Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Glukokortikoid Reseptörü Aracılığıyla Kronik Obstruktif Akciğer Hastalığının Tedavisinde β-Sitosterol'ün Ağ Farmakolojisi ve Deneysel Araştırmaları

104 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/72018

⸱

7 Ağustos 2026

 ,  ,  , 
1Bishan Hospital of Chongqing Medical University, Bishan Hospital of Chongqing, 2Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Geriatrics Department, The Second Affiliated Hospital Zhejiang University School of Medicine, 4Department of Traditional Chinese Medicine, Nanjing Yuhua Hospital

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

β-sitosterol, KOAH'yı hafifletmiş ve deksametazonun etkinliğini güçlendirmiştir; glukokortikoid reseptörü bu etkiyi aralemiştir. Ayrıca, β-sitosterol, hem CSE ile uyarlanan bronşiyal epitel hücrelerinde hem de sigara dumanı kaynaklı KOAH farelerinde iltihabı, oksidatif stresi ve hücresel yaşlanmayı azaltmıştır.

Özet

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH), kalıcı iltihaplanma, oksidatif stres ve ilerleyici akciğer fonksiyon düşüşü ile karakterize edilen yaygın bir solunum bozukluğudur. KOAH'ta β-sitosterolün terapötik potansiyeli hâlâ belirsizdir. Bu çalışma, β-sitosterolün KOAH'ya karşı koruyucu etkilerini araştırmayı ve altta yatan mekanizmasını netleştirmeyi amaçladı. Veritabanı taraması, glukokortikoid reseptörünü (GR) β-sitosterolün potansiyel hedefi olarak belirledi. Sigara dumanı kaynaklı bir KOAH fare modeli ve sigara dumanı ekstraktı (CSE) ile uyarlanan BEAS-2B hücre modeli oluşturuldu. Akciğer fonksiyonu, akciğer hasarı ile ilgili belirteçler, iltihaplanma, oksidatif stres ve hücresel yaşlanma, (RT-qPCR), DCFH-DA floresan prob testleri ve yaşlanma tespit kitleri kullanılarak değerlendirildi. β-sitosterolün tek başına veya deksametazon (DEX) ile kombinasyonunun etkileri de değerlendirildi. β-sitosterol, hem CSE ile uyarlanan BEAS-2B hücrelerinde hem de sigara dumanına maruz kalan farelerde akciğer fonksiyonunu önemli ölçüde iyileştirdi, akciğer hasarı ile ilgili belirteçleri normalleştirdi ve iltihabı, oksidatif stresi ve hücresel yaşlanmayı azalttı. Bu koruyucu etkiler, GR ifadesinin artmasıyla birlikte gerçekleşti. Ayrıca, β-sitosterol DEX'e yanıt vermeyi artırdı ve β-sitosterol ile DEX ile kombinasyon tedavisi, sadece DEX tedavisine kıyasla akciğer fonksiyonu, akciğer hasarı belirteçleri, iltihaplanma, reaktif oksijen türleri seviyeleri ve hücresel yaşlanmada daha fazla iyileşme sağladı. Bu bulgular toplamda, β-sitosterol'ün GR ifadesini artırarak ve DEX'in terapötik etkinliğini artırarak KOAH ile ilişkili patolojik değişiklikleri en azından kısmen hafiflettiğini ve DEX'in tedavi için yardımcı strateji potansiyelini ortaya koyduğunu öne sürmektedir.

Giriş

Kronik obstruktif akciğer hastalığı (KOAH), kalıcı hava yolu iltihabı, alveolar hasar ve geri dönüşü olmayan hava akışı tıkanıklığı ile karakterize edilen ilerleyici bir solunum yolu hastalığıdır ve solunum fonksiyonunu bozur ve yaşam kalitesinidüşürür. Yaşla birlikte yaygınlığı önemli ölçüde artar ve altmış beş yaş ve üzeri kişiler için risk, kırk2 yaş altındakilerin yaklaşık beş katıdır. Bu demografik eğilim, artan hastalık sisidanlığı, ölüm oranı ve engellilikleilişkilidir 3. Epidemiyolojik projeksiyonlar, 2030 yılına kadar KOAH'nin dünya çapında dördüncü en çok ölüm nedeni olabileceğini ve tüm ölümlerin yaklaşık %5'inioluşturabileceğini (4,5,6) göstermektedir. Şu anda belirlenen risk faktörleri arasında genetik yatkınlık, akciğer displazi, partikül madde maruziyeti, kronik bronşit ve solunum yoluenfeksiyonu yer almaktadır 7.

