Obstrüktif uyku apne sendromlu akut serebral enfarktüs hastalarında miR‑486‑3p seviyeleri azalmıştır; bu durum hastalık şiddeti ve inflamatuar belirteçlerle negatif korelasyon göstermekte ve kötü 1 yıllık prognozu öngörmektedir; bu da miR‑486‑3p'nin tanısal ve prognostik bir biyobelirteç olma potansiyelini desteklemektedir.
Araştırma makalesi
Akut Serebral İnfarkt ve Obstrüktif Uyku Apne Sendromu Olan Hastalarda Periferik Kan miR-486-3p Seviyelerinin Retrospektif Kohort Çalışması
Bu makalede
Özet
Özet
Obstrüktif uyku apnesi sendromu (OUAS) ile komplike olan akut serebral enfarktüs (ASE), yüksek inme nüksü ve ölüm riski taşımaktadır, ancak bu komorbid durum için etkili biyobelirteçler halen sınırlıdır. Bu retrospektif kohort çalışmasına Kasım 2020 ile Aralık 2023 arasında ASE tanılı 270 hasta dahil edilmiş; hastalar ASE grubu (n = 100, apne-hipopne indeksi [AHI] < 5) ve OUAS'lı ASE grubu (n = 170, AHI ≥ 5) olarak sınıflandırılmıştır. OUAS'lı ASE grubu ayrıca hafif (5 ≤ AHI < 15, n = 60), orta (15 ≤ AHI < 30, n = 75) ve ağır (AHI ≥ 30, n = 35) alt gruplara ayrılmıştır. Serum miR-486-3p ekspresyonu RT-qPCR ile ölçülmüş; tümör nekroz faktör-α (TNF-α), C-reaktif protein (CRP) ve hipoksiyle indüklenebilir faktör-1α (HIF-1α) dahil olmak üzere enflamatuar belirteçler ELISA ile kantifiye edilmiştir. miR-486-3p'nin tanısal değeriyle ilgili değerlendirmeler işlem karakteristik eğrisi (ROC) analizi ile, prognostik önemi ise Kaplan-Meier sağkalım analizi ve Cox regresyon modelleri ile yapılmıştır. miR-486-3p, komorbid grupta belirgin şekilde daha düşük bulunmuş ve güçlü bir tanısal yetenek (AUC = 0,927) göstermiştir. Özellikle, OUAS şiddet alt grupları arasında net bir doz-bağımlı eğilim gözlemlenmiş; hafiften ağıra doğru OUAS ilerledikçe miR-486-3p progresif olarak azalırken, TNF-α ve CRP basamaklı olarak artmıştır. Spearman korelasyon analizleri, miR-486-3p'nin AHI, NIHSS skoru, TNF-α ve CRP ile negatif korelasyona sahip olduğunu ortaya koymuştur. 1 yıllık takipte, düşük miR-486-3p ekspresyonuna sahip hastaların, yüksek ekspresyona sahip olanlara kıyasla fonksiyonel sonuçlarının anlamlı derecede daha kötü olduğu görülmüştür. Multivaryant Cox regresyonu, miR-486-3p'nin 1 yıllık prognoz için bağımsız bir koruyucu faktör olduğunu doğrulamıştır. Bu bulgular, miR-486-3p'nin sistemik enflamasyondaki düzenleyici rolü aracılığıyla OUAS'lı ASE hastaları için yeni bir tanısal ve prognostik biyobelirteç olarak hizmet edebileceğini göstermekte olup, daha geniş prospektif kohortlarda doğrulanmasını gerektirmektedir.
Giriş
Obstrüktif uyku apnesi sendromu (OUAS), uyku sırasında solunumun tekrarlayan kesintileri ile karakterize yaygın bir durumdur1. OUAS, sıklıkla metabolik, kardiyovasküler, renal, pulmoner ve nöropsikiyatrik bozukluklar gibi komorbiditelerle ilişkilendirilir2. Kardiyovasküler ve metabolik hastalıklarla olan genel ilişkilerinin ötesinde OUAS, vakaların %70'ine kadarını komplike ederek nörolojik kötüleşme, mortalite ve tekrarlayan inme risklerini artıran, akut iskemik inmelerde spesifik ve ciddi bir tehdit oluşturur3,4,5. Akut serebral enfarktüs (ASE), inmenin en yaygın formunu oluşturur. Son yıllarda ASE tedavisinde önemli ilerlemeler kaydedilmiş olsa da, hastaların çoğu hala şiddetli engellilik veya ölümle karşı karşıyadır6. ASE ile kombine OUAS arasındaki sinerjik etkileşim, iskemik hasarı ve sistemik inflamasyonu şiddetlendirerek inme nüksü, engellilik ve mortalite risklerini önemli ölçüde artırır. Sonuç olarak, bu yüksek riskli komorbid durumun erken teşhisi ve yönetimi için güvenilir biyobelirteçlerin belirlenmesi büyük önem taşımaktadır.
MikroRNA'lar (miRNA'lar), son yıllarda biyobelirteç olarak büyük bir potansiyel göstermiştir. Bunlar arasında miR-486-3p, nörovasküler hastalıklarda büyük öneme sahiptir. Önceki araştırmalar, obstrüktif uyku apnesinde (OSA) miR-486-3p ekspresyonunun inhibe edildiğini göstermiştir7. Ayrıca, kuduz virüsü glikoproteini-miR-486-3p-ekzozom tedavisi; nörodavranışsal bozuklukları, serebral ödemi, kan-beyin bariyeri hasarını ve nörodejenerasyonu hafifletebilir8, bu da miR-486-3p'nin beyin hasarında rol oynadığını göstermektedir. ACI sonrası, hasarlı beyin dokusundaki mikroglialar aktive olarak inflamatuar sitokinlerin sekresyonunu teşvik eder5. OSAS, intermitan hipoksi semptomlarına neden olarak sempatik sinir sisteminin aktivasyonuna ve oksidatif strese yol açar, böylece sistemik bir inflamatuar kaskad reaksiyonunu tetikler9. miR-486-3p, inflamasyon ile yakından ilişkilidir10. Bu kanıtlar, miR-486-3p'nin OSAS ile ilişkili hipoksi, sistemik inflamasyon ve inme sonrası iyileşme arasında moleküler bir bağ görevi görebileceğini düşündürmektedir.
Buna rağmen, OSAS ile birlikte seyreden ACI hastalarındaki ekspresyon profili, tanısal doğruluğu ve prognostik önemi sistematik olarak araştırılmamıştır ve OSAS şiddeti veya inflamatuar mediyatörlerle doz bağımlı bir şekilde korelasyon gösterip göstermediği bilinmemektedir. Bu boşlukları gidermek amacıyla, bu çalışma ACI hastalarında miR-486-3p'nin OSAS için tanısal değerini değerlendirmiş, OSAS şiddeti ve inflamatuar belirteçlerle (TNF-α, CRP ve HIF-1α) olan doz bağımlı ilişkisini incelemiş ve 1 yıllık fonksiyonel sonuçlar üzerindeki prognostik faydasını analiz etmiştir. Bildiğimiz kadarıyla bu çalışma, miR-486-3p'nin, potansiyel olarak sistemik inflamasyonun regülasyonu aracılığıyla, ACI-OSAS komorbiditesi için yeni bir tanısal ve prognostik biyobelirteç olarak hizmet edebileceğini gösteren ilk kapsamlı çalışmadır.
