Hareket tarzı saç derisi akupunkturunun dış kapsül mikroyapısı ve omurga refleks uyarıcılığı üzerindeki etkileri, inme sonrası spastite modelinde bir fare modelinde

Özet

Bu protokol, inme sonrası spaztisite bir sıçan modelinde hareket tarzı saç derisi akupunkturunu tanımlar ve davranışsal, manyetik rezonans görüntüleme, histolojik ve elektrofizyolojik değerlendirmeler kullanılarak dış kapsül mikroyapısı ve omurga refleks uyarıcılığındaki değişiklikleri araştırarak değerlendirilmesini gösterir.

Özet

İnme sonrası spaztisite (PSS), felç sonrası motor fonksiyonu ve yaşam kalitesini ciddi şekilde olumsuz etkiler. Kortiko-retikulospinal yolun bozulması ve supraspinal iniş inhibisyonunun bozulması, önemli patolojik mekanizmalar olarak kabul edilir; ancak hareket tarzı saç derisi akupunkturunun (MSSA) terapötik etkilerinin altında yatan sinir ve mikrostruktural mekanizmalar hâlâ tam olarak anlaşılmamaktadır. Bu çalışma, orta beyin arter tıkanmasının sıçan modelinde nörogörüntüleme, elektrofizyoloji ve histolojiyi entegre eden multimodal bir değerlendirme kullanarak MSSA'nın PSS üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçladı. Beyin infarkt hacmini niceltmek için T2 ağırlıklı manyetik rezonans görüntüleme yapıldı ve dış kapsül beyaz maddesinin mikrostruktural bütünlüğünü değerlendirmek için difüzyon tensör görüntüleme kullanıldı. Luxol Fast Blue (LFB) boyama dış kapsül içindeki miyelin bütünlüğünü değerlendirirken, H-refleks kayıtları omurga refleks uyarılabilirliğini değerlendirdi. İnfarkt hacmi, beyaz madde mikroyapısı, omurga refleks uyarıcılığı ve spastisite şiddeti arasındaki ilişkileri incelemek için korelasyon analizleri yapıldı. MSSA, beyin infarkt hacmini azalttı, dış kapsül mikrostruktural hasarını azalttı ve demiyelinasyonu zayıflattı. Buna ek olarak, MSSA, anormal H-refleks parametrelerini iyileştirdi, omurga refleksi uyarılmasını normalleştirdi ve spastisiteyi azalttı. Korelasyon analizleri, daha büyük enfarktların daha fazla dış kapsül yaralanmasıyla ilişkili olduğunu, daha iyi korunmuş beyaz madde bütünlüğünün ise omurga refleks regülasyonunun iyileşmesi ve daha az şiddetli spastisiteyle ilişkili olduğunu gösterdi. Bu bulgular, MSSA'nın iskemik beyin hasarını azaltarak, dış kapsül mikrostruktural bütünlüğünü koruyarak ve kortiko-retikulospinal yol ilişkili iniş inhibitör fonksiyonunu iyileştirerek PSS'yi hafifletebileceğini ve terapötik uygulamasını destekleyen preklinik kanıtlar sağladığını göstermektedir.

Giriş

İnme sonrası spaztisite (PSS), iskemik inmenin yaygın ve engelleyici bir sekelidir ve klinik olarak kas tonusunda hız ve uzunluğa bağlı artışlarla tanımlanır. Bu durum genellikle anormal uzuv duruşu ve işlevsiz hareket kalıplarına yol açar; hastaların motor bağımsızlığını ve yaşam kalitesini ciddi şekilde zayıflatır ve dünya çapında önemli ekonomik ve bakım yükleri oluşturur ^1,2. Üst motor nöron sendromunun tipik bir tezahürü olarak, PSS'nin patogenezi öncelikle omurga gerilme reflekslerinin aşırı uyarılabilirliğine bağlanır. Biriken nöroanatomik ve nörofizyolojik çalışmalar, ekstrapiramidal sistemden omurilik refleks devrelerine inen inhibitör modülasyonun kaybının, PSS'nin başlangıcı ve ilerlemesinin temelinde önemli bir patolojik mekanizma olduğunu göstermiştir; kortiko-retikulospinal yol ise bu iniş düzenleyici kontrolü aracı eden birincil sinir^{devresi olarak hizmet vermektedir 3,4,5}.

İğneleme tekniği, akupunktur etkinliğinin önemli belirleyicisidir ve klinik akupunktur uygulamasında kritik bir konuma sahiptir. Hareket tarzı saç derisi akupunkturu (MSSA), PSS müdahalesi için özel olarak geliştirilmiş ve saç derisi akupunkturunu eşzamanlı aktif veya pasif uzuv egzersiziyle birleştiren kendine özgü bir iğneleme^{tekniğidir 3}. Birçok klinik çalışma, MSSA'nın sadece saç derisi akupunkturu veya egzersiz rehabilitasyonuna kıyasla spaztisite şiddetini azaltmada, hareketsel fonksiyonu geri kazandırmada ve inme hastalarında günlük yaşam aktivitelerini iyileştirmede üstün sonuçlar^{sağladığını göstermiştir} 6,7,8,9. Önceki hayvan çalışmalarımız, PSS'nin sıçan modellerinde MSSA'nın geleneksel saç derisi akupunkturuna göre daha belirgin antispastik etkiler gösterdiğini göstermiştir. Mekanik olarak, bu terapötik etkiler iskemik penumbrada beyin perfüzyonun iyileşmesi, omurga gerilme refleksinin uyarılmasının azalması ve spinal ön boynuzlu motonörlerde potasyum-klorür kotransporter 2'nin (KCC2) artan ekspresyonuyla ilişkilendirilmiştir. Bu moleküler modülasyon, spinal γ-aminobutirik asit (GABA)erjik inhibitör iletimi daha da artırabilir ve böylece spastisite rahatlamasına katkıda^{bulunabilir 10,11}.

MSSA'nın mevcut mekanik araştırmaları sınırlı kalmaktadır; ekstrapiramidal iniş yolları içindeki yukarı akış intraserebral beyaz maddenin PSS'ye nasıl katkı sağladığını özel olarak inceleyen önceki çalışmalar yoktur. Dış kapsül, kortiko-retikulospinal yolun kritik bir beyaz madde segmentini oluşturur; Kortikal sinyalleri beyin sapı retiküler oluşumuna ileten kortiko-tegmental lifler içerir ve böylece omurga refleks devrelerinin supraspinal inhibitör kontrolüne katkıda bulunur^12,13. Bu anatomik rolle uyumlu olarak, birden fazla voxel tabanlı lezyon-semptom haritalama çalışması, dış kapsül hasarının felç sonrası üst ve alt uzuv spastisitesi ile ilişkili olduğunu^{göstermiştir} 12,13,14. Bu anatomik ve klinik gözlemler, dış kapsülün birincil ilgi bölgesi (ROI) olarak seçilmesini destekler. Bugüne kadar, MSSA'nın dış kapsül mikroyapısal bütünlüğünü koruyup korumadığını veya bu değişikliklerin omurga refleks uyarılabilirliğindeki değişikliklerle ilişkili olup olmadığını in vivo kanıt göstermemiştir. Davranışsal değerlendirmeler, geleneksel manyetik rezonans görüntüleme (MR) ve elektrofizyolojik testlere dayalı klinik değerlendirmeler yalnızca korelasyonel analizlere izin verir ve hasta heterojenliği, hastalık süresi ve diğer klinik karıştırıcı faktörlerden etkilenebilir. Buna karşılık, PSS'nin standartlaştırılmış fare modelleri, deneysel değişkenlerin titiz kontrolünü ve tekdüze müdahale protokollerini mümkün kılarak mekanik araştırma için tamamlayıcı bir platform sağlar.