Risk faktörleri arasında, sigara dumanı KOAH8'in en önemli patojenik faktörüdür. Bronş epitel hasarına yol açabilen, inflamatuar hücrelerin sızmasını teşvik edebilen ve akciğer dokusunun yeniden şekillenmesine yol açabilen binlerce kimyasaliçerir 9. Uzun vadeli maruziyet, kalıcı ve geri dönüşü olmayan epitel hasarına neden olabilir, çok sayıda pro-inflamatuar kemokinin salınımını teşvik edebilir, (ROS) üretimini önemli ölçüde artırabilir ve hücreapoptozunu tetikleyebilir 10. Birçok çalışma, interleukin-8 (IL-8) ve tümör nekroz faktörü-α (TNF-α gibi pro-inflamatuar kemokinin artan seviyelerinin, aşırı ROS üretimi ve hücresel yaşlanma ile birlikte KOAH 11,12'nin şiddetiyle yakından ilişkili olduğunu göstermiştir. Bu durum, KOAH'ta koruyucu ve terapötik etkiler yaratmak için bu temel patojenik faktörleri etkili ve güvenli şekilde modüle edebilen ajanlara olan ihtiyacı vurgulamaktadır.

Fitosteroller, bitki hücre zarlarında yaygın bulunan doğal biyoaktif bileşiklerdir. Bunlar arasında β-sitosterol en bol olanıdır ve sebzeler, kuruyemişler, tohumlar ve zeytinyağı gibi lipid açısından zengin bitki kaynaklı gıdalardayaygın olarak dağılır 13,14,15,16. Çalışmalar, fare ve farelerde 1000 mg/kg'ya kadar dozlarda β-sitosterol uygulanmasının sitotoksisite veya genotoksisite ile ilişkiliolmadığını doğrulamıştır 17. Ayrıca, araştırmalar β-sitosterolün antioksidan enzimler ve insan östrojen reseptörleri üzerindeki etkileri sayesinde antioksidan özellikler sergilediğinigöstermiştir 18.

β-sitosterol, anti-inflamatuar19, antipiretik20, analjezik21 ve antidiyabetik etkiler dahil olmak üzere geniş bir farmakolojik aktivite yelpazesigösterir 13. Ayrıca kolit ve bağırsakiltihabı 22 gibi çeşitli hastalık modellerinde terapötik potansiyel göstermiştir ve anti-aterosklerotik23 ile immünomodülatörözelliklere sahiptir 24. Ayrıca, avantajlı bir güvenlik profili vardır. Bu özellikler göz önüne alındığında, β-sitosterol potansiyel bir ilaç adayı olarak büyük ilgi çekmiştir. Ancak, KOAH'taki kesin rolü ve altta yatan mekanizmaları büyük ölçüde belirsizdir.

Bu nedenle, bu çalışma KOAH'ta β-sitosterolün potansiyel terapötik etkilerini ve altta yatan mekanizmalarını incelemeyi amaçlamıştır. Özellikle, β-sitosterolün CSE aracılı hücresel hasarı etkili bir şekilde hafifledip hafifletemeyeceğini değerlendirmek için bir sigara dumanı ekstraktı (CSE) kaynaklı BEAS-2B hücre hasarı modeli kullanıldı ve böylece KOAH tedavi stratejileri için yeni bir aday molekül belirlendi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Çalışma, deneysel ve klinik çalışmalar için Temel ve Klinik Farmakoloji ve Toksikoloji rehberlerineuygun olarak yürütülmüştür. Tüm hayvan deney protokolleri, Zhejiang Üniversitesi Tıp Fakültesi'nin İkinci Bağlı Hastanesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmış (Onay No. 20230102) ve tüm deneyler Hayvan Etik Komitesi'nin yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Çalışma, ARRIVE yönergeleriyle uyumlu şekilde yürütülmüştür.

Ana bileşenlerin ve hedeflerin ağ farmakolojisi yoluyla taraması

Fritillaria cirrhosa D. Don, Lonicera japonica Thunb., Glehnia littoralis F. Schmidt ex Miq. ve Adenophora stricta Miq. aktif bileşenleri. Geleneksel Çin Tıbbı Sistemleri Farmakoloji Veritabanı'ndan (TCMSP; erişim tarihi: 12 Mart 2024) alınmıştır. Aday bileşikler şu ADME kriterlerine göre tarandı: ağızdan biyoyararlanılım (OB) ≥ %30, ilaç benzerliği (DL) ≥ 0,18 ve Caco-2 geçirgenliği ≥ −0,4,4%25. Üç kriterin tamamını karşılayan bileşikler, sonraki analizler için aday aktif bileşen olarak korundu.

β-sitosterol'ün kanonik Basitleştirilmiş Moleküler Giriş Hattı Giriş Sistemi (SMILES) yapısı, PubChem'den (erişim tarihi: 18 Mart 2024) alınmış ve hedef tahmini için SwissTargetPrediction'a (erişim tarihi: 21 Mart 2024) aktarılmıştır. Homo sapiens hedef tür olarak seçildi. Potansiyel hedefler, β-sitosterol ile veritabanındaki bilinen ligandlar arasındaki 2D ve 3D yapısal benzerliğe dayanarak tahmin edildi. 0'dan büyük olasılıkla tahmin edilen hedefler korundu ve tekrarlı girişler kaldırıldı.