Protokol
Bu çalışma, Xuzhou Tıp Üniversitesi Bağlı Hastanesi Etik Kurulu tarafından onaylanmış olup (onay numarası: XYFY2024-KL238-01) hastalardan ek bilgilendirilmiş onam alma gerekliliğinden muaf tutulmuştur. Kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
Hastalar ve örnekler
Bu çalışma retrospektif bir kohort çalışmasıydı. Kasım 2020'den Aralık 2023'e kadar, Xuzhou Tıp Üniversitesi Bağlı Hastanesi'nde ACI uygulanan toplam 270 hasta ardışık olarak dahil edildi. Hasta seçim süreci Ek Şekil 1'de özetlenmiştir. Uygun hastalar, inme ünitesine yapılan tüm yeni yatışların günlük taraması yoluyla belirlendi. Yatış öncesindeki 72 saat içinde semptomların başladığı, acil servis kayıtlarının incelenmesiyle doğrulanmış ve sertifikalı bir nörolog tarafından hasta öyküsü ve aile görüşmesi yoluyla teyit edilmiştir. Örneklem büyüklüğü, gruplar arasındaki miR-486-3p seviyelerindeki anlamlı bir farkı tespit edebilme kapasitesine göre hesaplanmıştır. 0,5'lik bir etki büyüklüğü, 0,05'lik iki yönlü α ve 0,80'lik bir güç (1-β) varsayıldığında, grup başına minimum 64 hasta gereklidir. Nihai grup boyutları, önceden belirlenmiş bir tahsisi değil, gerçek alımı ve inme popülasyonundaki OSAS prevalansının daha yüksek olmasını yansıtmaktadır. ACI ile birlikte OSAS olan hastaların prognozları 1 yıl boyunca takip edilmiştir.
Dahil etme kriterleri şunlardı: (1) Yatıştan önceki 72 saat içinde semptom başlangıcı olan ve manyetik rezonans görüntüleme ile doğrulanmış akut iskemik inme. (2) Çalışma anketlerini ve nörolojik değerlendirmeleri anlama ve tamamlama yeteneği. (3) ACI şiddeti, yatışta Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği (NIHSS) ile değerlendirildi. NIHSS skoru <5 olduğunda hafif ACI, NIHSS skoru 5 ile 20 arasında olduğunda ise orta şiddette ACI olarak sınıflandırılmıştır. Temel dışlama kriterleri arasında malign tümör öyküsü, önceden mevcut olan ciddi fiziksel yetersizlik veya psikiyatrik bozukluklar, ciddi kardiyak, pulmoner veya renal yetmezlik, önceki 3 ay içinde geçirilmiş majör cerrahi veya travma, aktif enfeksiyonlar veya otoimmün hastalıklar; 6 ay içinde geçirilmiş inme; immünosüpresif tedavi ve OSAS tanısı veya tedavisi (sürekli pozitif havayolu basıncı terapisi dahil) yer almaktaydı.
MR doğrulaması için tüm hastalara 3.0-T sisteminde; T1-ağırlıklı, T2-ağırlıklı, sıvı attenuasyonlu inversiyon recovery (FLAIR), difüzyon ağırlıklı görüntüleme (DWI) ve görünür difüzyon katsayısı (ADC) haritalamasını içeren standart beyin MRG yapıldı. Akut enfarkt, DWI'da hiperintens sinyal varlığı ile ADC'de buna karşılık gelen hipointens sinyal olarak tanımlandı. Tüm MRG taramaları, klinik verilere kör olan iki deneyimli nöroradyolog tarafından yorumlandı ve uyuşmazlıklar konsensüs yoluyla çözüldü. NIHSS skorlaması, herhangi bir trombolitik veya endovasküler tedavi öncesinde, kabul sırasında sertifikalı nörologlar tarafından gerçekleştirildi.
Açlık venöz kanı, inme başlangıcından sonraki 24 sa ile 48 sa arasında, en az 8 sa'lik gece boyu açlığın ardından toplandı. Sirkadiyen varyasyonu minimize etmek için kan alma işlemleri sabah 6:00 ile 8:00 arasında gerçekleştirildi. Toplam 5 mL periferik venöz kan, EDTA kaplı vakumlu tüplere toplandı. Toplamadan sonraki 2 sa içinde, kan örnekleri soğutmalı bir santrifüj kullanılarak 4 °C'de 15 dk boyunca 1,500 × g hızda santrifüjlendi. Serum süpernatanı dikkatlice 1,5 mL RNaz içermeyen mikrosantrifüj tüplerine paylaştırıldı ve RNA ekstraksiyonuna kadar hemen −80 °C'de saklandı. Tekrarlayan dondurma-çözme döngülerinden kesinlikle kaçınıldı; tüm alikotlar analiz öncesinde maksimum bir dondurma-çözme döngüsüne maruz bırakıldı.
Hasta gruplandırması
Katılımcılar, polisomnografiden elde edilen AHI skorlarına göre gruplandırıldı. Tüm kayıtlar, hastanenin uyku laboratuvarında saat 22:00 ile 06:00 arasında, minimum 7 h süresince gerçekleştirildi. İzlenen fizyolojik kanallar şunları içeriyordu: elektroensefalografi (EEG; altı kanal), elektrookülografi (EOG; iki kanal), elektromiyografi (EMG; çene ve bilateral anterior tibialis), elektrokardiyografi (ECG; tek derivasyon), nazal hava akışı (termistör ve basınç transducer'ı), torasik ve abdominal solunum çabası (respiratuar indüktans pletismografisi) ve pulse oksimetri (SpO2). AHI, uyku çalışması teknisyeni tarafından hesaplandı. Uyku evrelerinin ve solunum olaylarının skorlaması, Somnolyzer 24×7 yazılımı kullanılarak, sertifikalı bir uyku teknisyeni tarafından Amerikan Uyku Tıbbı Akademisi (AASM) 2012 skorlama kılavuzuna göre manuel olarak gerçekleştirildi. Amerikan Uyku Tıbbı Akademisi'nin yaygın olarak kabul edilen tanı kriterlerine göre, saatte 5 veya daha fazla olaydan oluşan bir AHI, OSA tanısı için standart eşiktir. Bu nedenle, AHI < 5 olan katılımcılar ACI grubu (n = 100) olarak, AHI ≥ 5 olanlar ise ACI kombine OSAS grubu (n = 170) olarak sınıflandırıldı. AHI ≥ 5 olanlar arasında (ACI kombine OSAS grubu, n = 170), hastalar yerleşmiş kriterlere göre üç şiddet alt grubuna ayrıldı: hafif OSAS (5 ≤ AHI < 15, n = 60), orta OSAS (15 ≤ AHI < 30, n = 75) ve şiddetli OSAS (AHI ≥ 30, n = 35). Bu tabakalama, hipoksik yük, miR‑486‑3p ekspresyonu ve inflamatuar belirteçler arasındaki doz bağımlı ilişkinin değerlendirilmesini sağladı. Bazal AHI ölçümünün karışmasını önlemek amacıyla, daha önce OSAS tedavisi (örneğin, CPAP) görmüş hastalar çalışmaya dahil edilmedi.
