Mir-146a Rs2910164 ile Alerjik Rinit Duyarlılığı Arasındaki İlişkinin İncelenmesi

Özet

Bu çalışma, miR-146a rs2910164 polimorfizmi ile alerjik rinit (AR) yatkınlığı arasındaki ilişkiyi açıklamayı amaçlamaktadır. Düşük plazma miR-146a seviyeleri ve rs2910164 GG genotipi, AR hastalarında artmış AR riski, güçlenmiş inflamatuar yanıtlar ve daha şiddetli klinik belirtilerle ilişkilidir.

Özet

Alerjik rinit (AR), hastaların yaşamı için bir tehdit oluşturmasa da yaşam kalitelerini ciddi şekilde bozar. MicroRNA-146a (miR-146a), bağışıklık düzenlemesi ve inflamatuar yanıtlar için kritiktir; ancak, miR-146a rs2910164 polimorfizmi ile AR duyarlılığı arasındaki ilişki henüz tam olarak anlaşılamamıştır. Bu vaka-kontrol çalışması, miR-146a rs2910164 polimorfizminin AR duyarlılığı üzerindeki etkisini araştırmak için tasarlanmıştır. Bu çalışmaya toplam 180 AR dışı gönüllü ve 211 AR hastası dahil edilmiştir. Plazma miR-146a ekspresyonu RT-qPCR ile ölçülmüş; rs2910164 genotipi TaqMan-qPCR yöntemi kullanılarak tespit edilmiştir. Serum IgE, IL-4, IL-6 ve IL-10 seviyelerini belirlemek için ELISA kullanılmıştır. Pearson korelasyon analizi ile miR-146a ekspresyonu ile TNSS skoru, RQLQ skoru ve serum faktör konsantrasyonları arasındaki doğrusal korelasyonlar değerlendirilmiştir. AR'nin risk faktörleri lojistik regresyon aracılığıyla belirlenmiştir. miR-146a rs2910164'ün GG genotipi ve G aleli, AR hastalarında sağlıklı kontrollere göre anlamlı derecede daha yaygındı. Plazma miR-146a seviyesi AR hastalarında azalmıştı. GG genotipine sahip AR hastalarında plazma miR-146a seviyesi daha düşük olup, daha aktif alerjik ve inflamatuar yanıtlar sergiledikleri görülmüştür. miR-146a ekspresyonu, alerjik semptomlarla ve klinik belirtilerin şiddetiyle yakından ilişkiliydi. Lojistik regresyon, serum IgE ve IL-4 seviyelerinin AR için bağımsız risk faktörleri, IL-10 ve miR-146a ekspresyonunun ise bağımsız koruyucu faktörler olduğunu göstermektedir. AR hastalarında düşük plazma miR-146a seviyeleri gözlemlenmekte ve miR-146a rs2910164'ün GG genotipi AR duyarlılığını artırmaktadır.

Giriş

Alerjik rinit (AR), nazal mukozanın alerjen aracılı, enfeksiyöz olmayan inflamatuar bir bozukluğudur. AR'nin tipik klinik semptomları arasında burun kaşıntısı, burun tıkanıklığı, şeffaf burun akıntısı ve sık hapşırma yer alır¹. Daha şiddetli vakalarda hastalar koku duyusunda azalma yaşayabilir ve hatta uyku kalitesi etkilenebilir. Epidemiyolojik veriler, AR'nin küresel yaygınlık oranının yıldan yıla artarak %10 ile %25'e ulaştığını göstermektedir². AR hastaların hayatını tehlikeye atmasa da uykuyu, öğrenmeyi ve çalışmayı ciddi şekilde bozar, yaşam kalitesini önemli ölçüde düşürür ve bireyler ile toplum üzerinde ağır bir ekonomik yük oluşturur³. Çalışmalar, AR'nin astım için bir risk faktörü olduğunu ve hastalık ilerledikçe hastaların sinüzit veya nazal polipler geliştirme olasılığının arttığını, bunun da hastalığın yükünü daha da artırdığını doğrulamıştır^4,5. Bu nedenle, AR'nin önlenmesi ve kontrol altına alınması solunum yolu hastalıkları alanında temel bir görev haline gelmiştir. Ancak, AR'nin patogenezi henüz tam olarak aydınlatılmamıştır. AR'nin patofizyolojik mekanizmasının derinlemesine araştırılması ve hedeflenmiş tedavi stratejilerinin geliştirilmesi kritik öneme sahiptir. Bu durum, aynı zamanda acilen çözülmesi gereken güncel bilimsel konulardır.