KOAH ile ilişkili genler, Terapötik Hedef Veritabanı (TTD; erişim tarihi: 25 Mart 2024) ve Karşılaştırmalı Toksikogenomik Veritabanı (CTD; erişim tarihi: 28 Mart 2024) üzerinden "kronik obstrüktif akciğer hastalığı" anahtar kelimesi kullanılarak alındı. Kopya genler çıkarıldıktan sonra, KOAH ile ilişkili genler, tahmin edilen β-sitosterol hedefleriyle kesiştirilerek β-sitosterolün KOAH'ya karşı terapötik etkilerinde potansiyel olarak rol oynayan aday hedefler belirlendi.

β-sitosterol ve GR'nin moleküler kenetlenmesi

SDF formatındaki β-sitosterolün üç boyutlu yapısı PubChem veritabanından (erişim tarihi: 2 Haziran 2026) alındı; glukokortikoid reseptörünün (GR) kristal yapısı ise Yapısal Biyoinformatik Protein Veri Bankası Araştırma Laboratuvarı'ndan (RCSB PDB; erişim tarihi: 3 Haziran 2026) alındı. Ligand ve reseptör yapılarının standart hazırlanmasından sonra, moleküler kenetlenme CB-Dock2 çevrimiçi platformu kullanılarak gerçekleştirildi (erişim tarihi: 3 Haziran 2026). Hazırlanan ligand ve reseptör dosyaları platforma yüklendi ve kenetlenme hesaplamaları varsayılan parametrelerle yapıldı.

Gen Ontolojisi (GO) ve Kyoto Genler ve Genomlar Ansiklopedisi (KEGG) fonksiyonel zenginleştirme analizi

β-sitosterolün tahmin edilen tüm hedef genleri GO fonksiyonel zenginleştirme ve KEGG yol zenginleştirme analizlerine tabi tutuldu. Zenginleştirme sonuçları, önemli ölçüde zenginleşmiş biyolojik süreçler, hücresel bileşenler, moleküler fonksiyonlar ve sinyal yolları dahil olup, sonraki biyoinformatik analiz için Ek Dosya 1'de sıralandı ve saklandı.

Hayvan modelleme ve gruplama

Örneklem büyüklüğü, G*Power yazılımı kullanılarak önceden güç analizi yapılan (α = 0.05, güç = 0.80) ve n = 6'nın karşılaştırılabilir deneysel koşullarda biyolojik olarak ilgili farklılıkları tespit etmek için yeterli olduğunu gösteren bir çalışmaya dayanarak grup başına altı hayvan olarakbelirlendi 26. 6–8 haftalık (20 ± 2 g) erkek C57BL/6 fareleri rastgele beş gruba ayrıldı: kontrol grubu, KOAH model grubu, KOAH + deksametazon (DEX) grubu, KOAH + β-sitosterol grubu ve KOAH + DEX + β-sitosterol grubu. Fareler standart laboratuvar koşullarında (25 °C, 12 saat ışık/karanlık döngü) tutuldu ve standart yemek ve suya serbest erişim sağlandı ve deneylerden önce 1 hafta boyunca uyum sağlamalarına izin verildi.

KOAH modelinin oluşturulması için, fareler tüm vücut sigara dumanına maruz kalma odasına (63 cm × 55 cm × 45 cm) yerleştirildi ve 12 hafta boyunca ana akım sigara dumanına maruz bırakıldı. Her sigara 10 mg katran, 0,9 mg nikotin ve 10 mg karbon monoksit içeriyordu. Dumana maruz kalma, günde iki kez (haftada 5 gün) sabah 09:30 ve 15:00'te gerçekleştirildi; 18 sigaradan oluşan duman her seans27 90 dakika boyunca odaya getirildi.

Müdahalelerin terapötik etkilerini değerlendirmek için, 8 haftalık sigara dumanına maruz kaldıktan sonra ilaç uygulaması başlatıldı ve kalan 4 hafta boyunca devam etti. 9. haftadan itibaren, ilgili tedavi gruplarındaki farelere sigara dumanına maruz kalmadan 1 saat önce günlük intragastrik DEX (1 mg/kg)28 veya β-sitosterol (50 mg/kg)29,30 verildi. Önceki farmakokinetik çalışmalar, kemirgenlerde β-sitosterol için yaklaşık %4 ağızdan biyoyararlanılım bildirmiştir31. Ayrıca, birkaç fare çalışmasında 20 ila 50 mg/kg32 arasında dozlar kullanılmıştır. Bu nedenle, yeterli sistemik maruziyeti sağlamak ve preklinik çalışmalarda yaygın kullanılan aralık içinde kalmak için 50 mg/kg doz seçildi.

