Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

IL-1β İndüklenmiş Kondrosit Modelinde EREG ile Osteoartrit ve Mekanizmi için Tanısal Biyobelirteç Olarak miR-215-5p'nin Klinik Kohort Analizi

96 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/72124

⸱

31 Temmuz 2026

 ,  ,  , 
1Fujian University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Orthopedics, Xianyou County General Hospital, 3Department of Rehabilitation, Xianyou County General Hospital, 4Department of Orthopedics, Putian 95th Hospital

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, serum miR-215-5p'yi osteoartrit için tanısal bir biyobelirteç olarak değerlendirmeyi ve IL-1β kaynaklı kondrositlerde düzenleyici mekanizmasını incelemeyi amaçlamaktadır.

Özet

Osteoartrit (OA), eklem kıkırdaklarının bozulması ve sinovial infiltrasyonun oluşmasıyla karakterize edilen dejeneratif bir eklem hastalığıdır. Bu çalışma, serum miR-215-5p'yi OA için tanısal bir biyobelirteç olarak değerlendirmeyi ve IL-1β ile indüklenen kondrositlerde düzenleyici mekanizmasını incelemeyi amaçlamaktadır. 110 OA hastası ve 105 sağlıklı kontrol kontrol üyesi alındı. Serum miR-215-5p ve EREG ekspresyonu, nicel ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu ile belirlendi. OA için miR-215-5p'nin tanı değeri, alıcı çalışma karakteristik eğrisi kullanılarak değerlendirildi. C28/I2 kondrositleri, IL-1β ile uyarılarak bir OA hücre modeli oluşturuldu. Hücre canlılığı, göç yeteneği ve inflamatuar sitokin seviyeleri, Cell Counting Kit-8, Transwell testi ve enzimle bağlantılı immünosor testi (ELISA) ile değerlendirildi. miR-215-5p ile EREG arasındaki ilişki, çift lusiferaz raporlayıcı testi ve RNA immünopresipitasyon (RIP) testi kullanılarak doğrulandı. OA hastalarında serum miR-215-5p yukarı düzenlenirken, EREG aşağı regülasyonla düzenlendi. MiR-215-5p, OA için iyi tanı performansı gösterdi (eğri altındaki alan, AUC = 0.883). Interlökin-1β (IL-1β) ile tedavi edilen C28/I2 hücrelerinde, miR-215-5p inhibisyonu hücre canlılığını ve göçünü artırmış, IL-1β, IL-6 ve tümör nekroz faktörü-α (TNF-α) seviyelerini azaltmıştır. EREG'in miR-215-5p'nin doğrudan hedefi olduğu doğrulandı. EREG'in devrilmesi, miR-215-5p aşağı regülasyonunun IL-1β ile tedavi edilen C28/I2 hücrelerinin canlılık ve göç kapasitesi üzerindeki teşvik etkiyi kısmen tersine çevirdi ve inflamatuar faktörler üzerindeki inhibitör etkisini azalttı. miR-215-5p, EREG'i düzenleyerek OA patogenezine katkıda bulunur ve OA için umut vadeden bir tanısal biyobelirteç ve potansiyel terapötik hedefi temsil eder.

Giriş

Osteoartrit (OA), dejeneratif bir eklem hastalığıdır ve patolojisi, gondovial iltihaplanma ile kıkırdakdejenerasyonu ile seçilir 1,2. Dünya genelinde OA insidansı yüksek olmaya devam ediyor ve ilgili çalışmalar, 3,4. yıl artan bir sisidans eğilimi bildirmiştir. OA5'in gelişimiyle obezite, yaşlanma, genetik duyarlılık ve kemik yoğunluğu gibi faktörlerin ilişkili olduğu belirlenmiştir. Klinik semptomlar açısından, OA hastaları genellikle eklem ağrısı, şişlik, hareket kabiliyeti kısıtlı ve sertlikle ortaya çıkar; bu da hastaların yaşam kalitesini ciddi şekildedüşürür 6,7. OA'nın farklı fenotiplerinin mevcut olması dikkat çekicidir ve bu fenotipler, hastalığın patogenezinin çeşitliliğiniuygun şekilde yansıtmaktadır 8. Şu anda OA tedavisi hâlâ semptomların iyileştirilmesine odaklanmakta olup, yaygın kullanılan klinik ilaçlar arasında sadece ağrıyı hafifleten ve hastalığın ilerlemesini etkili şekilde geri çeviremeyen analjezikler ve steroid olmayan anti-enflamatuarilaçlar bulunmaktadır. Bu nedenle, yeni OA biyobelirteçlerini araştırmak, güncel araştırmalar için acil bir ihtiyaç haline gelmiştir.

