Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Diyabetik Retinopatide Qiming Granül'ün Gut-Retina Ekseni Aracılığıyla CMKLR1 Merkezli Ağ ve Sistemik İnflamasyon ile Korelasyonel Analizi

121 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/72700

⸱

15 Eylül 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, Qiming Granül'ün (QMG) bağırsak-retina eksenini modüle ederek diyabetik retinopatiyi (DR) iyileştirdiğini göstermektedir. QMG, bağırsak mikrobiyotasını yeniden şekillendirmiş, sistemik inflamasyonu baskılamış ve CMKLR1 merkezli düzenleyici ağı geri kazandırarak retinal histopatolojik hasarı tersine çevirmiştir. Bu bulgular, QMG'yi DR için gelecek vaat eden bir bağırsak-retina terapötik stratejisi olarak konumlandırmaktadır.

Özet

Diyabetik retinopati (DR), kronik hiperglisemi ve sistemik inflamasyon tarafından tetiklenen bir nörovasküler komplikasyondur ve ortaya çıkan kanıtlar, bağırsak-retina ekseninin kritik ancak yeterince değerlendirilmemiş bir terapötik hedef olduğunu vurgulamaktadır. Bu çalışma, Qiming Granülün (QMG) bağırsak-retina eksenini modüle ederek DR'ye karşı koruyucu etkinlik gösterip göstermediğini araştırmaktadır. C57BL/6 fareleri randomize edilerek deneysel gruplara ayrılmış ve farklı müdahalelere tabi tutulmuştur. Retinal histopatolojik değişiklikler, Hematoksilin-Eozin (HE) boyaması ile değerlendirilmiştir. İnflamatuar sitokinlerin (IL-1β, IL-6, TNF-α) serum düzeyleri, enzim bağlı immünosorbent assay (ELISA) ile ölçülmüştür. Hem retinal hem de kolonik dokulardaki temel düzenleyici proteinlerin (CMKLR1, Wnt5a, PPAR-γ, AP-1, TP53) ekspresyonu Western blot (WB) ile tespit edilmiştir. Bağırsak mikrobiyota kompozisyonu ve çeşitliliği, tam uzunlukta 16S rDNA sekileme ile karakterize edilmiştir. Bağırsak mikrobiyotası ile inflamatuar faktörler veya temel proteinler arasındaki ilişkileri değerlendirmek için korelasyon analizleri yapılmıştır. QMG tedavisi, retinal laminer arşivin restorasyonu, retinal ganglion hücresi sayılarının kısmi geri kazanımı (P < 0.001) ve retinal incelmenin tersine dönmesiyle (P < 0.01) kanıtlandığı üzere, retinal histopatolojik anomalileri iyileştirmiştir. Ayrıca serum IL-1β, IL-6 ve TNF-α düzeylerini belirgin şekilde düşürmüştür (P < 0.0001). Bağırsak-retina ekseni boyunca QMG, temel düzenleyici proteinlerin, özellikle CMKLR1 merkezli ağın (Wnt5a, PPAR-γ, AP-1, TP53) anormal ekspresyonunu tersine çevirmiştir. Dahası, QMG bağırsak mikrobiyota kompozisyonunu, çeşitliliğini ve fonksiyonunu restore etmiştir ve korelasyon analizleri QMG'nin bağırsak-retina eksenini modüle etmek için sistemik inflamasyonu bu düzenleyici proteinlerle ilişkilendirdiğini ortaya koymuştur. Bu çalışma, QMG'nin CMKLR1 merkezli düzenleyici ağı (Wnt5a, PPAR-γ, AP-1 ve TP53 dahil) ve sistemik inflamasyonu bağırsak-retina ekseni aracılığıyla ilişkilendirerek DR'yi iyileştirdiğine dair ön farmakolojik kanıtlar sunmakta ve QMG'yi DR için gelecek vaat eden bir bağırsak-retina terapötik stratejisi olarak konumlandırmaktadır.

