ ve/veya elastaz^11'in topikal uygulaması gibi küçük hayvan modelleri dahil olmak üzere çeşitli deneysel modeller kullanılmaktadır. Bu modellerin her biri AAA'nın patolojik temelini farklı şekilde anlamakta olup, çoğu, başlangıçtan beri değiştirilmiş, geliştirilmiş veya diğer yöntemlerle birleştirilmiştir.

Önemli olarak, AAA histolojisi normal lamellar elastin matriksinin kaybını gösterir; bu durum kronik obstruktif akciğer hastalığında akciğer dokusunda da görülür^12,13. Matriks metalloproteinaz aktivitesi yoluyla elastin bozunması, AAA patogenezi ile sigara içme arasında önemli bir bağlantı sağlar; bu da AAA oluşumu için en önemli değiştirilebilir risk^{faktörüdür 12,14}. Özellikle, insan AAA'sında azalmış aort elastini, elastin lifi bozulması ve dolaşımdaki elastin peptitlerinin artması gözlemlenir ve artan AAA duvar^{yayılabilirliğiyle ilişkilidir 15,16}. Bu nedenle, elastin bozgununu uyarmak, çevrilebilir bir AAA modeli oluşturmak için çok önemlidir. Elastin bozunmasına dayanan mevcut AAA modelleri etkili olsa da, özellikle aort^{kanülasyonu 17} kullanan modellerde yüksek hayvan ölüm oranları ve özellikle topikal elastaz uygulamasına dayanan modellerde tutarsız anevrizma oluşumu nedeniyle^{karmaşıklaşabilir.} Ayrıca, indüksiyon cerrahilerine dayanan tüm modeller operatör öğrenme eğrilerine ve teknik varyasyonlara tabidir.

Bu sorunları ele almak için, konak bağışıklık yanıtını kullanarak hayvanları elastine karşı duyarlılaştırmak için elastin bozunma ürünleri (EDP) enjekte ediyoruz. Bir hafta sonra, anevrizma indüksiyon ameliyatı standardlaştırılmış adımlı bir şekilde gerçekleşir; periaortik elastaz uygulaması kullanılarak duyarlı konakçının bağışıklık yanıtı oluşturabilmesi için EDP bölümleri oluşturulur. Sonraki "booster" EDP hassasiyeti, indüksiyon ameliyatından bir hafta sonra, konak bağışıklık yanıtının devam etmesini sağlar. Tekrarlayan bağışıklık duyarlılığı aort genişletmeyi güvenilir şekilde sağlar. Daha düşük maliyet, bakım kolaylığı, hızlı hastalık gelişimi ve teknik tutarlılık nedeniyle fare AAA modeli kullanıyoruz.

Bu model güvenilir şekilde aort yırtılmasına yol açmaz ve bu nedenle AAA yırtılmasıyla ilişkili faktörlerin incelenmesi için tasarlanmamıştır. Ancak, bu model indüksiyon ameliyatından 21 gün sonra da progresif aort genişlemesini güvenilir şekilde üretmektedir. Bu nedenle, model anevrizma oluşurken aort genişlemesini azaltabilecek veya tersine çevirebilen terapötik yöntemleri incelemek için en uygun modeldir.

