Bu protokol, kronik öngörülemeyen hafif stresle tetiklenen depresyonun fare modelinde Modifiye Xiaoyao San'ın değerlendirmesini; nöronal nekroptozun davranışsal, histolojik ve moleküler değerlendirmeleri dahil olmak üzere göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Araştırma makalesi
Modifiye Xiaoyao San, Kronik Öngörülemeyen Hafif Stres Fare Modelinde Depresyon Benzeri Davranışları ve Nöronal Nekroptozu İyileştirmektedir
Bu makalede
Özet
Özet
Nöron kaybı ve hasarı, depresyonun önemli patolojik özellikleri olup nekroptoz, nöronal hücre ölümünün potansiyel bir mekanizması olarak öne sürülmüştür. Gene Expression Omnibus (GEO) veri setlerinin (GSE54565, GSE54566 ve GSE54568) analizi, depresyon ile nekroptoz arasında bir ilişki olduğunu ortaya koymuş ve bu yolağın inhibisyonunun potansiyel bir terapötik strateji olabileceğini göstermiştir. Geleneksel Çin tıbbı Xiaoyao San'ın modifiye edilmiş bir formülasyonu olan Modifiye Xiaoyao San (MXYS); terapötik etkinliği artırmak amacıyla ısıyı temizleyici, kanı soğutucu, bilişi güçlendirici ve canlandırıcı etkili bitkiler eklenerek geliştirilmiştir. Ancak, nöronal nekroptoz üzerindeki etkileri ve beyin dokusuna ulaşan aktif bileşenleri henüz net değildir. Beyin dokusunda tespit edilen MXYS bileşenlerini geçici olarak tanımlamak için yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi ile eşleştirilmiş ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UHPLC-HRMS) kullanılmıştır. Terapötik etkinlik; davranışsal değerlendirmeler, histolojik inceleme, immünofloresan, western blotting ve biyoinformatik analizler kullanılarak kronik öngörülemeyen hafif stres (CUMS) fare depresyon modelinde değerlendirilmiştir. MXYS uygulaması, depresyon benzeri davranışların düzelmesi, patolojik beyin hasarının hafiflemesi ve reseptör etkileşimli protein kinaz 3 (RIPK3) ile karışık soy kinaz alanı benzeri proteinin (MLKL) fosforilasyonunun azalması ile ilişkilendirilmiştir. Bu bulgular, MXYS'nin nöronal nekroptoz belirteçlerinin azalmasıyla ilişkili antidepresan benzeri etkiler gösterdiğini ortaya koymakta ve MXYS'nin depresyon için potansiyel bir terapötik strateji olarak daha ileri araştırmalar için deneysel destek sağlamaktadır.
Giriş
Duygudurum bozuklukları spektrumunda yer alan ciddi bir ruhsal bozukluk olan depresyon, temel olarak kalıcı düşük ruh hali ile karakterize edilir ve birçok faktörden etkilenir1. Klinik olarak, depresyon hastaları yaygın olarak çökkün ruh hali, bilişsel yavaşlama, sözel iletişimin ve fiziksel aktivitenin azalması ve ağır vakalarda kendine zarar verme davranışı ile intihar düşünceleri gibi semptomlar sergilerler2. Yüksek yaygınlığı, tekrarlama oranı, yeti yitimi ve intihar oranları nedeniyle depresyon, dünya çapında yeti yitiminin önde gelen nedenlerinden biridir ve önemli sosyal ve ekonomik yükler getirmektedir3. Dünya Sağlık Örgütü'ne göre, depresyonun 2030 yılına kadar kanser, kardiyovasküler ve serebrovasküler hastalıkları geride bırakarak küresel hastalık yüküne en çok katkıda bulunan neden olacağı öngörülmektedir3. Ayrıca, koronavirüs hastalığı 2019 (COVID-19) pandemisi, majör depresif bozukluğun küresel yaygınlığında %27,6'lık bir artışla ilişkilendirilmiştir4. Çin'de depresyonun yıllık yaygınlığı %3,6 iken yaşam boyu yaygınlığı %6,8'dir5. Depresyonun patogenezi, karmaşık etiyolojisi ve etkileyen çok sayıda faktör nedeniyle henüz tam olarak anlaşılamamıştır. Sonuç olarak, tedavi seçenekleri sınırlı kalmaya devam etmekte ve hastaların yaklaşık %30-40'ı, mevcut antidepresanlara yetersiz yanıt vermeleri nedeniyle tedaviye dirençli depresyon geliştirmektedir6. Ayrıca, mevcut antidepresanlarla ilişkili olan etkinin geç başlaması, rezidüel semptomlar, nörotoksisite ve advers etkiler, terapötik açıdan önemli zorluklar oluşturmaya devam etmektedir7.
Programlı hücre ölümü, uzun süredir biyomedikal araştırmaların ana odak noktalarından biri olmuştur. Artan kanıtlar, depresyonun nekroptoz ile ilişkili olduğunu göstermektedir8,9,10,11. Nekroptoz, apoptoz gibi programlı bir hücre ölümü biçimidir; ancak apoptozdan farklı olarak belirgin immün ve inflamatuar yanıtlar uyandırır12. Kaspaaz-8 aktivitesinin yokluğunda, tümör nekroz faktör-α (TNF-α), tümör nekroz faktör reseptörü 1'e (TNFR1) bağlanır ve bu durum reseptörle etkileşen protein kinaz 1'in (RIPK1) aktivasyonuyla sonuçlanır13. Aktive olan RIPK1, nekrozom kompleksini oluşturmak için reseptörle etkileşen protein kinaz 3 (RIPK3) ile etkileşime girer ve bu kompleksle birlikte ardından karma hat kinaz alanı benzeri proteini (MLKL) aktive eder14. Oligomerizasyonu takiben MLKL, sitoplazmadan plazma membranına transloke olarak organel şişmesine15,16, hücre membranı bütünlüğünün bozulmasına ve hasarla ilişkili moleküler paternler (DAMP'ler) ile TNF-α, interlökin (IL)-1 ve IL-6 gibi inflamatuar mediyatörler dahil olmak üzere hücre içi içeriğin salınmasına neden olarak inflamatuar yanıtları şiddetlendirir17. Nekroptozun; multipl skleroz, depresyon, amyotrofik lateral skleroz, Parkinson hastalığı ve Alzheimer hastalığı dahil olmak üzere çok sayıda inflamatuar ve nörodejeneratif hastalıkta rol oynadığı belirtilmiştir18,19,20. Proteomik analizler, kronik öngörülemeyen hafif stres (CUMS) kaynaklı depresyonun RIPK3 ve MLKL ekspresyonunun artması ve nekroptoz yolağının aktivasyonu ile ilişkili olduğunu göstermiştir2. Bir başka CUMS fare depresyon modelinde fluoksetin, RIPK1 aracılı nekroptozun inhibisyonu ile ilişkili antidepresan benzeri etkiler göstermiştir10. Ayrıca, bir nekroptoz inhibitörü olan Nec-1s'in lipopolisakkarit (LPS) kaynaklı depresyon benzeri davranışları iyileştirdiği gösterilmiştir21. Nöronal hasar depresyonun önemli bir patolojik özelliği olduğundan, nekroptozun hedeflenmesi depresyon tedavisi için gelecek vadeden bir terapötik strateji olabilir.