MikroRNA'lar (miRNA'lar), proteinkodlayan 10'da yer almayan kısa zincirli RNA molekülleri kategorisidir. Çok hücreli organizmalarda önemli gen düzenleyici moleküller olarak hizmet ederler ve çok sayıda protein kodlayan genin ifade çıkışınıetkileyebilirler. Birçok çalışma, miRNA'ların OA12'nin gelişimi üzerinde belirgin bir etki yarattığını doğrulamıştır. Daha önceki bir çalışma, miR-215-5p'nin preeklampside aşırı ekspresye uğradığını ve CDC6ekspresyonu 13'ü düzenleyerek trofoblastların göç ve invaziv kapasitesini azalttığını göstermiştir. miR-215-5p'nin aşırı ekspresyonu, sepsis14'te H9c2 hücrelerinde inflamatuar hasarı azalttı. miR-215-5p, XIAP'ın ifadesini engelleyerek ve hBMSC'lerin farklılaşmasını teşvik ederek osteoporozun patogenezinde koruyucu bir etkiuygulayabilir. Özellikle, OA hastalarının sinovial dokularının miRNA ekspresyon profilleri analiz edildiğinde miR-215-5p'nin yukarı regülasyona uğradığıtespit edilmiştir 16. Ancak, serum miR-215-5p ekspresyonu ve OA için tanısal bir biyobelirteç olarak potansiyeli henüz araştırılmamıştır. miR-215-5p'nin OA kondrositlerindeki rolü, özellikle hücre canlılığı, göçü ve inflamatuar yanıt üzerindeki etkileri hâlâ belirsizdir. MiR-215-5p'nin OA'da düzenleyici işlevini belirli aşağı akış hedefleri aracılığıyla uygulayıp uygulamadığını bildiren hiçbir çalışma bulunmamıştır. Bu boşlukları doldurmak, OA moleküler mekanizmalarına dair yeni içgörüler sağlayacak ve yeni aday terapötik hedefleri belirleyecektir.

EREG, epidermal büyüme faktörü ailesine bir parçadır ve doku onarımı ile inflamatuar yanıtlarda rol oynadığıkanıtlanmış 17,18. Chen ve ark. tarafından yapılan çalışma, OA hastalarının kıkırdak ve sinovial dokularında EREG ifadesinin kontrolgrubuna kıyasla anlamlı şekilde azaldığını bildirdi 19. Ancak, EREG'in OA kondrositlerinde miR-215-5p'nin aşağı akış hedefi olup olmadığı ve bu düzenleyici eksenin OA patogenezindeki rolü şu anda belirsizdir.