Beyin beyaz madde mikroyapısı ve nörofizyolojik fonksiyona odaklanan bu çalışma, T2 ağırlıklı görüntüleme (T2WI), difüzyon tensör görüntüleme (DTI), H-refleks elektrofizyolojik kaydı, dış kapsülün hedefli Luxol Fast Blue (LFB) boyama ve davranışsal değerlendirmeler gibi çoklu mod yaklaşımları entegre etti. Entegre bir yapı-fonksiyon-davranış korelasyon çerçevesi oluşturarak, bu çalışma, MSS'nin bir sıçan modelinde MSS'nin tedavisi sonrası serebral enfarktüsü, dış kapsül mikroyapısı, omurga refleks uyarıcılığı ve spastisite arasındaki ilişkileri araştırmayı amaçladı. Bulgular, MSSA'dan sonra korunan dış kapsül bütünlüğü ile azalmış omurga refleks hiperuyarıcılığı arasındaki ilişkiyi destekleyecek preklinik kanıtlar sunmayı amaçlamaktadır ve MSSA'nın PSS rehabilitasyonunda translasyonel uygulamasına teorik bir temel sağlar.

Protokol

240–280 g ağırlığında kırk yetişkin erkek Sprague–Dawley (SD) sıçan, Pekin Vital River Laboratuvarı Hayvan Teknolojisi'nden [Lisans No.: SCXK (Jing) 2021-0011] satın alınmıştır. Tüm fareler, Pekin Çin Tıp Üniversitesi Laboratuvar Hayvan Merkezi'nde kontrollü koşullarda barındırıldı; oda sıcaklığı 23°C ± 1°C, bilgili nem %50 ± %5 ve 12 saat ışık/12 saat karanlık döngü, yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlandı. Fareler 5 gün boyunca aklimatize edildi ve bu süre zarfında koşu bandı egzersizi aynı anda alışma eğitimi yapıldı. Hayvanlar, kontrol stresini azaltmak için elektriksel uyarım olmadan seansta 15 dakika boyunca günde bir kez koşu bandı alışması yaptılar.

Önceki çalışmamıza göre, orta beyin arter tıkanması (MCAO) yöntemiyle PSS indüksiyonunun başarı oranı yaklaşık %^60'dır15. Rastgele sayı tablosu kullanılarak, 9 fare önceden rastgele seçildi; kalan 31 fare ise model kurulum için kullanıldı. Başarılı modellemeden sonra, bu fareler rastgele model grubu ve MSSA grubuna ayrıldı. Sonuçta, her gruba dokuz fare dahil edildi. Bu deney, laboratuvar hayvan refahı 3R ilkelerine uygun olarak yapılmış ve Pekin Çin Tıp Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmış (BUCM 20250915-008).

Model Kuruluş

MCAO modeli, değiştirilmiş bir intraluminal filament tekniği kullanılarak sıçanlarda kuruldu. Sıçanlar indüksiyon için %3 izoflüran ile anestezi edildi ve cerrahi işlem boyunca %1,5 isofluran ile 1 L/dakika sabit akış hızında oksijenle anestezi sağlandı. Orta hat servikal kesi yapıldı, ardından sağ ortak karotis arter (CCA), dış karotis arter (ECA) ve iç karotis arter (ICA) ortaya çıkarmak için küt diseksiyon yapıldı. ECA aracılığıyla ICA'ya bir naylon monofilament dikişi (çapı 0,36 ± 0,02 mm) getirildi ve arterial tıkanma sağlamak için orta beyin arteri (MCA) kökenine yaklaşık 18–20 mm ilerletildi. Damarlar bağlandı ve kesi kapatıldı. Fareler daha sonra anesteziden iyileşene kadar bir ısıtma pedine yerleştirildi. Sahte ameliyat grubundaki fareler, intraluminal filament yerleştirilmeden CCA, ICA ve ECA'nın aynı cerrahi maruziyetine maruz kaldılar.

Ameliyattan sonra, tüm MCAO fareleri standart ameliyat sonrası bakım aldı. Hayvanlar, hipotermiyi önlemek için ilk 12 saat boyunca 37°C ısıtma pedinde tutuldu. Cerrahi kesiler üç gün üst üste günlük temizlendi, enfeksiyon profilaksisi için intraperitoneal enjeksiyonla ampisilin (100 mg/kg) verildi ve yeterli beslenmeyi korumak için yumuşatılmış yiyecekler verildi. Genel aktivite, yiyecek alımı, yara durumu ve uzuv motor fonksiyonları ameliyat sonrası 1. günlerden 10. güne kadar günlük olarak izlendi.

Nörolojik eksiklikler, Zea Longa nörolojik defisit skoru kullanılarak grup dağılımı kör edilmiş araştırmacılar tarafından değerlendirildi ve kas tonusu Modifiye Ashworth Ölçeği (MAS) kullanılarak değerlendirildi. Değerlendirmeler ameliyattan 1 gün önce (−1. gün), ameliyat öncesi MCAO günü (0. gün) ve ameliyat sonrası 1, 3, 5, 7 ve 10. günlerde yapıldı. Ameliyat sonrası 3. günde Zea Longa ve MAS puanları ≥1 olan fareler, başarılı bir PSS modeli kurmuş olarak kabul edildi.

MSSA Tedavisi

Müdahaleler ameliyat sonrası 3. günde başladı. Saç derisi akupunktur uyarısı bölgesi, ipsilesional MS 6 hattı (ön parietotemporal oblik hattı) idi. Ulusal Standart Saç Derisi Akupunkturu Manipülasyonları Standardı'na (GB/T 21709.2-2021) uygun olarak, MS 6 serisi GV 21'den (Qianding) GB 6'ya (Xuanli) kadar uzanır.

Tek kullanımlık steril akupunktur iğneleri (0,25 × 13 mm), GV 21'de galea aponeurotica'nın altına saç derisi yüzeyine göre yaklaşık 15° eğik açı ile yerleştirildi ve ön parietotemporal oblik çizgi boyunca yaklaşık 10 mm derinlikte GB 6'ya doğru ilerletildi. Hızlı dönme manipülasyonu (200 devir/dakika) 1 dakika boyunca sürekli uygulandı. 15 dakika iğne tutmasından sonra, aynı dönme manipülasyonu bir kez tekrarlandı ve toplam iğne tutma süresi 30 dakika oldu. İğne tutma süresi boyunca fareler aynı anda 10 m/dakika sabit hızda koşu bandı egzersizi yaptılar.

Sahte ile işletilen ve model gruplardaki fareler ne akupunktur ne de koşu bandağı egzersizi aldı. Spesifik olmayan müdahale ve kısıtlama stresini kontrol etmek için, sıkıştırıcı olmayan stok tutucularında günde 30 dakika boyunca nazikçe tutulup tutuldular; bu, MSSA grubunun toplam günlük müdahale süresine denk geldi.

Davranışsal Değerlendirmeler

Nörolojik Bozukluklar için Zea Longa Puanı:

Sıçanlarda nörolojik eksiklikler, Zea Longa puanlama sistemi¹⁶ kullanılarak değerlendirildi. Aşağıdaki kriterler uygulandı: 0 puan, nörolojik bozulma olmadığını ve normal kısıtlanmamış hareketin olduğunu gösteriyordu; 1 puanı, ön uzuvun veya arka uzuvun etkilenen tarafa karşı tam olarak uzatılmadığını gösteriyordu; 2 skoru, hareket sırasında karşı tarafa doğru dairesel olarak döndüğünü gösteriyordu; 3 puanı yürürken karşı tarafa düştüğünü gösteriyordu; ve 4 puan, bilinç kaybı ve spontan yürüyüşün olmaması anlamına geliyordu.

