Kan kaybı, travmaya bağlı koagülopati ve sağkalım sonuçlarını entegre eden, ciddi kanamalı, tekrarlanabilir bir fare karaciğer laserasyon modeli sunuyoruz. Model; koagülasyon, fibrinolitik ve mortalite değerlendirmelerinin yanı sıra rekombinant faktör VIIa ve traneksamik asit dahil olmak üzere hemostatik girişimlerin değerlendirilmesine olanak tanıyarak mekanistik ve translasyonel kanama araştırmaları için maliyet etkin ve ölçeklenebilir bir platform sağlamaktadır.
Yöntem makalesi
Travma Kaynaklı Hemorajik Koagülopati, İnflamasyon ve Sağkalımın Kantifikasyonunu Basitleştiren Bir Murin Karaciğer Laserasyonu Modeli
Bu makalede
Özet
Özet
Kontrol altına alınamayan kanama, travma hastalarında önlenebilir ölümlerin önde gelen nedenlerinden biri olmaya devam etmektedir ve travma kaynaklı koagülopati (TIC), erken mortalitenin temel belirleyicisidir. Kanamayı ve buna eşlik eden koagülopatik yanıtları güvenilir bir şekilde yeniden canlandıran deneysel modeller, mekanistik çalışmalar ve hedeflenen müdahalelerin değerlendirilmesi için gereklidir. Burada, kanamaya neden olan ve kesin olarak miktarı belirlenebilen, tekrarlanabilir karaciğer laserasyonu (LL) kullanarak, aynı zamanda sistemik koagülopati, inflamatuar belirteçler ve mortaliteyi eş zamanlı olarak takip edebilen standardize bir derin kanama fare modelini tanımlıyoruz.
Farelere standart bir midline laparotomi uygulanır ve ardından LL gerçekleştirilir; kan kaybı, kana doyurulmuş süngerler aracılığıyla ölçülür. Koagülasyon, fibrinoliz ve inflamasyonun sistemik belirteçleri, işlem öncesinde ve işlem sonrasında önceden belirlenmiş seri aralıklarla retro-orbital kan alma yoluyla toplanır. Kan kaybının eşlik ettiği LL, güvenilir bir şekilde TIC (aktive parsiyel tromboplastin zamanı (aPTT) uzaması, trombin-antitrombin (TAT) kompleksinde artış, fibrinolizin aktivasyonu ile birlikte koagülasyon faktörleri (F) V ve VIII'in seçici olarak tükenmesi ile karakterize) oluşturur. Paralelde, inflamatuar aktivasyon artmış interlökin-6 (IL-6) ile kanıtlanır. Ayrıca bu model, midline insizyon onarımı sonrası sağkalım analizlerine de olanak tanır.
Translasyonel bir uygulama olarak, koagülasyon ve fibrinolitik parametrelerin farmakolojik modülasyonu ile kanama kurtarma işlemine modelin duyarlı olduğunu kanıtlamak için rhFVIIa ve TXA kullanılır. Büyük hayvan modelleriyle karşılaştırıldığında, bu fare sistemi, travmatik hemorajiye yönelik yenilikçi ve hedefli müdahaleleri incelemek için ekonomik, çok yönlü ve kolayca ölçeklendirilebilir bir olanak sunar.
Giriş
Travma, genç yetişkinlerde (yaş < 45 yıl)1,2 önde gelen ölüm ve engellilik nedenlerinden biridir ve kontrol altına alınamayan kanama, erken dönem mortalitenin ana nedenlerinden birini oluşturur3. Ağır yaralanmalı hastalarda kötü sonuçların kritik bir faktörü, travma kaynaklı koagülopatinin (TIC) gelişmesidir4,5. TIC; koagülasyon faktör V ve VIII'in tükenmesi6,7, düzensiz fibrinoliz7,8,9 ve sistemik inflamatuar aktivasyon10 ile karakterize, kompleks ve multifaktöriyel bir hemostaz disregülasyonudur. Hasar kontrol resüsitasyonu ve terapötik müdahalelerdeki ilerlemelere rağmen TIC, devam eden kanamalara katkıda bulunur ve artan transfüzyon gereksinimleri11, organ yetmezliği5 ve mortalite ile ilişkilidir5.
Hemorajik şok ve buna eşlik eden koagülopatik değişiklikleri güvenilir bir şekilde yeniden üretebilen deneysel modeller, mekanistik araştırmalar ve hedeflenmiş hemostatik müdahalelerin değerlendirilmesi için gereklidir. Kontrollü kanama modelleri, doku hasarına yol açmayabilen ve klinik travmalarda gözlemlenen sistemik koagülopatik yanıta katkıda bulunmayan standartlaştırılmış kan çekim yöntemleri kullanır12. Bu nedenle, sürekli kanama ve sistemik yanıtlar nicel olarak değerlendirilebildiği sürece, solid organ yaralanmalarını içeren kanama modelleri daha yüksek klinik uygunluk sağlayacaktır13,14,15,16. Daha karmaşık TIC modelleri, ağır travmanın çok sayıda bileşenini yeniden üretmek için travmatik beyin hasarı, uzun kemik veya ekstremite kırıkları, yumuşak doku yaralanması, laparotomi ve kontrollü hemorajik şok kombinasyonlarını içerir17,18. Bu yaklaşımlar politravmanın daha kapsamlı bir temsilini sunsa da, çoklu yaralanma prosedürleri ve fizyolojik manipülasyonlar teknik karmaşıklığı ve deneysel değişkenliği artırabilir.
Onlarca yıllık araştırmalara rağmen, TIC'nin klinik olarak ilgili ve tekrarlanabilir deneysel modelleri sınırlı ve heterojen kalmaya devam etmektedir. İncelemeler, doku hasarı ve hemorajik şokun klinik dizisini daha doğru bir şekilde yeniden üreten ve terapötik müdahalelerin değerlendirilmesini destekleyen güçlü modellere duyulan ihtiyacı vurgulamıştır17,19. Kardiyak kateterizasyon ve sürekli hemodinamik izleme dahil olmak üzere kapsamlı enstrümantasyon gerektiren karmaşık modeller, ayrıntılı fizyolojik bilgiler sağlayabilir ancak aynı zamanda özel ekipman ve ek prosedürel manipülasyonlar gerektirir. Travma araştırmalarının önündeki engelleri kaldırmak için, TIC'nin temel özelliklerini korurken deneysel yaklaşımı basitleştirmek kritik görünmektedir. Burada, derin kanamaya yol açan ve TIC'nin temel özelliklerini yeniden canlandıran tekrarlanabilir LL kullanarak kontrolsüz hemorajik şokla14 sonuçlanan standardize bir fare modelini tanımlıyoruz. Bu model; genel koagülasyon ölçümleri (aPTT ve trombin üretimi), TIC'nin belirgin bir özelliği olan koagülasyon faktörlerinin (FV ve FVIII) seçici tükenmesi, fibrinoliz belirteçleri ve sitokin profillemesi dahil olmak üzere koagülasyon ve inflamatuar yanıtların değerlendirilmesine olanak tanır. Bu modelin insan travmasına karşı hassasiyetini ve ilgisini kanıtlamak için, travma resüsitasyonunda kullanılan rhFVIIa (prohemostatik ajan) ve TXA'nın (antifibrinolitik ajan) kanama şiddeti, koagülopati ilerlemesi ve sağkalım sonuçları üzerindeki etkilerini değerlendiriyoruz.