Kontrol grubundaki fareler filtrelenmiş oda havasına maruz kalırken, model ve tedavi gruplarındaki fareler araç olarak eşdeğer miktarda normal tuzlu su aldı. Deneysel dönemin sonunda, fareler izofluran ile derin anestezi altına alınarak pedal refleksini kaybetti ve karın aortası kan toplama yoluyla exkanguinasyonla ötanize edildi. Toraks boşluğu hemen açıldı ve sağlam iki taraflı akciğer dokuları dikkatlice kesildi, buz soğukluğu fosfatlı tuzlu su (PBS) ile duruldu ve buz üzerine kondu. Bronkoalveolyar lavaj sıvısı (BALF) toplamak için, trakea kanülasyon edilip soğuk steril PBS ile yıkandı; PBS nazikçe aşılanıp tekrar tekrar çekilerek lavaj sıvısı toplandı. Akciğer dokuları ve BALF örnekleri buz üzerinde tutuldu ve ardından aşağı akış analizleri için işlendi.

BEAS-2B hücre kültürü

BEAS-2B insan bronşial epitel hücreleri, Dulbecco'nun Modified Eagle Medium/F12 (DMEM/F12) içinde tutuldu; bu hücreler %10 fetal sığır serumu (FBS) ve %1 penisilin/streptomisin içeren, %5 CO₂ altında 37 °C'de tutuldu.

CSE hazırlığı ve BEAS-2B hücre maruziyeti

BEAS-2B hücreleri, fosfatla tamponlanmış tuzlu suyla yıkanıp 24 kuyu tabaklarına üçlü olarak tohumlanmış, her kuyu başına 5 ×10 4 hücre yoğunluğunda tohumlanmıştır. 12 saatlik kültür sonrası hücreler yaklaşık %60 birleşmeye ulaştı ve ardından CSE'ye maruz kaldılar. CSE, daha önce tarif edildiği gibi taze hazırlanmış, küçükdeğişikliklerle 33. Kısa bir süreliğine, filtrelenmemiş bir ticari sigara sürekli yakıldı ve ana akım duman yaklaşık 5 dakika boyunca 1,05 L/dakika sabit akış hızında (yaklaşık −11 kPa negatif basınç) vakum pompası ile 10 mL serumsuz ortama kabarcıklandı, ta ki sigara tamamen yanana kadar. Elde edilen çözelti önce büyük partikül safsızlıkları çıkarmak için ön filtreleme geçirildi, ardından kalıntı partikülleri ortadan kaldırmak için 0,22 μm steril mikrogözenekli filtre ile sterilize edildi; ortaya çıkan stok çözümü %100 CSE olarak tanımlandı. Tüm taze hazırlanmış KS, filtreleme sonrası hücre tedavisinde depolanmadan hemen sonra kullanıldı. Hücreler, %2,5 CSE içeren ortamla uyarıldı. 24 saatlik CSE tedavisinden sonra, kültür süpernatantları toplanıp -40 °C'de depolanarak sonraki analiziçin 34.

Nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR)

Toplam RNA, BEAS-2B hücrelerinden toplam RNA çıkarma kiti kullanılarak çıkarıldı ve üreticilerin talimatlarına göre ters transkripsiyon kiti kullanılarak cDNA'ya ters-transkribe edildi. RT-qPCR daha sonra gerçek zamanlı PCR tespit sistemi ve SYBR Yeşil tabanlı qPCR master karışımı kullanılarak gerçekleştirildi. Tüm RT-qPCR deneyleri, veri güvenilirliğini sağlamak için her örnek başına üç biyolojik ve üç teknik replika ile gerçekleştirildi.

Her qPCR reaksiyonu, toplam 20 μL hacimde gerçekleştirildi; 10 μL SYBR Green qPCR master karışımı, 0,4 μL ön astar, 0,4 μL ters primer, 2 μL seyreltilmiş cDNA şablonu ve 7,2 μL RNase içermeyen su içeriyordu. Amplifikasyon koşulları şöyleydi: başlangıçta 95 °C'de 3 dakika denatürasyon, ardından 95 °C'de 10 saniye boyunca 40 döngü denatürasyon ve 30 saniye boyunca 60 °C'de tavlama/uzatma. Göreceli gen ifade seviyeleri 2−ΔΔCt yöntemiyle hesaplandı ve GAPDH dahili referans gen olarak hizmet verdi. Bu çalışmada kullanılan primer dizileri, Ek Tablo 1'de belirtilmiştir.

Hücre içi reaktif oksijen türleri (ROS) analizi

BEAS-2B hücrelerinde hücre içi ROS üretimi, florojenik prob 2′,7′-diklorodihidroflorescein diacetate (DCFH-DA) kullanılarak değerlendirildi ve akış sitometrisiyle analiz edildi. Akış sitometrik alım sırasında, hücresel döküntüleri dışlamak ve sağlam tek hücreleri seçmek için standart bir ileri saçılma (FSC) ve yan saçılma (SSC) kapı stratejisi uygulandı. Her örnek için toplam 10.000 geçerli hücresel olay elde edildi. Uyarılma ve emisyon dalga boyları sırasıyla 488 nm ve 525 nm olarak ayarlandı. Akış sitometrik verileri daha sonra hücre içi ROS floresans yoğunluğu nicelendirilmek için analiz edildi.