Geleneksel Çin Tıbbı'nın (TCM) depresyon tedavisinde uzun bir geçmişi vardır. TCM teorisine göre karaciğer, qi'nin serbest akışını yönetir; bu nedenle depresyon, temel olarak karaciğer qi durgunluğuna yol açan duygusal sıkıntılara bağlanır. Buna göre, temel terapötik strateji karaciğeri yatıştırmak ve depresyonu gidermektir. Xiaoyao San (XYS), bu amaçla yaygın olarak kullanılan klasik bir bitkisel reçetedir ve kapsamlı kanıtlar depresyon tedavisindeki uygulamasını desteklemektedir22. Ayrıca, XYS'nin anti-nekroptotik özelliklere sahip olduğu bildirilmiştir23,24. "Karaciğer depresyonunun ateşe dönüşmesi" ve "temiz yang'ın beyne yükselmesi" şeklindeki TCM kavramlarına dayanarak; ısıyı temizlemek ve kanı soğutmak için Moutan Cortex (Mudan Pi) ve Gardeniae Fructus (Zhizi), bilişsel fonksiyonu ve canlanmayı desteklemek için ise Acori Tatarinowii Rhizoma (Shi Changpu) ve Polygalae Radix (Yuan Zhi) eklenerek XYS modifiye edilmiştir. Ortaya çıkan formülasyon Modifiye Xiaoyao San (MXYS) olarak adlandırılmış ve TCM ilkelerine dayanarak artırılmış terapötik etkiler sağlamak amacıyla geliştirilmiştir. Bununla birlikte, bu çalışmada orijinal XYS formülasyonu ile doğrudan bir karşılaştırma yapılmamıştır25. Klinik çalışmalar MXYS'nin antidepresan etkinliğini göstermiştir26,27,28 ve terapötik etkileri hipotalamus-hipofiz-adrenal (HPA) aksının düzenlenmesi ve nöroinflamasyonun inhibisyonu ile ilişkili olabilir29,30,31. Yine de, MXYS'nin azalmış nöronal nekroptoz ile ilişkili olup olmadığı belirsizliğini korumaktadır.
Bu çalışmada, beyin dokusunda saptanan MXYS türevli bileşiklerin geçici olarak tanımlanması için yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi ile eşleştirilmiş ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UHPLC-HRMS) kullanılmıştır. MXYS, depresyon ve nekroptoz arasındaki ilişkileri incelemek için halka açık Gene Expression Omnibus (GEO) veri setleri ile ağırlıklı gen eş-ekspresyon ağ analizi (WGCNA), diferansiyel ekspresyon analizi ve zenginleştirme analizi dahil olmak üzere biyoinformatik analizlerden yararlanılmıştır. Bu bulgulara dayanarak, MXYS'nin azalmış nöronal nekroptoz belirteçleri ile ilişkili antidepresan benzeri etkiler gösterebileceği ve aktive edici transkripsiyon faktörü 4 (ATF4)/cAMP yanıt elementi bağlayıcı protein (CREB)/beyin türevli nörotrofik faktör (BDNF) yolunun potansiyel bir korelatif mekanizma olduğu hipotezi kurulmuştur. Bu hipotezi değerlendirmek amacıyla, beyin dokusunda saptanan bileşikler UHPLC-HRMS kullanılarak geçici olarak tanımlanmış, potansiyel terapötik hedeflerin belirlenmesi için biyoinformatik analizler gerçekleştirilmiş ve MXYS tedavisinin nekroptoz belirteçleri ile ATF4/CREB/BDNF yolundaki değişikliklerle ilişkili olup olmadığını incelemek için in vivo deneyler yürütülmüştür. Bu bulgular, orijinal XYS formülasyonu ile karşılaştırmalı çalışmaların ve doz-yanıt doğrulamasının gerekliliği kabul edilmekle birlikte, MXYS'nin depresyondaki potansiyel terapötik uygulamalarını destekleyen ön kanıtlar sunmaktadır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan deneyleri, Henan Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (onay no. DWLLGZR202200023). Tüm prosedürler, hayvan refahına yönelik kurumsal ve ulusal kılavuzlar doğrultusunda yürütülmüş ve ARRIVE kılavuzlarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Erkek Sprague–Dawley (SD) sıçanlar, lisanslı bir laboratuvar hayvanı tedarikçisinden temin edilmiştir. Hayvanlar; kontrollü sıcaklık ve nem koşulları altında, 12 saatlik ışık/karanlık döngüsüyle barındırılmış; standart yem ve suya ad libitum olarak erişimleri sağlanmıştır.
MXYS'nin Beyin Dokusu İçeren Bileşenlerinin Tanımlanması
Liyofilize MXYS Tozunun Hazırlanması:
MXYS'nin 11 bitkisi 10 hacim saf suda 2 saat boyunca bekletilmiş ve ardından 40 dakika boyunca kaynatılmıştır. Nane, dekoksiyonun son 5 dakikasında eklenmiştir. 8 hacim saf su kullanılarak aynı yöntemle ikinci bir dekoksiyon hazırlanmıştır. İki dekoksiyon birleştirilmiş, gazlı bezle süzülmüş, indirgenmiş basınç altında 1 g/mL (ham ilaç eşdeğeri) konsantrasyona kadar yoğunlaştırılmış ve liyofilize MXYS tozu elde etmek için vakum altında 48 saat boyunca dondurularak kurutulmuştur. Ekstraksiyon verimi %21,7 (a/a)25,29,31 olarak belirlenmiştir.
Hayvanlar ve MXYS Uygulaması:
On iki erkek SD sıçan rastgele iki gruba ayrıldı ve günde iki kez oral gavage yoluyla ya MXYS ya da saflaştırılmış su verildi. Günlük iki uygulama sabah 08:00 ve akşam 20:00'de (12 saatlik aralıkla) gerçekleştirildi. MXYS tozu saflaştırılmış suda çözüldü ve 24.4 g/kg dozunda (sıçanlar için klinik dozun yaklaşık iki katı) uygulandı25. Kontrol grubu eşdeğer hacimde (10 mL/kg) saflaştırılmış su aldı.