Model ayrıca, seri ve terminal kan örneklemesini destekleyerek, yaralanma şiddeti ve terapötik müdahale ile ilişkili olarak koagülasyon ve inflamatuar seyirlerin boylamsal değerlendirmesine olanak tanır. Birlikte, bu model; derin hemoraji durumunda Travmatik İndüklenmiş Koagülopati'nin (TIC) incelenmesi ve kan kaybı, koagülopati, fibrinoliz, inflamasyon ve sağkalım gibi klinik olarak ilgili son noktalar kullanılarak hemostatik ve hedefe yönelik farmakolojik müdahalelerin değerlendirilmesi için tekrarlanabilir ve ölçeklenebilir bir murin sistem sağlar.
Dyer ve arkadaşları13 tarafından tanımlanan protokol dahil olmak üzere önceden yayınlanmış fare karaciğer laserasyon modelleriyle karşılaştırıldığında, bu yöntem birkaç temel metodolojik gelişme sunmaktadır. Bunlar arasında kan kaybının kantitatif gravimetrik ölçümü, laserize olan karaciğer kütlesinin vücut ağırlığına göre normalize edilmesiyle yaralanma şiddetinin standartlaştırılması ve TIC, fibrinoliz ve inflamasyonun kapsamlı profillemesi yer almaktadır. Ayrıca model; seri örnekleme, farmakolojik modülasyon ve terminasyon yerine fiziksel iyileşmeyi sağlayan abdominal kapatma tekniklerini detaylandıran sağkalım analizlerine olanak tanır. Tüm prosedürler tek bir deneysel yaklaşım dahilinde gerçekleştirilebilir; bu da hemoraji ve hedeflenmiş hemostatik müdahalelerin çalışılması için ölçeklenebilir ve translasyonel bir platform sağlar.
Protokol
Tüm hayvan protokolları, California Üniversitesi San Diego (UCSD) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. C57BL/6J fareleri, UCSD dahili üretim tesisinde üretilmiş ve burada tutulmuştur. Deneylerde 8 ila 10 haftalık hem erkek hem de dişi fareler kullanılmıştır. Deneysel iş akışının ve zaman çizelgesinin şematik bir genel görünümü Ek Şekil 1'de sunulmuştur.
NOT: Örnek boyutları; ön deneyler, bireysel son noktaların beklenen değişkenliği ve fare karaciğer laserasyon modeliyle ilgili önceki deneyimlere dayanarak belirlenmiştir. Bireysel deneysel son noktalar ve deneysel gruplar için nihai örnek boyutları, ilgili şekil açıklamalarında verilmiştir. Karaciğer ağırlığı ölçümleri için, deneysel kohortlar arasındaki tutarlılığı değerlendirmek amacıyla birden fazla bağımsız deneyden elde edilen veriler havuzlanmıştır. Ayrı deneysel çalışmalarda gerçekleştirilen koagülasyon analizleri için, analizler arası tutarlılığı ve tekrarlanabilirliği izlemek amacıyla daha önce analiz edilmiş örnekler çalışmalara dahil edilmiştir.
1. Deney öncesi hazırlık
- Bazal örnek toplama (Gün -1)
- Bazal parametreleri belirlemek amacıyla, deneyden 24 saat önce her bir fareden (8–10 haftalık) retro-orbital erişim yoluyla ~200 µL kan toplayın.
- Kan toplama işleminin ardından deri altına ~200 µL steril enjeksiyonluk salin uygulayın.
- Fareleri; 20–24 °C kontrollü sıcaklık, %30–70 bağıl nem ve 12 saat ışık/12 saat karanlık döngüsünün olduğu standart laboratuvar koşulları altında, temiz kafeslerde, deney gününe kadar yeme ve suya serbest erişim sağlayacak şekilde barındırın.
- Kafes hazırlığı (Gün 0)
- Deney gününde fareyi, taze kağıt havlularla döşenmiş temiz bir kafese aktarın.
- Deneyden 15 dakika önce yeme ve suyu kaldırın ve cerrahi işlem sonrası emici süngerler çıkarılana kadar bunları vermeyin.
2. Enstrüman ve cerrahi alan hazırlığı
- Enstrüman sterilizasyonu
- Cerrahi enstrümanları, pamuğu, aplikatörleri ve filtre kağıtlarını otoklavlayarak sterilize edin.
- Cerrahi yüzeyi %70 etanol kullanarak dezenfekte edin.
- Cerrahi masa kurulumu
- Steril enstrümanları steril bir örtü üzerine düzenleyin.
- Enstrümanların ara temizliği için %70 etanol ve steril pamuk içeren paslanmaz çelik bir kap hazırlayın.
- Hayvanlar arası sterilizasyon için bir microbead sterilizasyon cihazını çalıştırın ve 150 °C sıcaklığa ulaşmasını bekleyin.
3. Sıcaklık koruma hazırlığı
- İzotermal ped hazırlığı
- İzotermal ısıtma pedini, üretici talimatlarına uygun olarak ameliyattan hemen önce aktif hale getirin.
- İzotermal ısıtma pedini, anestezi ve cerrahi işlem boyunca fare vücut sıcaklığını 36–37 °C hedef aralığında tutacak şekilde ayarlayın.
- Ped yüzeyi boyunca ısının eşit dağıldığını doğrulayın.
- Pedi cerrahi platformun üzerine yerleştirin ve steril bir örtüyle kapatın.
- Cerrahi tahtayı izofluran anestezi sistemine bağlayın.
4. Anestezi ve ameliyat öncesi prosedürler
- Anestezi indüksiyonu
- Fareyi, 2 L/min oksijen içinde %2 isoflurane içeren bir indüksiyon haznesine yerleştirerek anesteziyi başlatın.