Yukarıdaki arka plana dayanarak, serum miR-215-5p ifadesinin OA hastalarında yukarı düzenlendiğini ve doğrudan EREG'i hedefleyerek kondrosit inflamatuar disfonksiyonunu tetiklediğini, miR-215-5p inhibitionunun ise interleukin-1β (IL-1β) kaynaklı kondrosit hasarını hafiflettiğini varsayıyoruz. Bu çalışma, klinik ve hücresel doğrulama için birleşik ölçülebilir son noktalar ve yargı kriterleri benimsedi: klinik olarak 110 OA hastası ve 105 sağlıklı kontrol kontrol sınıfı kaydedildi; serum miR-215-5p ve EREG seviyeleri qRT-PCR ile nicelendirildi ve tanısal performansı değerlendirmek için ROC eğrileri uygulandı (AUC 0.7, P 0.05 ≥ < geçerlidir). MiR-215-5p ile OA klinik özellikleri arasındaki ki-kare testleriyle korelasyonlar analize edildi ve çok değişkenli lojistik regresyon bağımsız OA risk faktörlerini (ayarlanmış P < 0.05) tespit etti. In vitro, C28/I2 kondrositleri 24 saat boyunca 10 ng/mL IL-1β ile tedavi edilerek OA modeli oluşturuldu, ardından miR-215-5p inhibitörü/mimik ve si-EREG ile transfeksiyon yapıldı. CCK-8, Transwell ve ELISA testleri hücre canlılığı, göçü ve inflamatuar sitokin seviyelerini değerlendirmek için kullanıldı. Kurtarma deneyi kriterleri: miR-215-5p inhibitörü kondrositlerin canlılığını ve göçünü geri getirdi (P < 0.05), EREG susturması ise bu koruyucu etkiyi kısmen ortadan kaldırdı (P < 0.05). Biyoinformatik TargetScan tahmini, çift lusiferaz raporlayıcı testleri ve RIP testleri doğrudan bağlanmalarını daha da doğruladı: miR-215-5p mimik transfeksiyonundan sonra WT-EREG lusiferaz aktivitesinde anlamlı azalma ve Ago2 çökeltmelerinde miR-215-5p/EREG zenginleştirmesi belirgin şekilde yükseldi, IgG kontrolüne karşı (hem P < hem de 0.05) hedef etkileşim kriterleri olarak tanımlandı. Bu çalışma, OA'da miR-215-5p'nin tanısal değerini ve moleküler mekanizmasını sistematik olarak netleştirerek yeni terapötik adaylar belirlemiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Çalışma, Helsinki Bildirgesi'nin ilkelerine uygun şekilde gerçekleştirilmiştir. Xianyou İlçe Genel Hastanesi Etik Komitesi, çalışmayı başlamadan önce onayladı (Onay No. 202514, 18 Haziran 2025).

Protokolün özeti Ek Şekil 1'de verilmiştir.

Örnek

Bu hastanede tedavi edilen toplam 110 OA hastası ve 105 sağlıklı kontrol bu araştırma için alındı. OA grubu için dahil etme kriterleri şöyleydi: OA tanısı Amerikan RomatolojiKoleji 20 tarafından belirlenen sınıflandırma kriterlerine göre doğrulandı. Tüm hastalara röntgen görüntüleme ve Kellgren-Lawrence (K-L) görüntüleme derecelendirmesi yapıldı; Yatıştan önce 3 ay içinde antibiyotik tedavisi yapılmaması; tam klinik veriler; ve tüm hastalardan yazılı bilgilendirilmiş onay alındı. OA grubu için hariç tutma kriterleri, ilgili tedavi almış veya hastalığın terminal evrelerinde olan hastalardı; gut, romatoid artrit gibi diğer eklem hastalıklarından muzdarip olanlar; tümörler, şiddetli karaciğer ve böbrek yetmezliği, otoimmün hastalıklar, enfeksiyon hastalıkları, nörolojik hastalıklar veya şiddetli kardiyorespiratuar hastalıklar kombinasyonu olanlar; ve kendilerine bakmalarını engelleyen fiziksel engelli kişiler. Kayıt sırasında tüm katılımcıların başlangıç verileri kaydedildi; yaş, cinsiyet, vücut kitle indeksi (BMI), sigara içmek, alkol içmek, aile öyküsü, hastalık süreci, K-L notu, Görsel Analog Ölçeği (VAS) puanı, Western Ontario ve McMaster Üniversiteleri Osteoartrit Endeksi (WOMAC) puanı ve lezyon bölgesi dahil olmak üzere kayıtlara geçti. İlgili veriler analiz edilip Tablo 1'de özetlenmiştir. Tüm deneklerden açlık halinde 8 mL venöz kan alındı, 4 °C'de 3 saat bekletildi, ardından serum izole etmek için 3000 × g ile 15 dakika boyunca 4 °C'de santrifüj edildi. Serum nazikçe hasat edilip −80 °C'de tutuldu ve daha fazla test yapıldı.

İnsan kanı/serumu (Kategori B bulaşıcı biyolojik materyal), bilinmeyen bulaşıcı patojenler taşıyabilecek ve sıçrama, iğne batması veya hasarlı deriyle temas yoluyla perkutan veya mukoza enfeksiyonlarına yol açabilen insan vücut sıvıları içerir. Tek kullanımlık nitril eldivenler, tek kullanımlık tıbbi izolasyon önlükleri, gözlük veya yüz maskesi ve cerrahi maske giymek zorundadır. Yüksek basınçlı sterilizasyona tabi tutulduktan sonra, sertifikalı tıbbi atık bertaraf kurumları tarafından merkezi olarak toplanır ve yakılır.