MXYS İçeren Beyin Dokusunun Hazırlanması:
14 gün sonra, tüm sıçanlar son MXYS uygulamasından 2 saat sonra sodyum pentobarbital (40 mg/kg, intraperitonal) ile anestezi altına alındı. Normal salin ile transkardiyak perfüzyonun ardından beyin dokuları toplandı. Boş beyin dokusu ve MXYS ile işlem görmüş beyin dokusu örnekleri elde etmek için tüm beyinler hemen çıkarıldı ve buza yerleştirildi.
Kromatografik/Kütle Spektrometrisi Koşulları ve Veritabanı:
Liyofilize MXYS tozu, MXYS tozu ile zenginleştirilmiş boş beyin dokusu, boş beyin dokusu ve MXYS içeren beyin dokusu ekstraktları, 35°C'de tutulan bir HSS-T3 kolonu (100 × 2.1 mm, 1.8 μm) ile donatılmış bir ultra-yüksek performanslı sıvı kromatografi sistemi kullanılarak analiz edilmiştir. Mobil fazlar, %0.1 formik asit içeren su (mobil faz A) ve %0.1 formik asit içeren asetonitrilden (mobil faz B) oluşmaktadır. Örnekler; 1 dk boyunca %5 B, 16 dk içinde %98 B'ye yükselen, 0.5 dk içinde %5 B'ye geri dönen ve 2.5 dk boyunca %5 B'de tutulan bir gradyan kullanılarak 0.3 mL/min akış hızında ayrılmıştır.
Kütle spektrumları, 90–1,300 m/z aralığında veri bağımlı kazanım kullanılarak hem pozitif hem de negatif elektrospray iyonizasyon modlarında elde edilmiştir. MS/MS spektrumları, en yoğun 10 öncül iyondan 20, 40 ve 60 eV'luk kademeli yüksek enerjili çarpışmalı ayrışma çarpışma enerjileri kullanılarak üretilmiştir. Kapiler sıcaklığı 320°C'de tutulmuş ve prob ısıtıcı sıcaklığı 350°C'ye ayarlanmıştır.
Bileşik anotasyonu; hassas kütle, izotopik dağılım ve MS/MS spektrumlarının kurum içi bir geleneksel Çin tıbbı veri tabanı ile halka açık GNPS32, ReSpect33 ve MassBank34 veri tabanlarıyla eşleştirilmesi yoluyla gerçekleştirilmiştir. Güvenilir MS/MS eşleşmesine ve tutarlı kromatografik pik şekillerine sahip olan bileşikler tutulmuştur. Geçici olarak tanımlanan bileşiklerin tam listesi Ek Tablo 1'de sunulmuştur.
Biyoenformatik
GEO Veritabanından Veri Seti Seçimi ve Ön İşleme:
Nekroptozun depresyon patolojisindeki potansiyel rolü, GEO veritabanında “depression” anahtar kelimesi kullanılarak yapılan bir araştırma ile incelenmiştir. Seçim kriterlerine dayanarak, ileri analizler için üç veri seti (GSE54566, GSE54565 ve GSE54568) belirlenmiştir. Veri setleri farklı beyin bölgelerinden elde edilmiştir: GSE54565 (anterior singulat korteks), GSE54566 (amigdala) ve GSE54568 (dorsolateral prefrontal korteks, BA9). Tüm veri setleri Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0 Array platformu (GPL570) kullanılarak oluşturulmuş olup, majör depresif bozukluğu (MDD) olan hastaların ve psikiyatrik olmayan kontrollerin postmortem beyin doku örneklerinden oluşmaktadır. Her bir veri seti için detaylı örnek özellikleri Ek Tablo 2'de özetlenmiştir. Bu veri setleri, depresyonda rol oynayan üç beyin bölgesinden alınan transkriptomik verileri içermektedir. Her bir veri seti için MDD ve kontrol grupları arasında diferansiyel gen ekspresyon analizi gerçekleştirilmiş ve tutarlı şekilde artmış (upregulated) ve azalmış (downregulated) genler Robust Rank Aggregation (RRA) R paketi kullanılarak entegre edilmiştir.
Tüm veri setleri, arka plan düzeltmesi ve normalizasyon için robust multi-array average (RMA) algoritması kullanılarak ön işleme tabi tutulmuştur. RMA normalizasyonunun ardından, veri setleri arasındaki parti etkilerini düzeltmek amacıyla sva R paketinde uygulanan ComBat algoritması kullanılmış ve veri seti kaynağı parti kovaryatı olarak değerlendirilmiştir. Bu işlem, veri setleri arasındaki teknik varyasyonu azaltmış ve sonraki analizler için karşılaştırılabilirliği artırmıştır.
Biyoenformatik analizler R yazılımı (versiyon 4.2.1) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Kullanılan temel R paketleri arasında Gen Ontolojisi (GO) ve Kyoto Gen ve Genom Ansiklopedisi (KEGG) zenginleştirme analizleri için ClusterProfiler (versiyon 4.8.2), ağırlıklı gen eş-ekspresyon ağ analizi için WGCNA (versiyon 1.72), diferansiyel gen entegrasyonu için RRA ve ComBat grup düzeltmesi için sva (versiyon 3.48.0) yer almıştır. Analitik iş akışı; veri edinimi, RMA normalizasyonu, ComBat grup düzeltmesi, RRA entegrasyonu ile diferansiyel ekspresyon analizi, WGCNA modül oluşturma, yanlış keşif oranı (FDR) < 0.05 olacak şekilde GO ve KEGG zenginleştirme analizleri ile protein-protein etkileşim (PPI) ağ analizi ile hedef öngörüsünden oluşmuştur.
Depresyon ve Nekroptoz ile Anlamlı İlişkisi Olan Modüllerin Belirlenmesi ve Ko-Ekspresyon Gen Ağlarının Kurulması için WGCNA Kullanımı:
WGCNA, ölçeksiz bir topolojiye yaklaşmak için yumuşak eşikleme gücü (β değeri) uygulayarak ağırlıklı gen ko-ekspresyon ağları kurar. β değeri, log(k) ile log(p(k)) arasındaki korelasyon katsayısı en az 0.9'a ulaştığında seçilmiştir. β değeri seçildikten sonra, dinamik ağaç kesme yöntemi kullanılarak gen modülleri tanımlanmıştır. Ek parametreler şu şekilde ayarlanmıştır: minModuleSize = 30, cutHeight = 0.25 ve deepSplit = 2. β değeri, log(k) ile log(p(k)) arasındaki korelasyon katsayısı en az 0.9'a ulaştığında seçilmiştir. Ağ kurulumu için β = 7 yumuşak eşikleme gücü kullanılmıştır. Gen ekspresyon modellerini özetlemek ve biyolojik özelliklerle olan ilişkileri değerlendirmek için her modül için Modül Eigengeni (ME) hesaplanmıştır. Ardından Gen Anlamlılığı (GS) ve Modül Üyeliği (MM) hesaplanmış ve modül-özellik ilişkileri korelasyon katsayısı (cor) ve ilgili p-değeri kullanılarak değerlendirilmiştir. Daha yüksek korelasyon katsayıları ve daha düşük p-değerleri, gen modülleri ile biyolojik özellikler arasında daha güçlü ilişkiler olduğunu göstermiştir.