- Parmak sıkıştırma refleksi ile yeterli anesteziyi onaylayın.
- Cerrahi işlem öncesinde vücut ağırlığını kaydedin.
- Analjezi ve tedavi uygulaması
- Analjezi için buprenorfin (3,25 mg/kg, deri altı) uygulayın.
- Gerektiğinde hemostatik ajanları hazırlayın.
- Tedavi grupları için, yaralanmadan 5 dk önce retro-orbital intravenöz enjeksiyon yoluyla rekombinant insan aktive faktör VII (rhFVIIa; 3 mg/kg) veya traneksamik asit (10 mg/kg) uygulayın.
- Kontrol hayvanlarına eşdeğer hacimde (~100 µL) enjekte edilebilir sınıfta steril salin uygulayın.
5. Cerrahi hazırlık
- Cerrahi bölge hazırlığı
- Anestezize edilmiş fareyi, izotermal ped üzerine yerleştirilmiş cerrahi tahtasına transfer edin.
- Cerrahi prosedür boyunca, 2 L/min oksijen içerisinde %1,5–%2 isofluran kullanan bir burun konisi aracılığıyla anesteziyi sürdürün.
- Fareyi sırt üstü pozisyonlandırın ve dört uzvunu da bantla sabitleyin.
- Abdominal bölgeyi tıraş edin.
- Sırasıyla povidon-iyot ve %70 etanol kullanarak aseptik hazırlık yapın (üç döngü).
6. Karaciğer laserasyonu prosedürü
- Materyallerin ön tartımı
- Biri 0.5 mL salin içeren ve diğeri boş olan iki adet 1.5 mL tüpü önceden tartın.
- Her hayvan için üç adet primer ve iki adet sekonder absorbsiyon üçgenini önceden tartın ve toplam kütlelerini kaydedin.
- Çıkarılan karaciğer dokusunun daha sonra tartılması için her hayvan için bir adet tartım kabını önceden tartın.
- Karaciğer hasarının indüklenmesi
- Karaciğeri açığa çıkarmak için yaklaşık 0.5 inch (12.7 mm) uzunluğunda bir orta hat laparotomisi gerçekleştirin.
- Karaciğerle temastan kaçınarak, sağ ve sol abdominal duvarlar boyunca iki adet absorbsiyon üçgeni yerleştirin.
- Sol karaciğer lobunu dışarı çıkarın ve doku çıkarma miktarını standartlaştırmak için lob sınırlarını belirleyin. İstem dışı doku hasarından kaçının.
- Hayvanlar arasında tutarlılığı sağlamak için keskin makaslar kullanarak, lobun yaklaşık %75'ini tek bir kontrollü hareketle lasele edin.
- Hasar şiddetinin daha sonra miktar tayini için, çıkarılan lasele dokuyu önceden tartılmış boş tüpe aktarın.
- Hemoraji fazı sırasında tekdüze kan toplanmasını kolaylaştırmak için abdominal kaviteye üçüncü bir absorbsiyon üçgeni yerleştirin.
- İç hemorajiyi sürdürmek için hızlı abdominal kapatma (kritik adım)
- Abdominal duvarı iki adet cerrahi otoklip kullanarak ~10–15 s içinde hemen kapatın.
- Boşluk kalmadan tam kapatma sağlamak için insizyon kenarlarının hassas bir şekilde hizalandığından emin olun. Eksik kapatma, dışa kan sızıntısına ve kan kaybının olduğundan düşük tahmin edilmesine neden olabilir.
- Kapatma sırasında, kanama dinamiklerini değiştirebilecek abdominal içeriklerin sıkıştırılmasından kaçınarak tutarlı ancak nazik bir gerginlik uygulayın.
- Tamamen mühürlenmiş bir abdominal kompartıman sağlamak için kapatmayı doku yapıştırıcısı (2–3 damla) ile güçlendirin.
- Hasar sonrası izleme
- Çıkarılan karaciğer dokusunu tartın ve karaciğer hasarının boyutunu miktarlandırmak ve doğrulamak için ölçümü vücut ağırlığına göre normalize edin.
- Fareyi izotermal ped üzerine yerleştirilmiş kafese geri koyun.
- Bitiş noktası ve sağkalım kohortu için hemorajinin 60 min boyunca sürmesine izin verin.
7. Kan toplama ve kan kaybının miktarlaştırılması
- Kan örneği toplama ve işleme
- Son nokta kohortu için, karaciğer laserasyonundan 60 dk sonra fareyi izofluran ile tekrar anestezi altına alın.
- Sağkalım kohortu için, kan toplamak amacıyla karaciğer laserasyonundan 6 sa ve 7 gün sonra fareyi izofluran ile tekrar anestezi altına alın.
- Plazma hazırlamak için kanı, retro-orbital ponksiyon yoluyla sodyum sitrat çözeltisi içeren tüplere (kan-antikoagülan oranı: 9:1) toplayın.
- Sonraki koagülasyon ve fibrinoliz analizleri için trombositten fakir plazma elde etmek amacıyla örnekleri önce 2,000 × g'de 10 dk, ardından 12,000 × g'de 5 dk santrifüj edin.
- Kan kaybı ölçümü
- Hem son nokta hem de sağkalım kohortları için karaciğer laserasyonundan 60 dk sonra abdomeni tekrar açın ve kan içeren absorpsiyon süngerlerini çıkarın.
- Kanla doygun tüm süngerleri, steril salin içeren önceden tartılmış tüpe aktarın.
- Abdominal kavite içindeki kalıntı kanı toplamak için ek önceden tartılmış absorpsiyon süngerleri kullanın.
- Final tüp ağırlığını elde etmek için kan toplama işleminden sonra toplama tüpünü tartın.
- Kan kaybını aşağıdaki gravimetrik denklem kullanarak hesaplayın:
Kan kaybı (µL/g) = [(final tüp ağırlığı − başlangıç tüp ağırlığı – absorpsiyon süngeri ağırlığı) / fare vücut ağırlığı] × 1000.
NOT: Tüm ağırlıklar gram cinsinden ifade edilmiştir. 1,000 faktörü, kan yoğunluğunun yaklaşık 1 g/mL olduğu varsayılarak, gram cinsinden kanı mikrolitrelere dönüştürür.
- Sağkalım ve boylamsal sonuç kohortu
- 60. dakikadaki kan kaybı ölçümünün ardından, tamamen sızdırmaz bir abdominal kompartman sağlamak için insizyonu cerrahi zımbalar ve doku yapıştırıcısı kullanarak hemen kapatın.