Protokol

1. Ultrason görüntüleme

1. Fareyi hazırla
   1. Faresi anestezi indüksiyon odasına yerleştirin.
   2. Fare anestezi edilene kadar %1,8−2 solunmuş izofluran ve oksijen verin. İzofluran kullanıldığında operatörün uçucu anesteziklere maruz kalmasını azaltmak için anestezi gazı kutularının anestezi cihazına bağlı olduğundan emin olun.
   3. Fareyi sırtüstü pozisyonda 37 °C'ye kadar ısıtılan bir aşamaya yerleştirin; farenin burnu anestezi burun konisine yerleştirilsin.
   4. Arka ayakları sahneye etiketleme bantıyla bantlayın.
   5. Karın bölgesine pamuk uçlu aplikatör kullanarak tüy çıkarma ajanı uygulayın ve 30 saniye bekleyin.
   6. Karın tüylerini 5 cm x 5 cm ölçülerinde pamuklu gazlı bez kullanarak çıkarın.
   7. Isıtılmış ultrason iletim jelini farenin karnına yerleştirin.
2. Karın bölgesine 38 MHz ultrason probu yerleştirin ve pelvik kuşağı tespit edin.
3. Aorta, ultrason probu aracılığıyla uygulanan orta tarafa yönelik orta basınç uygulanan ve sıkıştırılamayan tübüler bir orta hat yapısı olarak tanımlayın.
   NOT: Alt vena kava (IVC), farenin aortanın sağında bir ışık yapısı olarak görülür ve ultrason probu üzerinden uygulanan orta arka yönlü basınçla sıkıştırılabilir.
4. Karın aortasının ön-arka çapını, sadece cephalad olarak bifurkasyon noktasına kadar ölçün.
5. Probu aorta boyunca proksimali olarak hareket ettirin ve sol böbrek veninin aortanın önünden geçip IVC'ye girdiğini tespit edin.
6. Karın aortasının ön-arka çapını, sol böbrek veninin karın aortasına önden geçtiği noktaya kadar ölçün.
7. Probu yakın hareket ettirin ve diyaframı tespit edin.
   NOT: Diyafram, karaciğere sadece cephalad olan hiperekoik bir bant olarak tanımlanabilir.
8. Karın aortasının ön-arka çapını, karın bölgesine girdiği noktaya kadar ölçün.
9. Fareyi kafesine veya havlularla kaplanmış bir kurtarma sepetine yerleştirin ve 37 °C'ye kadar ısıtılan bir sahneye yerleştirin.
10. Faresi anesteziden çıkana kadar izleyin.

2. Başlangıçta elastin hassasiyeti

1. Eldiven, göz koruma ve yüz maskesi dahil olmak üzere kişisel koruyucu ekipman takarak elastin bozgunlaştırıcı ürünleri (EDP) hazırlayın.
   1. Molin pankreas lastazı formülasyonunu PBS süspansiyonunda 0.475 birim/mL (4.75 birim/mg protein) elde edin.
   2. 168 μL elastaz alın ve 5 mg mare elastine ekleyin. Bu karışıma 200 μL daha 1X fosfat-tamponlu tuzlu (PBS) ekleyin, ardından pipet yapın.
   3. Elastaz ve elastin karışımını 37 °C'de aralıklı nazik çalkalama ile 20 dakika boyunca inkübe edin.
   4. Elastaz ve elastin karışımına 632 μL soğuk 1X PBS ekleyin.
   5. 1 mL tam Freund adjuvantı ekleyin.
2. Faresi anestezi indüksiyon odasına yerleştirin.
3. Fare anestezi edilene kadar %1,8−2 solunmuş izofluran ve oksijen verin.
4. Fareyi yatağa pozisyona getirin, 37 °C'ye kadar ısıtılan bir aşamaya yerleştirin; farenin burnu anestezi burun konisine yerleştirilir.
5. Her fare için toplamda 100 μL EDP olmak üzere her yana, deri altı olarak 50 μL EDP enjekte edin.
6. Fareyi havlularla kaplanmış bir kurtarma sepetine yerleştirin ve 37 °C'ye kadar ısıtılan bir sahneye yerleştirin.
7. Faresi anesteziden çıkana kadar izleyin.