Fonksiyonel Zenginleştirme Analizi ve PPI Ağının Oluşturulması:
KEGG yolak zenginleştirme analizini gerçekleştirmek için ClusterProfiler kullanılmıştır. Çoklu test düzeltmesi için Benjamini–Hochberg FDR yöntemi uygulanmış ve düzeltilmiş p-değeri (FDR) < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir. Hedef modül belirlendikten sonra, modül içindeki kilit genler MXYS ve nekroptoz ile ilişkili genlerle kesiştirilmiştir. Ardından, STRING veri tabanı kullanılarak bir PPI ağı oluşturulmuştur.
Beyin Dokusunda Saptanan Bileşikler için Hedef Tahmini:
MXYS uygulamasının ardından sıçan beyin dokusunda ön tanımlama yapılan 143 bileşik, hedef tahmini için kullanılmıştır. Her bir bileşik için potansiyel hedefler, GeneCards veri tabanındaki Related Targets fonksiyonu kullanılarak ilgili skor değeri > 5 olacak şekilde getirilmiştir. Tekrarlayan hedefler birleştirilmiş ve yalnızca resmi gen sembollerine sahip insan genleri tutularak toplam 3.164 benzersiz hedef elde edilmiştir. Bu hedeflere, FDR < 0.05 değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edilerek ClusterProfiler R paketi ile GO ve KEGG zenginleştirme analizleri uygulanmıştır. Arka plan gen seti, KEGG veri tabanında açıklanmış tüm insan protein kodlayan genlerini kapsamıştır.
Deneysel Doğrulama
Hücre Kültürü:
HT-22 hücreleri Procell Life Science & Technology Co., Ltd.'den temin edildi (CL-0697, RRID: CVCL_0321) ve %10 fetal bovine serum (FBS) ve 100 U/mL penisilin/streptomisin ile desteklenmiş büyüme ortamında kültüre edildi. Hücreler, %5 CO₂ içeren nemlendirilmiş bir inkübatörde 37°C'de korundu.
MXYS'nin Anti-Nekroptoz Aktivitesi:
Dondurularak kurutulmuş MXYS tozu, hücre büyüme ortamında 1,0 g/mL konsantrasyona getirilmiş, 0,22 μm membran filtreden geçirilerek sterilize edilmiş ve kullanıma kadar −20°C'de saklanmıştır. HT-22 hücreleri, grup başına üç kuyucuk olacak şekilde, 96 kuyucuklu plakalara kuyucuk başına 8.000 hücre yoğunluğunda ekilmiştir. MXYS, büyüme ortamında 2, 4 ve 6 mg/mL nihai konsantrasyonlara seyreltilmiştir. 12 saatlik inkübasyonun ardından hücreler 30 dakika boyunca SM-164 hidroklorür (10 nM) ve kaspaz inhibitörü z-VAD-fmk (20 μM) ile işleme tabi tutulmuş, ardından 12 saat boyunca insan tümör nekroz faktörü-α (h-TNF-α; 20 ng/mL) ile stimüle edilmiştir. Hücre canlılığı, üretici talimatlarına uygun olarak lüminesan hücre canlılığı testi kullanılarak değerlendirilmiştir. Lüminesans, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak ölçülmüştür. Hücre morfolojisi ters mikroskop altında incelenmiş ve analiz için temsili görüntüler elde edilmiştir.
Hayvanlar:
Hayvan deneyleri, Henan Üniversitesi Çin Tıbbı Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (onay no. DWLLGZR202200023). Tüm prosedürler, hayvan refahına ilişkin kurumsal ve ulusal kılavuzlara uygun olarak yürütülmüş ve ARRIVE kılavuzlarına uyulmuştur. CUMS modelinin oluşturulması için sadece 6–8 haftalık erkek BALB/c fareler kullanılmıştır. Hayvanlar, kontrollü sıcaklık ve nem altında, 12 saatlik ışık/karanlık döngüsünde barındırılmış; standart yem ve suya ad libitum olarak erişimleri sağlanmıştır.
CUMS Kaynaklı Depresyon Modeli:
Fareler rastgele bir kontrol grubuna veya bir CUMS grubuna ayrıldı. Bir haftalık alışma sürecinin ardından, CUMS grubundaki fareler aralıklı ve öngörülemeyen hafif stresörlere maruz bırakılırken, kontrol grubu fareleri rahatsız edilmedi. Stres paradigması; kafesin eğilmesi, kafesin sallanması, kafes değişimi, ıslak altlık, su kısıtlaması, stroboskopik aydınlatma, gürültüye maruz kalma, sürekli ışık, sürekli karanlık, aralıklı aydınlatma, soğuk suda yüzme (4°C), sıcak suda yüzme (40°C), kısıtlama stresi ve diğer hafif stresörler dahil olmak üzere 13 farklı stresörden oluşmaktaydı. Öngörülemezliği korumak amacıyla her stresör, randomize edilmiş bir sıra ile her seansta 2–6 h boyunca uygulandı. Fareler, randomize edilmiş bir programa göre her gün bir veya iki farklı stresöre maruz bırakıldı.
Gruplar ve İlaç Uygulaması:
Altı haftalık CUMS maruziyetinin ardından fareler rastgele CUMS, MXYS, paroksetin veya Nec-1 tedavi gruplarına atandı. MXYS grubu, 35,2 g/kg/gün dozunda dondurularak kurutulmuş MXYS tozunu oral gavaj yoluyla aldı. Paroksetin grubu oral gavaj ile paroksetin (20 mg/kg), Nec-1 grubu ise dört hafta boyunca ardışık olarak intraperitonal enjeksiyon ile Nec-1 (10 mg/kg) aldı. Aynı süre boyunca, kontrol ve CUMS grupları oral gavaj ile eşdeğer hacimde normal salin aldı.
Davranışsal Deneyler:
Fareler, ilaç uygulaması başlamadan önce bilgisayar tarafından oluşturulan rastgele bir sayı dizisi kullanılarak deney gruplarına rastgele atanmıştır. Randomizasyon dizisi, sonraki deneylerde veya veri analizinde yer almayan bağımsız bir araştırmacı tarafından oluşturulmuştur.