- Ayılmadan önce deri altına 400 µL steril salin uygulayın.
- Fareyi standart kafesine geri yerleştirin, anesteziden ayılma sürecinde sürekli olarak izleyin; cerrahi sonrası 2 sa, 6 sa ve 24 sa'da değerlendirin ve ardından 7. güne kadar günlük izlem yapın.
8. Ameliyat sonrası bakım
- Ameliyat sonrası izleme
- Anestezi sonrası erken iyileşme sürecinde hayvanları distres veya morbidite belirtileri açısından sürekli izleyin.
- Planlanan her değerlendirmede sağkalım durumunu ve klinik gözlemleri kaydedin.
- Destekleyici bakım
- 3 gün boyunca günlük olarak deri altına 400 µL steril salin uygulayın.
- Onaylanmış hayvan bakım protokolüne uygun olarak her 72 saatte bir analjezi (buprenorphine, 3.25 mg/kg, deri altına) sağlayın.
- Fareleri, yiyecek ve suya serbest erişimli (ad libitum) standart barındırma koşullarında tutun.
- İnsani sonlanma noktaları
- Hayvanları; şiddetli veya kalıcı letarji, hareket edememe veya yiyecek/suya erişememe, şiddetli solunum distresi, tepkisizlik veya onaylanmış kurumsal hayvan bakım protokolünde belirtilen diğer şiddetli distres belirtileri dahil olmak üzere önceden tanımlanmış insani sonlanma noktaları açısından izleyin.
- Önceden tanımlanmış insani sonlanma noktalarını karşılayan hayvanları kurumsal kılavuzlara uygun olarak itlaf edin.
- Sağkalım izlemesini 7. güne kadar veya bir insani sonlanma noktasına ulaşılana kadar sürdürün.
9. Bitiş prosedürleri ve doku toplama
- Önceden belirlenmiş deneysel bitiş noktalarında, fareleri anesteziye alın ve retro-orbital ponksiyon yoluyla kan toplayın.
- Kurumsal kılavuzlara uygun olarak CO₂ inhalasyonu ile ötanazi uygulayın.
- Organları hasat edin ve belirtilen sonraki prosedürlere göre dokuları histolojik analiz için hazırlayın.
10. Koagülasyon, fibrinoliz ve sitokin analizleri
NOT: Bu prosedürler için kullanılan reaktifler, analiz kitleri ve ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.
- aPTT Ölçümü
- Materyal Tablosu'nda listelenen koagülometreyi kullanarak tüm pıhtılaşma sürelerini kaydedin.
- 25 µL fare plazmasını 25 µL aPTT reaktifi ile karıştırın ve 37 °C'de 3 dk inkübe edin. HBS (20 mM HEPES, 147 mM NaCl, 3 mM KCl, pH 7.4) içinde hazırlanmış 25 µL CaCl₂ (25 mM) ekleyerek pıhtılaşmayı başlatın ve pıhtılaşma süresini kaydedin.
- FV, FII ve FX aktivitesinin ölçümü
- 5 µL fare plazmasını, 20 µL ilgili faktör eksikliği olan plazma ve %0,5 sığır serum albümin içeren 25 µL HBS ile karıştırın.
- 37 °C'de 1 dk inkübe edin ve Materyal Tablosu'nda listelenen Innovin reaktifini ekleyerek pıhtılaşmayı başlatın.
- Faktör aktivitesini, ilgili kalibrasyon/referans sistemine göre belirleyin.
- FVIII Ölçümü
- Üretici talimatlarına uygun olarak kromojenik FVIII testi ile FVIII'i belirleyin.
- Fibrinojen Ölçümü
- Fibrinojen konsantrasyonunu Clauss yöntemiyle belirleyin. 10 µL fare plazmasını, %0,01 sığır serum albümin içeren 40 µL HEPES tamponlu salin ile karıştırın ve 37 °C'de 3 dk inkübe edin.
- 25 µL trombin (25 U/mL) ekleyerek pıhtı oluşumunu başlatın ve test kalibrasyonunu kullanarak fibrinojen konsantrasyonunu belirleyin.
- Plazma biyobelirteçlerinin ölçümü
- Plazma TAT komplekslerini, PAP komplekslerini ve D-dimer'i Materyal Tablosu'nda listelenen ticari olarak mevcut test kitlerini kullanarak ölçün. Her testi üretici talimatlarına göre gerçekleştirin.
- Üreticiler tarafından belirtilen teste özel standartları, kalibratörleri ve kontrolleri kullanın ve analit konsantrasyonlarını ilgili standart eğrilerinden hesaplayın.
- Plazma IL-6 Ölçümü
- Karaciğer laserasyonu sonrası başlangıçta, 60. dk'da ve 6. saatte plazma IL-6 konsantrasyonlarını Materyal Tablosu'nda listelenen multipleks sitokin testi ile ölçün.
- Testi üretici talimatlarına göre gerçekleştirin ve verileri üreticinin Q-View yazılımını kullanarak analiz edin.
Sonuçlar
LL modeli, farelerde tekrarlanabilir ve standartlaştırılmış bir yaralanma şiddeti sağlar. Şekil 1A, vücut ağırlığına (%BW) normalize edildiğinde lase karaciğer ağırlığının tutarlılığını göstermekte olup, deneysel gruplar genelinde medyan yaralanma %1,4 BW olarak belirlenmiştir. Bu tutarlılık, cerrahi indüksiyonun güvenilir olduğunu doğrulamakta ve hayvanlar arasında ve farklı deneysel koşullar genelinde tekrarlanabilirliğe olanak tanımaktadır. Yaralanma şiddetini standartlaştırabilme yeteneği, doku hasarındaki değişkenlikten bağımsız olarak alt akıştaki fizyolojik yanıtların değerlendirilmesi için kritik öneme sahiptir.
Model içindeki kanama yanıtının ve terapötik modülasyonun doğrulaması Şekil 1B'de gösterilmiştir. Farelere ön tedavi olarak salin, prehemostatik ajan rhFVIIa veya antifibrinolitik ajan TXA uygulanmış, kan kaybı miktar olarak belirlenmiş ve vücut ağırlığına göre normalize edilmiştir (µL/g). Salin ile tedavi edilen fareler LL sonrası önemli ölçüde hemoraji sergilerken, rhFVIIa veya TXA ile tedavi edilen farelerde kan kaybının azaldığı görülmüştür. Bu bulgular, bu modelin hemorajinin farmakolojik modülasyonunu tespit etme ve kontrolsüz kanama koşulları altında hemostatik müdahaleleri değerlendirme yeteneğini kanıtlamaktadır.