Prognoz değerlendirmesi
1 yıllık zaman noktası, akut etkilerin ortadan kalkmasına ve OSAS'ın kümülatif hipoksik yükünün ortaya çıkmasına olanak tanıyarak, prognostik etkisini değerlendirmek için sağlam bir pencere sunar. OSAS ile birlikte ACI olan hastaların klinikle prognozu, hastalığın başlangıcından sonra modifiye Rankin Ölçeği (mRS) ile değerlendirildi. Tüm mRS değerlendirmeleri, çalışma öncesinde standardize eğitim almış sertifikalı nörologlar tarafından, yapılandırılmış mRS görüşme formu kullanılarak gerçekleştirildi. Değerlendiriciler arası güvenilirlik, kappa katsayısı ile değerlendirildi. >0.85. İzlem değerlendirmesi, planlanmış bir poliklinik ziyareti aracılığıyla gerçekleştirilmiştir. Şahsen katılamayan hastalar için, eğitimli bir araştırma hemşiresi tarafından standart bir senaryo kullanılarak yapılandırılmış bir telefon görüşmesi yapılmıştır. Tüm değerlendiriciler, hastaların miR-486-3p seviyelerine ve OSAS durumlarına karşı körlenmiştir. Poliklinik ve telefon değerlendirmeleri arasında tutarlılığı sağlamak için her iki formatta da aynı yapılandırılmış anket kullanılmış ve tüm değerlendiriciler çalışma öncesi bir kalibrasyon egzersizi tamamlamıştır. 0–2 puan alan hastalar iyi prognoz grubuna, 3–6 puan alanlar ise kötü prognoz grubuna dahil edilmiştir. Takip sürecinde hiçbir hasta kaybedilmemiştir. SAQLI, ESS, TNF-αve HIF-1α prognoz gruplarını tanımlamak için kullanılmak yerine prognostik değişkenler olarak değerlendirildi. NIHSS, SAQLI ve ESS, eğitimli araştırma personeli tarafından uygulandı. SAQLI ve ESS, sessiz bir odada görüşmeci eşliğinde uygulanan anketler şeklinde yürütüldü.
Puanlama indeksi
NIHSS, inme için kullanılan kantitatif bir ölçektir11, daha yüksek puanlar ACI'nin daha şiddetli olduğunu göstermektedir. SAQLI; günlük aktiviteleri, sosyal etkileşimleri, duygusal durumları, semptomları ve tedaviyle ilgili semptomları kapsayan, 1–7 ölçeğinde, daha yüksek puanların daha kötü yaşam kalitesini gösterdiği, OSA'ya yönelik bir yaşam kalitesi anketidir.12ESS, hastaların kendi bildirdikleri gündüz uykululuğunu incelemek için kullanılır; skor aralığı 0 ile 24 arasındadır ve skor > 10, gündüz uykululuğunu belirtir13.
RNA ekstraksiyonu ve ters transkripsiyon
Toplam RNA, TRIzol reaktifi kullanılarak 200 µL serumdan ekstrakt edildi. Kısaca, serum örnekleri 800 µL TRIzol ile karıştırıldı, oda sıcaklığında 5 dk inkübe edildi ve 4 °C'de 12,000 × g santrifüjle 15 dk döndürüldü. Kloroform (200 µL) eklendi ve karışım 15 sn boyunca kuvvetlice çalkalandı, 3 dk inkübe edildi ve 4 °C'de 12,000 × gsantrifüjle 15 dk döndürüldü. Sulu faz yeni bir tüpe aktarıldı ve RNA, 500 µL izopropanol ile çöktürüldü, −20 °C'de 1 saat inkübe edildi ve 4 °C'de 12,000 × gsantrifüjle 10 dk döndürüldü. RNA peleti %75 etanol ile yıkandı, havada kurutuldu ve 20 µL RNaz-free su içerisinde çözüldü. RNA konsantrasyonu ve saflığı, bir mikrohacim spektrofotometresi kullanılarak değerlendirildi ve sonraki analizler için 1.8 ile 2.0 arasındaki A260/A280 oranı kabul edildi. RNA bütünlüğü, agaroz jel elektroforezi ile doğrulandı.
Ters transkripsiyon, üretici protokolüne uygun olarak rastgele hekzamer primerler kullanılarak, 20 µL toplam reaksiyon hacminde, Reverse Transcription Kit ile 500 ng toplam RNA kullanılarak gerçekleştirildi. Ters transkripsiyon reaksiyonu 25 °C'de 10 dk, 42 °C'de 60 dk ve 70 °C'de 5 dk boyunca uygulandı. Elde edilen cDNA, kullanıma kadar −20 °C'de saklandı.
RT-qPCR
miR-486-3p ekspresyonu, bir gerçek zamanlı kantitatif PCR (qPCR) sisteminde, mikroRNA kantifikasyonu için SYBR Green tabanlı bir gerçek zamanlı PCR kiti kullanılarak tespit edilmiştir. Reaksiyon karışımı şunları içermekteydi: 10 µL 2'den× SYBR Green Master Mix, 2 µL cDNA kalıbından (1:5 oranında seyreltilmiş), 1 µL her bir primerin (10 µM), ve son hacmi şu seviyeye getirmek için nükleaz içermeyen su ekleyin: 20 µLPrimer dizileri şöyledir (5'-3'): miR-486-3p-ileri: TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU, geri: CTCAACTGGTGTCGTGGA; ve U6-ileri: CTCGCTTCGGCAGCACA, geri: AACGCTTCACGAATTTGCGT. qPCR döngü koşulları şöyledir: 95 °C 2 dakika boyunca, ardından 40 döngü şeklinde 95 °C 30 saniye boyunca, 60 °C 30 saniye boyunca ve 72 °C 60 saniye boyunca. Her örnek üç tekrarlı olarak çalışıldı ve her çalışmaya kalıp içermeyen bir kontrol eklendi. Amplifikasyonun özgüllüğü, şunlardan elde edilen erime eğrisi analizi ile doğrulandı: 60 °C -e / -a 95 °CDöngü eşiği (Ct), varsayılan eşik ayarı kullanılarak QuantStudio 6 Pro yazılımı (v1.5) tarafından otomatik olarak belirlenmiştir. miR-486-3p seviyesi, 2--ΔΔBT (Bilgisayarlı Tomografi) yöntem ve U6'ya normalize edildi. Gruplar arası tutarlılığı sağlamak amacıyla, serum örneklerimizde U6'nın stabil bir referans gen olduğu NormFinder algoritması kullanılarak doğrulandı. Deneyler arası ve deney içi varyasyon katsayıları <5%.
ELISA
C-reaktif protein (CRP), TNF-α ve HIF-1α serum konsantrasyonları ELISA kiti kullanılarak tespit edildi. Deneysel prosedürler üreticinin talimatlarına uygun olarak gerçekleştirildi. Kısaca, serum örnekleri buz üzerinde çözüldü ve sağlanan dilüsyon tamponu ile 1:2 oranında seyreltildi. Örnekler ve standartlar önceden kaplanmış 96 kuyucuklu plakalara (100 µL/kuyucuk) eklendi ve 37°C'de 2 saat inkübe edildi. 300 µL yıkama tamponu ile dört kez yıkandıktan sonra, 100 µL biotin-konjuge tespit antikoru eklendi ve 37°C'de 1 saat inkübe edildi. Bir başka yıkama adımının ardından, 100 µL horseradish peroxidase-konjuge streptavidin eklendi ve karanlıkta 37°C'de 30 dakika inkübe edildi. Kromojenik substrat (tetrametilbenzidin, 100 µL) eklendi ve ışıktan korunarak 37°C'de 15 dakika inkübe edildi. Reaksiyon 50 µL durdurma çözeltisi ile sonlandırıldı ve absorbans, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm'de ölçüldü. Konsantrasyonlar, bilinen konsantrasyonlardaki rekombinant proteinlerle oluşturulan standart eğrilerden hesaplandı. Her örnek duplicate olarak ölçüldü ve analizler için ortalama değer kullanıldı. Üretici tarafından sağlanan kalite kontrol örnekleri her plakaya dahil edildi; sonuçlar yalnızca QC değerleri üreticinin belirttiği aralıkta olduğunda kabul edildi.