Kas Tonusu için MAS:

Kas tonusu MAS¹⁷ kullanılarak değerlendirildi. Kriterler şu şekilde tanımlandı: 0. derece, kas tonunda artış yok; 1. derece, kas tonusunda hafif artış, pasif fleksiyon ve uzatmanın sonunda geçici bir yakalama veya minimal direnç; 1+ derece, kas tonunda belirgin artış, orta hareket aralığında geçici bir yakalama ve hareketin ikinci yarısında kalıcı direnç; 2. derece, kas tonusunda belirgin artış, hareket aralığının çoğunda direnç belirgin, ancak uzuv kolayca hareket ettirilebilir kaldı; 3. derece, kas tonusunda önemli artış ve pasif fleksiyon ve ekspansiyonu zorlaştırdı; ve 4. derece, eklem sertliği nedeniyle sınırlı pasif hareket. 1+ Sınıfına 2 puan verildi ve bu çalışmada maksimum 5 MAS^{puanı 10} puan aldı.

Beyin İnfarkt Hacminin Niceliklendirilmesi için T2WI Nörogörüntüleme

Tüm T2WI taramaları, ParaVision 360 yazılımı (sürüm 3.5) ile çalışan PharmaScan MRI tarayıcısı kullanılarak alındı. Beyin infarkt hacminin nicelendirilmesi için MCAO sıçanlarına T2 ağırlıklı turbo hızlı kazanım ve gevşeme artırıcı (T2_TurboRARE, ayrıca RARE/hızlı spin eko [FSE]) darbe dizisi uygulandı. Görüntüleme parametreleri şu şekilde yapılandırıldı: tekrarlama süresi (TR) = 3000,0 ms, yankı süresi (TE) = 33,0 ms, görüş alanı (FOV) = 35,00 × 35,00^{mm 2}, matris boyutu = 250 × 250, dilim kalınlığı = 0,80 mm, dilim sayısı = 35, uyarılma sayısı (NEX) = 3,0 ve çevirme açısı (FA) = 180,0°. Beyin enfarkt bölgeleri, ITK-SNAP yazılımında (sürüm 4.4.0) tek bir araştırmacı tarafından, sinyal yoğunluğu değişiklikleri ve iskemik enfarktuyla uyumlu morfolojik özellikler kullanılarak grup atamasına kör edilmiş tek bir araştırmacı tarafından dilim dilim bazında manuel olarak belirlenmiştir. Beyin infarkt hacmi yazılım tarafından otomatik olarak hesaplanıyordu.

Beyaz madde mikroyapısal bütünlüğünün değerlendirilmesi için DTI Nörogörüntüleme

MRI verileri 7.0 T PharmaScan manyetik rezonans tarayıcısı kullanılarak alındı. Anestezi, basınçlı havada %3 izofluran (0,4–0,6 L/dakika) verilerek DTI alımı boyunca %1 izofluran ile tutuldu. Görüntüleme işlemi boyunca çekirdek vücut sıcaklığı, termostatla kontrol edilen su banyosu kullanılarak korundu.

MRI taraması sırasında, önce üç düzlemli bir lokalizasyon dizisi uygulanarak fare beyni mıknatıs içinde konumlandırıldı. DTI, aşağıdaki parametrelerle eksenel tek atışlı spin-eko eko-düzlemsel görüntüleme dizisi kullanılarak gerçekleştirildi: TR/TE = 3000/27 ms, matriks = 90 × 75, FOV = 20 × 15^{mm 2}, dilim kalınlığı = 0,7 mm, 30 difüzyon gradyanı yönü ve b-değerleri 0 ile 1000 s/^{mm 2}. DTI analizi için, bregma'nın 1,3 mm gerisindeki beyin dilimlerinde dış kapsülde ilgi alanları çizildi. ParaVision 360 yazılımı kullanılarak fraksiyonel anizotropi (FA), ortalama difüzözite (MD), eksenel difüzyon (AD) ve radyal difüzyon (RD) parametrik haritaları yeniden oluşturuldu. Veriler, etkilenen yarımkürenin karşı taraflı sağlıklı yarımküreye oranı olarak ifade edilir.

Miyelin Yaralanması ve Remiyelinasyonun Değerlendirilmesi İçin LFB Boyama

LFB boyama işlemi dış kapsüldeki miyelinizlenmiş aksonlara yapılan yapısal hasarı değerlendirmek için gerçekleştirildi. Miyelin hasarı, miyelin seyreklenmesi ve vakuolasyonu ile karakterize edilen, harici kapsüldeki ROI içindeki LFB boyalı miyelinli liflerin entegre optik yoğunluğu (IOD) ImageJ yazılımı kullanılarak ölçülerek (sürüm 6.0; gri ton eşiği, 35–225) ölçüldü. Fare beyni stereotaksik atlas^18'e dayanarak, her hayvan için bregma +1,0 mm, −1,3 mm ve −1,6 mm ölçülerinde üç koronal kesit analiz edildi; bu aralıklar dış kapsülün ön, orta ve orta-arka kısımlarına karşılık geldi. Üç bölüm boyunca ortalama OGD, her hayvanı temsil etmek için hesaplandı (n = 4 her grup). İpsilateral IOD değerleri kontralateral tarafa normalize edildi ve yüzde¹⁹ olarak ifade edildi.

Omurga refleks uyarılabilirliğinin değerlendirilmesi için elektrofizyolojik kayıtlar

Omurga monosinaptik H-refleksi biyolojik fonksiyon deney sistemi kullanılarak kaydedilmiştir. Fareler, elektrofizyolojik kayıtlar sırasında omurga reflekslerinin uyarılmasını korumak için α-kloraloz (50 mg/kg, intraperitoneal) ile hafifçe anestezi edildi. Sol siyatik sinir küt diseksiyon ile açığa çıkarıldı ve elektriksel uyarım için bipolar kanca elektrotlarına yerleştirildi. Yağlı bir vitamin çözeltisi, doku hidrasyonunu ve sinirsel canlılığı korumak için aralıklı olarak maruz kalan sinire uygulandı. Sol arka patinin arasal kaslarına bir çift paslanmaz çelik kayıt elektrodu yerleştirildi ve kuyruğuna bir topraklama elektrodu yerleştirildi. H-refleksi, 100 μs nabız süresine sahip monopolar-bipolar darbe uyarıcısı kullanılarak uyarıldı. H-refleks eşiği ve motor eşik (MT), geri dönmez periferik sinir hasarını önlemek için akım 0,05 mA adımlarla maksimum 3,0 mA yoğunluğuna çıkarılarak belirlendi.

Maksimum H-refleksi (H_max) ortaya çıkaran aynı uyarım yoğunluğu kullanılarak, farklı frekanslarda (0,3, 5 ve 10 Hz) darbe uyarıları verilerek farklı uyarım frekanslarında H-refleks genlikleri elde edildi. M-dalgası genliğinin başlangıç değerinin %95'i içinde kaldığını doğrulamak için 0.3 Hz'de tekrarlanan darbe uyarısı uygulandı; aksi takdirde, veri seti atıldı. H-refleks frekansına bağlı depresyon (FDD), 5 Hz ve 10 Hz'deki H-dalga/M-dalga genlik oranının (H/M oranı) 0,3 Hz'e göre yüzdesi olarak hesaplandı; 0,3 Hz'deki H/M oranı temel referans¹⁰ olarak kullanıldı.

Veri Analizi

İstatistiksel analizler SPSS yazılımı (sürüm 20.0) kullanılarak gerçekleştirildi. Sürekli veriler, ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunulur. Veri normalliği Shapiro–Wilk testi kullanılarak değerlendirildi. Gruplar arasında geleneksel görüntüleme sonuçları ve diğer nicel değişkenleri karşılaştırmak için tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanıldı. Varyans homojenliği sağlandığında, Bonferroni sonradan yapılan testler yapıldı; aksi takdirde, Dunnett'in T3 testi uygulandı. Davranışsal veriler, sabit faktörler olarak deneysel grup ve ameliyat sonrası zaman noktası ile iki yönlü ANOVA kullanılarak analiz edildi. Çalışma değişkenleri arasındaki ilişkileri değerlendirmek için Spearman korelasyon analizi kullanıldı. p < 0.05 değeri istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.