Giriş

Diabetes mellitus'in (DM) en yaygın mikrovasküler komplikasyonlarından biri olan diyabetik retinopati (DR), dünya genelinde çalışma çağındaki yetişkinler arasında körlüğün önde gelen nedenlerinden biridir1. Küresel ölçekte DR, DM popülasyonunun yaklaşık %20–30'unu etkilemektedir2. Kronik hiperglisemi; bozulmuş nörovasküler kenetlenme, artmış enflamatuar yanıtlar ve oksidatif stres dahil olmak üzere bir dizi patolojik olayı tetikleyerek DR patogenezini yönlendirir3. Son zamanlarda, retinopatisi olan diyabetik hastalarda, retinopatisi olmayanlara kıyasla bağırsak mikrobiyota çeşitliliği ve kompozisyonunda değişiklikler gözlemlenmiştir4,5. Sonuç olarak, bağırsak homeostazını retinal sağlıkla ilişkilendiren çift yönlü bir iletişim ağı olan bağırsak-retina ekseni, DR progresyonuna katkıda bulunan yeni bir unsur olarak ortaya çıkmıştır. Ancak, bağırsak-retina sinyallerini retinal patolojiye dönüştüren spesifik moleküler mediyatörler büyük ölçüde belirsizliğini korumakta, bu da güvenilir biyobelirteçlerin ve terapötik hedeflerin belirlenmesini sınırlamaktadır.

Bağırsak-retina ekseni, intestinal mikrobiyota ve metabolitleri ile retinal dokular arasında immünolojik, metabolik, nöroendokrin ve vasküler yollar aracılığıyla gerçekleşen karmaşık ve çift yönlü bir iletişim ağını tanımlayarak homeostatik dengelerini modüle eder6. Moleküler düzeyde bağırsak-retina ekseni, özellikle AP-1 ve TP53 olmak üzere, temel stres yanıtı veren ve hücre kaderini belirleyen proteinlerin düzensizliği ile karakterize edilir7,8,9. Ayrıca, temel bir kemokin reseptörü olan CMKLR1, endotelyal disfonksiyon ve metabolik düzensizliğin temel bir aracısı olarak ortaya çıkmakta; böylece bağırsak mikrobiyota değişiklikleri ile diyabetik retinopati patogenezi arasında kritik bir bağlantı kurmaktadır10. Önemli ölçüde, Wnt sinyal yolu retinal vasküler homeostazın ve intestinal epitel bariyer fonksiyonunun korunmasında çift yönlü düzenleyici roller üstlenirken11, PPAR sinyal yolu hem oküler hem de intestinal dokularda inflamatuar yanıtların ve metabolik süreçlerin ana düzenleyicisi olarak görev yapar12,13. Bu moleküler oyuncular, bağırsak-retina ekseni içinde birbirine bağlı bir sinyal ağını oluşturarak diyabetle ilişkili komplikasyonlar için yeni mekanistik içgörüler ve terapötik fırsatlar sunmaktadır. Bu nedenle, bu eksen boyunca meydana gelen yapısal ve fonksiyonel değişikliklerin hedeflenmesi, DR yönetimi için gelecek vaadeden bir stratejiyi temsil etmektedir.

Geleneksel Çin Tıbbı (TCM), tarihsel olarak diyabet ve ilgili retinopati tedavisinde önemli bir rol oynamış ve terapötik kararlar sendrom farklılaştırmasına dayandırılmıştır14. Astragalus membranaceus, Pueraria lobata, Rehmannia glutinosa, Lycium barbarum, Senna obtusifolia, Leonurus japonicus, Typha angustifolia ve Whitmania pigra bileşenlerinden oluşan Qiming Granül (QMG), DR tedavisinde yaygın olarak uygulanmaktadır. Çin Ulusal Tıbbi Ürünler Yönetimi tarafından onaylanan (Onay No. Z20090036) QMG, klinik deneyleri başarıyla tamamlamış ve pazarlama izni almıştır. QMG, retinal kapillerlerdeki bazal membranın kalınlaşmasını önleyerek, perisitlerin ve retinal mikrovaskülaturanın gördüğü zararı azaltarak ve gözün yerel patolojik morfolojisini koruyarak15 koruyucu etkiler sergilemekte, bu da onu DR'yi ele almak için gelecek vadeden bir tedavi haline getirmektedir. Temel proteinleri ve inflamatuar faktörleri hedefleyerek, QMG'nin aktif bileşenleri anti-inflamatuar, antioksidan ve anti-apoptotik etkiler göstererek bağırsak-retina ekseninin modülasyonu için mekanistik bir temel oluşturur16. Bu özellikler, QMG'nin bağırsak-retina eksenini potansiyel modülasyonu için mekanistik bir temel sağlamaktadır, ancak bu bağlantıyı araştıran çok az çalışma bulunmaktadır. Bu nedenle, bu çalışma QMG'nin bağırsak-retina eksenini modüle etmedeki etkinliğini doğrulamayı ve DR'deki terapötik potansiyeli için deneysel kanıt sağlamayı amaçlamaktadır.