Kalite kontrol ve tekrarlanabilirlik
Tüm laboratuvar analizleri, RT-qPCR için MIQE (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments) kılavuzlarına ve ELISA için uygun raporlama standartlarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Temel cihazlar, üretici programlarına göre kalibre edilmiştir. Plakalar arası değişkenliği izlemek için her RT-qPCR ve ELISA grubu çalışmasına negatif ve pozitif kontrol örnekleri dahil edilmiştir. Tüm veriler Microsoft Excel kullanılarak kaydedilmiş ve yönetilmiştir; ilgili yazar, makul talep üzerine ayrıntılı deneysel protokolleri ve ham verileri sağlayacaktır.
İstatistiksel analiz
Veriler, SPSS 23.0 ve bir istatistiksel analiz ve grafik yazılımı kullanılarak analiz edildi. Normal dağılım, Shapiro–Wilk testi ile değerlendirildi. Sürekli değişkenler ortalama ± SD veya medyan (IQR) olarak sunuldu ve uygun şekilde t‑testi veya Mann–Whitney U testi ile karşılaştırıldı. Kategorik değişkenler χ2 testi ile karşılaştırıldı. Korelasyonlar, veri dağılımına bağlı olarak Pearson veya Spearman analizleri kullanılarak incelendi. Prediktif değer, ROC eğrisi kullanılarak belirlendi ve 5 katlı çapraz doğrulama ile doğrulandı. miR-486-3p için optimal kesme değeri, Youden indeksi maksimize edilerek belirlendi. Korelasyonları değerlendirmek için Pearson ve Spearman korelasyon analizleri kullanıldı. Prognostik analiz için hastalar, medyan miR‑486‑3p ekspresyonuna göre tabakalandırıldı; gruplar arasındaki sağkalım sonuçlarını karşılaştırmak için log‑rank testi ile Kaplan–Meier eğrileri kullanıldı. Tek değişkenli Cox regresyonunda P < 0.1 olan değişkenler, çok değişkenli Cox modeline dahil edildi. P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
Sonuçlar
ACI grubu ve ACI ile kombine OSAS grubundaki temel özellikler
Tablo 1'de gösterildiği üzere, ACI grubu 62,84 ± 12,65 yaş ortalamasına sahip 68 erkek ve 32 kadından oluşurken; ACI ile kombine OSAS grubu 61,31 ± 11,25 yaş ortalamasına sahip 116 erkek ve 54 kadını içermektedir. ACI ile kombine OSAS grubunda AHI, NIHSS skorları ve CRP seviyeleri anlamlı derecede daha yüksekti. Bununla birlikte, iki grup yaş, cinsiyet, BMI, hipertansiyon, DM, kardiyopati, dislipidemi, sigara kullanımı, alkol kullanımı, tromboliz ve TOAST dağılımları açısından benzerlik göstermiştir.
OSAS şiddet alt grupları genelinde miR-486-3p ve enflamatuar belirteçlerdeki değişimler
OSAS şiddeti ile moleküler değişimler arasındaki doz bağımlı ilişkiyi değerlendirmek amacıyla, ACI ve OSAS tanılı 170 hasta, AHI kriterlerine göre hafif (5 ≤ AHI < 15, n = 60), orta (15 ≤ AHI < 30, n = 75) ve şiddetli (AHI ≥ 30, n = 35) alt gruplara ayrılmıştır. Şekil 1A–C'de gösterildiği üzere, dört grup (ACI, hafif, orta ve şiddetli OSAS) arasında belirgin bir dereceli örüntü gözlenmiştir. Spesifik olarak, miR-486-3p ekspresyonu, ACI grubundan şiddetli OSAS alt grubuna doğru kademeli olarak azalmıştır (Şekil 1A, P < 0.001 vs. ACI grubu). Buna karşılık, serum TNF-α ve CRP seviyeleri OSAS şiddetiyle birlikte basamaklı olarak artmıştır (Şekil 1B,C, P < 0.001 vs. ACI grubu). Bu bulgular, OSAS'ın neden olduğu hipoksik yükün, miR-486-3p'nin dereceli bir baskılanması ve sistemik enflamasyonun paralel bir artışıyla ilişkili olduğunu göstermektedir.
ACI hastalarında OSAS için miR-486-3p'nin tanısal değeri
miR-486-3p, 0.927 AUC (optimal kesme değeri 0.845), %92,94 duyarlılık ve %79,00 özgüllük değerleri ile ACI ile birlikte seyreden OSAS'ta önemli bir tanısal değere sahip olabilir (Şekil 1D). Tanısal modelin sağlamlığını değerlendirmek ve potansiyel aşırı uyumu (overfitting) dışlamak amacıyla, miR-486-3p'nin ROC analizi için 5 katlı çapraz doğrulama yapılmıştır. Ek Tablo 1'de gösterildiği üzere, beş kat arasındaki ortalama AUC 0,928 (0,847 ile 0,969 arasında) olup, orijinal analizden elde edilen 0,927'lik görünür AUC ile yüksek düzeyde tutarlılık göstermiştir. Ortalama duyarlılık %88,83 ve özgüllük %87,00 olarak belirlenmiştir.
OSAS ile birlikte seyreden ACI'da miR-486-3p'nin inme şiddeti ve inflamatuar belirteçlerle korelasyonu
OSAS'lı ACI grubunda, Spearman korelasyon analizleri miR-486-3p ekspresyonunun NIHSS skoru (Şekil 2A), TNF-α (Şekil 2B) ve CRP (Şekil 2C) ile anlamlı derecede negatif korelasyon gösterdiğini ortaya koymuştur.
İyi ve kötü prognoz gruplarındaki prognostik göstergeler
ACI ile birlikte OSAS olan hastalar, mRS skorlarına göre iyi prognoz grubu ve kötü prognoz grubu olarak ikiye ayrılmıştır. Tablo 2'de gösterildiği üzere, kötü prognoz grubunda mRS skoru, SAQLI skoru, ESS skoru, HIF-1α ve TNF-α artış göstermiştir.
ACI ile beraber OSAS olan hastalarda miR-486-3p'nin 1 yıllık sonuçlar için prognostik değeri
Kaplan-Meier eğrisi sonuçları, yüksek miR-486-3p seviyelerinin iyi bir prognozla, düşük seviyelerin ise kötü bir prognozla ilişkili olduğunu göstermiştir (Şekil 2D). Tek değişkenli analizde, miR-486-3p ekspresyonu ve NIHSS skoru klinik sonuçlarla ilişkili bulunmuştur. SAQLI skoru (P = 0.078), HIF-1α (P = 0.086), TNF-α (P = 0.072), yaş (P = 0.082), DM (P = 0.067), kardiyopati (P = 0.065) ve AHI (P = 0.069) dahil olmak üzere diğer değişkenler, prognozla marjinal düzeyde anlamlı ilişkiler göstermiş ve bunlar da çok değişkenli Cox analizine dahil edilmiştir. Çok değişkenli analizde miR-486-3p bağımsız bir koruyucu faktör olmaya devam ederken (HR = 0.437, 95% CI: 0.278–0.684, P < 0.001), kardiyopati (HR = 1.822, 95% CI: 1.070–3.104, P = 0.027) ve NIHSS skoru (HR = 1.597, 95% CI: 1.008–2.529, P = 0.046) kötü klinik sonuçlar için bağımsız risk faktörleri olarak ortaya çıkmıştır (Tablo 3).