Model aynı zamanda travma kaynaklı koagülopatinin temel özelliklerini de yeniden üretmektedir. Şekil 1C'de gösterildiği üzere, LL, yaralanma sonrası bozulmuş koagülasyona işaret eden aPTT uzaması ile sonuçlanmıştır. rhFVIIa veya TXA tedavisi bu uzamayı hafifletmiş, bu da koagülasyon fonksiyonunun geri kazanıldığını düşündürmüştür. Benzer şekilde, TAT kompleksleri ile değerlendirilen trombin üretimi, LL sonrası artmış ve TXA tedavisi ile azalmışken; rhFVIIa'nın TAT seviyelerini düşürmediği görülmüştür (Şekil 1D), bu durum koagülasyon aktivasyonunun modüle edildiğini göstermektedir.
Koagülopatinin daha ayrıntılı karakterizasyonu Şekil 2'de gösterilmiştir. LL, TIC ile uyumlu olarak seçici bir şekilde koagülasyon faktör V ve VIII tükenmesine yol açmış ve bu değişiklikler rhFVIIa veya TXA tedavisi ile geri döndürülmüştür (Şekil 2A,B). Buna karşın, faktör II ve X önemli ölçüde değişmemiştir (Şekil 2C,D); bu durum, söz konusu değişikliklerin faktör II ve X'in korunduğu bir bağlamda gerçekleştiğini göstererek, yaygın intravasküler koagülasyon (DIC) benzeri bir fenotipten ziyade TIC baskın bir fenotipi desteklemektedir.
LL sonrası fibrinolizin gelişimi Şekil 3'te gösterilmiştir. Fibrinojen seviyeleri yaralanma sonrası azalmış olup bu durum tüketimi göstermekteydi ve rhFVIIa veya TXA ile tamamen geri döndürülmedi (Şekil 3A). Buna karşın, plazmin-antiplazmin (PAP) kompleksleri ve D-dimer dahil olmak üzere fibrinolitik belirteçler LL sonrası yükseldi. rhFVIIa PAP kompleks seviyelerini düşürdü ancak D-dimer seviyelerini önemli ölçüde değiştirmedi. TXA, LL sonrası hem PAP kompleks hem de D-dimer seviyelerini düşürdü (Şekil 3B,C).
Son olarak, sistemik inflamatuar yanıt ve sağkalım sonuçları Şekil 4'te değerlendirilmektedir. Tüm tedavi gruplarında LL sonrası 60. dk ve 6. saatte plazma interlökin-6 (IL-6) seviyeleri ölçülmüştür. Tüm gruplarda erken zaman noktalarında IL-6 seviyeleri yükselmiştir (Şekil 4A). 7 günlük süre boyunca sağkalım, Kaplan-Meier analizi kullanılarak değerlendirilmiştir. Yedi günlük sağkalım oranı salin grubunda %75, rhFVIIa grubunda %55 ve TXA ile tedavi edilen grupta %80'dir. Salin ve TXA grupları arasında anlamlı bir fark gözlemlenmezken, rhFVIIa grubundaki sağkalım, salin ve TXA gruplarına kıyasla anlamlı derecede azalmıştır (Şekil 4B).
Şekil 1: Karaciğer laserasyonu (LL) modelinin doğrulanması: yaralanma şiddetinin tekrarlanabilirliği, kantitatif kan kaybı ve koagülopatinin indüksiyonu. Şiddetli iç kanama, orta hat laparotomisini takiben standart LL ile indüklenir. Kanama ve koagülopatinin farmakolojik modülasyonunu değerlendirmek amacıyla fareler, yaralanma öncesinde salin (~100 µL), rekombinant insan aktive faktör VII (rhFVIIa; 3 mg/kg) veya traneksamik asit (TXA; 10 mg/kg) ile ön işlemden geçirilir. (A) Yaralanma şiddeti, laserasyonlu karaciğer ağırlığının vücut ağırlığına normalize edilmesiyle (%BW) kantifiye edilmiş olup, hayvanlar arasında standart yaralanmanın tekrarlanabilir indüksiyonunu göstermektedir. (B) Kan kaybı, gravimetrik bir yöntem kullanılarak kantifiye edilmiş ve vücut ağırlığına normalize edilmiştir (µL/g); bu durum, TXA tedavisiyle azalan ölçülebilir kanamayı göstermektedir. (C) Aktive edilmiş parsiyel tromboplastin zamanı (aPTT) ve (D) trombin–antitrombin (TAT) kompleksleri, LL sonrası koagülopatinin tekrarlanabilir indüksiyonunu ve rhFVIIa veya TXA tedavisi sonrası gözlenen modülasyonu göstermektedir. Veriler, medyan ve interkuartil aralık ile birlikte bireysel değerler olarak sunulmuştur; karşılaştırmalar nonparametrik Mann–Whitney U testi kullanılarak yapılmıştır (n = 5–21). ****P ≤ 0.0001. Joseph ve ark. 16 izinleri ile uyarlanmıştır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Karaciğer laserasyonu (LL) sonrası travma kaynaklı koagülopatinin (TIC) doğrulanması: koagülasyon faktörlerinin seçici tükenmesi. Midline laparotomi ve ardından standart LL ile şiddetli internal hemoraji indüklenmiştir. Koagülopatinin farmakolojik modülasyonunu değerlendirmek için fareler, yaralanma öncesinde salin (~100 µL), rekombinant insan aktive faktör VII (rhFVIIa; 3 mg/kg) veya traneksamik asit (TXA; 10 mg/kg) ile ön işlemden geçirilmiştir. Koagülasyon parametreleri LL'den 60 dakika sonra değerlendirilmiştir. (A) Faktör V ve (B) Faktör VIII seviyeleri, TIC ile uyumlu olarak LL sonrası tekrarlanabilir tükenme göstermektedir. (C) Faktör II ve (D) Faktör X nispeten korunmuş kalmış olup, bu durum global tüketimden ziyade seçici koagülasyon faktörü tükenmesine işaret etmektedir. Veriler, medyan ve çeyrekler arası aralık ile birlikte bireysel değerler olarak sunulmuştur (n = 7–10). İstatistiksel karşılaştırmalar nonparametrik Mann-Whitney U testi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. ***P ≤ 0.001; ****P ≤ 0.0001. Joseph ve ark. 16 çalışmasından izin alınarak uyarlanmıştır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Karaciğer laserasyonu (LL) sonrası fibrinolitik aktivasyonun doğrulanması. Orta hat laparotomisi ve ardından standardize LL ile şiddetli internal hemoraji indüklenir. Fibrinolizin farmakolojik modülasyonunu değerlendirmek için farelere yaralanma öncesinde salin (~100 µL), rekombinant insan aktive faktör VII (rhFVIIa; 3 mg/kg) veya traneksamik asit (TXA; 10 mg/kg) ile ön tedavi uygulanır. Fibrinolitik