Davranışsal testler, tedavi gruplarına karşı körleme uygulanmış bir araştırmacı tarafından yürütülmüştür. Sübjektif yanlılığı en aza indirmek amacıyla, aynı araştırmacı otomatik takip yazılımı kullanarak video tabanlı davranışsal puanlama (hareketsizlik süresi, katedilen mesafe ve merkezde geçirilen süre) gerçekleştirmiştir. Körleme uygulanan araştırmacı, tüm davranışsal veriler toplanıp kaydedilene kadar grup tahsis kodlarına erişememiştir.
İmmünofloresan analizleri, deney gruplarına dair bilgisi olmayan ayrı bir araştırmacı tarafından gerçekleştirilmiştir. Örnekler kodlanmış tanımlayıcılar kullanılarak etiketlenmiş ve grup dağılımı ancak densitometrik veya floresan yoğunluk ölçümleri tamamlandıktan sonra açıklanmıştır. İstatistiki analizler, tüm nicel veriler derlenene kadar hem grup dağılımına hem de ilgili deneysel sonuçlara dair bilgisi olmayan üçüncü bir araştırmacı tarafından yürütülmüştür.
Sükroz Tercih Testi (STT): Davranışsal testler, son ilaç uygulamasından sonra gerçekleştirilmiştir. Test öncesinde fareler, önce 12 saat boyunca %1'lik sukroz çözeltisi içeren iki şişe, ardından ek 12 saat boyunca %1'lik sukroz çözeltisi içeren bir şişe ve içme suyu içeren bir şişe sağlanarak %1'lik sukroz çözeltisine alıştırılmıştır. Fareler, ardından resmi testten önce 12 saat boyunca yiyecek ve sudan yoksun bırakılmıştır. Test sırasında her fareye %1'lik sukroz çözeltisi içeren bir şişe ve içme suyu içeren bir şişe sağlanmıştır. 12 saat sonra, her şişeden tüketilen hacim ölçülmüştür. Sukroz tercihi şu şekilde hesaplanmıştır:
Kuyruk Süspansiyon Testi (KST): Her bir farenin kuyruğu, yapışkan bant kullanılarak test düzeneğinin üst kısmına sabitlendi. Fare davranışı, davranışsal video kayıt ve analiz yazılımı kullanılarak 6 dakika boyunca kaydedildi. Testin son 4 dakikasındaki hareketsizlik süresi nicelendirildi.
Açık Alan Testi (OFT): Her fare, açık alan düzeneğinin merkezine tek tek yerleştirilmiştir. Lokomotor mesafe ve hareket aktivitesi dahil olmak üzere davranışsal aktiviteler, davranış takip yazılımı kullanılarak 5 dk boyunca kaydedilmiş ve analiz edilmiştir. Her testten sonra düzenek %75 etanol ile temizlenmiştir.
Numune Toplama:
CUMS prosedürü sırasında ölen veya ciddi hastalık belirtileri (örneğin, >20% vücut ağırlığı kaybı, görünür enfeksiyon veya hareket edememe) gösteren fareler çalışmaya dahil edilmemiştir. Ötanazi, sertifikalı personel tarafından sodyum pentobarbital doz aşımıyla (150 mg/kg, intraperitonal olarak) gerçekleştirilmiştir. Bilinç kaybının ardından, ölümün gerçekleştiğinden emin olmak için ikincil bir yöntem olarak servikal dislokasyon uygulanmıştır. Nissl boyama ve immünofloresans analizleri için her gruptan rastgele üç fare seçilmiştir. Western blot analizi için kullanılacak hipokampal dokular, buz üzerinde hemen disseke edilmiş ve sıvı azot içerisinde şok dondurulmuştur.
Nissl Boyama:
Nissl boyama ve immünofloresan analizleri için fareler, sodyum pentobarbital (150 mg/kg, intraperitonal) ile derin anesteziye alınmış ve transkardiyal perfüzyon yapılmadan giyotinle kafa kesimi (dekapitasyon) uygulanmıştır. Beyinler hızla çıkarılmış ve parafin gömme işleminden önce 24–48 saat boyunca %4'lük paraformaldehitte fikse edilmiştir. Parafin kesitler şu kalınlıkta kesilmiştir: 3 μmParafin kesitler, akan su ile durulanmadan önce sırasıyla dewaxing çözeltisi, mutlak etanol ve %75'lik etanol içinde inkübe edilerek deparafinize edildi. Uygulanabilir olduğunda, dondurulmuş kesitler oda sıcaklığına getirildi, doku fissatörü ile 15 dakika fikse edildi ve akan su ile durulandı. Doku kesitleri, Nissl boyama çözeltisi ile 2–5 dakika boyandı, su ile durulandı, %0,1'lik buzlu asetik asit ile farklılaştırıldı, reaksiyonu sonlandırmak için yıkandı, farklılaştırmayı kontrol etmek amacıyla mikroskop altında izlendi, kurutuldu, 10 dakika boyunca ksilen ile şeffaflaştırıldı ve nötr montaj medyumu ile kapatıldı.
İmmünofloresan:
İmmünofloresan prosedürleri standart yöntemler kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Beyin dokusu %4 paraformaldehit ile fikse edilmiş ve immünofloresan boyama için parafine gömülmüştür. Doku kesitleri; NeuN (1:200), MLKL (1:300), ATF4 (1:5000) ve CREB (1:1000) karşıtı primer antikorlar ile 4°C'de gece boyunca inkübe edilmiştir. Primer antikorlarla inkübasyonu takiben kesitler dört kez PBS ile yıkanmış ve ilgili floresan sekonder antikorlar ile karanlıkta 1 sa boyunca inkübe edilmiştir: fare anti-ATF4 için CY3-konjuge keçi anti-fare IgG (1:300, Servicebio, GB21301); fare anti-MLKL için Alexa Fluor 488-konjuge keçi anti-fare IgG (1:400, Servicebio, GB25301); tavşan anti-NeuN için CY3-konjuge keçi anti-tavşan IgG (1:300, Servicebio, GB21303) ve tavşan anti-CREB için Alexa Fluor 488-konjuge keçi anti-tavşan IgG (1:400, Servicebio, GB25303). Kesitler daha sonra oda sıcaklığında 10 dk boyunca DAPI ile boyanmış, PBS ile yıkanmış, antifade montaj medyumu ile kapatılmış ve floresan görüntüleri konfokal mikroskopi kullanılarak elde edilmiştir.