Malondialdehit (MDA) seviyesi belirleme

Hücre içi MDA içeriği, üreticinin talimatlarına göre lipid peroksidasyon test kiti kullanılarak ölçüldü. Kısa süreliğine, işlenmiş BEAS-2B hücreleri toplanıp lizlendi, ardından düşük sıcaklıkta santrifüjlenerek süpernatan toplandı. Daha sonra tiyobarbiturik asit (TBA) kolorimetrik reaksiyonu gerçekleştirildi ve mikroplaka okuyucu kullanılarak 532 nm soğurma oranı ölçüldü. Göreceli MDA seviyeleri standart eğriye göre hesaplandı.

Hücre yaşlanması değerlendirmesi

Hücresel yaşlanma, yaşlanma ile ilişkili β-galaktosidaz (SA-β-gal) aktivitesine dayalı bir yaşlanma tespit testi kullanılarak değerlendirildi. SA-β-gal-pozitif hücreler akış sitometrisiyle nicelendirildi. Paralel olarak, yaşlanma ile ilişkili belirteçler p53 ve p21'in mRNA ekspresyon seviyeleri RT-qPCR ile belirlendi.

Hücre proliferasyon testi

Hücre çoğalması, kolorimetrik hücre canlılık testi kiti kullanılarak değerlendirildi. Absorbans 450 nm olarak mikroplaka okuyucu kullanılarak ölçüldü.

GR çökme testi

Hücre transfeksiyonu lipid bazlı bir transfeksiyon reaktifi kullanılarak gerçekleştirildi. Aşağıdaki oligonukleotidler transfekte edildi: glukokortikoid reseptör-hedefleyen küçük interferens RNA (si-GR) ve negatif kontrol küçük interferenif RNA (si-NC). GR hedefleyen aday siRNA dizileri, çevrimiçi biyoinformatik platformu siDirect 2.0 kullanılarak tasarlanmıştır. Transfeksiyondan sonra hücreler 48 saat kültürlendi ve tüm siRNA'lar son konsantrasyon 50 nM'de kullanıldı. Knockdown verimliliği, RT-qPCR kullanılarak GR mRNA ekspresyonunun ölçülmesiyle doğrulandı.

Araç kontrol grupları hem β-sitosterol tedavisi hem de transfeksiyon deneylerine dahil edildi. β-sitosterol müdahalesinde, sadece araç çözücüsiyle işlenmiş hücreler araç kontrol grubu olarak kullanıldı (CSE+0 olarak gösterilir). İstatistiksel analiz, araç kontrol ve boş kontrol grupları arasında anlamlı bir fark gözlemlenmediğini doğruladı.

İstatistiksel analiz

Tüm nicel sonuçlar, üç biyolojik olarak bağımsız in vitro deneyden ortalama ± standart sapma olarak ifade edildi. İstatistiksel analizler istatistiksel analiz yazılımı kullanılarak gerçekleştirildi. Shapiro–Wilk testi, istatistiksel testlerden önce veri seti dağılımının normalliğini incelemek için kullanıldı; Bonferroni post-hoc düzeltmesi, varyans analizinden (ANOVA) sonra çoklu karşılaştırmalar için P değerlerini ayarlamak amacıyla benimsenmiştir. İki grup arasındaki karşılaştırmalar, eşleşmemiş bir öğrencinin t-testi ile değerlendirilirken, çoklu grup karşılaştırmaları için tek veya iki yönlü ANOVA kullanıldı. P ≤ değeri 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

β-sitosterol, KOAH tedavisinde potansiyel bir doğal üründü

Fritillaria cirrhosa D. Don'un rapor edilen iyileştirici etkileri nedeniyle, Lonicera japonica Thunb.'un kuru çiçeği, Glehnia littoralis F. Schmidt ex Miq.'nin kuru kökü ve Adenophora stricta Miq. Akciğer hastalıklarınıntedavisinde 35,36,37,38, bu çalışma TCMSP veritabanını kullanarak bu Geleneksel Çin Tıbbı (TCM) bitkilerinin...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

KOAH, küresel düzeyde ciddi bir hastalık yükü oluşturur ve dünya çapında sağlık için büyük bir zorlukolmaya devam eder 1. KOAH'nin mevcut yönetimi hem farmakolojik hem de farmakolojik olmayan müdahalelerikapsar 42. Farmakolojik tedaviler arasında, glukokortikosteroidler (GC) kronik inflamatuar bozukluklarda yaygın olarak kullanılır. GR'ye bağlanarak histon deasetilaz 2'yi transkripsiyonel komplekslere akılayarak histonaset...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazar(lar) çıkar çatışması olmadığını belirtir.