Hücre kültürü ve OA hücre modeli yapısı

İnsan C28/I2 kondrositleri, %5 CO₂ ile dolu nemlendirilmiş kuluçka içinde, %10 fetal sığır serumu (FBS) içeren DMEM/F12 ortamında 37 °C'de tutuldu. Tüm deneyler, stabil bir hücresel fenotipi korumak için 3–6 geçişlerdeki hücreler kullanılarak gerçekleştirildi. Hücre birleşimi %80'e ulaştığında sonraki deneysel manipülasyonlar yapıldı. Deneysel gruptaki hücreler, in vitro OA model21 oluşturmak için 37 °C'de 10 ng/mL IL-1β ile 24 saat boyunca işlendi, kontrol grubundaki hücreler ise tedavi edilmedi.

Hücre transfeksiyonu

Negatif kontrol inhibitörü (inhibitör-NC), miR-215-5p inhibitörü, mimic-NC, miR-215-5p mimik, negatif kontrol küçük interferens RNA (si-NC) ve si-EREG ticari olarak sentezlendi. Transfeksiyon testleri, hücrelerin logaritmik büyüme aşamasında transfeksiyon reaktifi kullanılarak 6 delikli plakalarda gerçekleştirildi. Özellikle, inhibitör/mimik veya negatif kontrollerin 50 nM'si, her kuyu başına 125 μL Opti-MEM ortamında seyreltilmiş, 5 μL transfeksiyon reaktifiyle birlikte 125 μL Opti-MEM içinde çözünmüş ve oda sıcaklığında 15 dakika boyunca tutularak kompleks oluşturulmuştur. Karışım hücrelere eklendi. Hücreler, transfeksiyondan 48 saat sonra sonraki deneyler için alındı.

Nicel ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PCR testi)

Toplam RNA, üreticinin protokollerine uygun olarak TRIzol reaktifi kullanılarak izole edildi ve örneklerde serum ile hücreler bulundu. Ters transkripsiyon için, üreticinin PrimeScript Ters Transkriptoz protokolüne uygun olarak her reaksiyonda toplam 1 μg RNA kullanılmıştır. Ters transkripsiyon tamamlandıktan sonra, SYBR-Green Real Master karışımı reaksiyon reaktifi olarak kullanılan gerçek zamanlı PCR cihazında amplifikasyon reaksiyonları gerçekleştirildi. Termal döngü parametreleri şöyleydi: ilk denatürasyon 95 °C'de 30 saniye, ardından 40 döngü 95 °C 5 saniye ve 60 °C 30 saniye. QRT-PCR tüm örnekler için teknik üçlü olarak gerçekleştirildi. miRNA ve mRNA seviyelerinin nicel tespiti için, döngü eşiği (Ct) değerleri endogen referans olarak U6 ve β-aktin kullanılarak normalleştirildi ve nihai veri analizi 2-ΔΔCT yöntemiyle nicelendirildi. qRT-PCR için kullanılan primer dizileri, Ek Tablo 1'de sunulmaktadır.

TRIzol reaktifi tehlikeli bir kimyasaldır. Oldukça aşındırıcıdır; Doğrudan temas cilt ve gözlerde ciddi yanıklara yol açabilir ve uçucu dumanlar solunum yolunu tahriş edebilir. Kimyasal dirençli nitril eldivenler, laboratuvar önlükleri ve kimyasal sıçrama geçirmez gözlükler giymek gereklidir; sadece bir buharlı davlumonda kullanılabilir. Atık sıvı, etiketli kaplı plastik kimyasal atık kaplarında saklanır ve yerel düzenlemelere uygun şekilde bertaraf edilir.

Hücre canlılık testi

Hücre canlılığı Hücre Sayma Kiti-8 (CCK-8) ile değerlendirildi. Hücreler, 5 ×10 3 hücre/kuyu ile 96 kuyuklu plakalara yerleştirildi. 0, 24, 48 ve 72 saatlik kuluçkada, her kuyuya 10 μL CCK-8 çözeltisi eklendi. Hücreler 37 °C'de 1 saat kuluçka edildikten sonra, her kuyunun optik yoğunluğu 450 nm olarak ölçüldü.