Western Blot:
Beyin dokuları, radyoimmünopresipitasyon analiz (RIPA) liz tamponunda homojenize edildi. Protein konsantrasyonları belirlendi ve her şeride 20 μg toplam protein gelecek şekilde, poliviniliden florür (PVDF) membranlara aktarılmadan önce %10 sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile ayrıştırıldı. Bloklama işleminden sonra membranlar, primer antikorlar (1:1000) ile 4°C'de gece boyu inkübe edildi ve ardından 1 saat boyunca yaban turpu peroksidaz (HRP)-konjuge sekonder antikorlar ile inkübe edildi. Protein bantları, bir kemilüminesans görüntüleme sistemi kullanılarak görselleştirildi ve bant yoğunlukları ImageJ yazılımı kullanılarak nicelleştirildi. Hipokampal dokuların western blot analizi için grup başına iki fare analiz edildi ve temsili immünoblotlar gösterildi. HT-22 hücre deneyleri için western blot analizi, temsili bir deney olarak bir kez gerçekleştirildi. Bu veriler, istatistiksel olarak nicelleştirilmiş bulgulardan ziyade kalitatif trend gözlemleri olarak sunulmuştur.
İstatistiksel Analiz:
Gruplar arasındaki farklar, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve ardından Tukey çoklu karşılaştırma testi kullanılarak analiz edilmiştir. Veriler, ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunulmuştur. p değerinin < 0.05 olması istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir.
Veri Kullanılabilirliği:
Bu çalışma sırasında oluşturulan ve analiz edilen veri setleri, yayınlanan bu makaleye ve ek materyallerine dahildir. UHPLC-HRMS bileşik tanımlama sonuçları Ek Tablo 1'de sunulmuş ve biyoinformatik analizler için kullanılan GEO veri setlerinin özellikleri Ek Tablo 2'de özetlenmiştir. GFAP immünofloresansı (Ek Şekil 1), p-RIPK3 ve p-MLKL'nin immünofloresan boyaması (Ek Şekil 2), deneysel tasarım ve hayvan tahsis zaman çizelgesi (Ek Şekil 3) ile kırpılmamış orijinal western blot görüntülerini (Ek Şekil 4) içeren ek destekleyici veriler, ek materyallerde mevcuttur.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
WGCNA, Nekroptozis Yolağında Zenginleşmiş Depresyonla İlişkili Bir Gen Modülünü Belirler
GSE54566, GSE54565 ve GSE54568 veri setleri genelinde tutarlı bir şekilde artmış ve azalmış diferansiyel eksprese genleri entegre etmek için RRA paketi kullanılmış ve sonuç olarak 2.513 gen tanımlanmıştır. Bu genlerin ısı haritası Şekil 1A'da gösterilmiştir. Üç veri seti; anterior singulat korteks, amigdala ve dorsolateral prefrontal korteks olmak üzere farklı beyin bölgelerinden tür...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Anormal nöronal ölüm, depresyonun patogenezinde kritik bir rol oynar8. Programlanmış bir hücre ölümü formu olan nekroptoz kapsamlı bir şekilde araştırılmış ve bu yolu hedefleyen inhibitörlerin geliştirilmesinde önemli ilerlemelere yol açmıştır39. 2005 yılında nekroptoz inhibitörü Nec-1'in tanımlanmasından bu yana40, nekroptotik sinyal yolunun temel bileşenlerini hedefleyen bileşiklerin geliştirilmesinde önemli ilerlemeler kaydedilmiştir. Nec-1'in nör...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar Çatışmaları:
Yazarlar beyan edecek herhangi bir husus olmadığını belirtmişlerdir.
Teşekkürler
Bu çalışma; Çin Henan Yükseköğretim Kurumları Temel Bilimsel Araştırma Projesi (No. 26A360008), Henan Eyaleti Geleneksel Çin Tıbbı Bilimsel Araştırma Projesi (No. 2025ZY3152), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 82274496), Henan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Araştırma Projesi (No. 232301420018) ve Ulusal Geleneksel Çin Tıbbı İdaresi Bilim ve Teknoloji Departmanı Zhang Zhongjing Miras ve İnovasyon Projesi (No. GZY-KJS-2022-044-1) tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Acori Tatarinowii Rhizoma (Acorus tatarinowii Schott; Shi Changpu) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | 231001 | Bitkisel bileşen (12 g) |
| Yapışkan bant | Uygulanamaz | Uygulanamaz | Kuyruk asma testi |
| Angelicae Sinensis Radix (Angelica sinensis (Oliv.) Diels; Dang Gui) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | G01230507-16 | Bitkisel bileşen (10 g) |
| Anti-ATF4 antikoru (immunofloresans) | Servicebio | GB111137 | Primer antikor |
| Anti-ATF4 antikoru (western blot) | MedChemExpress | HY-P80486 | Primer antikor |
| Anti-BDNF antikoru | MedChemExpress | HY-P80567 | Western blot için primer antikor |
| Anti-CREB antikoru | Beyotime | AF1018 | Western blot ve immunofloresans için primer antikor |
| Anti-GAPDH antikoru | Abcam | ab181602 | Yükleme kontrolü |
| Anti-MLKL antikoru | Proteintech | 66675-1-Ig | Western blot ve immunofloresans için primer antikor |
| Anti-NeuN antikoru | Servicebio | GB11138 | Immunofloresans için primer antikor |
| Anti-fosfo-CREB antikoru | Beyotime | AF5785 | Primer antikor |
| Anti-fosfo-MLKL antikoru | Bioss | bsm-54104R | Primer antikor |
| Anti-fosfo-RIPK1 antikoru | Biolynx | BX60008 | Primer antikor |
| Anti-fosfo-RIPK3 antikoru | Abcam | ab195117 | Primer antikor |
| Anti-RIPK1 antikoru | Cell Signaling Technology | 3493S | Primer antikor |
| Anti-RIPK3 antikoru | Proteintech | 17563-1-AP | Primer antikor |
| Atractylodes macrocephala (Atractylodes macrocephala Koidz.; Bai Zhu) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | 230801 | Bitkisel bileşen (10 g) |
| Otomatik davranış takip yazılımı | Panlab (Harvard Apparatus) | N/A | Açık alan ve kuyruk asma testleri için SMART 3.0 video takip yazılımı |
| BCA Protein Analiz Kiti | CWBIO | CW0014S | Protein kantifikasyonu |
| Davranış kayıt sistemi | Panlab (Harvard Apparatus) | SMART V3.0 | Açık alan ve kuyruk asma testleri |
| Bio-Rad kemilüminesans görüntüleme sistemi | Bio-Rad | 12003154 | Kemilüminesans western blot tespiti için ChemiDoc MP Görüntüleme Sistemi |