parametreler LL'den 60 dakika sonra değerlendirilir. (A) Fibrinojen seviyeleri, fibrinoliz aktivasyonu ve koagülasyon faktörü tükenmesi ile uyumlu olarak yaralanma sonrası tüketimi göstermektedir. (B) Plazmin-antiplazmin (PAP) kompleksleri ve (C) D-dimer seviyeleri LL sonrası artış göstermiş olup, bu durum aktif fibrin degradasyonunu ve sistemik fibrinolitik aktivasyonu işaret etmektedir. Veriler, medyan ve çeyrekler arası aralık ile birlikte bireysel değerler olarak sunulmuştur (n = 8–13). İstatistiksel karşılaştırmalar nonparametrik Mann-Whitney U testi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. **P ≤ 0.01; ***P ≤ 0.001; ****P ≤ 0.0001. Joseph ve ark. 16 tarafından verilen izinle uyarlanmıştır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 4: Karaciğer laserasyonu (LL) sonrası sistemik inflamatuar yanıtın doğrulanması ve sağkalım değerlendirmesi. Orta hat laparotomisini takiben standart LL ile şiddetli internal hemoraji indüklenir. Fareler, yaralanma öncesinde salin (100 µL), rekombinant insan aktive faktör VII (rhFVIIa; 3 mg/kg) veya traneksamik asit (TXA; 10 mg/kg) ile ön işlemden geçirilir. Yaralanmanın ardından, abdominal insizyon yara klipsleri ve doku yapıştırıcısı kullanılarak kapatılır ve hayvanlar kafeslerine geri döndürülür. Destekleyici bakım, yaralanma sonrası ilk üç gün boyunca günlük subkütan salin (400 µL) uygulamasından oluşur. Sistemik inflamatuar aktivasyonu değerlendirmek için LL sonrası 60. dakikada ve 6. saatte plazma örnekleri toplanır. (A) Interlökin-6 (IL-6) seviyeleri, yaralanma sonrası sürdürülen bir sistemik inflamatuar yanıtı göstermektedir. Veriler, medyan ve interkuartil aralık ile birlikte bireysel değerler olarak sunulmuştur. İstatistiksel karşılaştırmalar, nonparametrik Mann–Whitney U testi kullanılarak gerçekleştirilmiştir (n = 9–13). (B) Yedi günlük sağkalım, modelin boylamsal sonuç tabanlı sonlanım noktalarını destekleme kapasitesini gösteren Kaplan-Meier analizi kullanılarak değerlendirilmiştir (n = 20). ****P ≤ 0.0001. Joseph ve ark. 16 izinleriyle uyarlanmıştır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayınız.
Ek Şekil 1: Karaciğer laserasyonu modelinin şematik özeti ve deneysel zaman çizelgesi. Bu şekil, kontrolsüz kanama için standartlaştırılmış fare karaciğer laserasyonu (LL) modeline ait deneysel iş akışını özetlemektedir. Farelere midline laparotomi uygulanmış, ardından sol karaciğer lobunun yaklaşık %75'ine tekrarlanabilir LL yapılmıştır. Yaralanmadan önce farelere, LL'den 5 dk önce retro-orbital enjeksiyon yoluyla intravenöz olarak ya salin (~100 µL, araç kontrolü) ya da rekombinant insan aktive faktör VII (rhFVIIa; 3 mg/kg) veya traneksamik asit (TXA; 10 mg/kg) uygulanmıştır. Kan kaybının miktar tayini, yaralanma anında intra-abdominal olarak yerleştirilen, LL sonrası 60. dk'da geri çıkarılan ve toplam kanamayı belirlemek için tartılan önceden tartılmış abdominal süngerler kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Abdomen daha sonra doku yapıştırıcısı ile yara klipsleri kullanılarak kapatılmıştır. Kan örnekleri, son nokta kohortunda 60. dk'da, sağkalım kohortunda ise 6. saat ve 7. günde retro-orbital erişim yoluyla toplanmıştır. Plazma; aktive parsiyel tromboplastin zamanı (aPTT), koagülasyon faktör aktivitesi, trombin-antitrombin (TAT) kompleksleri, plazmin-α2-antiplazmin (PAP) kompleksleri ve 60. dk'daki D-dimer dahil olmak üzere koagülasyon parametreleri açısından analiz edilmiştir. Sitokin profillemesi 60. dk ve 6. saatte gerçekleştirilmiştir. Sağkalım 7 günlük bir süre boyunca izlenmiştir. Joseph ve ark. 16 izinle uyarlanmıştır. Lütfen bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.
Tartışma
Bu çalışmada, kantitatif kan kaybı değerlendirmesini, TIC ve inflamasyon karakterizasyonunu ve sağkalım analizini tek bir deneyde birleştiren, standardize LL kullanan derin hemorajiye dair tekrarlanabilir bir murine model sunuyoruz. Model, vücut ağırlığına göre normalize edilmiş karşılaştırılabilir laserasyonlu karaciğer ağırlığı ile kanıtlandığı üzere tutarlı bir yaralanma şiddeti oluştururken, deney grupları arasında hemorajinin ve sistemik hemostatik yanıtların tekrarlanabilir değerlendirilmesine olanak tanımaktadır. Standartlaştırılmış yaralanma ve kantitatif sonuç ölçümlerine sahip küçük kemirgen modelinin kullanımı, teknik olarak karmaşık prosedürlere gerek kalmadan, tek bir deneysel çerçeve içinde birden fazla deneysel son noktanın verimli bir şekilde değerlendirilmesini sağlayarak TIC'in tekrarlanabilir ve ölçeklenebilir bir şekilde araştırılmasını desteklemektedir.
Önemli bir nokta olarak bu model, genel koagülasyon parametrelerinin (aPTT) uzaması, TAT kompleksleri ile yansıtılan artmış trombin üretimi, koagülasyon faktör V ve VIII'in seçici tüketimi ve yükselmiş PAP kompleksleri ile D-dimer oluşumuyla kanıtlanan fibrinoliz aktivasyonu dahil olmak üzere, TIC'nin temel özelliklerini yeniden ortaya koymaktadır. Bu değişiklikler, faktör II ve X'in korunduğu bir bağlamda meydana gelmekte olup, disseminated intravasküler koagülasyondan ziyade TIC baskın bir fenotipi desteklemektedir. Bu parametrelerin eş zamanlı olarak ölçülebilme yeteneği, travmatik yaralanma sonrası hemostatik düzensizliğin değerlendirilmesi için translasyonel açıdan ilgili bir çerçeve sunmaktadır.