Transwell testi

Hücre göç kapasitesi, 8 μm gözenek boyutunda zarlara sahip bir Transwell odası kullanılarak değerlendirildi. Kısaca, serumsuz ortam içeren üst girişlere 5 ×10 4 hücre/kuyu yerleştirildi, alt insertler ise tam ortamla takviye edildi. Odalar 37 °C'de 24 saat kuluçka altına alındı. Üst membran yüzeyinde kalan ve göç etmeyen hücreler pamuk çubukla nazikçe silindi. Alt yüzeye göç eden hücreler 10 dakika boyunca %4 formaldehit ile sabitlendi ve 20 dakika boyunca %0,1 kristal violet ile boyandı. Son olarak, zarı delen hücreler gözlemlenip optik mikroskopla sayıldı (×200). Her model için, saymak üzere rastgele olarak çakışmayan beş görüş alanı seçildi. Her deneysel gruptaki göç eden hücre sayısının ortalaması hesaplandı ve kaydedildi.

Formaldehit (kanserojen, cilt/solunum tahrişleyicisi, uçucu toksik organik bileşik). Uçucu gazı mukozal tahriş, dermatit ve alerjik reaksiyonlara neden olabilir. Tüm işlemler iyi havalandırılan bir buhar kapasası içinde yapılmalıdır. Kimyasal dirençli eldivenler, laboratuvar önlüğü, sis önleyici gözlükler ve aktif karbon solunum cihazı takın. PFA içeren atıklar tehlikeli atık düzenlemelerine uygun şekilde muamele edilmelidir. Atıklar yerel düzenlemelere uygun olarak bertaraf edilmelidir.

Kristal menekşe biyolojik bir lekedir. Deri yoluyla emildiğinde toksiktir; Çevre üzerinde uzun vadeli zararlı etkileri vardır. Doğrudan ciltle temas ve rastgele akıntıdan kaçının. Tek kullanımlık nitril eldivenler ve laboratuvar önlüğü giyin.

Enzimle bağlantılı immünosorbent testi (ELISA)

IL-1β, IL-6 ve tümör nekroz faktörü-α (TNF-α) seviyeleri, ürün kılavuzunda belirtilen operasyonel yönergelere uygun olarak insan ELISA kitleri aracılığıyla ölçüldü.

Dual luciferase reporter gen testi

TargetScan veritabanı, miR-215-5p'nin aday hedef genlerini tahmin etmek için kullanıldı. miR-215-5p'nin hedef gen EREG ile etkileşimi, çift lusiferaz test kiti aracılığıyla analiz edildi: EREG'in vahşi tip ve mutant dizileri amplifikasyon yapıldı ve pGL3 vektörüne klonlandı. Daha sonra, inşa edilen rekombinant plazmidler, sırasıyla mimik-NC veya miR-215-5p taklitiyle birlikte C28/I2 hücrelerine transfekte edildi. 48 saatlik kuluçkadan sonra lusiferaz aktivitesi tespit edildi.

RNA immünopresipitasyonu (RIP)

miR-215-5p ile EREG arasındaki etkileşim, EZ-Magna RIP Kit ile doğrulandı. Adımlar şöyleydi: hücreler önce RIP lizatla lizedilmişti. Daha sonra, hücre lizatları, RIP tamponunda anti-argonaute 2 (Ago2) veya anti-immünoglobulin G (IgG) antikorlarına (insan) konjuge edilmiş manyetik boncuklarla birlikte inkubasyon edildi. Daha sonra RNA proteinaz K ile işlendi ve saflaştırıldı. Son olarak, miR-215-5p ve EREG seviyeleri qRT-PCR kullanılarak ölçüldü.