Teşekkürler

Yazarların herhangi bir teşekkürü yoktur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
BEAS-2B human bronchial epithelial cellsSunnCell, ÇinSC-0218In vitro çalışma için insan bronşiyal epitel hücre hattı
C57BL/6 farelerVital River Laboratories, Çin213Canlı deneyde KOAH için hayvan modeli
CB-DOCK2Çinhttps://cadd.labshare.cn/cb-dock2/php/index.phpLigand ve reseptör proteini arasındaki moleküler yerleştirme simülasyonu için
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)Beyotime Biotechnology, ÇinC0038Hücre canlılığı ve proliferasyonunun tespiti
CellEvent™ Senescence Green Detection KitThermo Fisher, ABDC10851Hücresel yaşlanmanın tespiti
SigaraHongta, ÇinVerilmediDuman maruziyeti ve CSE hazırlığı için kullanılan sigara
CTDABDhttps://ctdbase.org/KOAH ile ilgili genleri almak için
DCFH-DA floresan probuSigma-Aldrich, ABDD6883-50MGİntrasellüler ROS seviyesinin tespiti
Deksametazon (DEX)Yeasen, Çin40323ES03Kombine müdahale için glukokortikoid
DMEM/F12 ortamıGibco, ABD11330032BEAS-2B hücre kültürü için bazal ortam
Fetal boğa serumu (FBS)Gibco, ABD10270106Hücre kültür ortamı için takviye
GraphPad Prism GraphPad Software, ABD9.3.1Veri istatistiksel analizi ve grafik çizimi
IzofluranRWD Life Science, ÇinR510-22-10Hayvan ötanazi için inhalasyon anestezisi
Lipid Peroksidasyon MDA Assay KitBeyotime Biotechnology, ÇinS0131Sİntrasellüler malondialdehit (MDA) içeriğinin tespiti
Lipofectamine 2000Thermo Fisher, ABD11668030siRNA teslimi için transfeksiyon reaktifi
Multimodlu mikroplaka okuyucuThermo Fisher, ABDVL0000D0Absorbans ve floresan değerinin tespiti
Navios EX Akış SitometrisiBeckman Coulter, ABDB80912ROS ve yaşlı hücrelerin analizi
Penisilin/streptomisinHyClone, ABDSV30010Bakteryel kontaminasyonu önlemek için antibiyotik
Power SYBR™ Green Master MixThermo Fisher, ABD4367659Floresan kuantitatif PCR amplifikasyonu
PrimeScript™ RT reaktifi KitiTakara, JaponyaRR037QcDNA sentezi için ters transkripsiyon
PubChem veritabanıABDhttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/Beta-sitosterolün kanonik SMILES dizisi ve 3D SDF yapı bilgisinin alınması için
QuantStudio Dx PCR CihazıThermo Fisher, ABD4479889Gerçek zamanlı RT-qPCR tespiti
RCSB PDBABDhttps://www.rcsb.org/GR kristal 3D yapı dosyasının alınması için
RNA/Protein İzolasyon KitiBeyotime Biotechnology, ÇinR0018SHücre ve akciğer dokusundan toplam RNA ekstraksiyonu
si-GRsiDirect 2.1 üzerinden silico olarak tasarlanmışÖzel sentezRehber: 5′-UUUUGAAUGGGUGUAGCAA-3′; Yolcu: 5′-GCUUUCACCCAUUCAAAAGG-3′, GR için knockdown
si-NCThermo Fisher, ABD4390843Hücresel ve in vivo deneyler için negatif transfeksiyon kontrolü olarak kullanılır
SwissTargetPrediction veritabanıİsviçrehttp://swisstargetprediction.ch/Potansiyel ilaçla ilgili protein hedeflerinin silico tahmini için
TCMSP veritabanıÇinhttps://www.tcmsp-e.com/Bitkisel içerik taraması ve hedef tahmini için
TTDSingapurhttps://db.idrblab.net/ttd/Onaylanmış KOAH ile ilişkili hastalık genlerinin toplanması için
Tüm vücut duman maruziyeti odasıTeague Enterprise, ABDTE-2Sigara dumanı kaynaklı KOAH modelinin kurulması
β-sitosterolChemicalBook, Çin83-46-5İlaç tedavisi için aktif fitosterol