Bu çalışma, QMG'nin bağırsak-retina eksenini modüle etmedeki etkinliğini doğrulamak için teorik öngörüleri in vivo deneysel verilerle birleştirmektedir. Bu bulgular, QMG'nin, CMKLR1 merkezli düzenleyici ağı (Wnt5a, PPAR-γ, AP-1 ve TP53 dahil) bağırsak-retina ekseni aracılığıyla sistemik inflamasyonla eşleştirerek DR'yi iyileştirdiğini göstermekte ve QMG'yi DR için gelecek vaat eden, bağırsak-retina hedefli bir terapötik strateji olarak konumlandırmaktadır. Grafik özeti Şekil 1'de sunulmuştur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, ARRIVE kılavuzlarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Çalışma, Sichuan Scientist Biotechnology Co., Ltd. Etik İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır (IACUC ISSUE SYST-2024-011).  Çalışma tasarımını özetleyen ayrıntılı bir deneysel zaman çizelgesi Ek Şekil 1'de sunulmuştur.

Hayvan hazırlama ve tedavi

Fareler %2 isofluran inhalasyonu ile derin anestezi altına alındı. Derin anestezi altında, retro-orbital enükleasyon yoluyla kan toplandı. Kan toplama işleminin hemen ardından, retinal doku hasadı için göz küreleri enükle edildi. Ardından, ötanaziyi sağlamak amacıyla derin anestezi altında servikal dislokasyon gerçekleştirildi. Daha sonra kolon dokuları hemen diseke edildi. Yan etkiler gösteren hayvanlar derhal çalışmadan çıkarıldı ve uygun veteriner bakımı aldılar.

Rastgeleştirme ve körleme

5 haftalık ve 20 ile 30 gram arasında ağırlığa sahip erkek C57BL/6 fareler, sıcaklık ve nem dahil olmak üzere sıkı şekilde düzenlenen koşullar altında barındırılmıştır. Bir haftalık aklimatizasyonun ardından, C57BL/6 fareleri bilgisayar tarafından oluşturulan rastgele bir sayı dizisi kullanılarak üç gruba (kontrol, model ve müdahale grupları) rastgele atanmıştır. Randomizasyon dizisi, hayvanların bakımı veya sonuç değerlendirmesiyle ilgisi olmayan bir araştırmacı tarafından oluşturulmuştur.

Körlemeyi sağlamak için tüm hayvan bakımı, ilaç uygulaması ve veri toplama işlemleri, grup tahsisatından habersiz araştırmacılar tarafından gerçekleştirilmiştir. Kodlanmış grup atamaları, yalnızca tüm deneyler ve istatistiksel analizler tamamlandıktan sonra açıklanmıştır. Körleme şu kişilere uygulanmıştır: oral gavajı gerçekleştiren teknisyen; retinal histolojiyi değerlendiren patolog ve Western blot (WB) bantlarını niceliksel olarak belirleyen analist.

Örneklem büyüklüğü hesaplaması

Örneklem büyüklüğü, aynı deneysel koşullar altında retinal ganglion hücresi (RGC) sayımlarını değerlendiren öncül bir deneye dayanarak belirlenmiştir. İki yönlü anlamlılık düzeyinin (α) 0,05 ve istatistiksel gücün (1-β) 0,80 olduğu varsayıldığında, model ve müdahale grupları arasındaki RGC sayılarında klinik olarak anlamlı bir farkı tespit etmek için grup başına minimum 5 fare gerekmektedir. Yaklaşık %20'lik potansiyel bir kayıp oranı göz önünde bulundurularak, her grubun 6 fare içereceği şekilde ayarlanmıştır.

Diyabetik hayvanların oluşturulması

Boş kontrol grubuna standart diyet uygulanırken, müdahale ve model gruplarına dört hafta boyunca yüksek yağlı, yüksek şekerli diyet (HFHSD) verilmiştir. Bu diyet dönemini takiben, müdahale ve model gruplarına 35 mg/kg17,18,19,20 dozunda %1 Streptozotosin (STZ) çözeltisi ile intraperitoneal enjeksiyon yapılmıştır. Enjeksiyondan yetmiş iki saat sonra, açlık karşıtı kan glukoz seviyeleri 16,7 mmol/L'nin üzerinde olan farelerin DM modeli başarıyla oluşturulmuş kabul edilmiş ve ileri deneyler için seçilmişlerdir. DM hayvanları yüksek yağlı, yüksek şekerli diyete dört ay daha devam ederken, boş kontrol grubu standart diyetlerini sürdürmüştür.