İstatistikler

Veri analizi ve görüntü çizimleri SPSS ve GraphPad Prism kullanılarak gerçekleştirildi. Shapiro-Wilk testi, istatistiksel analizden önce dağılımın normalliğini değerlendirmek için uygulanmıştır. Normal dağılımdan sonra yapılan ölçümler, ortalama ± standart sapma (SD) olarak ifade edildi. İki gruplu karşılaştırmalar için öğrencinin t-testi kullanılırken, varyans analizi (ANOVA) ve ardından Tukey'nin post-hoc testi çoklu grup analizleri için kullanıldı. Normalde dağılım olmayan sürekli değişkenler medianlar ve çeyreklerarası aralıklar (IQR) olarak rapor edildi ve Mann-Whitney U testi kullanılarak karşılaştırıldı. Kategorik değişkenler yüzde olarak ifade edildi (n (%)) ve gruplar arası farklar ki-kare testiyle incelendi. miR-215-5p'nin OA için tanısal etkinliği, alıcı çalışma karakteristikası (ROC) eğrileri kullanılarak değerlendirildi. miR-215-5p ile OA hastalarının klinik özellikleri arasındaki ilişki, ki-kare testi ile değerlendirildi. OA gelişimi için risk faktörleri, çok değişkenli lojistik regresyon kullanılarak incelenmiştir. miR-215-5p ile EREG arasındaki ilişki Spearman korelasyon analiziyle değerlendirildi. P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Temel özellikler

Kontrol grubuna dahil edilen 105 hasta dahil edildi; bunların arasında 58 (%55,24) erkek ve 47'si (%44,76) kadın bulunmakta, ortalama yaşı 52,81 ± 12,57 yaş ve BMI 24,25 ± 2,71 kg/m 2 idi. OA grubunda 110 hasta bulunuyordu; 69'u erkek ve 41'i (%37,27) kadındı; ortalama yaş 54,42 ± 12,33 yaş, BMI 24,88 ± 3,51 kg/m 2 idi. OA grubu için ek temel bilgiler Tablo 1'de sunulmuştur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Klinik ortamlarda yaygın bir eklem rahatsızlığı olan OA, diyabet ve demanstan sonra organik engelliliğin üçüncü en önemli nedenihaline gelmiştir 22,23. Ancak, OA'nın patogenezi karmaşıktır ve teşhisi genellikle klinik semptomlar, görüntüleme muayeneleri ve diğer yöntemlerin birleşimini gerektirir; uzun tanı döngüsü ise hastaların zamanında tedavisini ciddi şekildegeciktirmektedir 24. Bu nedenle, OA tanısı ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların, bu makalede tartışılan hiçbir materyalde finansal veya mülkiyetli çıkarları yoktur.

Teşekkürler

Yazarlar bu çalışma için özel bir fon almadılar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
96-well platesCorning/USA3903
Anti-Ago2Abcam/USAAB_867543
RRID: ab186733
Anti-IgGAbcam/USAAB_10673832
RRID: ab133470
C28/I2 kondrositlerMerck Millipore/USASCC043
CCK-8 KitBeyotime/ÇinC0038Hücre canlılık analiz kiti
Kristal menekşeSigma-Aldrich/USAV5265
DMEM/F12 ortamıGibco/USA11320033
Dual-Luciferase Reporter Assay KitPromega/USAE1910
EZ-Magna RIP KitMerck Millipore/USA17701
FBSThermo Fisher Scientific/USA26010074
FormaldehitSigma-Aldrich/USAF8775
Graphpad Prism 9.0GraphPad Software Inc. /USAhttps://www.graphpad.com/features
IL-1βSigma-Aldrich/USASRP3083
IL-1β ELISA kitiNanjing Jiancheng/ÇinH002-1-2
IL-6 ELISA kitiNanjing Jiancheng/ÇinH007-1-2
İnkübatörThermo Fisher Scientific/USABB150-2TCS-L
Inhibitor-NCGenePharma (özel sentez) /Çinhttps://www.genepharma.com/
Light Cycler 480Roche/İsviçrehttps://lifescience.roche.com/global/en/article-listing/article/lightcycler-480-system-technology.htmlGerçek zamanlı PCR cihazı
Lipofectamine 3000Invitrogen/USAL3000015Hücre transfeksiyonunda kullanılan transfeksiyon reaktifi
Mikroplate okuyucuThermo Fisher Scientific/USAVA000010C
MikroskopNikon/Japonyahttps://www.nikon.com.cn/sc_CN/
Mimic-NCGenePharma (özel sentez) /Çinhttps://www.genepharma.com/
MiR-215-5p inhibitörüGenePharma (özel sentez) /Çinhttps://www.genepharma.com/
MiR-215-5p taklitçisiGenePharma (özel sentez) /Çinhttps://www.genepharma.com/
Opti-MEMGibco/USA31985070
pGL3 vektörüPromega/USAE1751
PrimeScript Reverse TranskriptazTakara/Japonya2680Ters transkripsiyon kiti
Si-EREGGenePharma (özel sentez) /Çinhttps://www.genepharma.com/
Si-NCGenePharma (özel sentez) /Çinhttps://www.genepharma.com/
SPSS 24.0IBM Corp/USAhttps://spssau.com/index.html
SYBR Green SupermixBio-Rad/USA1725121
TNF-α ELISA kitiNanjing Jiancheng/ÇinH052-1-2
Transwell odasıCorning/USA3422
TRIzol reaktifiThermo Fisher Scientific/USA15596026RNA izolasyon reaktifi