| CellTiter-Lumi II Lüminesans Hücre Canlılığı Analiz Kiti | Beyotime | C0056XL | Hücre canlılığı analizi |
| Konfokal mikroskop | Nikon Eclipse C1 | N/A | Immunofloresans görüntüleme |
| DAPI | Servicebio | G1012 | Nükleer boya |
| Çevresel parafin giderme çözeltisi | Servicebio | G1128 | Parafin deparafinizasyon |
| Fetal sığır serumu (FBS) | BI | C04001-500 | Hücre kültürü takviyesi |
| Gardeniae Fructus (Gardenia jasminoides J. Ellis; Zhi Zi) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | 22102109 | Bitkisel bileşen (12 g) |
| Glycyrrhizae Radix (Glycyrrhiza uralensis Fisch.; Gan Cao) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | 230301 | Bitkisel bileşen (3 g) |
| CY3-konjuge keçi anti-fare IgG | Servicebio | GB21301 | Fare anti-ATF4 için floresan sekonder antikor (IF, CY3, 1:300) |
| Alexa Fluor 488-konjuge keçi anti-fare IgG | Servicebio | GB25301 | Fare anti-MLKL için floresan sekonder antikor (IF, Alexa Fluor 488, 1:400) |
| CY3-konjuge keçi anti-tavşan IgG | Servicebio | GB21303 | Tavşan anti-NeuN için floresan sekonder antikor (IF, CY3, 1:300) |
| Alexa Fluor 488-konjuge keçi anti-tavşan IgG | Servicebio | GB25303 | Tavşan anti-CREB için floresan sekonder antikor (IF, Alexa Fluor 488, 1:400) |
| HRP keçi anti-tavşan IgG | Absin | abs20040 | Western blot için sekonder antikor |
| HRP-konjuge fare anti-tavşan IgG hafif zinciri | ABclonal | AS061 | Western blot için sekonder antikor |
| İnsan TNF-α | Novoprotein | C008 | Nekroptoz indükleyici |
| HT-22 hücreleri | Procell | CL-0697 | RRID: CVCL_0321 |
| HyClone büyüme medyumu | Cytiva (HyClone) | SH30022.01 | Hücre kültürü medyumu |
| ImageJ | NIH | Ücretsiz yazılım | Bant kantifikasyonu |
| İnverted mikroskop | Nikon | Eclipse Ti-SR | Hücre morfolojisi |
| Sıvı nitrojen | Henan Jilai New Energy Technology Co., Ltd. | N/A | Doku koruma |
| Molecular Devices mikroplaka okuyucu | Molecular Devices | SpectraMax M5 | Lüminesans ölçümü |
| Moutan Cortex (Paeonia suffruticosa Andr.; Mu Danpi) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | 22121714 | Bitkisel bileşen (12 g) |
| Necrostatin-1 (Nec-1) | Selleck | S8037 | RIPK1 inhibitörü |
| Paraformaldehit | Servicebio | G1101-500ML | Doku fiksasyonu |
| Paroksetin hidroklorür hemihidrat | Aladdin | P129711 | Pozitif kontrol |
| PBS | Servicebio | G4202-500ML | Yıkama tamponu |
| Nane (Mentha haplocalyx Briq.; Bo He) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | 230101 | Bitkisel bileşen (6 g) |
| Penisilin–streptomisin | Gibco | 15140-122 | Hücre kültürü antibiyotiği |
| Polygalae Radix (Polygala tenuifolia Willd.; Yuan Zhi) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | 20221101 | Bitkisel bileşen (12 g) |
| Poliviniliden florür (PVDF) membran | Merck Millipore | ISEQ00010 | Western blot |
| Poria (Wolfiporia cocos; Fu Ling) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | D23070601 | Bitkisel bileşen (15 g) |
| Radyoimmünopresipitasyon analizi (RIPA) liz tamponu | CWBIO (Jiangsu Cowin Biotech Co., Ltd.) | CW2333S | Protein ekstraksiyonu |
| Radix Bupleuri (Bupleurum chinense DC.; Chai Hu) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Çin | 230801 | Bitkisel bileşen (12 g) |
| SDS-PAGE reaktifleri | Solarbio; Servicebio; Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd. | Uygulanamaz | Kurum içinde hazırlanan akrilamid, bis-akrilamid, Tris, SDS, APS ve TEMED |
| Sodyum pentobarbital | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 69020181 | Anestezik |
| Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografi sistemi | Thermo Fisher Scientific | Vanquish UHPLC Sistemi | LC-MS analizi |
| UHPLC HSS-T3 kolonu (100 × 2.1 mm, 1.8 μm) | Waters | 186003539 | Kromatografik ayırma |
| z-VAD-fmk | TargetMol | T6013 | Pan-kaspaz inhibitörü |
Kaynaklar
- Zhang Y, et al. Natural volatile oils derived from herbal medicines: A promising therapy way for treating depressive disorder. Pharmacol Res. 2021;164:105376.
- O’Connor EA, et al. Depression and suicide risk screening: Updated evidence report and systematic review for the US Preventive Services Task Force. JAMA. 2023;329(23):2068-85.
- World Health Organization. The global burden of disease: 2004 update. World Health Organization; Geneva; 2008.
- Pedrosa-Naudín MA, et al. Non-adherence to antidepressant treatment and related factors in a region of Spain: A population-based registry study. Pharmaceutics. 2022;14(12):2696.
- Huang Y, et al. Prevalence of mental disorders in China: A cross-sectional epidemiological study. Lancet Psychiatry. 2019;6(3):211-24.
- Thase ME. New medications for treatment-resistant depression: A brief review of recent developments. CNS Spectr. 2017;22(S1):39-48.
- Monteggia LM, Malenka RC, Deisseroth K. Depression: The best way forward. Nature. 2014;515(7526):200-1.
- Cao H, et al. Hippocampal proteomic analysis reveals activation of necroptosis and ferroptosis in a mouse model of chronic unpredictable mild stress-induced depression. Behav Brain Res. 2021;403:113261.
- Sun Y, et al. Dysmyelination by oligodendrocyte-specific ablation of Ninj2 contributes to depressive-like behaviors. Adv Sci (Weinh). 2022;9(3):e2103065.
- Zeb S, et al. Necroptotic kinases are involved in the reduction of depression-induced astrocytes and fluoxetine’s inhibitory effects on necroptotic kinases. Front Pharmacol. 2022;13:1060954.
- Duan YW, Chen SX, Li QY, Zang Y. Neuroimmune mechanisms underlying neuropathic pain: The potential role of the TNF-α-necroptosis pathway. Int J Mol Sci. 2022;23(13):7191.
- Frank D, Vince JE. Pyroptosis versus necroptosis: Similarities, differences, and crosstalk. Cell Death Differ. 2019;26(1):99-114.