AR başlangıcı çevresel ve genetik faktörlerle ilişkilidir⁶. Güncel araştırmalar genel olarak, bireysel genetik yatkınlık ile alerjen maruziyeti ortamının sinerjik etkisinin AR başlangıcındaki temel itici faktör olduğunu kabul etmektedir. Brozek ekibi, vücudun genetik yatkınlığı ile çevresel maruziyetler arasındaki etkileşimin AR'nin temel nedeni olduğunu daha sonra teyit etmiştir². AR genetik mekanizma araştırmaları alanında, genetik polimorfizm bilim insanlarının dikkatini giderek daha fazla çeken bir odak noktası haline gelmiştir. Genetik polimorfizmin yaygın bir formu olan tek nükleotid polimorfizmleri (SNP'ler), organizmalarda genetik bilgi varyasyonunun birincil nedenidir⁷. Biriken kanıtlar, IL-33 rs7044343'teki TT genotipinin AR'nin önlenmesi ve tedavisi için potansiyel bir hedef olabileceğini göstermektedir⁸. Ek olarak, CD14 promotör C-159T bölgesindeki TT genotipi, AR riski için öngörücü bir belirteç görevi görmektedir⁹. Bu durum, kilit gen SNP'lerinin AR riskini değerlendirmek, erken uyarılar sağlamak ve kesin önleme ile tedaviyi gerçekleştirmek için önemli moleküler hedefler olarak hizmet edebileceğini göstermektedir. Bu, AR'nin genetik yatkınlık mekanizmasının daha derinlemesine anlaşılması için kritik ipuçları sağlamaktadır.

Çok sayıda çalışma, mikroRNA'ların (miRNA'lar) anormal ekspresyonunun, geniş bir hastalık yelpazesinin ortaya çıkışında ve gelişiminde temel itici faktörlerden biri olduğunu ortaya koymuştur¹⁰. miRNA'lar, vücut sıvılarında stabil olarak bulunma özelliğine sahiptir ve bu durum onları hastalık teşhisi için oldukça hassas moleküler markerlar haline getirir. miR-146a, kapsamlı biyolojik fonksiyonlara sahip bir kodlamayan RNA molekülü türüdür¹¹. rs2910164 polimorfizmi, prekürsör miR-146a sekansının sap-ilmek (stem-loop) bölgesinde yer alır. Bu bölgedeki varyasyon, pre-miR-146a'nın işlenme ve olgunlaşma verimliliğini etkileyebilir; böylece olgun miR-146a'nın ekspresyon seviyesini değiştirerek downstream immün ve inflamatuar yanıtları etkileyebilir. Önceki çalışmalar, miR-146a'nın aşırı ekspresyonunun astım fare modellerinde hava yolu hiperreaktivitesini önemli ölçüde azaltabildiğini ve sensitize olmuş lenfositlerin aktivasyonunu inhibe edebildiğini doğrulamıştır¹². Epidermal büyüme faktörü reseptörünün (EGFR) aktivitesini hedefleyip inhibe ederek, miR-146a sinüzitin inflamatuar hasarını etkili bir şekilde hafifletebilir¹³. Ayrıca, miR-146a'nın aşırı ekspresyonu, Toll benzeri reseptör 4 (TLR4) sinyal yolunu bloke ederek AR fare modelinin patolojik semptomlarını da hafifletebilir¹⁴. Bu gözlemler, miR-146a'nın solunum sistemi hastalıklarını modüle etmedeki hayati rolünü vurgulamaktadır.