Bulguların Özeti
Özetle, bu çalışma miR‑486‑3p'nin komorbid OSAS'lı ACI hastalarında anlamlı düzeyde azaldığını ve bu popülasyonda OSAS'ın tespitinde yüksek tanısal doğruluk sergilediğini göstermiştir. OSAS şiddet alt grupları arasında net bir doz-bağımlı ilişki gözlemlenmiş; hafiften şiddetliye doğru OSAS düzeyi arttıkça miR‑486‑3p kademeli olarak azalırken, inflamatuar belirteçler (TNF‑α ve CRP) basamaklı olarak artmıştır. Korelasyon analizleri, miR‑486‑3p'nin hem inme şiddeti (NIHSS) hem de sistemik inflamasyon ile negatif ilişkili olduğunu doğrulamıştır. Önemli bir bulgu olarak, düşük miR‑486‑3p ekspresyonu kötü 1 yıllık fonksiyonel sonuçları öngörmüştür ve çok değişkenli Cox regresyonu, NIHSS ve AHI dahil potansiyel karıştırıcı değişkenlere göre ayarlama yapıldıktan sonra miR‑486‑3p'yi bağımsız bir koruyucu faktör olarak tanımlamıştır. Toplu olarak bu bulgular, miR‑486‑3p'nin sistemik inflamasyondaki düzenleyici rolü aracılığıyla, ACI‑OSAS komorbiditesi için yeni bir tanısal ve prognostik biyobelirteç olarak hizmet edebileceği hipotezini desteklemektedir.
VERİ ERİŞİLEBİLİRLİĞİ:
Bu çalışmanın bulgularını destekleyen ham veriler; tüm kayıtlı hastaların başlangıç özellikleri, miR‑486‑3p ekspresyon düzeyleri, ELISA ölçümleri ve 1 yıllık mRS takip verilerini içeren Ek Dosya 1'de mevcuttur.
Şekil 1: ACI ile kombine OSAS şiddet alt gruplarında miR-486-3p ve inflamatuar belirteçlerdeki değişiklikler ve OSAS için miR-486-3p'nin tanısal performansı. (A) ACI grubu ve ACI ile kombine OSAS alt gruplarında miR-486-3p'nin göreceli ekspresyonu. (B) Kombine serum TNF-α konsantrasyonu. (C) ACI grubu (AHI < 5, n=100) ile hafif (5 ≤ AHI < 15, n=60), orta (15 ≤ AHI < 30, n=75) ve ağır (AHI ≥ 30, n=35) OSAS alt gruplarındaki serum CRP konsantrasyonu. (D) OSAS olan ACI hastalarını OSAS olmayanlardan ayırt etmek için miR-486-3p'nin ROC eğrisi. ***P < 0.001. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: miR-486-3p'nin inme şiddeti ve inflamatuar belirteçlerle korelasyonları ve 1 yıllık sonuçlar için prognostik değeri. (A–C) miR-486-3p ekspresyonunun NIHSS skoru, TNF-α ve CRP ile Spearman korelasyon analizleri. (D) Medyan miR-486-3p ekspresyonuna göre tabakalandırılmış, 1 yıllık takipte iyi prognoz olasılığı için Kaplan-Meier sağkalım eğrileri. ***P < 0.001. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Değişken | ACI (n=100) | ACI ve OSAS (n=170) | P değeri | |
| Yaş (yıl) | 62.84 ± 12.65 | 61.31 ± 11.25 | 0.303 | |
| Cinsiyet (erkek/kadın) | 68/32 | 116/54 | 0.968 | |
| BKİ (kg/m2) | 24.74 ± 3.57 | 25.02 ± 3.47 | 0.531 | |
| Hipertansiyon, n (%) | 74 (74%) | 134 (78.82%) | 0.365 | |
| DM, n (%) | 22 (22%) | 43 (25.29%) | 0.543 | |
| Kardiyopati, n (%) | 13 (13%) | 25 (14.71%) | 0.698 | |
| AHI (kez/saat) | 2.07 ± 1.42 | 19.95 ± 9.19 | < 0.001*** | |
| NIHSS skoru | 1.70 ± 1.18 | 4.05 ± 1.73 | < 0.001*** | |
| CRP (ng/mL) | 2.03 ± 0.17 | 3.01 ± 0.27 | < 0.001*** | |
| ACI derecesi (hafif/orta) | 99/1 | 69/101 | < 0.001*** | |
| Dislipidemi (evet/hayır) | 52/48 | 96/74 | 0.478 | |
| Sigara kullanımı (evet/hayır) | 48/52 | 91/79 | 0.382 | |
| Alkol kullanımı (evet/hayır) | 40/60 | 87/83 | 0.076 | |
| Tromboliz (evet/hayır) | 38/62 | 81/89 | 0.124 | |
| TOAST | 0.487 | |||
| Kardiyoembolizm (n) | 22 | 36 | ||
| Küçük damar tıkanıklığı (n) | 18 | 28 | ||
| Büyük arter aterosklerozu (n) | 13 | 25 | ||
| Etiyolojisi belirlenemeyen inme (n) | 5 | 19 | ||
| Diğer belirlenmiş etiyolojili inme (n) | 42 | 62 | ||
Tablo 1: OSAS olan ve olmayan ACI hastalarının başlangıç özellikleri. Veriler, sürekli değişkenler için ortalama ± SD veya kategorik değişkenler için n (%) şeklinde sunulmuştur. P değerleri, sürekli değişkenler için bağımsız t-testi ve kategorik değişkenler için ki-kare testi kullanılarak hesaplanmıştır. ACI, akut serebral enfarktüs; OSAS, obstrüktif uyku apne sendromu; BMI, vücut kitle indeksi; DM, diabetes mellitus; AHI, apne-hipopne indeksi; NIHSS, Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği; CRP, C-reaktif protein; TOAST, Akut İnme Tedavisinde Org 10172 Denemesi.
| Değişken | İyi prognoz (n=97) | Kötü prognoz (n=73) | P değeri |
| mRS skoru | 0.88 ± 0.84 | 4.55 ± 1.08 | < 0.001*** |
| SAQIL skoru | 2.59 ± 1.17 | 3.12 ± 1.48 | 0.009** |
| ESS skoru | 8.69 ± 2.76 | 10.05 ± 2.79 | 0.002** |
| HIF-1α (pg/mL) | 1159.94 ± 277.86 | 1283.88 ± 445.15 | 0.027* |
| TNF-α (pg/mL) | 121.4 ± 12.87 | 128.4 ± 11.67 | < 0.001*** |
Tablo 2: OSAS'lı ACI hastalarının iyi ve kötü prognoz gruplarındaki prognostik göstergeler. Hastalar, 1 yıllık mRS skorlarına göre iyi prognoz (mRS 0–2, n = 97) ve kötü prognoz (mRS 3–6, n = 73) gruplarına ayrılmıştır. Veriler ortalama ± SD olarak sunulmuştur. P değerleri bağımsız t-testi kullanılarak hesaplanmıştır. mRS, modifiye Rankin Ölçeği; SAQLI, Calgary Uyku Apnesi Yaşam Kalitesi İndeksi; ESS, Epworth Uykululuk Ölçeği; HIF‑1α, hipoksiyle indüklenebilir faktör‑1α; TNF‑α, tümör nekroz faktörü‑α.