Sonuçlar

MSS, Nörolojik Fonksiyonel Eksiklikleri Düzeltir

İki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA, zaman (F[2.613, 62.71] = 315.3, p < 0.001) ve grup (F[2, 24] = 142.9, p < 0.001) ve Zea Longa nörolojik skorları için grup etkileşimi × anlamlı bir zaman (F[12, 144] = 99.94, p < 0.001) ana etkilerini ortaya koydu. Ameliyattan bir gün önce, sahte ameliyat edilen, model ve MSSA gruplarındaki tüm farelerin Zea Longa puanı 0 oldu; bu da nörolojik eksiklikler olmadan sağlam bir başlangıç nörolojik fonksiyonunu gösteriyordu. Ameliyat sonrası 1. günden itibaren, hem model hem de MSSA gruplarında Zea Longa puanları kademeli olarak arttı. Bu gruplar arasında ameliyat sonrası 1. günden 5. güne kadar belirgin bir fark gözlemlenmedi (p > 0.05). Devam eden müdahaleyle, MSSA grubundaki Zea Longa puanları, ameliyat sonrası 7 ve 10. günlerdeki model grubun puanlarından anlamlı şekilde daha düşük oldu (p < 0.001), bu da nörolojik fonksiyonun iyileşmesini gösteriyordu (Şekil 1A).

Şekil 1. Hareket tarzı saç derisi akupunkturu, inme sonrası spazmisite olan sıçanlarda nörolojik bozuklukları iyileştirir ve kas tonusunu azaltır. (A) Orta serebral arter tıkanmasından (MCAO; gün −1), MCAO'dan hemen önce (0. gün) ve ameliyat sonrası 1, 3, 5, 7 ve 10. günlerde ölçülmüş Zea Longa nörolojik defisit puanları. (B) İlgili zaman noktalarında ölçülen değiştirilmiş Ashworth Ölçeği puanları. Kesik dikey çizgi, 0. gün MCAO'yu gösterir. Veriler, ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunulur. Hata çubukları SD'yi temsil eder. Karşılaştırmalar için %***p < 0.001 (%0,001) ile belirtilir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

MSSA, Beyin İnfarkt Hacmini Azaltır

Sahte olarak işletilen fareler, beyin genelinde homojen parenkimal sinyal yoğunluğuna sahip normal T2WI bulguları sergiledi. Patolojik hiperyoğunluk, beyin enfarktüsü, morfolojik anormallikler veya ventriküler genişleme gözlemlenmedi (Şekil 2A). Buna karşılık, model grubu ipsilateral serebral yarımkürde belirgin T2 hiperyoğunluğu ve belirgin ventriküler genişleme sergiledi (Şekil 2A). Kantif morfometrik analiz, MSSSA grubunda serebral enfarkt hacminin model grubuna kıyasla anlamlı şekilde azaldığını gösterdi (p < 0.001; Şekil 2B). MSSA müdahalesi Şekil 2C'de gösterilmiştir.

Şekil 2. Hareket tarzı saç derisi akupunkturu, felç sonrası spastisite olan sıçanlarda serebral infarkt hacmini azaltır. (A) Sahte ameliyat edilen, model ve hareket tarzı saç derisi akupunkturu (MSSA) gruplarından temsil eden T2 ağırlıklı görüntüleme (T2WI) beyin görüntüleri, bregmaya göre 1.00, 0.20, −0.92 ve −1.88 mm oranlarında. (B) T2WI'den beyin infarkt hacminin nicelendirilmesi. Bireysel semboller bireysel hayvanları temsil eder. (C) Koşu bandı egzersiziyle eşzamanlı yapılan MSSA müdahalesinin fotoğrafı. Veriler ortalama SD ± olarak sunulur. Hata çubukları SD. ***p < 0.001 ile model grubunu temsil eder. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

MSSA, İnme Sonrası Kas Spaysitesini Azaltıyor

MAS puanları için, iki yönlü tekrarlanan ölçümlü ANOVA zamanın (F[2.158, 51.79] = 183.7, p < 0.001) ve grubun (F[2, 24] = 57.68, p < 0.001) ve grup etkileşiminin anlamlı × etkilerini ortaya koydu; ayrıca grup etkileşimi < anlamlı bir zaman gösterdi. Tüm fareler, ameliyattan bir gün önce ve ameliyat sonrası 1. günde MAS puanı 0 gösterdi; bu da normal başlangıç kas tonusunu yansıtıyor, spastisite olmadan. Postoperatif 3. günden itibaren, model ve MSSA gruplarında MAS puanları kademeli olarak arttı; bu da inme sonrası uzuv spastisitesinin gelişimini gösterdi ve bu dönemde iki grup arasında anlamlı bir fark gözlemlenmedi. Ameliyat sonrası 5. günden 10. güne kadar, MSSA grubundaki MAS skorları model grubundakilere göre anlamlı derecede düşüktü (p <0.01 ile p 0.001 < 0.001 arasında), bu da MSSA'nın PSS'yi hafiflettiğini gösteriyor (Şekil 1B).

MSSA, dış kapsülde beyaz madde mikroyapısal bütünlüğünü korur

Temsilci DTI parametre haritaları Şekil 3A'da gösterilmiştir. Ameliyat sonrası 10. günde, sahte ile ameliyat edilen gruba kıyasla, model grubu dış kapsül içindeki fraksiyonel anizotropi (rFA) oranında belirgin bir azalma gösterdi (p < 0.001; Şekil 3B), ortalama difüzyöte (rMD) ve radyal difüzyon (rRD) oranlarında anlamlı artışlarla birlikte (her ikisi de p < 0.001; Şekil 3C,D). Model grubuyla karşılaştırıldığında, MSSA, rFA'yı (p < 0.001; Şekil 3B) ve rMD ve rRD'yi anlamlı şekilde azalttı (her ikisi de p < 0.01; Şekil 3C,D). Gruplar arasında eksenel difüzyon oranında (rAD) anlamlı bir fark gözlemlenmedi (p > 0.05; Şekil 3E). DTI alımı sırasında sıçanların konumlanması ve dış kapsül ROI'sinin anatomik konumu Şekil 3F,G'de gösterilmiştir.

Şekil 3. Hareket tarzı saç derisi akupunkturu, felç sonrası spastisite olan sıçanlarda difüzyon tensör görüntüleme parametrelerini değiştirir. (A) Sahte işletilen, model ve hareket tarzı saç derisi akupunkturu (MSSA) gruplarından bregma ile −1,30 mm yükseklikte temsil kesirli anizotropi (FA), ortalama difüzyofite (MD), eksenel difüzyofite (AD) ve radyal difüzyofite (RD) haritaları. (B–E) İpsilyonal ve kontralateral FA (rFA), MD (rMD), RD (rRD) ve AD (rAD) oranlarının nicelendirilmesi. Bireysel semboller bireysel hayvanları temsil eder. (F) Difüzyon tensör görüntüleme (DTI) için konumlandırılmış bir farenin fotoğrafı. (G) İlgi duyulan kontralateral ve ipsileyonal dış kapsül bölgelerini gösteren şematik ve ilgili manyetik rezonans görüntüsü. Veriler ortalama SD ± olarak sunulur. Hata çubukları SD'yi temsil eder. #p < 0.05 ve ###p < sahte (sahte gruba karşı) 0.001; **p < 0.01 ve ***p model grubuna karşı 0.001 <. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

MSSA, dış kapsülde miyelin bütünlüğünü artırır

Dış kapsülde miyelin bütünlüğünü değerlendirmek için LFB boyama yapıldı. Histolojik olarak, miyelinizlenmiş lifler sahte ile işletilen grupta sağlam morfoloji ve düzenli düzen sergilerken, MCAO model sıçanlarının dış kapsülünde belirgin miyelin kaybı ve yapısal düzensizlik gözlemlenmiştir (Şekil 4A). Nicel analiz, model grubunda LFB boyamanın göreceli IOD'sunun sahte yöntemle çalışan gruba göre anlamlı şekilde daha düşük olduğunu gösterdi (p < 0.001; Şekil 4B). Model grubuna kıyasla, MSSA grubu anlamlı derecede daha yüksek göreceli IOD değerleri gösterdi (p < 0.001; Şekil 4B), MSSA tedavisi sonrası dış kapsülde miyelin bütünlüğünün iyileşmesini göstermektedir.