Genetik polimorfizm çalışmalarından elde edilen mevcut kanıtlar, miR-146a rs2910164 lokusundaki G alel frekansının hava yolu hiperreaktivitesi ile yakından ilişkili olduğunu göstermektedir¹⁵. Bu SNP, aynı zamanda Kore popülasyonunda astım riski için potansiyel bir biyobelirteç olarak kabul edilmektedir¹⁵. Ek olarak, Jimenez-Morales ekibi, miR-146a rs2910164 lokusundaki CC genotipinin astıma karşı koruma sağladığını ortaya koymuştur¹⁶. Bununla birlikte, miR-146a rs2910164 polimorfizmi ile AR duyarlılığı arasındaki ilişyere dair raporlanmış ilgili bir çalışma bulunmamaktaydı. Bu nedenle, bu çalışma miR-146a rs2910164 polimorfizminin AR üzerindeki etkisini doğrulamayı ve AR'nin patogenezi, klinik tanısı ve tedavisi için yeni bir teorik temel sağlamayı amaçlamaktadır.

Protokol

Etik beyan:
Tüm katılımcılar deneyimizin amacı hakkında tam olarak bilgilendirilmiş ve bilgilendirilmiş onam formunu imzalamıştır. Bu araştırma, Fujian Tıp Üniversitesi Longyan Birinci Bağlı Hastanesi etik kurulu tarafından onaylanmıştır (Onay numarası LYREC2023-k007-01). Tüm prosedürler ilgili kılavuzlara, düzenlemelere ve Helsinki Deklarasyonu'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

Katılımcı Alımı, Uygunluk Kriterleri ve Örnek Toplama
Ocak 2023 ile Mayıs 2025 tarihleri arasında, Fujian Tıp Üniversitesi Longyan Birinci Bağlı Hastanesi'nin kulak burun boğaz polikliniğinden AR tanısı konmuş toplam 211 birey ve 180 sağlıklı katılımcı (AR olmayan) alınmıştır. AR tanı kriterleri, Çin Alerji Derneği'nin Alerjik Rinit Tanı ve Tedavi Kılavuzları'ndan¹⁷ benimsenmiştir. Hastaların burun kaşıntısı, hapşırma, burun tıkanıklığı veya burun akıntısı dahil olmak üzere en az iki klinik AR semptomu göstermesi şart koşulmuştur. Ek olarak, burun mukoza muayenesinde solukluk ve ödem görülmesi ve Deri Prick Testi (SPT) sonucunun veya serum IgE testi sonucunun pozitif olması gerekmiştir. Doğruluğu ve tutarlı sonuçları garanti etmek amacıyla SPT, poliklinik alerjen test odasında uzman personel tarafından gerçekleştirilmiştir. Tüm AR hastaları, tıbbi personelin yardımıyla Rino konjonktivit Yaşam Kalitesi Anketi (RQLQ) ve Toplam Nazal Semptom Skoru (TNSS) değerlendirmelerine tabi tutulmuş ve skorlar sonraki analizler için kaydedilmiştir.

Hastanede rutin fiziksel muayeneden geçen sağlıklı gönüllüler, AR olmayan grup olarak çalışmaya dahil edilmiştir. Uygun katılımcıların kişisel veya ailesel AR öyküsü, astım veya diğer alerjik hastalık öyküsü, kronik sinüzit veya burun boşluğunun diğer inflamatuar hastalıkları bulunmamaktaydı ve önceki ay içerisinde herhangi bir solunum yolu enfeksiyonu geçirmemişlerdi. Ayrıca, ciddi kardiyak, hepatik, pulmoner veya renal hastalık öyküsü olanlar ya da herhangi bir malign tümörü bulunan bireyler çalışma dışı bırakılmıştır.

İki gönüllü grubundan periferik venöz kan örnekleri toplandı. Antikoagüle edilmiş venöz kanın bir kısmı DNA ekstraksiyonu ve plazma RNA ekstraksiyonu için kullanıldı. Venöz kanın diğer bir kısmı, serumla ilişkili faktörlerin (immünoglobulin E (IgE), interlökin-4 (IL-4), IL-6 ve IL-10) tespiti için kullanılmak üzere serum elde etmek amacıyla ayrıştırıldı.