- Vandenabeele P, Galluzzi L, Vanden Berghe T, Kroemer G. Molecular mechanisms of necroptosis: An ordered cellular explosion. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010;11(10):700-14.
- Linkermann A, Green DR. Necroptosis. N Engl J Med. 2014;370(5):455-65.
- Sun L, et al. Mixed lineage kinase domain-like protein mediates necrosis signaling downstream of RIP3 kinase. Cell. 2012;148(1-2):213-27.
- Cai Z, et al. Plasma membrane translocation of trimerized MLKL protein is required for TNF-induced necroptosis. Nat Cell Biol. 2014;16(1):55-65.
- Kaczmarek A, Vandenabeele P, Krysko DV. Necroptosis: The release of damage-associated molecular patterns and its physiological relevance. Immunity. 2013;38(2):209-23.
- Wallach D, Kang TB, Kovalenko A. Concepts of tissue injury and cell death in inflammation: A historical perspective. Nat Rev Immunol. 2014;14(1):51-9.
- Yuan J, Amin P, Ofengeim D. Necroptosis and RIPK1-mediated neuroinflammation in CNS diseases. Nat Rev Neurosci. 2019;20(1):19-33.
- Mitroshina EV, Saviuk M, Vedunova MV. Necroptosis in CNS diseases: Focus on astrocytes. Front Aging Neurosci. 2022;14:1016053.
- Gong Q, et al. RIPK1 inhibition mitigates neuroinflammation and rescues depressive-like behaviors in a mouse model of LPS-induced depression. Cell Commun Signal. 2024;22(1):427.
- Kwon TG, et al. A review of antidepressant and anxiolytic effects of Soyo-san (Xiaoyao-san) and modified Soyo-san in animal models. Phytomedicine. 2024;135:155387.
- Jiao H, et al. Xiaoyaosan ameliorates CUMS-induced depressive-like and anorexia behaviors in mice via necroptosis-related cellular senescence in the hypothalamus. J Ethnopharmacol. 2024;318(Pt A):116938.
- Yan ZY, et al. Antidepressant mechanism of traditional Chinese medicine formula Xiaoyaosan in a CUMS-induced depressed mouse model via RIPK1-RIPK3-MLKL-mediated necroptosis based on network pharmacology analysis. Front Pharmacol. 2021;12:773562.
- Wu M, et al. Integration of network pharmacology and experimental verification to reveal the active components and molecular mechanism of modified Danzhi Xiaoyao San in the treatment of depression. J Ethnopharmacol. 2025;337:118739.
- Chen X, et al. Therapeutic effect of Jiawei Danzhi Xiaoyao Powder combined with intravenous human umbilical cord mesenchymal stem cells on post-stroke depression. Chin J Pathophysiol. 2019;35(12):2274-79.
- Zhang J. Clinical observation of Shugan Jiannao Tiaoyu Tablets in the treatment of 30 cases of depression. New J Tradit Chin Med. 2008;40(11):48-49.
- Zhang J, Zhang B. Thirty-five patients with post-stroke depression were treated with Shugan Jiannao Tiaoyu Tablets. New J Tradit Chin Med. 2006;38(3):75-76.
- Su P, et al. Modified Xiaoyao San reverses lipopolysaccharide-induced depression-like behavior through suppressing microglial M1 polarization by enhancing autophagy via the PI3K/AKT/mTOR pathway in mice. J Ethnopharmacol. 2023;308:116659.
- Guo X, et al. Effect of Jiawei Danzhi Xiaoyao Powder on mineralocorticoid receptor and glucocorticoid receptor in the hippocampus of depression model rats. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 2014;20(11):119-22.
- Wang B, et al. Modified Danzhi Xiaoyaosan inhibits neuroinflammation by regulating the TRIM31/NLRP3 inflammasome in chronic unpredictable mild stress-induced depression. Exp Gerontol. 2024;187:112451.
- Wang M, et al. Sharing and community curation of mass spectrometry data with Global Natural Products Social Molecular Networking. Nat Biotechnol. 2016;34(8):828-37.
- Sawada Y, et al. RIKEN tandem mass spectral database (ReSpect) for phytochemicals: A plant-specific MS/MS-based data resource and database. Phytochemistry. 2012;82:38-45.
- Horai H, et al. MassBank: A public repository for sharing mass spectral data for life sciences. J Mass Spectrom. 2010;45(7):703-14.
- Wang M, et al. Targeting programmed cell death in inflammatory bowel disease through natural products: New insights from molecular mechanisms to targeted therapies. Phytother Res. 2024;38:4587-611.
- Huang X, et al. Shikonin overcomes drug resistance and induces necroptosis by regulating the miR-92a-1-5p/MLKL axis in chronic myeloid leukemia. Aging (Albany NY). 2020;12(17):17662-80.
- Yuan J, Najafov A, Py BF. Roles of caspases in necrotic cell death. Cell. 2016;167(7):1693-704.
- Mu R, et al. Activation of TGR5 ameliorates streptozotocin-induced cognitive impairment by modulating apoptosis, neurogenesis, and neuronal firing. Oxid Med Cell Longev. 2022;2022:3716609.
- Gardner CR, et al. From (tool)bench to bedside: The potential of necroptosis inhibitors. J Med Chem. 2023;66(4):2361-85.
- Degterev A ,et al. Chemical inhibitor of nonapoptotic cell death with therapeutic potential for ischemic brain injury. Nat Chem Biol. 2005;1(2):112-19.
- Cao L, Mu W. Necrostatin-1 and necroptosis inhibition: Pathophysiology and therapeutic implications. Pharmacol Res. 2021;163:105297.
- Vissers M, et al. Safety, pharmacokinetics and target engagement of the novel RIPK1 inhibitor SAR443060 (DNL747) for neurodegenerative disorders: Randomized, placebo-controlled, double-blind phase I/Ib studies in healthy subjects and patients. Clin Transl Sci. 2022;15(8):2010-23.
- Mo K, et al. Targeting HNRNPC suppresses thyroid follicular epithelial cell apoptosis and necroptosis through m6A-modified ATF4 in autoimmune thyroid disease. Pharmacol Res. 2023;195:106933.
- Liu J, et al. Brain-derived neurotrophic factor elevates activating transcription factor 4 (ATF4) in neurons and promotes ATF4-dependent induction of SESN2. Front Mol Neurosci. 2018;11:62.
- Tang H, Kang R, Liu J, Tang D. ATF4 in cellular stress, ferroptosis, and cancer. Arch Toxicol. 2024;98(4):1025-41.
- Pang BPS, et al. Deficiency of muscle-generated brain-derived neurotrophic factor causes inflammatory myopathy through reactive oxygen species-mediated necroptosis and pyroptosis. Redox Biol. 2024;74:103418.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.