Şekil 4. Hareket tarzı saç derisi akupunkturu, felç sonrası spastisite olan sıçanlarda dış kapsül miyelin yaralanmasını azaltır. (A) Sahte ameliyat edilen, model ve hareket tarzı saç derisi akupunkturu (MSSA) gruplarından panoramik Luxol Fast Blue (LFB) boyalı beyin kesitleri ve karşı taraflı ve ipsilesional dış kapsül bölgelerinin (ROI) büyütülmüş görüntüleri. Panoramik görüntülerdeki mavi ve kırmızı kutular, sırasıyla kontralateral ve ipsilesional ROI'ları gösterir. Büyütülmüş görüntülerdeki ölçek çubukları = 50 μm. (B) İpsilyonal dış kapsülde LFB boyamalarının karşılıklı tarafa normalize edilmiş göreli entegre optik yoğunluğunun (IOD) nicelendirilmesi. Bireysel semboller bireysel hayvanları temsil eder; n = grup başına 4. Veriler ortalama SD ± olarak sunulur. Hata çubukları SD'yi temsil eder. ###p < 0.001 ile sahte gruba karşı; p < model grubuna karşı 0.001; △p < parantez ile belirtilen karşılaştırma için 0.05. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

MSSA, Omurga H-refleks aşırı uyarılabilirliğini inhibe eder

Temsil eden M-dalgası ve H-dalgası kayıtları Şekil 5A'da, elektrofizyolojik kayıt düzeni ise Şekil 5B'de gösterilmiştir. Ameliyat sonrası 10. günde, elektrofizyolojik değerlendirme, sahte ameliyatlı gruba kıyasla model grubunun motor eşiğinin (MT; p < 0.001) ve maksimum H-dalgası/maksimum M-dalga genliği (H_max/M_max) oranı (p < 0.001), M-dalgası gecikmesinde ılımlı bir artış (p < 0.05) ve buna karşılık gelen H-refleks gecikmesinde (p < 0.05; Şekil 5C–H). Model grubuna kıyasla MSSA grubu MT (p < 0.001) ve H_max/M_max oranı (p < 0.001) ile birlikte önemli ölçüde daha yüksek H-refleks eşiği (p < 0.001; Şekil 5C–H). Model ile MSSA grupları arasında H_max'ı ortaya çıkarmak için gereken uyarılma yoğunluğunda MT'nin katı olarak ifade edilen uyarılma yoğunluğunda anlamlı bir fark gözlemlenmedi (Şekil 5H). Ayrıca, 0.3 Hz'de H/M oranına normalleştirildiğinde, H-refleks FDD üç grupta da uyarılma frekansı arttıkça kademeli olarak azalmıştır (Şekil 5I). Hem 5 Hz hem de 10 Hz'de, H/M oranı MSSA grubunda, model grubuna göre (her ikisi de p 0.001< oranında, H-refleks FDD'nin fizyolojik desenine kısmi geri döndüğünü gösteriyor (Şekil 5J; Tablo 1).

Şekil 5. Hareket tarzı saç derisi akupunkturu, felç sonrası spastisite olan farelerde omurga refleks aşırı uyarılabilirliğini azaltır. (A) Sahte ile işletilen, model ve hareket tarzı saç derisi akupunkturu (MSSA) gruplarından temsil etkileyici M-dalgası ve H-dalga izleri. (B) Siyatik sinir uyarı bölgesini, kayıt elektrotlarını ve toprak elektrotunu gösteren elektrofizyolojik kayıt sisteminin fotoğrafı. (C–H) Motor eşiği (MT), maksimum H-dalgası/maksimum M-dalga genlik oranı (H_max/M_max), H-dalgası gecikmesi, H-refleks eşiği, M-dalga gecikmesi ve_Hmax'ı ortaya çıkaran uyarılma yoğunluğunun sırasıyla MT'nin katı olarak ifade edilmesi. Bireysel semboller bireysel hayvanları temsil eder. (I) Her grupta 0.3 Hz, 5 Hz ve 10 Hz uyarım frekanslarında elde edilen temsil H-refleks izleri. (J) H-refleksinin frekansa bağlı depresyonu, 5 Hz ve 10 Hz'de H/M oranı olarak ifade edilir; bu oran 0,3 Hz'deki H/M oranına normalize edilir. Gölgelenmiş bölgeler, ortalama değerlerin SD'sini temsil eder. Veriler ortalama ± SD olarak sunulur. Hata çubukları SD'yi temsil eder. #p < 0.05 ve ###p < sahte (sahte) tarafından işletilen gruba karşı 0.001; p < model grubuna karşı 0.001. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Grup	MT (mA)	Mmax (mV)	Hmax (mV)	M gecikmesi (ms)	H gecikmesi (ms)	H-refleks eşiği (×MT)	Hmax (×MT)	H/M oranı (0.3 Hz)	H/M oranı (5 Hz)	H/M oranı (10 Hz)
Sahte (n = 9)	0.808 ± 0.218	11.119 ± 7.802	2.804 ± 2.896	4.567 ± 0.731	11.311 ± 0.849	1.296 ± 0.251	1.554 ± 0.264	0.452 ± 0.264	0.304 ± 0.155	0.176 ± 0.137
Model (n = 9)	1.855 ± 0.203###	3.282 ± 2.040##	2.307 ± 1.296	5.333 ± 0.893	10.456 ± 1.056	0.729 ± 0.299	1.517 ± 0.303	0.826 ± 0.120##	0.741 ± 0.129###	0.684 ± 0.131###
MSSA (n = 9)	0.663 ± 0.236	5.908 ± 2.751	1.497 ± 0.688	4.744 ± 0.590	10.978 ± 0.602	1.939 ± 0.819	1.832 ± 1.557	0.556 ± 0.238*	0.390 ± 0.193**	0.142 ± 0.134

Tablo 1: İnme sonrası spaztisite olan sıçanlarda H-refleksinin elektrofizyolojik parametreleri. Sahte çalıştırılan, model ve hareket tarzı saç derisi akupunkturu (MSSA) gruplarından elde edilen elektrofizyolojik ölçümler; motor eşik (MT), maksimum M-dalgası genliği (M_max), maksimum H-dalgası genliği (H_max), M-dalgası gecikmesi, H-dalgası latansısı, H-refleks eşiği MT'nin katı (×MT) olarak ifade edilir, uyarılma yoğunluğu H_max'ı ortaya çıkarır MT (×MT) katı olarak ifade edilir ve 0.3, 5 ve 10 Hz uyarım frekanslarında ölçülen H/M oranları bulunur. Veriler ortalama SD ± olarak sunulur. ##p < 0.01 ve ###p < sahte ile çalışan gruba karşı 0.001; *p < 0.05, **p < 0.01 ve ***p < model grubuna karşı 0.001.