DNA Ekstraksiyonu:
Tam kan genomik DNA ekstraksiyon kiti kullanılarak 200 µL periferik venöz kan örneklerinden DNA ekstraksiyonu yapılmıştır (Materyaller Tablosu'na bakınız). Kan örnekleri lityum heparin antikoagülan tüplere toplanmış, ardından alikotlanarak saklama için -20 °C'de dondurulmuştur. Spesifik uygulama prosedürleri, kitin talimatlarına kesinlikle uyulmalıdır. Son olarak, DNA'yı elüye etmek için 100 µL elüsyon tamponu kullanılmıştır. Ekstrake edilen DNA örneğinin saflığı, nükleik asit/protein analizörü (Spektrofotometre) ile belirlenmiştir (OD₂₆₀/OD₂₈₀ oranı 1,8 ile 2,0 arasındaydı). Tespit sonrası DNA örnekleri, sonraki genotipleme deneylerinde kullanılmak üzere -20 °C'de saklanmıştır.

Genotip Belirleme
miR-146a rs2910164 genotiplerinin dağılımını belirlemek için TaqMan SNP genotiplendirme kiti kullanılmıştır. Kit bilgileri sarf malzemeleri listesine eklenmiştir. Toplam PCR reaksiyon hacmi; 5 µL Master Mix, 0,5 µL tipleme probu primer karışımı, 10 ng kalıp DNA ve RNase-free su içeren 10 µL olarak belirlenmiştir. DNA amplifikasyonu, Roche LightCycler 480 II gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR cihazı ile gerçekleştirilmiştir. Reaksiyon koşulları: 95 °C'de 10 dk ön-denatürasyon; 40 döngü (95 °C'de 15 saniye, 60 °C'de 1 dk) ve FAM/VIC floresansı 60 °C'de okunmuştur. Amplifikasyon tamamlandıktan sonra, toplanan FAM/VIC çift floresan sinyalleri LightCycler 480 Yazılımı kullanılarak analiz edilmiş ve genotip verileri istatistiksel olarak işlenmiştir. Tek bir FAM sinyali homozigot bir genotipi, tek bir VIC sinyali diğer homozigot genotipi ve her iki sinyalin varlığı ise heterozigot bir genotipi temsil eder. Anormal sinyallere sahip olan veya tekrarlandığında tutarsız sonuçlar veren örnekler yeniden test edilecektir. Her deney, kalite kontrol amacıyla hem kalıp içermeyen kontrol hem de pozitif kontrol ile yürütülmüştür. Tüm örnekler üç teknik tekrara tabi tutulmuştur.

RT-qPCR
Toplam plazma miRNA ekstraksiyonu, özel bir miRNA ekstraksiyon kiti kullanılarak 100 µL plazmadan gerçekleştirilmiştir. Kit bilgileri sarf malzemeleri listesine girilmiştir. RNA konsantrasyonu bir spektrofotometre kullanılarak belirlenmiştir. Ekstraksiyonu yapılmış kaliteli miRNA örneklerinin OD₂₆₀/OD₂₈₀ oranı 1,8 ile 2,0 arasında değişmiştir. cDNA sentezlemek için ters transkripsiyonda 200 ng RNA kullanılmış ve reaksiyon prosedürü kitin standart talimatlarına uygun olarak yürütülmüştür. Ters transkripsiyon, 42 °C'de 60 dk inkübasyon ve 85 °C'de 5 dk inaktivasyon dahil olmak üzere toplam 20 µL hacimde gerçekleştirilmiştir. qPCR reaksiyonu, toplam 20 µL hacimle belirlenmiş protokole uygun olarak hazırlanmıştır. Reaksiyon karışımı şu şekilde düzenlenmiştir: 10 µL qPCR pre-mix, 0,4 µL ileri primer, 0,4 µL ters primer, 1 µL cDNA kalıbı ve 8,2 µL RNaz-free su. miR-146a ve dahili referans gen U6 için spesifik primerler kullanılmıştır. Amplifikasyon, Roche LightCycler 480 II gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR cihazı kullanılarak tamamlanmıştır. qPCR termal döngü koşulları şu şekildeydi: 30 s boyunca 95 °C'de ön-denatürasyon, ardından 40 döngü boyunca 5 s 95 °C'de denatürasyon ve 30 s 60 °C'de bağlanma ve uzama. Tüm örnekler üç teknik tekrara tabi tutulmuştur. Deneysel veriler LightCycler 480 Yazılımı kullanılarak analiz edilmiştir. Örnekler arası varyasyonu düzeltmek için dahili referans olarak U6 kullanılarak, önce ΔCt (miR-146a Ct değeri - U6 Ct değeri) hesaplanmış, ardından ΔΔCt (deney grubunun ΔCt değeri - kontrol grubunun ΔCt değeri) hesaplanmış ve son olarak miR-146a'nınle göreceli ekspresyon seviyesi 2^⁻ΔΔCt ile elde edilmiştir.