3. Ameliyata hazırlık

1. Cerrahi aletleri hazırla.
   1. 2 dişli forseps, 1 keskin düz forseps, 1 keskin açılı forseps, 1 iğne sürücüsü, makas, en az 3 kendini tutan manyetik retraktor, 1 cilt zımba ve 1 polipropilen şişe kapağı içeren bir cerrahi kit oluşturun.
   2. Ameliyattan hemen önce sete steril şekilde 4-0 poliglikolik asit örgülü dikiş ekleyin.
   3. NOT: 3-0 veya 5-0 dikiş bedenleri de yeterli olacaktır.
   4. Polipropilen şişe kapağını steril ısıtılmış 1X PBS ile doldurun.
      NOT: Steril 1X PBS şişesi 37 °C sıcaklıkta tekrar doldurulmak için ısıtıcıda saklanır.
2. Elastazı hazırlayın.
   1. 27 μL 5.1 mg/mL (≥4.0 birim/mg protein) domuz pankreas elastazını 73 μL 1X PBS ile seyreltirin; böylece 10 farede (10 μL/fare) ameliyat için son hacim 100 μL.
   2. Ameliyat odasını hazırla.
   3. Pamuk uçlu aplikatörlerden oluşan bir bedek, konik uçlu pamuk uçlu aplikatörler ve 5 cm x 5 cm ölçülerindeki gazlı bezi otoklav edin ve ameliyattan önce ameliyat tepsilerinin yanına yerleştirin.
   4. Manyetik cerrahi aşamayı, mikroskop aşamasında 37 °C sıcaklığa ayarlanmış ısıtma pedine yerleştirin. Isıtma pedini mikroskop aşamasına bantlayın, ancak cerrahi sırasında yeniden konumlandırılması için manyetik bileşeni bağlı bırakın.
   5. Isıtıcı pedin üzerine emici bir ped veya kağıt havlu yerleştirin. 5 cm x 5 cm boyutlarında bir gazlı bezi ikiye katlayın ve anestezi burun konisi altına yerleştirin.
   6. Tüy çıkarma maddesi ile dolu 30 mL'lik bir bardak, %5 povidon-iyot içeren 30 mL'lik bir bardak, bir tüp göz kayganlaştırıcısı, cerrahi bant, steril olmayan 5 cm x 5 cm gazlı bez, steril olmayan pamuk uçlu aplikatörler, mühürlü 5 cm x 5 cm alkol sürüntüsü, yapışkan yiyecek servisi filmi rulo ve %70 etanol içeren bir sprey şişesi cerrahi alanın yakınına yerleştirin.
   7. Uzun salınımlı 1.3 mg/mL buprenorfini fare başına 75 μL hacimde 1 mL bir şırıngaya çekin; 30 g farede 3.25 mg/kg doz için.
3. Fareyi ameliyata hazırlayın.
   1. Farenin ağırlığını gram cinsinden ölçüp kaydedin.
   2. Faresi anestezi indüksiyon odasına yerleştirin.
   3. Fare anestezi edilene kadar %1,8−2 solunmuş izofluran ve oksijen verin.
   4. Fareyi sırtüstü pozisyonda 37 °C'ye kadar ısıtılan bir aşamaya yerleştirin; farenin burnu anestezi burun konisine yerleştirilsin.
   5. 75 μL buprenorfin deri altına enjekte edilir.
   6. Arka ayakları sahneye etiketleme bantıyla bantlayın.
   7. Karın bölgesine pamuk uçlu aplikatör kullanarak tüy çıkarma ajanı uygulayın ve 30 saniye bekleyin.
   8. Karın tüylerini 5 cm x 5 cm ölçülerinde pamuklu gazlı bez kullanarak çıkarın.
   9. Farenin gözlerine göz kayganlaştırıcısı uygulayın.
   10. 5 cm x 5 cm ölçümlerindeki gazlı bez kullanarak farenin karnına povidon-iyot uygulayın ve kurumasına izin verin.
   11. Karın bölgesini 5 cm x 5 cm alkollü sürüntlerle silin. Povidon-iyodu tekrar uygulayın ve kurumasına izin verin.
   12. Anestezi, farenin parmağını sıkıştırarak ve tepki vermediğinden emin olarak test edin.
   13. Cerrahi aşamanın üzerine yapışkan bir yiyecek servisi filmi koyun.
   14. Ameliyat aşamasına %70 etanol püskürtün ve kurumasına izin verin.
   15. Ellerinizi yıkayın ve steril cerrahi eldivenler takın.