T2WI İnfarkt Hacmi Arasındaki Korelasyonlar, Dış Kapsülün DTI Metrikleri, Elektrofizyolojik Indeksler ve MAS Skorları

T2WI ile ölçülen serebral enfarkt hacmi ile dış kapsülün DTI metrikleri arasındaki korelasyonlar ilk olarak incelendi. Birleştirilmiş analizde, infarkt hacmi rFA ile güçlü şekilde negatif korelasyonluydu (ρ = −0.902, p < 0.001) ve rMD ile pozitif korelasyonluydu (ρ = 0.511, p = 0.03; ρ = 0.661, p = 0.003; Şekil 6A–D). Alt grup analizlerinde enfarkt hacmi ile DTI parametreleri arasında anlamlı bir korelasyon gözlemlenmedi. Daha sonra dış kapsüle ait DTI metrikleri, omurga refleks uyarılabilirliğinin elektrofizyolojik indeksleri ve MAS tarafından değerlendirilen kas tonusu arasındaki ilişkiler değerlendirildi. Birleştirilmiş analizde, daha düşük rFA daha yüksek H_max/M_max oranıyla ilişkilendirildi (ρ = −0.895, p < 0.001), yüksek rRD ise daha düşük H-refleks eşiğiyle ilişkilendirildi (ρ = −0.504, p = 0.03; Şekil 6E,F). Ayrıca, daha yüksek H_max/M_maksimum oranları ve daha düşük H-refleks eşikleri daha yüksek MAS puanlarıyla ilişkilendirildi (ρ = 0.760, p < 0.001; ρ = −0.479, p = 0.01; Şekil 6G,H). Alt grup analizleri, yalnızca model grubunda H-refleks eşiği ile MAS puanı arasında anlamlı negatif bir korelasyon gösterdi (ρ = −0.736, p = 0.03), oysa sahte uygulanan veya MSSA gruplarında anlamlı bir korelasyon gözlemlenmedi.

Şekil 6. İnme sonrası spastisite olan sıçanlarda beyin infarkt hacmi, difüzyon tensör görüntüleme parametreleri, H-refleks indeksleri ve kas tonusu arasındaki ilişkiler. (A–D) T2 ağırlıklı görüntüleme (T2WI) kaynaklı serebral enfarkt hacminin fraksiyonel anizotropi (rFA), ortalama difüzyofite (rMD), radyal difüzyon (rRD) ve eksenel difüzyon (rAD) ipsilesional-kontralateral oranları ile ilişkilendirilmesi. (E) rFA ile maksimum H-dalga/maksimum M-dalga genlik oranı (H_max/M_max) arasındaki ilişki. (F) rRD ile H-refleks eşiği arasındaki ilişki. (G) H_max/M_max ile Modifiye Ashworth Ölçeği (MAS) puanı arasındaki ilişki. (H) H-refleks eşiği ile MAS puanı arasındaki ilişki. Daireler, kareler ve üçgenler, sırasıyla sahte yöntemle, model ve hareket tarzı saç derisi akupunkturu (MSSA) gruplarını temsil eder. Kesik çizgiler, ölçülen verilerden üretilen doğrusal regresyon uyum eğrisine karşılık gelir. Her panelde genel ve gruba özgü Spearman korelasyon katsayıları (ρ) ve buna karşılık gelen p değerleri gösterilir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Veri Erişilebilirliği:

Bu çalışma sırasında üretilen veya analiz edilen tüm veriler, bu yayımlanmış makalede ve Ek Materyal'de yer almaktadır. Bu çalışmanın bulgularını destekleyen ham veri setleri, Ek Tablo 1'de sunulmaktadır.

Ek Tablo 1. Bu çalışmada sunulan nicel analizleri destekleyen ham veri setleri. Çalışma kitabı, davranışsal değerlendirmeler, T2 ağırlıklı görüntüleme (T2WI) enfarkt hacim analizi, difüzyon tensör görüntüleme (DTI) metrikleri, Luxol Fast Blue (LFB) boyama niceliği ve tüm deneysel gruplar için H-refleks elektrofizyolojik ölçümler için kullanılan ham deneysel verileri içerir. Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

Geleneksel Çin tıbbı açısından PSS, kas-tendon bozuklukları kategorisine girer; temel patogenezi ise temel neden olarak beyin yaralanması, yüzeysel olarak ise uzuv spastisitesi olarak^{tanımlanır. 20}. Bu nedenle terapötik stratejiler hem birincil beyin lezyonu hem de ikincil periferik belirtileri ele^{almalıdır 21}. MSSA'nın temel gerekçesi, iskemik beyinden spastik uzuvlara bütünsel düzenlemeyi vurgular; terapötik amaçlarla kan dolaşımını artırmak, meridyenleri açmak, tendonları gevşetmek ve spastisiteyi hafifletmektir. İğneleme tekniği, akupunktur etkinliğinin merkezindedir ve hastalık desenine uygun bir teknik seçmek, olumlu klinik sonuçlar elde etmek için kritiktir. MSSA, iğne tutma sırasında aktif veya pasif uzuv hareketiyle saç derisi akupunkturunu birleştiren PSS için karakteristik bir saç derisi akupunktur^{modalitesidir 3}. Son zamanlarda yapılan sistematik bir inceleme ve meta-analiz, MSSA'nın PSS hastalarında kas spastisitesini azaltmada, motor fonksiyonu iyileştirmede ve günlük yaşam aktivitelerini artırmada geleneksel saç derisi akupunkturu veya egzersiz rehabilitasyonuna kıyasla üstün etkiler^{sağladığını göstermiştir9}. Özellikle, MSSA'da uygulanan saç derisi akupunkturu ve egzersiz rehabilitasyonunun eşzamanlı uygulanması, orta kaliteli klinik kanıtlarla desteklenen asenkron müdahaleden daha iyi sonuçlar^{vermektedir 9}. MS 6, GB/T 21709.2-2021'de tanımlandığı şekliyle, anatomik önemi ve kanıtlanmış klinik faydası nedeniyle seçilen ön parietotemporal eğik saç derisi akupunktur^{hattıdır 9}. Birincil ve ikincil motor kortekslerin üzerinde yer alır; bu kortikolojiler, beyin sapı retiküler çıkışını şekillendiren ve omurga refleks uyarılabilirliğini modüle eden iniş kortikofügal projeksiyonlarının başlıca kaynaklarıdır. Klinik olarak, MS 6, PSS için en yaygın kullanılan saç derisi akupunktur hattı olup, yukarıda bahsedilen meta-analizle doğrulanmıştır ve bu çalışmada motor yolların modülasyonu için en uygun hedef haline gelmektedir. Bu bulgular, PSS yönetiminde MSSA'nın ayırt edici prosedürel özelliklerini ve potansiyel klinik avantajlarını ortaya koymaktadır. Preklinik çalışmalar ayrıca MSSA'nın iskemik penumbrada beyin perfüzyonu iyileştirdiğini ve omurga ön boynuzu motonöronlarının uyarılabilirliğini modüle ettiğini, bunun terapötik uygulaması için ön mekanik destek^{sağladığını göstermiştir 10,11}.