Bu modelin temel bir güçlü yönü, travmatik kanama ortamında sağkalımın bir sonuç uç noktası olarak dahil edilmesidir. Klinik olarak ilgili kurtarma stratejilerini test etmek için, insanlarda travma resüsitasyonunda kullanılan veya araştırılan iki ajan olan rhFVIIa ve TXA'yı değerlendirdik. TXA, kan kaybını azaltma, koagülopatiyi ve fibrinolitik aktivasyonu normalleştirme konusunda tutarlı etkiler göstermiş ve bu durum sağkalım kurtarmasına dönüşmüştür. Buna karşılık, rhFVIIa, hemostatik parametrelerin aşırı düzeltilmesi ve yetersiz fibrinoliz kontrolü ile ilişkili belirgin bir mortalite ile sonuçlanmıştır16.
Bu bulgular, modelin önemli bir yönünü vurgulamaktadır: sağkalım, bireysel hemostatik yolların izole düzeltilmesinden ziyade; hemoraji şiddeti, koagülopati ve sistemik yanıtın karmaşık etkileşimi tarafından yönlendirilmektedir. Bu hemoraji modelinin, biyokimyasal hemostatik parametrelerin klinik uygulamada kritik bir sonuç belirleyicisi olan sağkalım ile entegrasyonuna karşı duyarlı olduğu görülmektedir. Bu sistemde modellenen temel yaralanma şiddetli travmatik hemoraji olsa da, sekonder organ hasarı da sonuca katkıda bulunabilir. Bu modelin kullanıldığı önceki çalışmamızda, rhFVIIa ile tedavi edilen farelerde pulmoner mikrotrombolar ve fibrin birikimi gözlemlenmiş ve bunlar artmış mortalite ile ilişkilendirilmiştir; bu durum, tromboinflamatuar organ hasarının sonuca potansiyel bir katkısı olduğunu göstermektedir16.
Bu çalışmaya eş zamanlı bir sham-operasyon grubu dahil edilmemiş olsa da, daha önce laparotominin LL olmadan TIC'ye yol açmadığını göstermiş ve TIC ile gözlemlenen karakteristik koagülasyon anomalilerini oluşturmak için ek hızlı kan kaybının (şok) gerekli olduğunu kanıtlamıştık14.
Bu modelin tekrarlanabilirliği için birkaç teknik husus önem taşımaktadır. Karaciğer lacerasyonunun (LL) kapsamı ve konumu standart hale getirilmelidir; çünkü çıkarılan karaciğer miktarındaki farklılıklar, kanama şiddetini ve buna bağlı gelişen koagülopatik yanıtı önemli ölçüde etkileyebilir. Protokolümüzde, sol karaciğer lobunun ~75%'i çıkarılmakta ve laseye olan karaciğer ağırlığı vücut ağırlığına normalize edilerek yaralanma tutarlılığına dair objektif bir ölçüt sağlanmaktadır. Gözlem süresi boyunca dış kanamayı önlemek ve karın içi kanamayı kapalı bir ortamda tutmak için hızlı ve güvenli abdominal kapatma işlemi de kritiktir. Kan kaybının doğru ölçümü için, önceden tartılmış süngerler, deney grupları arasında aynı toplama prosedürü ve zamanlaması kullanılarak tutarlı bir şekilde geri alınmalıdır. Bu adımlar, operatöre bağlı varyasyonu en aza indirir ve başlangıçtaki kan kaybı farklılıkları sonraki koagülopatiyi ve sağkalımı etkileyebileceği için özellikle önemlidir. Kapatma işleminden önce aşırı kanama meydana gelirse veya dışarıya kan kaybı olursa, hayvan çalışma dışı bırakılmalıdır.
Bu modelin bir sınırlaması, uzun kemik kırıkları, yumuşak doku ezilme travması ve diğer karmaşık şok durumlarını içerebilen politravmanın heterojenliğini yansıtmayan, organ yaralanmasına odaklanmış olmasıdır. Bununla birlikte, bu odaklanmış yaralanma modelin kasıtlı bir özelliği olup, derin hemoraji ve TIC etkilerinin, birden fazla yaralanma modalitesinin getirdiği ek prosedürel karmaşıklık ve değişkenlik olmadan incelenmesine olanak tanır. Sonuç olarak, bu fare LL modeli, travma kaynaklı hemoraji TIC ve mortalitenin incelenmesi için maliyet etkin (büyük hayvan çalışmalarına kıyasla), sağlam ve ölçeklenebilir bir yaklaşım sunmaktadır. Basit bir küçük kemirgen deneysel platformunu standartlaştırılmış yaralanma, kantitatif kan kaybı ölçümü, kapsamlı hemostatik profilleme ve sağkalım değerlendirmesi ile birleştiren bu model, daha kapsamlı şekilde enstrümante edilmiş travma modellerine pratik bir alternatif sağlamaktadır. Bu model; kan hacmi kaybı, koagülasyon (aPTT, FII, FV, FVIII, FX, TAT), fibrinoliz (Fibrinogen, PAP, D-dimer) ve sağkalım sonlanım noktalarının klinik olarak ilgili bir bağlamda, antifibrinolitik ve hedefe yönelik hemostatik müdahalelerin değerlendirilmesine uygun şekilde entegre değerlendirilmesine imkan tanır.