4. Ameliyat prosedürü (ilk elastin hassasiyetinden 7 gün sonra)

1. Karın aortasını açığa çıkarın.
   1. Karın orta hattı boyunca makas veya skarpel kullanarak ~3 cm boyunca bir deri kesisi yapın; 0,5−1 cm cephaladdan penise kadar başlayıp 0,5 cm caudad aralığına kadar xiphoid'a kadar uzanın.
   2. Dişli penslerle cildi tutun ve nazikçe yukarı çekerek linea alba'yı tespit edin; bu asker rectus kaslar arasında avasküler bir düzlem olarak görünecektir.
   3. Makasla linea alba'yı kesin ve deriyi yukarı çekmeye devam edin. Sadece linea alba kesmeye dikkat edin, karın içi yapılardan kaçının.
   4. Manyetik kendini tutan retraktorlar yerleştirin; biri karın duvarının sağ tarafını, biri karın duvarının sol tarafını geri çekiyor ve diğeri kesinin kaudal kısmındaki mesane ve seminal veziküller gibi yapıları geri çekiyor.
   5. Nemli pamuk uçlu aplikatörler kullanarak bağırsağı kendinden uzaklaştırın ve üzerindeki nemli 5 cm x 5 cm gazlı bezle örtün. Alternatif olarak, bağırsağı, kıvrılmış ve nemlendirilmiş 5 cm boyutlarında bir gazlı bezle farenin karnının sol tarafına yerleştirin.
      NOT: Farenin anatomisine ve retraktorların yerleşimine bağlı olarak, bağırsak en iyi görselleştirme için zıt yönde parçalanabilir veya paketlenebilir.
   6. Orta hattın arka kısmında IVC ve abdominal aortu tespit edin.
   7. Pamuk uçlu aplikatörler kullanılarak, arka damar yapılarını kaplayan doku düzlemini nazikçe açarak retroperitoneuma girin.
      NOT: İlgilenen dokuya arkaya doğru baskı ve ardından pamuk aplikatörlerinin uçları birbirinden ayrılarak daha yüksek bir çekiş oranı uygulanır. Daha nazik çekiş için, pamuk aplikatörlerinin uçlarını zıt yönlere döndürün.
   8. Lateral retraktorları daha derine yerleştirerek aortanın daha iyi çekiş ve görselleştirilmesi sağlanır.
   9. Bu aşamada aortanın lateral tutucularının serbest bırakılmasını önlemek için IVC ve infrarenal abdominal aortayı nazikçe ayırmak için pamuk uçlu aplikatörleri kullanmaya devam edin.
   10. IVC ile aorta arasındaki düzlemi geliştirmeye devam edin, aorta ile IVC arasında üçgen bir boşluk görünene kadar (Şekil 1).
       NOT: Bu adım genellikle sadece sol böbrek venine kadar en kolay şekilde gerçekleştirilir.
   11. Küt diseksiyon veya keskin forseps kullanarak, farenin sol tarafındaki bağlayıcı doku ve bel kaslarından aortayı ayırarak lateral aort bağlantılarını serbest bırakın.
   12. Açılı keskin forsepsleri aort ile IVC arasında oluşan boşluğa yerleştirin ve forsepsleri tekrar tekrar nazikçe açıp kapatarak arka aort bağlantılarını açın.
   13. Aynı açılma ve kapanma tekniği kullanılarak, aorta boyunca arka düzlemi geliştirin, cephaladdan kuyoda doğru ilerler.
   14. Tüm aortanın bir video mikrometrik görüntüsünü alın ve analiz için saklayın.
2. Perivasküler elastaz uygulayın.
   1. Bir pipet kullanarak, açıkta duran aortanın uzunluğu boyunca 10 μL elastaz çözeltisi bırakın.
      NOT: Sadece aortanın medial ve lateral dokuları disseksiye, elastazın biriktiği bir oluk ortaya çıkar.
   2. Açık karın bölgesine nemli 5 cm x 5 cm gazlı bez pedleri yerleştirin ve elastaz çözeltisi 10 dakika kuluçkaya düşsün.
   3. Gazlı bez kapağını çıkarın ve kalan elastaz çözeltisi çıkarmak için karın bölgesini steril 1X PBS ile üç kez sulayın.
3. Karnını kapat.
   1. Karın organlarını orijinal konumlarına döndür. Bağırsaktaki burkulmaları veya bükülmeleri gözlemleyin ve çıkarın.
   2. Dişli forseps kullanarak, rectus kası ve fasya'yı deriden uzaklaştırarak 0,25 cm deri flebi oluşturun.
   3. Karın fasyasını 4-0 örgülü poliglikolik asit (veya benzeri) bir dikiş ile basit bir koşu şeklinde, kesinin köşelerini dahil etmeye özen göstererek ısırıklar arasında 2 mm'den fazla ilerlememeye dikkat edin.
   4. Üst kaplamayı 3−4 zımba kullanarak birbirine zımbalın.