Kaynaklar

  1. Christenson SA, Smith BM, Bafadhel M, Putcha N. Chronic obstructive pulmonary disease. Lancet. 2022;10342:2227-2242.
  2. Raherison C, Girodet PO. Epidemiology of COPD. Eur Respir Rev. 2009;114:213-221.
  3. Kennedy BK et al. Geroscience: linking aging to chronic disease. Cell. 2014;4:709-713.
  4. Mathers CD, Loncar D. Projections of global mortality and burden of disease from 2002 to 2030. PLoS Med. 2006;11:e442.
  5. Hanania NA, Marciniuk DD. A unified front against COPD: clinical practice guidelines from the American College of Physicians, the American College of Chest Physicians, the American Thoracic Society, and the European Respiratory Society. Chest. 2011;3:565-566.
  6. Rabe KF et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive pulmonary disease: GOLD executive summary. Am J Respir Crit Care Med. 2007;6:532-555.
  7. Szalontai K et al. Chronic obstructive pulmonary disease: Epidemiology, biomarkers, and paving the way to lung cancer. J Clin Med. 2021;13: 2889.
  8. Chen J et al. DNA of neutrophil extracellular traps promote NF-kappaB-dependent autoimmunity via cGAS/TLR9 in chronic obstructive pulmonary disease. Signal Transduct Target Ther. 2024;1:163.
  9. Vij N et al. Cigarette smoke-induced autophagy impairment accelerates lung aging, COPD-emphysema exacerbations and pathogenesis. Am J Physiol Cell Physiol. 2018;1:C73-C87.
  10. Zhu X et al. Cigarette smoke promotes interleukin-8 production in alveolar macrophages through the reactive oxygen species/stromal interaction molecule 1/Ca(2+) Axis. Front Physiol. 2021;12:733650.
  11. Cheng M et al. Qingke Pingchuan granules alleviate airway inflammation in COPD exacerbation by inhibiting neutrophil extracellular traps in mice. Phytomedicine. 2025;136:156283.
  12. Hikichi M, Mizumura K, Maruoka S, Gon Y. Pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease (COPD) induced by cigarette smoke. J Thorac Dis. 2019;Suppl 17:S2129-S2140.
  13. Babu S, Jayaraman S. An update on beta-sitosterol: A potential herbal nutraceutical for diabetic management. Biomed Pharmacother. 2020;131:110702.
  14. Cheng Y et al. Dietary beta-sitosterol regulates serum lipid level and improves immune function, antioxidant status, and intestinal morphology in broilers. Poult Sci. 2020;3:1400-1408.
  15. Takayasu BS et al. Biological effects of an oxyphytosterol generated by beta-Sitosterol ozonization. Arch Biochem Biophys. 2020;696:108654.
  16. Awad AB, Chinnam M, Fink CS, Bradford PG. Beta-sitosterol activates Fas signaling in human breast cancer cells. Phytomedicine. 2007;11:747-754.
  17. Paniagua-Perez R et al. Genotoxic and cytotoxic studies of beta-sitosterol and pteropodine in mouse. J Biomed Biotechnol. 2005;3:242-247.
  18. Moreno JJ, Mitjavila MT. The degree of unsaturation of dietary fatty acids and the development of atherosclerosis (review). J Nutr Biochem. 2003;4:182-195.
  19. Liao PC et al. Identification of beta-Sitosterol as in vitro anti-inflammatory constituent in Moringa oleifera. J Agric Food Chem. 2018;41:10748-10759.
  20. Gupta MB et al. Anti-inflammatory and antipyretic activities of beta-sitosterol. Planta Med. 1980;2:157-163.
  21. Nirmal SA, Pal SC, Mandal SC, Patil AN. Analgesic and anti-inflammatory activity of beta-sitosterol isolated from Nyctanthes arbortristis leaves. Inflammopharmacology. 2012;4:219-224.
  22. Kim KA et al. Beta-Sitosterol attenuates high-fat diet-induced intestinal inflammation in mice by inhibiting the binding of lipopolysaccharide to toll-like receptor 4 in the NF-kappaB pathway. Mol Nutr Food Res. 2014;5:963-972.
  23. Tada H et al. Sitosterolemia, Hypercholesterolemia, and Coronary Artery Disease. J Atheroscler Thromb. 2018;9:783-789.
  24. Efsa Panel on Nutrition NF, Food A et al. A combination of beta-sitosterol and beta-sitosterol glucoside and normal function of the immune system: evaluation of a health claim pursuant to Article 13(5) of Regulation (EC) No 1924/2006. EFSA J. 2019;7:e05776.
  25. Huang J et al. Identification of the active compounds and significant pathways of yinchenhao decoction based on network pharmacology. Mol Med Rep. 2017;4:4583-4592.
  26. Ashok V et al. Evaluation of 3D-printed polylactic acid as a bone substitute: An animal study in a rat model. Clin Exp Dent Res. 2025;4:e70201.
  27. Zhang R et al. Soyasaponin I alleviates inflammation and oxidative stress in chronic obstructive pulmonary disease through inhibiting the mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway. Exp Anim. 2025;4:407-418.
  28. Liu R et al. Therapeutic effects of Hedyotis diffusa Willd in a COPD mouse model challenged with LPS and smoke. Exp Ther Med. 2018;4:3385-3391.