ELISA
IgE, IL-4, IL-6 ve IL-10 serum düzeyleri ELISA kitleri ile tespit edildi. Deneysel prosedürler için kullanım kılavuzuna başvuruldu. Spesifik adımlar şu şekildedir: İlk olarak, konsantre yıkama solüsyonu seyreltildi ve standart eğrisi için çalışma solüsyonlarını hazırlamak amacıyla standartlar gradyanlı olarak seyreltildi. İkinci olarak, kuyucuklara 50 µL dilüent, standart solüsyon ve test edilecek örnek eklendi ve 37 °C'de 60 dk inkübe edildi. İnkübasyon sonrası kuyucuklar, yıkama tamponu ile üç kez yıkandı. Ardından, 50 µL enzim-konjuge antikor çalışma solüsyonu eklendi ve plaklar 37 °C'de 30 dk inkübe edildi. İnkübasyon tamamlandıktan sonra sıvı atıldı ve kuyucuklar tekrar yıkandı; ardından kromojenik solüsyon eklendi ve karanlıkta 37 °C'de 15 dk inkübe edildi. Durdurma solüsyonu eklendikten sonra, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm'de absorbans ölçüldü. Örnek konsantrasyonları standart eğrisine göre hesaplandı. Her örnek üç kez test edildi. Varyasyon katsayısı %10'dan küçük olan veriler geçerli kabul edildi. Kalite kontrol için deney sırasında boş kuyucuklar ve kontrol kuyucukları oluşturuldu. Kitin tespit aralığı ve hassasiyeti, üretici kılavuzunda belirtilen yönetmeliklere uygundu.

Veri istatistikleri
Deneysel veriler SPSS ve GraphPad Prism 9 yazılımları kullanılarak analiz edilmiştir. Veriler ortalama ± standart sapma (ortalama ± SD) olarak sunulmuştur. Sürekli değişkenlerin normalliğini değerlendirmek için Shapiro-Wilk testi, varyans homojenliğini değerlendirmek için ise Levene testi uygulanmıştır. İki grup arasındaki sürekli değişkenlerin karşılaştırması bağımsız örneklem t-testi kullanılarak analiz edilmiştir. Çoklu grup karşılaştırmaları için tek yönlü ANOVA ve ardından Tukey post-hoc testi uygulanmış, iki bağımsız faktörün ana etkilerini ve etkileşim etkilerini değerlendirmek için ise iki yönlü ANOVA uygulanmıştır. Aykırı değerler, 3 standart sapma kuralına göre belirlenmiş ve hariç tutulmuştur. Bu çalışmada eksik veri tespit edilmemiştir. miR-146a'nın AR için tanısal etkinliğini analiz etmek amacıyla alıcı işletim karakteristik (ROC) eğrisi kullanılmıştır. İlgili ROC parametreleri ve %95 güven aralıkları, yerleşik istatistiksel algoritmalar kullanılarak hesaplanmıştır. miR-146a ekspresyonu ile serumla ilişkili faktörlerin seviyeleri arasındaki doğrusal korelasyonu ölçmek için Pearson korelasyon analizi kullanılmıştır. AR için risk faktörlerini taramak amacıyla tek değişkenli ve çok değişkenli lojistik regresyon analizleri yapılmıştır. Tek değişkenli analizde p < 0.05 olan değişkenler, çok değişkenli lojistik regresyon modeline dahil edilmiştir. p < 0.05 değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir.