Modern nörolojik teoride, PSS'nin patogenezi öncelikle üç birbirine bağlı patolojik sürece bağlanır: supraspinal iniş inhibisyonunun bozulması, anormal intraspinal sinyal işleme ve değişen içsel kas özellikleri. Bunlar arasında, supraspinal iniş yollarının omurga refleks uyarılabilirliğini nasıl düzenlediği mekanizmalar tam olarak anlaşılmamıştır². Retikulspinal trakt (RST), esneklik refleks arkının dengesini korumada önemli bir rol oynar. Lateral RST, karşı taraf premotor korteks ve ek motor alandan kortiko-retiküler yol üzerinden uyarıcı girdi alır, omuriliğin dorsolateral funikülüsü içinde iner ve omurga gerilme refleks aktivitesi üzerinde inhibitör kontrol uygular. Buna karşılık, medial RST kontralateral korteks tarafından düzenlenmez, ventromedial funikulus içinde iner ve esneme refleks aktivitesini kolaylaştırır. Kortikal inme, kortiko-retiküler yolu bozar, medullar retiküler oluşuma eksitatif girdiyi azaltır ve medial RST aktivitesinin baskınlığına yol açar. Bu dengesizlik, omurga esnekliği, refleks aşırı uyarılmaya ve uzuv spastisitesinin klinik göstergesine katkıda bulunur³. Klinik nörogörüntüleme çalışmaları, PSS'yi premotor korteks, putamen, iç kapsülün arka uzvu ve dış kapsülü içeren lezyonlarla ilişkilendirmiştir^12,14,22. Bunlar arasında, dış kapsül, kortikos-retikulospinal yol içinde önemli bir beyaz madde kanalını temsil eder; bu yol, kortikal girdileri, beyin sapı retiküler çekirdeklerindeki sinapsları entegre eden ve omuriliğe projeksiyon yaparak α-motonöronlar ve internöronlar üzerinde iniş inhibitör kontrol uygulayan ana ekstrapiramidal bir trakttır.²³. Bu anatomik çerçeve, dış kapsülü beyin korteksi, bazal ganglionlar ve beyin sapı arasında ana bağlantı olarak tutarlı şekilde belirleyen sinir izleme ve DTI çalışmalarıyla desteklenmektedir^23,24. Özellikle, spaztisite, tek bir traktın işlevsizliğinden ziyade, hem kortikospinal hem de ekstrapiramidal yollar dahil olmak üzere birden fazla iniş motoru sistem arasındaki dengenin bozulmasından kaynaklanan ağ düzeyinde bir bozukluk olarak giderek daha fazla kabul edilmektedir. Bu bağlamda, dış kapsül PSS'ye ekstrapiramidal katkıların incelenmesinde temsil edici bir yapı olarak hizmet verir; çünkü bu kapsül sürekli olarak abartılı omurga refleks aktivitesiyle ilişkilendirilmiştir; izole kortikospinal lezyonlar ise daha yaygın olarak orantılı spastisite olmadan zayıflık üretir. Buna göre, spaztisite şiddetiyle ilişkili beyaz madde mikrostruktural değişikliklerini araştırmak için birincil yatırım getirisi olarak dış kapsülü seçtik. Bu çerçeveye uygun olarak, T2WI sahte operasyonlu grupta belirgin bir beyin enfarktüsü göstermemişken, model grubunda belirgin enfarkt lezyonları gözlemlenmiştir. MSSA tedavisi, Zea Longa ölçeği ile değerlendirildiği üzere nörolojik fonksiyonu önemli ölçüde iyileştirdi ve bu da iskemik beyin hasarına karşı nöroprotektif bir etki göstermektedir. MSSA'nın infarktı koruyucu etkisi birden fazla sinerjik mekanizmayı içerebilir. İlk olarak, MSSA'nın iskemik penumbrada bölgesel beyin perfüzyonu artırdığı gösterilmiştir¹⁰, böylece nöron hayatta kalma için daha elverişli bir mikro ortam yaratır. Ayrıca, MSSA için doğrudan kanıtlar şu anda sınırlı olsa da, saç derisi akupunkturu üzerine yapılan mekanik çalışmalar, MATN2/WNT3a/β-katenin sinyal yolunun aktivasyonu yoluyla anjiyogenezin teşvik edilmesi gibi katkıda bulunabilecek birkaç başka yol da önermiştir²⁵ ve RORγt aracılı Th17 farklılaşmasının bastırılması ve Th17/Treg dengesinin geri kazanılması yoluyla post-iskemik nöroinflamasyonun zayıflatılması²⁶. Bu bulgular, MSSA'nın hemodinamik etkilerinin ötesinde benzer nöroprotektif mekanizmaları devreye sokma olasılığını gündeme getiriyor. Ancak, her yolun göreceli katkısı henüz belirlenmemiş ve daha fazla araştırma gerektirmektedir.

DTI, beyaz madde mikroyapısının hassas nicel değerlendirmesini sağlar; FA, fiber bütünlüğünü yansıtır, RD demyelinasyon belirtisi olarak görev yapar ve AD aksonal^{bütünlüğü yansıtır 23}. Mevcut çalışmada, dış kapsül PSS'deki kortiko-retikulospinal yol ile ilişkili mikrostruktural değişiklikleri değerlendirmek için ROI olarak seçilmiştir. Sahte ameliyatlı grupla karşılaştırıldığında, model farelerde göreceli FA ve RD'de belirgin artışlar görüldü; bu da dış kapsül içinde beyaz madde bütünlüğünün bozulduğuna, beyin ödemine ve demyelinizasyonun göstergesine işaret etti. LFB boyama, beyaz madde demetlerinin belirgin miyelin kaybı ve düzensizliğini göstererek, DTI bulgularına histolojik destek sağladı. Toplamda, nörogörüntüleme ve histolojik bulgular, iskemik yaralanmanın dış kapsülde belirgin mikrostruktural bozulma ile ilişkili olduğunu ve bu kapsül MSSA tedavisinden sonra zayıflamıştır. H-refleks, omurga α-motonöron havuzu uyarılabilirliği ve supraspinal iniş^{düzenlemesi 27'yi} değerlendirmek için iyi kurulmuş bir elektrofizyolojik ölçüttür. H_max/M_max oranı, spinal motonöronların genel uyarılabilirliğini yansıtırken, H-refleks eşiği ise spinal internöronlar tarafından aracılık edilen presinaptik inhibisyonu ve entegre supraspinal iniş^{girdileri 27} yansıtır. İnme kaynaklı kortiko-retikulospinal yolun bozulması, iniş yapan inhibitör düzenlemeyi zayıflatır ve bu da spinal motonöronların hiperuyarılabilirliğine yol açar; bu durum artan H_max/M_maksimum oranı ve azalmış H-refleks^{eşiği 27} ile karakterize edilir. Ön deneylerimiz, MSSA'nın antispastik etkilerinin altında yatan moleküler mekanizmaları inceledi ve bu tedavinin omurga KCC2 ekspresyonunu artırabileceğini ve GABAerjik inhibitör^{fonksiyonu 10'u} geri getirebileceğini gösterdi. Bu omurga moleküler bulgularına dayanarak, bu çalışma abartılı omurga reflekslerinden sorumlu olan üst akış supraspinal mekanizmalarını daha da aydınlatarak, kortiko-retikulospinal yol içindeki dış kapsülün mikrostruktural hasarının belirgin şekilde artan omurga uyarıcılığıyla ilişkili olduğunu göstermektedir. Bu bulgular bir arada ele alındığında, MSSA'nın PSS'li sıçanlarda supraspinal iniş inhibitör yollarının rekonstrüksiyonunu ve spinal refleks hiperuyarılışını teşvik edebileceğini göstermektedir.