| Değişken | İK | Tek değişkenli %95 GA | P | İK | Çok Değişkenli %95 GA | P | ||
| Daha düşük | Üst | Düşürün | Üst | |||||
| miR-486-3p | 0.442 | 0.228 | 0.679 | <0.001 | 0.437 | 0.278 | 0.684 | <0.001 |
| SAQLI skoru | 0.628 | 0.375 | 1.053 | 0.078 | 0.713 | 0.416 | 1.22 | 0.217 |
| ESS skoru | 0.922 | 0.595 | 1.429 | 0.718 | ||||
| HIF-1α | 0.694 | 0.457 | 1.053 | 0.086 | 0.802 | 0.523 | 1.229 | 0.311 |
| TNF-α | 1.469 | 0.966 | 2.233 | 0.072 | 1.494 | 0.978 | 2.284 | 0.063 |
| Yaş | 1.445 | 0.955 | 2.188 | 0.082 | 1.29 | 0.845 | 1.97 | 0.238 |
| Cinsiyet | 0.829 | 0.534 | 1.285 | 0.401 | ||||
| VKİ | 1.196 | 0.786 | 1.821 | 0.402 | ||||
| Hipertansiyon | 0.754 | 0.465 | 1.222 | 0.252 | ||||
| DM | 1.512 | 0.972 | 2.351 | 0.067 | 1.246 | 0.79 | 1.965 | 0.343 |
| Kardiyopati | 1.611 | 0.971 | 2.673 | 0.065 | 1.822 | 1.07 | 3.104 | 0.027 |
| AHI | 1.468 | 0.97 | 2.222 | 0.069 | 1.125 | 0.734 | 1.725 | 0.588 |
| NIHSS skoru | 1.588 | 1.027 | 2.455 | 0.037 | 1.597 | 1.008 | 2.529 | 0.046 |
| Dislipidemi | 1.178 | 0.776 | 1.788 | 0.442 | ||||
| Sigara İçme | 0.895 | 0.593 | 1.35 | 0.596 | ||||
| İçme | 1.116 | 0.738 | 1.689 | 0.603 | ||||
| Tromboliz | 1.259 | 0.834 | 1.902 | 0.272 | ||||
Tablo 3: OSAS'lı ACI hastalarında 1 yıllık kötü prognoz için tek değişkenli ve çok değişkenli Cox regresyon analizleri. HR, risk oranı; CI, güven aralığı; SAQLI, Calgary Uyku Apnesi Yaşam Kalitesi İndeksi; ESS, Epworth Uykululuk Ölçeği; HIF‑1α, hipoksiyle indüklenen faktör‑1α; TNF‑α, tümör nekroz faktörü‑α; BMI, vücut kitle indeksi; DM, diabetes mellitus; AHI, apne-hipopne indeksi; NIHSS, Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği. Tek değişkenli analizde P < 0.1 olan değişkenler çok değişkenli Cox modeline dahil edilmiştir.
Ek Şekil 1: Hasta seçimi ve alt grup katmanlandırmasının akış şeması.Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Tablo 1: miR‑486‑3p'nin tanısal değerinin dahili validasyonu için beş katlı çapraz doğrulama. AUC, eğri altında kalan alan; CI, güven aralığı. Ortalama AUC, duyarlılık ve özgüllük, beş kat üzerinden aritmetik ortalama olarak hesaplanmıştır.Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Dosya 1: Bu çalışmanın bulgularını destekleyen ham veriler.Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Tartışma
OSAS olan hastalar, tekrarlayan havayolu kollapsı ve obstrüksiyonu yaşarlar; bu durum nöronal hasara yol açabilen intermitan hipoksiye (IH) ve aşırı gündüz uykululuğuna (EDS) neden olur.14OSA, ACI sonrası oldukça yaygındır; hastaların yaklaşık %72'sini etkilemekte ve kardiyovasküler riski önemli ölçüde artırmaktadır.15ACI, yetersiz perfüzyona bağlı olarak gelişen lokalize serebral iskemi ve hipoksiden kaynaklanan nörolojik defisitlerin oluşturduğu bir spektrumdur.16OSAS patolojisinin merkezinde yer alan aralıklı hipoksinin, ACI'nin iskemik hasarı ile sinerjiye girerek beyin hasarını artırdığı düşünülmektedir. Buna rağmen, özellikle bu yüksek riskli komorbid duruma odaklanan araştırmalar yetersizdir. Biriken kanıtlar, miRNA'ların hem OSAS hem de ACI patogenezinde kritik roller oynadığını göstermektedir.17,18miR-486-3p'nin OSAS ve ACI ile ilişkili olabileceği daha önce kaydedilmiştir. Bu nedenle, miR-486-3p'yi OSAS ve ACI arasında potansiyel bir moleküler bağlantı olarak inceledik. Özellikle, bu kohort, COVID-19 pandemisini kapsayan bir dönem olan Kasım 2020 ile Aralık 2023 tarihleri arasında kaydedilmiştir. Biriken kanıtlar, SARS-CoV-2 enfeksiyonunun tetiklediği sürekli sistemik inflamasyonun nöronal hasarı ağırlaştırabileceğini ve nörodejeneratif lezyonların ilerlemesini teşvik edebileceğini göstermektedir.19,20Bununla birlikte, mevcut çalışma SARS-CoV-2/COVID-19 enfeksiyonuna odaklanmamaktadır; araştırma amaçlarımız ve tasarımımız COVID-19 ile ilişkili değildir. OSAS ile birlikte seyreden ACI vakalarında serum miR-486-3p düzeylerinin anlamlı derecede düşük olduğu bulunmuştur; bu durum, söz konusu komorbiditedeki rolüne dair ilk klinik kanıtları sunmakta ve daha fazla çalışma yapılması gerekliliğini vurgulamaktadır.
NIHSS skoru, bir inmenin şiddetini değerlendirmek için kullanılabilir11. Polisomnografideki AHI, OSAS tanısı koymak için yaygın olarak kullanılır ve AHI skoru ne kadar yüksekse, OSAS o kadar şiddetlidir21. Polisomnografinin klinik ve lojistik zorlukları göz önüne alındığında, inme hastalarında obstrüktif uyku apnesi için erişilebilir biyobelirteçlerin belirlenmesi kritik öneme sahiptir22. Mevcut bulgular, miR-486-3p seviyelerinin hem AHI hem de NIHSS skorlarıyla ters korelasyon göstermesi ve hastalık şiddetini yansıtması nedeniyle, ACI ile birlikte seyreden OSAS için önemli bir tanısal potansiyele sahip olduğunu göstermiştir.
Metodolojik olarak bu çalışma, tanısal doğruluğu, doz-yanıt ilişkilerini ve prognostik değeri eş zamanlı olarak değerlendirmek amacıyla, tek bir kohortta moleküler profilleme ile kantitatif klinik fenotiplemenin entegrasyonunun fizibilitesini ortaya koymaktadır. Bu entegre çerçeve, birden fazla patofizyolojik yolak arasındaki karmaşık etkileşimlerin geleneksel tek uç noktalı analizleri sıklıkla zorlaştırdığı inme ile ilişkili komorbiditelerde, gelecekteki biyobelirteç keşif çalışmaları için bir referans teşkil edebilir.
IH, OSAS'ın belirgin bir özelliğidir ve proinflamatuar sinyal yollarını aktive ederek inflamasyona ve doku hasarına yol açar23. Kritik olarak, bu inflamatuar durum, post-iskemik inflamasyonun sekonder beyin hasarını aracılık ettiği ACI patogenezi ile kesişmekte ve onu şiddetlendirmektedir24,25. TNF-α ve CRP gibi temel inflamatuar mediyatörler her iki durumda da yükselmiş olup, hipoksi kaynaklı ve iskemi tetiklemeli inflamatuar kaskadların merkezinde konumlanarak ACI ve OSA'nın komorbid patolojisinde merkezi moleküller haline gelmişlerdir26,27,28. Bu nedenle, ACI ile birlikte OSAS olan hastalarda TNF-α ve CRP serum konsantrasyonları tespit edilmiştir. Bu çalışmada, ACI ile birlikte seyreden OSAS'ta serum miR-486-3p düzeyleri ile TNF-α ve CRP düzeyleri arasında gözlenen negatif korelasyonlar, bu miRNA ile bu komorbid duruma özgü sistemik inflamatuar durum arasında potansiyel bir bağlantı olduğunu göstermektedir.