Sonuçlar

Katılımcı Özellikleri ve Genotip Dağılımı
İki denek grubunun klinik bazal verileri istatistiksel olarak analiz edilmiştir. Sonuçlar; serum IgE, IL-4, IL-6 ve IL-10 seviyelerinin anlamlı farklılıklar gösterdiğini ortaya koymuştur. AR olmayan gönüllü grup ile karşılaştırıldığında, AR hastası grubunda serum IgE, IL-4 ve IL-6 konsantrasyonlarının arttığı, IL-10 seviyesinin ise azaldığı görülmüştür (Tablo 1). miR-146a rs2910164'ün genotip dağılımı TaqMan-qPCR yöntemi kullanılarak tespit e...

Tartışma

AR, solunum yollarının kronik alerjik inflamatuar bir hastalığıdır. AR'nin temel mekanizması, vücudun alerjenlere maruz kalmasının ardından nazal mukozadaki inflamatuar lezyonların IgE tarafından aracılanmasıdır^17,18. Klinik semptomlar temel olarak burun kaşıntısı, burun tıkanıklığı, hapşırma ve berrak burun akıntısını içerir ve bunlar hastaların yaşam kalitesini ciddi şekilde bozar. Epidemiyolojik ve genetik çalışmalar, genetik yatkınlığın AR'nin başlangıcı ve g...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
15 mL santrifüj tüpü	Corning	430791	Plazma ayrıştırma, numune alt paketleme ve nükleik asit ekstraksiyon işlemi için
Applied Biosystems TaqMan Genotiplendirme Master Mix	Thermo Fisher Scientific	4371355	2× hot-start Taq polimeraz, dNTP'ler, magnezyum iyonları, reaksiyon tamponu ve ROX referans boyası içeren, SNP genotipleme için optimize edilmiş konsantre master mix. Manuel sistem hazırlığı gerektirmez. Yukarıda belirtilen TaqMan SNP Genotipleme Analizi ile uyumlu olup; SNP amplifikasyonu ve floresan genotipleme için yüksek tekrarlanabilirlik ve net kümeleme sonuçları sağlayan stabil bir enzimatik reaksiyon sistemi sunar.
Applied Biosystems TaqMan SNP Genotipleme Analizi (rs2910164, miR-146a)	Thermo Fisher Scientific	C__15946974_10	İnsan miR-146a rs2910164 lokusunun SNP genotiplendirmesi için önceden tasarlanmış primer ve prob karışımı. Spesifik PCR primerleri ve iki MGB floresan prob içerir. VIC C alelini, FAM ise G alelini işaretler. qPCR cihazlarında uç nokta allelik ayrımı için uygun olup, tek bir reaksiyon tüpünde üç genotipi (CC, CG, GG) doğru bir şekilde ayırt edebilir.
BD Lityum Heparin Antikoagülan Kan Toplama Tüpleri	BD Vacutainer	367884	Klinik biyokimya, acil testler ve hematoloji araştırmaları
Graphpad	ABD	/	Profesyonel bilimsel grafik çizimi & istatistik yazılımı, biyoloji/tıp için standart, kodlama gerektirmez. Temel güçlü yönleri: t-testleri, ANOVA, sağkalım analizi, doğrusal olmayan regresyon (örneğin, doz-yanıt eğrileri); qPCR, Western Blot ve hücre deneyleri için yayına hazır grafikler (sütun, dağılım, sağkalım eğrileri) oluşturur.
İmmünoglobulin E (IgE) ELISA Kiti	Jiancheng	H108-1-2	Uygulama: İmmün yanıt, alerjik hastalık araştırmaları