  29. Baraya YS, Yankuzo HM, Wong KK, Yaacob NS. Strobilanthes crispus bioactive subfraction inhibits tumor progression and improves hematological and morphological parameters in mouse mammary carcinoma model. J Ethnopharmacol. 2021;267:113522.
  30. Tang X et al. Treatment with beta-sitosterol ameliorates the effects of cerebral ischemia/reperfusion injury by suppressing cholesterol overload, endoplasmic reticulum stress, and apoptosis. Neural Regen Res. 2024;3:642-649.
  31. Sylven C, Borgstrom B. Absorption and lymphatic transport of cholesterol and sitosterol in the rat. J Lipid Res. 1969;2:179-182.
  32. Jayaraman S et al. Beta-Sitosterol circumvents obesity induced inflammation and insulin resistance by down-regulating IKKbeta/NF-kappaB and JNK signaling pathway in adipocytes of type 2 diabetic rats. Molecules. 2021;7:2101.
  33. Higashi T et al. A simple and rapid method for standard preparation of gas phase extract of cigarette smoke. PLoS One. 2014;9:e107856.
  34. Carvalho JL et al. Oral feeding with probiotic Lactobacillus rhamnosus attenuates cigarette smoke-induced COPD in C57Bl/6 mice: Relevance to inflammatory markers in human bronchial epithelial cells. PLoS One. 2020;4:e0225560.
  35. Li L et al. Fritillaria cirrhosa D. Don Alleviates Inflammatory Progression and Suppresses M1 Polarization of Macrophages in Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Int Arch Allergy Immunol. 2025;3:243-251.
  36. Xiong L et al. The protective effect of Lonicera japonica Thunb. against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice: Modulation of inflammation, oxidative stress, and ferroptosis. J Ethnopharmacol. 2024;331:118333.
  37. Park SM et al. Adenophora stricta Root Extract Protects Lung Injury from Exposure to Particulate Matter 2.5 in Mice. Antioxidants (Basel). 2022;7:1376.
  38. Park J et al. Cytotoxic activity of C(17) polyacetylenes from the roots of Glehnia littoralis against drug-resistant colorectal and lung cancer cells. J Nat Med. 2025;2:391-398.
  39. Barnes PJ. Corticosteroid resistance in patients with asthma and chronic obstructive pulmonary disease. J Allergy Clin Immunol. 2013;3:636-645.
  40. Aviles B et al. Markers of airway remodeling in induced sputum from healthy smokers. Arch Bronconeumol. 2006;5:235-240.
  41. Chen Q et al. Resveratrol inhibits lipopolysaccharide‑induced MUC5AC expression and airway inflammation via MAPK and Nrf2 pathways in human bronchial epithelial cells and an acute inflammatory mouse model. Mol Med Rep. 2025;6:157.
  42. Singh D, Higham A, Mathioudakis AG, Beech A. Chronic obstructive pulmonary disease (COPD): Developments in pharmacological treatments. Drugs. 2025;7:911-930.
  43. Rhen T, Cidlowski JA. Antiinflammatory action of glucocorticoids--new mechanisms for old drugs. N Engl J Med. 2005;16:1711-1723.
  44. Morjaria JB, Malerba M, Polosa R. Biologic and pharmacologic therapies in clinical development for the inflammatory response in COPD. Drug Discov Today. 2010;9-10:396-405.
  45. Barnes PJ. How corticosteroids control inflammation: Quintiles Prize Lecture 2005. Br J Pharmacol. 2006;3:245-254.
  46. Barnes PJ, Adcock IM. Glucocorticoid resistance in inflammatory diseases. Lancet. 2009;9678:1905-1917.
  47. Shen HF et al. MiR-361-5p/abca1 and MiR-196-5p/arhgef12 axis involved in gamma-Sitosterol inducing dual anti-proliferative effects on bronchial epithelial cells of chronic obstructive pulmonary disease. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. 2021;16:2741-2753.
  48. Sun Y, Gao L, Hou W, Wu J. Beta-sitosterol alleviates inflammatory response via inhibiting the activation of ERK/p38 and NF-kappaB pathways in LPS-exposed BV2 cells. Biomed Res Int. 2020;2020:7532306.
  49. Adcock IM, Mumby S. Glucocorticoids. Handb Exp Pharmacol. 2017;237:171-196.
  50. Reddy AT, Lakshmi SP, Banno A, Reddy RC. Glucocorticoid receptor alpha mediates Roflumilast's ability to restore dexamethasone sensitivity in COPD. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. 2020;15:125-134.
  51. Kadushkin AG et al. The effect of glucocorticoids in combination with azithromycin or theophylline on cytokine production by NK and NKT-like blood cells of patients with chronic obstructive pulmonary disease. Biomed Khim. 2021;4:352-359.
  52. Zhou L et al. Expression of glucocorticoid receptor and HDACs in airway smooth muscle cells is associated with response to steroids in COPD. Respir Res. 2024;1:227.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

T pSay 234Say 234Bo De erSaysigara duman ekstraktbeta sitosteroldekzametazon
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.