Açıklamalar
A.v.D.; BioMarin, Regeneron, Pfizer, Bioverativ/Sanofi, CSL Behring, Novo Nordisk, Spark Therapeutics, Genentech ve uniQure'dan bilimsel danışma kurullarına katılım, danışmanlık ve konuşmacı görevleri için onuraryum almıştır. A.v.D., kanama komplikasyonları için superFVa tedavisi geliştiren bir biyoteknoloji şirketi olan Hematherix LLC'nin kurucu ortağıdır. B.C.J., M.L.C. ve R.M.'nin beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Teknik danışmanlığı için Dr. Laurent Mosnier'e teşekkür ederiz.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 25 G iğne | BD Diagnostics | 305124 | |
| 30 G iğne | BD Diagnostics | 305106 | |
| Anestezi sistemi | Patterson Scientific | 78915712 | |
| aPTT reaktifi - STA-C.K. Prest. 5 | Stago | 597 | |
| Otomatik klipsleme | Fine Science Tools | 12022-19 | |
| Otomatik klips aplikatörü | Fine Science Tools | 12020-09 | |
| Autoclip sökücü | Fine Science Tools | 12023-00 | |
| Sığır serum albümini | Sigma Aldrich | 10735078001 | |
| Kalsiyum klorür | Fisher Scientific | C79-500 | |
| Kılcal tüp – sade | Fisher Scientific | 22-260943 | |
| Pamuklu aplikatör | Medique | 19-090-701 | |
| Pamuk yumaklar | Fisher Scientific | 22-456-103 | |
| D-dimer ELISA kiti | Invitrogen | EEL094 | |
| Delta Faz İzotermal Ped | Braintree Scientific | 50-195-4663 | |
| Etanol | Fisher Scientific | BP28184 | |
| Ethiqa | Fidelis | SKU 072117 | |
| Faktör II eksik plazma | Affinity Biologicals | FII-DP | |
| Faktör V eksik plazma | Affinity Biologicals | FV-DP | |
| Faktör VIII eksik plazma | Affinity Biologicals | FVIII-DP | |
| Faktör X eksik plazma | Affinity Biologicals | FX-DP | |
| Filtre Kağıdı, Ekstra Kalın, 7 cm × 8,4 cm | Fisher Scientific | PI88605 | |
| Graefe pensleri | Fine Science Tools | 11049-10 | |
| İndüksiyon odası | Patterson Scientific | 78933385 | |
| Enjekte edilebilir kalite salin | Hospira | 0409-4888-02 | |
| Innovin | Siemens Healthineers | 23-044-778 | |
| İzofluran | Med Vet International | 50-304-2993 | |
| K824086 Chromogenix Coatest SP Faktör VIII | Diapharma | K822585 | |
| Liqui Vet Hızlı Doku Yapıştırıcısı | World Precision Instrument | 50-253-9340 | |
| Mikrobilya sterilizatörü | Fisher Scientific | 14-955-342 | |
| Mikrosantrifüj tüpleri – 1,5 mL | Fisher Scientific | AM12400 | |
| Fare sitokin multipleks kiti | Quansys Biosciences | 111049MS-13P | |
| PAP kompleks analiz kiti | Biotechne | NBP3-06903 | |
| povidon-iyot | Med Vet International | 50-283-2277 | |
| Rekombinant insan aktive faktör VII | Novo Nordisk | 0169-7001 | |
| Sodyum sitrat | Fisher Scientific | S279-500 | |
| Cerrahi örtü | Stoelting | 10-000-695 | |
| Surgical platform equaflow mouse 5 anestezi manifoldu | Patterson Scientific | 78919268 | |
| Cerrahi makaslar | Fine Science Tools | 91405-11 | |
| Bant | Fisher Scientific | 15-901-5R | |
| TAT kompleks analiz kiti | Siemens Healthineers | 23-044-704 | |
| Trombin | Invitrogen | PIRP43100 | |
| Tranezamik asit | Auromedics | 55150-0188-10 | |
| Kırpıcı | Stoelting | 10-000-792 | |
| WAG aktif kömür filtrasyon sistemi | Patterson Scientific | 78909457 | |
| Tartım kabı | Fisher Scientific | 01-549-752 |
Kaynaklar
- Rhee P, et al. Increasing trauma deaths in the United States. Ann Surg. 2014;260(1):13-21.
- Kauvar DS, Lefering R, Wade CE. Impact of hemorrhage on trauma outcome: an overview of epidemiology, clinical presentations, and therapeutic considerations. J Trauma. 2006;60(6):S3-S11.
- Bernhardt IM, et al. Timing of trauma deaths due to uncontrolled bleeding have not changed in three decades: a multicenter study of patients in hemorrhagic shock. Am J Surg. 2025;250.
- Cohen MJ, Christie SA. Coagulopathy of trauma. Crit Care Clin. 2017;33(1):101-18.
- Kornblith LZ, Moore HB, Cohen MJ. Trauma-induced coagulopathy: the past, present, and future. J Thromb Haemost. 2019;17(6):852-62.
- Brohi K, et al. Acute traumatic coagulopathy: initiated by hypoperfusion: modulated through the protein C pathway? Ann Surg. 2007;245(5):812-8.
- Cohen MJ, et al. Early coagulopathy after traumatic brain injury: the role of hypoperfusion and the protein C pathway. J Trauma. 2007;63(6):1254-61; discussion 1261-2.
- Davenport RA, et al. Activated protein C drives the hyperfibrinolysis of acute traumatic coagulopathy. Anesthesiology. 2017;126(1):115-27.
- Moore HB, et al. Hyperfibrinolysis, physiologic fibrinolysis, and fibrinolysis shutdown: the spectrum of postinjury fibrinolysis and relevance to antifibrinolytic therapy. J Trauma Acute Care Surg. 2014;77(6):811-7; discussion 817.
- Johansson PI, et al. Traumatic endotheliopathy: a prospective observational study of 424 severely injured patients. Ann Surg. 2017;265(3):597-603.
- Vernon T, Morgan M, Morrison C. Bad blood: a coagulopathy associated with trauma and massive transfusion review. Acute Med Surg. 2019;6(3):215-22.
- Lie SL, Rognes IN. Human and animal models for studying hemorrhagic shock. Scand J Trauma Resusc Emerg Med. 2025;33(1):124.
- Dyer M, et al. Uncontrolled hemorrhagic shock modeled via liver laceration in mice with real time hemodynamic monitoring. J Vis Exp. 2017;(123).
- Joseph BC, et al. An engineered activated factor V for the prevention and treatment of acute traumatic coagulopathy and bleeding in mice. Blood Adv. 2022;6(3):959-69.
- Joseph BC, et al. Traumatic bleeding and mortality in mice are intensified by iron deficiency anemia and can be rescued with tranexamic acid. Res Pract Thromb Haemost. 2024;8(6):102543.
- Chumappumkal Joseph B, et al. The effects of recombinant human activated factor VII and tranexamic acid on traumatic bleeding and mortality in mice. Res Pract Thromb Haemost. 2026;10(3):103436.
- Ask A, et al. Spotlight on animal models of acute traumatic coagulopathy: an update. Transfus Apher Sci. 2022;61(2):103412.
- Mayer AR, et al. A systematic review of large animal models of combined traumatic brain injury and hemorrhagic shock. Neurosci Biobehav Rev. 2019;104:160-77.
- Frith D, Cohen MJ, Brohi K. Animal models of trauma-induced coagulopathy. Thromb Res. 2012;129(5):551-6.
Yeniden basım ve izinler
Bu makale yayımlandı
Video yakında