5. Ameliyat sonrası bakım

1. Fareyi ameliyat aşamasından çıkarın ve havlularla kaplanmış bir iyileşme sepetine yerleştirin ve 37 °C'ye kadar ısıtılan bir aşamaya yerleştirin.
2. Faresi anesteziden çıkana kadar izleyin.
3. Ameliyat sonrası 4 gün boyunca fareyi her gün izleyin, genel sağlığı ve karın kesisinin durumunu not edin.
4. Ameliyat sonrası, yukarıda açıklandığı gibi tekrar ultrason yapılarak anevrizmanın büyümesini izleyin.
5. Zımba maddelerini ameliyattan bir hafta sonra veya 1. haftanın ultrason saatinde çıkarın.

6. Elastin hassasiyetini tekrarlayın (anevrizma indüksiyon ameliyatından 7 gün sonra)

1. Yukarıda açıklanan adımları ilk elastin hassasiyeti için EDP çözümünü aynı şekilde hazırlayarak, tam Freund adjuvantı yerine eksik Freund adjuvantı tek bir yer değiştirerek gerçekleştirin.

7. Doku hasadı prosedürleri

1. Ameliyat sonrası 21. günde çeşitli analizler için doku hasadı alın.
2. Fareyi indüksiyon ameliyatı için yapılan şekilde hazırlayın.
3. Aortu tekrar indüksiyon ameliyatı sırasında yapılan şekilde tekrar açığa çıkarın, histolojik analizler için toplanacak örneklere zarar vermemeye özen gösterin.
   NOT: Bu noktada farede yapışkan izler oluşmuş olur, bu yüzden künt diseksiyon yerine penslerle keskin diseksiyon kullanımı daha fazla gerekebilir.
4. Video mikrometrik görüntüler edinin.
5. Kan toplamak ve analiz için kalp ponksiyonu yapın ve fareyi ötenazi yapın.
6. Eldiven, göz koruma ve yüz maskesi dahil uygun kişisel koruyucu ekipman takarak fareyi analiz için perfüze edin.
   1. Dokular akış sitometrisi (veya benzeri) analizi için belirlenmişse, sol ventrikül 1X PBS ile damar genişletici olmadan 100−120 mm Hg çözünürlükte 8 mL hacim için perfüze edilir.
   2. Dokular PCR analizleri için belirlenmişse, sol ventriküle 1X PBS ile damar genişletici (0,1 mM adenosin ve 0,01 mM sodyum nitroprussid) perfüze edilin, ardından RNA stabilizasyon çözeltisi uygulanır.
   3. Dokular histolojik analizler için belirlenmişse, sol ventrikülü 1X PBS ile damar genişletici ile perfüze edin, ardından %10 tamponlu formalin fosfat uygulanır.
7. İstediğiniz dokuları hasat edin, histolojik analiz için hazırlanan dokulara yapısal zarar vermemeye özen gösterin. Dikişler veya işaretleme maddeleriyle işaretleme yönelimi.

Sonuçlar

Toplamda 28 erkek C57BL/6J faresi bu cerrahi protokolü geçirdi, bir perioperatif ölüm IVC yaralanmasından kaynaklandı (%3,6). Üç ek gecikmeli ölüm vakası vardı; bunlardan biri kesik fıtığından, diğer ikisi ise bilinmeyen nedenlerle gerçekleşti ve toplam 21 günlük sağlıkta %85,7 oldu. Anestezi indükasyonundan anestezi uygulamasının sonuna kadar geçen ortalama süre 46,4 ± 8,0 dakika idi. Sahte cerrahi fareler, başlangıç EDP hassasiyeti, laparotomi, aortanın maruz kalması ve tekrarlayan EDP...