Kaynaklar

  1. Jiang Y. Osteoarthritis year in review 2021: biology. Osteoarthritis Cartilage. 2022;30(2):207–215.
  2. Choi WS, et al. The CH25H-CYP7B1-RORalpha axis of cholesterol metabolism regulates osteoarthritis. Nature. 2019;566(7743):254–258.
  3. Lankhorst NE, et al. Incidence, prevalence, natural course, and prognosis of patellofemoral osteoarthritis: the Cohort Hip and Cohort Knee study. Osteoarthritis Cartilage. 2017;25(5):647–653.
  4. Nelson AE. Osteoarthritis year in review 2017: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 2018;26(3):319–325.
  5. Herrero-Beaumont G, et al. Systemic osteoarthritis: the difficulty of categorically naming a continuous condition. Aging Clin Exp Res. 2024;36(1):45.
  6. Abramoff B, Caldera FE. Osteoarthritis: Pathology, Diagnosis, and Treatment Options. Med Clin North Am. 2020;104(2):293–311.
  7. Han D, et al. The emerging role of fibroblast-like synoviocytes-mediated synovitis in osteoarthritis: An update. J Cell Mol Med. 2020;24(17):9518–9532.
  8. Maroun G, Fissoun C, Villaverde M, Brondello JM, Pers YM. Senescence-regulatory factors as novel circulating biomarkers and therapeutic targets in regenerative medicine for osteoarthritis. Joint Bone Spine. 2024;91(2):105640.
  9. Zhang Y, Zhao P, Li S, Mu X, Wang H. CircSCAPER knockdown attenuates IL-1beta-induced chondrocyte injury by miR-127-5p/TLR4 axis in osteoarthritis. Autoimmunity. 2022;55(8):577–586.
  10. Song AF, Kang L, Wang YF, Wang M. MiR-34a-5p inhibits fibroblast‑like synoviocytes proliferation via XBP1. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020;24(22):11675–11682.
  11. Lu X, Lin J, Jin J, Qian W, Weng X. Hsa-miR-15a exerts protective effects against osteoarthritis by targeting aggrecanase-2 (ADAMTS5) in human chondrocytes. Int J Mol Med. 2016;37(2):509–16.
  12. Yin CM, et al. Dysregulation of both miR-140-3p and miR-140-5p in synovial fluid correlates with osteoarthritis severity. Bone Joint Res. 2017;6(11):612–618.
  13. Yang X, Meng T. miR-215-5p decreases migration and invasion of trophoblast cells through regulating CDC6 in preeclampsia. Cell Biochem Funct. 2020;38(4):472–479.
  14. Yao Y, et al. MiR-215-5p inhibits the inflammation injury in septic H9c2 by regulating ILF3 and LRRFIP1. Int Immunopharmacol. 2020;78:106000.
  15. Yin Z, et al. miR-215-5p regulates osteoporosis development and osteogenic differentiation by targeting XIAP. BMC Musculoskelet Disord. 2022;23(1):789.
  16. Zhou Y, et al. Identification of differentially expressed miRNAs and mRNAs in synovial of osteoarthritis via RNA-sequencing. BMC Med Genet. 2020;21(1):46.
  17. Zhao YC, et al. Epiregulin enhances periodontal tissue regeneration by promoting bone marrow mesenchymal stem cell functions under inflammatory niches. World J Stem Cells. 2026;18(2):114032.
  18. Li PL, et al. Multiomic identification of senescent stem cell populations critical for osteoarthritis progression and therapy in subchondral bones. Sci Adv. 2025;11(29):eadu2294.
  19. Chen YJ, et al. Systematic Analysis of Transcriptomic Profile of Chondrocytes in Osteoarthritic Knee Using Next-Generation Sequencing and Bioinformatics. J Clin Med. 2018;7(12):535.