Mevcut verilerin kesitsel yapısı göz önüne alındığında, tüm korelasyon analizleri nedensel ilişkilerin kanıtı olarak değil, keşif ve hipotez üreten olarak yorumlanmalıdır. İnfarkt yükü, dış kapsül mikrostruktural bütünlüğü, omurilik refleks uyarıcılığı ve spastisite şiddeti arasındaki ilişkileri incelemek için korelasyon analizleri yapılmıştır. Tüm hayvanlarda, daha büyük enfarkt hacimleri, dış kapsül içinde daha şiddetli DTI kaynaklı mikrostruktural bozulmalarla ilişkilendirilmiştir; bu da primer iskemik hasar ile kortiko-retikulospinal yol boyunca ikincil beyaz madde değişiklikleri arasında bir bağlantı olduğunu göstermektedir. Özellikle, bu genel korelasyonlar öncelikle grup içi bireysel varyasyondan ziyade gruplar arası farklılıklardan kaynaklanıyor gibi görünüyordu; çünkü herhangi bir bireysel grup içinde anlamlı bir korelasyon gözlemlenmedi. Daha yüksek göreli FA (rFA) daha düşük H_max/M_max oranıyla ilişkilendirilirken, daha yüksek göreli RD (rRD) daha düşük H-refleks eşiğiyle ilişkilendirildi ve bu da korunan dış kapsül bütünlüğünün daha etkili ingitör düzenleyici düzenlemeyle ilişkili olduğu fikriyle uyumludur. Ayrıca, daha yüksek H_max/M_max oranları ve daha düşük H-refleks eşikleri, elektrofizyolojik değişiklikler ile spastisite şiddeti arasındaki ilişkiyi destekleyecek kadar yüksek MAS puanlarıyla ilişkilendirilmiştir. Alt grup analizleri genel korelasyon kalıplarının ağırlıklı olarak gruplar arası farklılıklara atfedildiğini ortaya koydu. Özellikle, H-refleks eşiği ile MAS skoru arasında anlamlı negatif bir korelasyon yalnızca model grubunda gözlemlenmiş, bu da presinaptik inhibisyonun tedavi edilmemiş patolojik koşullarda daha fazla spaztiklikle ilişkili olabileceğini göstermektedir.

Birkaç sınırlama kabul edilmelidir. Birincisi, sadece akupunktur ve sadece egzersiz yapan kontrol gruplarının olmaması, onların bağımsız ve sinerjik katkılarının incelenmesini engeller. Bu karşılaştırma gruplarını içeren gelecekteki çalışmalar, birleşik müdahalenin altında yatan mekanizmaları netleştirmeye yardımcı olacaktır. İkinci olarak, gözlem süresi kalıcı MCAO modelindeki zirve spastisite penceresi temelinde seçilen akut faza (ameliyat sonrası 0–10 günler) ile sınırlıydı. MSSA'nın akut evrenin ötesinde sürdürülebilir terapötik faydalar sağlayıp sağlamadığı bilinmemektedir ve kronik PSS modellerinde doğrulama, uzun vadeli translasyon potansiyelini belirlemek için önemli olacaktır. Üçüncüsü, MAS kas tonunu değerlendirmek için yaygın olarak kullanılsa da, doğası gereği öznel ve yarı niceldir. Bu sınırlamayı tamamlamak için, H-refleksi aynı anda omurilik reflekslerinin uyarılabilirliğinin objektif bir elektrofizyolojik ölçütü olarak değerlendirildi. Dördüncü olarak, çok modlu değerlendirmelerle ilgili teknik gereksinimler nedeniyle örneklem büyüklüğü mütevazıydı ve daha fazla hayvan içeren çalışmalar istatistiksel gücü ve bulguların sağlamlığını artıracaktı. Son olarak, tüm son noktalar sadece ameliyat sonrası 10. günde değerlendirildi. Gelecekteki çalışmalar, birden fazla zaman noktasında uzunlamasına değerlendirmeleri içerecek, MSSA kaynaklı nöroplastik değişikliklerin zamansal yörüngesini daha kapsamlı bir şekilde anlama sağlayacaktır.

Gelecekteki çalışmalar, MSSA müdahalesi sonrası nörogenez ve remiyelinleşme mekanizmalarını inceleyebilir. DTI doğrudan nöronal yenilenmeyi görselleştiremediğinden, sinir izleme ve immünohistokimya gibi tamamlayıcı yaklaşımlar nöronal plastisite ve remiyelinasyonu daha da karakterize edebilir. Translasyonel açıdan, dış kapsülün DTI metrikleri, özellikle FA ve RD, inme hastalarını kortiko-retikulospinal yol yaralanmasının şiddetine göre sınıflandırmaya ve MSSA'dan en çok fayda sağlama olasılığını belirleyebilmektedir. Böyle bir biyobelirteç odaklı yaklaşım, gelecekteki klinik çalışmalarda hasta seçimini ve tedavi tabakalaşmasını kolaylaştırabilir, ancak klinik faydası prospektif inme kohortlarında doğrulanmaya devam etmektedir. Sonuç olarak, bu çalışma, T2WI tabanlı enfarkt değerlendirmesi, beyaz madde mikroyapısının DTI değerlendirmesi, H-refleks elektrofizyolojisi ve LFB histolojik analizini içeren entegre bir çerçeve kullanarak PSS için MSSA tedavisiyle ilişkili sinir mekanizmalarını incelemiştir. Bulgular, MSSA'nın azalan beyin infarkt hacmi, dış kapsül mikrostruktural bütünlüğünün korunması ve kortiko-retikulospinal yolun iniş inhibitör regülasyonu ile ilişkili olduğunu göstermektedir. Bu değişiklikler, omurga refleks uyarılışının normalleşmesi ve spastisitenin azalmasıyla birlikte gerçekleşti. Bulgular toplamla, MSSA'nın PSS yönetiminde potansiyel translasyonel uygulamasını destekleyen mekanik içgörüler ve preklinik kanıtlar sunmaktadır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
α-Chloralose	GoldBio	C-118-250	H-refleks kayıtları için anestezik
Absolute Ethanol	Beijing Tong Guang Fine Chemicals Co., Ltd.	VS104021-500 mL	Histolojik reaktif
Akupunktur İğneleri (0.25 × 13 mm)	Beijing Zhongyan Taihe Acupuncture Needle Co., Ltd.	NA	Kafa derisi akupunkturu için tek kullanımlık steril iğneler
Ampisilin	Beijing Rui Da Heng Hui Technology Development Co., Ltd.	HD-3018-500g	Postoperatif enfeksiyon profilaksisi için antibiyotik
Biyolojik İşlev Deney Sistemi (BL420N)	Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd.	NA	Elektrofizyolojik kayıt sistemi
Difüzyon Tensör Görüntüleme Analiz Yazılımı (ParaVision 360)	Bruker	NA	MRI alımı ve DTI yeniden yapılandırma
Eko-Dostu Mum Alma ve Temizleme Çözeltisi	Servicebio	G1128-500ML	Histolojik reaktif
Tam Otomatik Döner Mikrotom	Leica Microsystems	RM2255	Dokunun kesilmesi
Isıtma Pedi	Suzhou Caiyang Electric Heating Technology Co., Ltd.	TT180×150-1XD	Postoperatif sıcaklık bakımı
ImageJ 6.0	National Institutes of Health	NA	Niteliksel görüntü analizi
Isofluran	Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.	I8000-25g	İnhalasyon anestezisi
ITK-SNAP 4.4.0	Pennsylvania Üniversitesi	NA	Serebral enfarktüs segmentasyonu
Luxol Hızlı Mavi Çözeltisi	Servicebio	G1030-100ML	Miyelin boyama
Monofilament Naylon Dikiş İpliği (0.36 ± 0.02 mm)	Beijing Cinontech Co., Ltd.	NA	MCAO indüksiyonu
Paraformaldehit (PBS içinde %4)	Servicebio	TBAB0102	Dokunun sabitlenmesi
PharmaScan 7.0 T Manyetik Rezonans Tarayıcı	Bruker	NA	MRI alımı
SPSS Statistics 20.0	IBM	NA	İstatistiksel analiz
Sprague–Dawley Sıçanları (SPF, erkek)	Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.	NA	Deney hayvanları
Termostatik Kontrollü Su Banyosu Sistemi	Shanghai Zhixin Experimental Instrument Technology Co., Ltd.	ZX-5A	MRI sırasında sıcaklık bakımı
Kemirgenler için Koşu Bandı	Clever	TreadScan	Uyum ve MSSA sırasında egzersiz eğitimi