Tartışma

1990'da ilk kez sıçanlarda tanımlandığından beri, elastaz tabanlı AAA modeli birkaç kez değiştirilmiş ve çeşitli^hayvanlarda 10,19,20,21,22,23 kullanılmıştır. Bazı modifikasyonlar arasında aort kanülasyonu bulunur; bu da muhtemelen ölüm oranını artıracak ve aort patolojisine travmatik bir bile...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1 mL Tuberculin Şırıngaları	Becton Dickinson	309628
10% Tamponlu Formalin Fosfat	Fisher Chemical	SF100-4
70% İzopropil Alkollu Swablar	Cardinal Health	S-16183
Açılı keskin forseps	Dumont	I I25 I-35
AutoClip 9mm (Deri staple'i)	MikRon	427630
Betadine	Atlantis Consumer Healthcare	67618-155-16
Pamuk gazlı ped	Dynarex Corporation	3223
Pamuk uçlu aplikatör	Puritan Medical Products	25-806 2WC
Domuz pankreasından elastaz (≥4.0 ünite/mg protein)	Sigma-Aldrich	E1250	4 °C'de sulu çözelti içinde muhafaza edilir
Fare pankreasından elastaz (4.75 ünite/mg protein)	Elastin Products Co., Inc.	MS838	4 °C'de sulu çözelti (0.1 mg 1 mL PBS içinde) içinde muhafaza edilir
Elastin	MP Biomedicals	101636	4 °C'de sulu çözelti içinde muhafaza edilir
Enersight Masaüstü Yazılımı	Leica	https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/enersight/
Ethiqa XR (uzun etkili buprenorfin)	Fidelis	NDC 86084-100-30
Göz yağı	OptixCare	Opx-4242
Flexacam i5 (Stereo)	Leica	https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-cameras/p/12730536-leica/
Freund’s komple adjuvan	MP Biomedicals	642851	4 °C'de sulu çözelti içinde muhafaza edilir
Freund’s eksik adjuvan	MP Biomedicals	642861	4 °C'de sulu çözelti içinde muhafaza edilir
Eldivenler (Steril)	Encore	7824PF
Hipodermik İğneler (23 G)	Becton Dickinson	305145
Hipodermik İğneler (27 G)	Becton Dickinson	305109
Isospire (Isofluran)	Dechra Veterinary	07-894-8943
Etiketleme Bandı	Fisher Scientific	15959
Maskeler	Dukal Corp.	1540
İğne sürücüsü	Scanlan	6006-36
Omnicon F/air Anestetik Gaz Kutusu	A.M. Bickford Inc.	80120
Press'N Seal	Glad	12587704417
RC2 Kemirgen Devre Kontrol Cihazı	VetEquip Incorporated	922100
RNAlater Stabilizasyon çözeltisi	ThermoFisher Scientific	AM7021
Makas	Fine Science Tools	14005-12
Deri staple'i (klipler)	MikRon	205016
Küçük Kemirgen Isıtıcı Isıtma Cihazı	Stoelting	53851
Küçük Kemirgen Isıtıcı Sahne	Stoelting	53812
Stereo Mikroskop M60	Leica	https://www.leica-microsystems.com/products/light-microscopes/stereo-microscopes/p/leica-m80/
Düz keskin forseps	Dumont	I I 25 I-30
SurgiSuite kendi kendine tutunan manyetik retraktör seti ve sahne	Kent Scientific	13-005-180
Tahoe Taşınabilir Oksijen Konsantratörü	Vetland Medical	595-2300A
Dişli forseps	Fine Science Tools	11043-08, 11042-08
Vevo 2100 Ultrason	FUJIFILM Visualsonics	EDU00496
Visorb poliglikolik asit dikiş	CP Medical	397A
VWR Absorbanlar	VWR	95057-860