İnterlökin-10 (IL-10) ELISA Kiti	Jiancheng	H010-1-2	Uygulama: İnflamasyon, immün regülasyon, klinik biyobelirteç araştırmaları
İnterlökin-4 (IL-4) ELISA Kiti	Jiancheng	H005-1-2	Araştırma alanı: İnflamasyon, Th2 bağışıklık yanıtı, alerjik reaksiyon
İnterlökin-6 (IL-6) ELISA Kiti	Jiancheng	H007-1-2	Uygulama: İnflamasyon, immün regülasyon, klinik biyobelirteç araştırmaları
LightCycler 480 Yazılımı (v1.5 /v1.6)	Roche Diagnostics	/	Tek tıklamayla qPCR veri elde etme, kantitatif analiz, erime eğrisi analizi ve SNP genotipleme (TaqMan uç nokta yöntemi + HRM) imkanı sağlayan resmi Roche yazılımı.
miRcute Geliştirilmiş miRNA cDNA İlk Zincir Sentez Kiti	TIANGEN	KR211-02	Tüm olgun miRNA ters transkripsiyon işlemleri için uygundur
miRcute Serum/Plasma miRNA Ekstraksiyon ve İzolasyon Kiti	TIANGEN	DP503	Uygulanabilir örnek: İnsan serumu, plazması, hücre süpernatantı
Roche LightCycler 480 Instrument II (Gerçek Zamanlı PCR Sistemi)	Roche Diagnostics	05015278001	qPCR Kantifikasyonu + SNP Genotiplemesi (TaqMan dahil) + HRM Yüksek Çözünürlüklü Erime Eğrisi Analizi
SPSS 27.0	ABD	/	Kapsamlı sosyal bilimler/tıbbi istatistik yazılımı, menü tabanlı (kodlama gerektirmez), geniş örneklemler için idealdir & karmaşık tasarımlar. Temel özellikler: tanımlayıcı istatistikler, ANOVA, regresyon, ki-kare, sağkalım analizi, güvenirlik, örneklem büyüklüğü hesaplaması; veri temizlemeyi destekler & klinik, anket ve epidemiyolojik veriler için çok formatlı içe aktarma (Excel/CSV).
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)	TIANGEN	FP205-02	Yüksek özgüllükle geliştirilmiş master mix; H-bağı faktörü ile optimize edilmiş tampon, primer dimerlerini minimize eder & spesifik olmayanlar; LightCycler 480 II için hot-start Taq + ROX; yüksek hassasiyet & tekrarlanabilirlik; düşük bolluktaki genler, karmaşık örnekler ve yüksek kapasiteli genotipleme için idealdir.
Thermo Scientific Multiskan FC Mikroplaka Fotometresi	Thermo	51119180	Üst segment çok modlu plaka okuyucu; absorbans (450 nm dahil) + floresans + lüminesans; doğrusallık 0–4 Abs (±%2) 450 nm'de, kesinlik SD&<0,001 Abs; 96/384 kuyucuk uyumlu, otomatik dinamik aralık; ELISA, hücre canlılığı, immünosayımlar, moleküler etkileşimler için idealdir.
Thermo Scientific NanoDrop One UV-Vis Spektrofotometre	Thermo	/	Altın standart mikrohacimli UV-Vis spektrofotometre; 1–2 μL örnek, küvet gerekmez; nükleik asitleri (260 nm), proteinleri (280 nm) ve konsantrasyonla birlikte OD600'ü doğrudan ölçer & saflık oranları (A260/A280, A260/A230); 190 nm'den başlayan tam spektrum taraması–850 nm, otomatik kalibrasyon, dokunmatik ekran; qPCR, NGS, protein saflaştırma kalite kontrolü için idealdir.
Tam kan genomik DNA ekstraksiyon kiti	TIANGEN	DP304-03	Uygulanabilir örnek: Periferik tam kan, kan hücreleri, doku örnekleri