OSAS yaşam kalitesi üzerinde çok olumsuz bir etkiye sahiptir ve SAQLI, OSA'ya özgü bir yaşam kalitesi anketidir29. EDS, OSAS'ın yaygın bir semptomudur ve EDS'nin eşlik ettiği OSAS, daha fazla olumsuz olaya ve daha kötü bir prognoza yol açar30. Gündüz uykululuğunun şiddetini belirlemek için yaygın olarak ESS kullanılır31. OSAS'ta, tekrarlayan IH epizodları vasküler hastalıklar için bağımsız bir risk faktörü olarak kabul edilir32. Ayrıca, IH kaynaklı oksidatif stres; osteoporoz, artan kardiyovasküler risk ve nörolojik değişiklikler gibi komplikasyonlara yol açabilir33. Bu nedenle, bu çalışmada HIF-1α ekspresyonu da incelenmiştir. OSAS ile birlikte seyreden ACI'nin kötü prognozlu grubunda HIF-1α'nın yüksek olduğunun saptanması, OSAS'taki kronik intermitan hipoksi patofizyolojisi ile uyumludur. Dahası, sonuçlar miR-486-3p ve TNF-α'nın OSAS ile birlikte seyreden ACI'de prognozla korele olduğunu ve düşük miR-486-3p seviyelerinin kötü prognozla ilişkili olduğunu göstermiştir. Bu durum, IH tarafından indüklenen HIF-1α'nın miR-486-3p'yi baskıladığı, böylece TNF-α gibi inflamatuar medyatörlerin yukarı regülasyonuna katkıda bulunduğu ve sonuç olarak ACI'deki beyin hasarını şiddetlendirdiği potansiyel bir kaskada işaret etmektedir.
Bu çalışmanın hâlâ bazı kısıtlılıkları bulunmaktadır. Çalışma, kontrol gruplarının (sağlıklı, yalnızca OSAS olan) eksikliği ile sınırlıdır; bu durum, miR-486-3p için normal bir aralık tanımlanmasını ve komorbiditeye özgü değişikliklerin yalnızca OSAS kaynaklı olanlardan ayırt edilmesini engellemektedir. Bu nedenle, miR-486-3p ekspresyon profilini tam olarak belirlemek için gelecek çalışmalara bu gruplar dâhil edilmelidir. Ayrıca, miR-486-3p'nin spesifik düzenleyici mekanizmasını yalnızca korelasyona dayanarak çıkarımlamak yetersizdir. Moleküler mekanizmasını gelecek deneylerde daha detaylı olarak doğrulayacağız.
Translasyonel bir perspektiften bakıldığında, miR‑486‑3p'nin yüksek tanısal doğruluğu ve bağımsız prognostik değeri, çeşitli potansiyel klinik uygulamaları akla getirmektedir. Kan bazlı bir biyobelirteç olarak, altta yatan OSAS olan ACI hastalarını tanımlamak amacıyla rutin inme tetkiklerine entegre edilebilir, böylece polisomnografi için erken sevk ve zamanında müdahaleyi kolaylaştırabilir. Akut ve subakut fazlarda miR‑486‑3p seviyelerinin izlenmesi, inflamatuar dinamiklerin takibine ve hastaların prognostik riske göre stratifiye edilmesine yardımcı olarak kişiselleştirilmiş rehabilitasyon stratejilerinin uygulanmasını sağlayabilir. Bu translasyonel yollar, prospektif ve çok merkezli çalışmalarda daha ileri araştırmalar gerektirmektedir. Genel olarak, miR-486-3p, inflamatuar faktörleri regüle ederek OSAS ile birlikte seyreden ACI'ye katılım sağlayabilir ve OSAS ile birlikte seyreden ACI'de tanısal ve prognostik değere sahiptir.
Açıklamalar
Bu çalışma, ‘İnme Önleme ve Tedavi Teknolojileri Araştırması’ (No. WKZX2023CZ0143) tarafından finanse edilmiştir.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 3.0T MR Cihazı | Siemens Healthineers, Almanya | MAGNETOM Skyra | Akut serebral enfarktüs onaylaması için beyin görüntüleme |
| 96 kuyucuklu ELISA Mikroplakaları | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Çin | XBS-PLATE | ELISA deteksiyonu için antijen-antikor reaksiyonu |
| Uyku Bozukluğu ile Seyreden Solunum İçin AASM Klinik Uygulama Kılavuzları | Amerikan Uyku Tıbbı Akademisi | 2020 tam kılavuzu | Standardize edilmiş AHI tanı ve OSAS şiddet tabakalama kriterleri |
| Calgary Uyku Apnesi Yaşam Kalitesi İndeksi'nin (SAQLI) Çince valide edilmiş versiyonu | Calgary Üniversitesi | 2021 çeviri baskısı | OSAS ile komplike olmuş ACI hastalarında yaşam kalitesi değerlendirmesi |
| EDTA-K2 5 mL Vakumlu Kan Toplama Tüpleri | BD Biosciences, ABD | 367863 | Serum ayrıştırması için periferik venöz kan örneği alımı |
| Epworth Uykululuk Ölçeği'nin (ESS) Çince valide edilmiş versiyonu | Johns Hopkins University | 2018 revize edilmiş baskı | İnme hastalarında gündüz uykululuğunun değerlendirilmesi |
| GraphPad Prism 9 | GraphPad Software, ABD | Sürüm 9.4.1 | Saçılım grafikleri, kutu grafikleri, ROC eğrisi görselleştirmesi |
| İnsan CRP ELISA Kiti | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Çin | XBS-H001 | Serum C-reaktif proteininin kantitatif tespiti |
| İnsan HIF-1α ELISA Kiti | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Çin | XBS-H007 | Serum hipoksiyle indüklenebilir faktör-1'in kantitatif tespitiα |
| İnsan TNF-α ELISA Kiti | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Çin | XBS-H003 | Serum TNF-$\alpha$'nın kantitatif tespitiα enflamatuar faktör |
| IBM SPSS Statistics 23.0 | IBM, Armonk, NY, ABD | Sürüm 23.0 | Tüm istatistiksel analizler (t-testi, korelasyon, ROC, Kaplan–Meier, Cox regresyonu) |
| Mikroplaka Spektrofotometresi | Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, ABD) | Multiskan FC | ELISA plakaları için 450 nm'de absorbans okuması |
| miR-486-3p & U6 qPCR Primerleri | Sangon Biotech, Şanghay, Çin | Özel sentez | qPCR için hedef ve referans gen amplifikasyonu |
| miScript SYBR Green PCR Kiti | Qiagen GmbH, Hilden, Almanya | 218073 | miR-486-3p ve U6'nın gerçek zamanlı kantitatif PCR amplifikasyonu |
| NIH İnme Ölçeği'nin (NIHSS) Çince Validasyonlu Versiyonu | Ulusal Nörolojik Hastalıklar ve İnme Enstitüsü (NINDS), ABD | Standart klinik edisyon | ACI hastaları için başlangıç nörolojik şiddet değerlendirmesi |
| PSG Uyku Skorlama Yazılımı | BMC Medical Co., Ltd., Çin | v3.2 | Uyku solunum olaylarının otomatik ön skorlaması |
| QuantStudio 6 Pro Gerçek Zamanlı PCR Sistemi | Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, ABD) | QuantStudio 6 Pro | RT-qPCR amplifikasyonu, eritme eğrisi alımı, Ct değerinin kaydedilmesi |
| QuantStudio Gerçek Zamanlı PCR Yazılımı | Applied Biosystems, ABD | v1.7 | qPCR ham veri dışa aktarımı, Ct değeri analizi |
| Soğutmalı Masaüstü Santrifüj | Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., Hunan, Çin | TDZ5-WS | Tam kandan serum ayrılması (2700 × g, 4 °C) |
| RevertAid RT Ters Transkripsiyon Kiti | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD | K1691 | Serum miRNA'nın cDNA'ya ters transkripsiyonu |
| RNaz içermeyen 1,5 mL'lik mikrosantrifüj tüpleri | Axygen, ABD | MCT-150-C | Ayrıştırılmış serumun aliquotlara bölünmesi ve saklanması |
| TRIzol RNA İzolasyon Reajeni | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD | 15596026 | İnsan serum örneklerinden toplam RNA ekstraksiyonu |
| Ultra-düşük Sıcaklıklı Dondurucu | Haier Biomedical, Shandong, Çin | DW-86L388 | Serum örneklerinin uzun süreli saklanması -de −80 °C |
| YH-600B Polisomnografi Monitörü | BMC Medical Co., Ltd., Pekin, Çin | YH-600B | OSAS tanısı için gece boyu uyku izleme ve AHI hesaplaması |
Kaynaklar
- Lv R, et al. Pathophysiological mechanisms and therapeutic approaches in obstructive sleep apnea syndrome. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):218.