  20. Altman R, et al. Development of criteria for the classification and reporting of osteoarthritis. Classification of osteoarthritis of the knee. Diagnostic and Therapeutic Criteria Committee of the American Rheumatism Association. Arthritis Rheum. 1986;29(8):1039–49.
  21. Gan K, et al. Positive feedback loop of lncRNA FAM201A/miR‑146a‑5p/POU2F1 regulates IL‑1beta‑induced chondrocyte injury in vitro. Mol Med Rep. 2022;25(1):20.
  22. GBD 2016 Disease and Injury Incidence and Prevalence Collaborators. Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 2017;390(10100):1211–1259.
  23. Mandl LA. Osteoarthritis year in review 2018: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 2019;27(3):359–364.
  24. Mobasheri A, et al. The role of metabolism in the pathogenesis of osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2017;13(5):302–311.
  25. Xiong X, et al. MicroRNA miR-215-5p Regulates Doxorubicin-induced Cardiomyocyte Injury by Targeting ZEB2. J Cardiovasc Pharmacol. 2021;78(4):622-629.
  26. Cai C, Zhang R, Xu X, Li G, Gou H. Diagnostic values of NLR and miR-141 in patients with osteoarthritis and their association with severity of knee osteoarthritis. Exp Ther Med. 2021;21(1):74.
  27. Lai Z, Cao Y. Plasma miR-200c-3p, miR-100-5p, and miR-1826 serve as potential diagnostic biomarkers for knee osteoarthritis: Randomized controlled trials. Medicine (Baltimore). 2019;98(51):e18110.
  28. Qi K, et al. Long Non-Coding RNA (LncRNA) CAIF is Downregulated in Osteoarthritis and Inhibits LPS-Induced Interleukin 6 (IL-6) Upregulation by Downregulation of MiR-1246. Med Sci Monit. 2019;25:8019–8024.
  29. Platzer H, et al. The Impact of 45S5-Bioactive Glass on Synovial Cells in Knee Osteoarthritis-An In Vitro Study. Materials (Basel). 2023;16(24):7594.
  30. Ren T, et al. MiR-140-3p Ameliorates the Progression of Osteoarthritis via Targeting CXCR4. Biol Pharm Bull. 2020;43(5):810–816.
  31. Ying P, et al. Analysis of the regulatory role of miR-34a-5p/PLCD3 in the progression of osteoarthritis. Funct Integr Genomics. 2023;23(2):131.
  32. Fields JK, Gunther S, Sundberg EJ. Structural Basis of IL-1 Family Cytokine Signaling. Front Immunol. 2019;10:1412.
  33. Pratama DGK, Suyasa IK, Astawa P, Lestari AAW. High IL-6 level as a marker of lumbar osteoarthritis in patients older than 55 years with low back pain. Orthop Res Rev. 2019;11:17–21.
  34. Molnar V, et al. Cytokines and Chemokines Involved in Osteoarthritis Pathogenesis. Int J Mol Sci. 2021;22(17):9208.
  35. Ji W, Sun B, Su C. Targeting MicroRNAs in Cancer Gene Therapy. Genes (Basel). 2017;8(1):21.
  36. Chen X, et al. Cell membrane-camouflaged nanomedicines for enhanced thrombolysis and blood-brain barrier penetration in ischemic stroke therapy. Int J Pharm X. 2025;10:100404.
  37. Gupta T, et al. Enhancing Bioavailability and Stability of Curcumin Using Solid Lipid Nanoparticles (CLEN): A Covenant for Its Effectiveness. Front Bioeng Biotechnol. 2020;8:879.
  38. Liang Q, Cheng Z, Qin L. Advanced nanoparticles in osteoarthritis treatment. Biomater Transl. 2024;5(2):95–113.
  39. Shi Z, et al. Micro-nano integrated platforms for osteoarthritis therapy: From spatial manipulation to cellular reprogramming. Mater Today Bio. 2026;37:102963.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

İmmünoloji ve EnfeksiyonSayı 233Sayı 233Boş DeğerSayıTanı
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.