- Gleeson M, McNicholas WT. Bidirectional relationships of comorbidity with obstructive sleep apnoea. Eur Respir Rev. 2022;31(164):210256.
- Seiler A, et al. Prevalence of sleep-disordered breathing after stroke and TIA: a meta-analysis. Neurology. 2019;92(7):e648-e654.
- Zhou Y, et al. Correlation between obstructive sleep apnea and hypoperfusion in patients with acute cerebral infarction. Front Neurol. 2024;15:1363053.
- Du W, Fan L, Du J. Neuroinflammation-associated miR-106a-5p serves as a biomarker for the diagnosis and prognosis of acute cerebral infarction. BMC Neurol. 2023;23(1):248.
- Tang Y, et al. Analysis of carotid vulnerable plaque MRI high-risk features and clinical risk factors associated with concomitant acute cerebral infarction. BMC Cardiovasc Disord. 2023;23(1):173.
- Santamaria-Martos F, et al. Circulating microRNA profile as a potential biomarker for obstructive sleep apnea diagnosis. Sci Rep. 2019;9(1):13456.
- Sheng B, et al. Exosome-mediated delivery of miR-486-3p alleviates neuroinflammation via. SIRT2-mediated inhibition of mitophagy after subarachnoid hemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2025;10(3):335-346.
- May AM, Mehra R. Obstructive sleep apnea: role of intermittent hypoxia and inflammation. Semin Respir Crit Care Med. 2014;35(5):531-544.
- Verjans R, et al. Functional screening identifies microRNAs as multicellular regulators of heart failure. Sci Rep. 2019;9(1):6055.
- Kwah LK, Diong J. National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). J Physiother. 2014;60(1):61.
- Tanellari O, et al. Study on quality of life of patients with obstructive sleep apnea: pilot study. Medicina (Kaunas). 2025;61(7):1234.
- Hajikarim-Hamedani A, Rassa S, Tarjoman T, Shafiei M. Assessment of sleep patterns in migraine sufferers using the Epworth Sleepiness Scale. J Headache Pain. 2025;26(1):58.
- Liu X, et al. The relationship between inflammation and neurocognitive dysfunction in obstructive sleep apnea syndrome. J Neuroinflammation. 2020;17(1):229.
- Dharmakulaseelan L, Boulos MI. Sleep apnea and stroke: a narrative review. Chest. 2024;166(4):857-866.
- Song XD, Li SX, Zhu M. Plasma miR-409-3p promotes acute cerebral infarction via. suppressing CTRP3. Kaohsiung J Med Sci. 2021;37(4):324-333.
- Wu Z, et al. Integrated analysis of competitive endogenous RNA networks in acute ischemic stroke. Front Genet. 2022;13:833545.
- Li K, Wei P, Qin Y, Wei Y. MicroRNA expression profiling and bioinformatics analysis of dysregulated microRNAs in obstructive sleep apnea patients. Medicine (Baltimore). 2017;96(34):e7917.
- Sriram S, Mehkri Y, Quintin S, Lucke-Wold B. Shared pathophysiology: understanding stroke and Alzheimer's disease. Clin Neurol Neurosurg. 2022;218:107306.
- Small C, Mehkri Y, Panther E, Felisma P, Lucke-Wold B. Coronavirus disease 2019 and stroke: pathophysiology and management. Can J Neurol Sci. 2023;50(4):495-502.
- Tamin S, et al. Association between laryngopharyngeal reflux and obstructive sleep apnea in adults. PeerJ. 2022;10:e13303.
- Fabbri M, et al. Measuring subjective sleep quality: a review. Int J Environ Res Public Health. 2021;18(3):1082.
- Song R, Baker TL, Watters JJ, Kumar S. Obstructive sleep apnea-associated intermittent hypoxia-induced immune responses in males, pregnancies, and offspring. Int J Mol Sci. 2024;25(3):1852.
- Liu X, et al. Effects of Kudiezi injection on serum inflammatory biomarkers in patients with acute cerebral infarction. Dis Markers. 2018;2018:7936736.
- Liang Z, et al. Effects of remote ischemic postconditioning on the proinflammatory neutrophils of peripheral blood in acute cerebral infarction. Aging (Albany NY). 2023;15(10):4481-4497.
- Imani MM, et al. Serum and plasma tumor necrosis factor alpha levels in individuals with obstructive sleep apnea syndrome: a meta-analysis and meta-regression. Life (Basel). 2020;10(6):87.
- Bian F, Kang S, Cui H, Wang F, Luan T. The clinical efficacy of compound Danshen injection on acute cerebral infarction and on the changes in the CRP, D-dimer, and IL-6 levels. Am J Transl Res. 2021;13(7):8126-8133.
- Tie YX, Fu YY, Xu Z, Peng Y. Relationship between C-reactive protein levels and obstructive sleep apnea syndrome. Genet Mol Res. 2016;15(2): DOI:10.4238/gmr.15027808.
- Dutt N, Janmeja AK, Mohapatra PR, Singh AK. Quality of life impairment in patients of obstructive sleep apnea and its relation with the severity of disease. Lung India. 2013;30(4):289-294.
- Feng X, et al. Test-retest reliability of Epworth Sleepiness Scale score in patients with untreated obstructive sleep apnea. Nat Sci Sleep. 2024;16:2299-2309.
- Lapin BR, Bena JF, Walia HK, Moul DE. The Epworth Sleepiness Scale: validation of one-dimensional factor structure in a large clinical sample. J Clin Sleep Med. 2018;14(8):1293-1301.
- Zolotoff C, et al. Obstructive sleep apnea, hypercoagulability, and the blood-brain barrier. J Clin Med. 2021;10(14):3099.
- Meliante PG, et al. Molecular pathology, oxidative stress, and biomarkers in obstructive sleep apnea. Int J Mol Sci. 2023;24(6):5478.