Taksonomik doğrulama ve kalite değerlendirmesi

QMG'deki sekiz bileşen, Modernize Edilmiş Bitki Adları Arama (MPNS, http://mpns.kew.org/mpns-portal/) kullanılarak taksonomik olarak doğrulanmıştır. QMG'nin bileşim raporlamasının kalitesi, ConPhYMP aracı kullanılarak değerlendirilmiştir.

Uygulama yöntemleri

Müdahale grubundaki hayvanlara oral yolla QMG uygulandı. QMG, Zhejiang Sansheng Mandi Pharmaceutical Co., Ltd.'den satın alındı (Çin Ulusal İlaç Onay No. Z20090036). QMG süspansiyonu, QMG'nin distile su ile homojen şekilde karıştırılmasıyla hazırlandı. Müdahale grubundaki farelere, model ve boş gruplarla eşdeğer hacimdeki süspansiyon oral gavaj yoluyla verildi. Doz, FDA ve Reagan-Shaw21 tarafından önerilen vücut yüzey alanı (BSA) normalizasyon yöntemi kullanılarak, 60 kg yetişkin başına 4,5 g'lık klinik tek terapötik doza (pazarlanan formülasyonun standart birim dozu) göre hesaplandı. Yetişkin insanlar (Km = 37) ve fareler (Km = 3) arasındaki dönüşüm faktörü 12,33 olarak belirlendi ve bu da 0,9 g/kg vücut ağırlığı şeklinde bir fare dozuna karşılık geldi. Model grubu ve boş gruba, oral gavaj yoluyla eşdeğer hacimde salin verildi. Uygulamalar, 3 ay boyunca birbirini takip eden günler sabah 09:00 ile 11:00 saatleri arasında gerçekleştirildi.

Gözlem ve test göstergeleri

Genel yaşam bulguları izlemi

Terapötik müdahaleleri kapsamlı bir şekilde değerlendirmek ve potansiyel komplikasyonları tespit etmek amacıyla vücut ağırlığı, kan glukoz seviyeleri, su ve gıda tüketimi, idrar çıkışı, aktivite seviyeleri ve davranış, vücut sıcaklığının yanı sıra kürk ve cilt durumu dahil olmak üzere genel yaşamsal bulgular ve fizyolojik göstergeler sistematik olarak gözlemlenmiş ve kaydedilmiştir.

HE boyama analizi ile retinadaki morfolojik değişikliklerin gözlemlenmesi

Tüm örnekler, fiksasyonun ardından bir dizi etanol ve ksilen solüsyonu kullanılarak otomatik bir dehydrator ile işlemden geçirilmiş ve ardından parafine gömülmüştür. Sonrasında, 4 µm kalınlığında parafin kesitler alınmış, HE ile boyanmış ve nötral gum ile lam üzerine monte edilmiştir. Retinal görüntüler, 3DHISTECH Pannoramic SCAN tarayıcı kullanılarak taranmıştır. Görüntü analizi ve veri ölçümleri Image-Pro Plus ile gerçekleştirilmiştir.

ELISA analizi ile serum IL-6, TNF-α ve IL-1β tespiti

Kan örnekleri retro-orbital enükleasyon yoluyla toplanmıştır. Serum, 4 °C'de 15 dakika boyunca 1.000 × g santrifüjasyon ile ayrılmış ve analiz aşamasına kadar -80 °C'de saklanmıştır. IL‑1β, IL‑6 ve TNF‑α serum seviyeleri; reaktiflerin dengelenmesi, örneğin eklenmesi, inkübasyon, yıkama, konjugat ve substrat eklenmesi, reaksiyonun sonlandırılması, optik yoğunluk ölçümü ve standart bir eğriye dayalı konsantrasyon hesaplaması dahil olmak üzere standart prosedürlere göre ölçülmüştür. Optik yoğunluk, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm'de okunmuş ve sitokin konsantrasyonları standart eğrilere göre hesaplanmıştır.

WB analizi ile retina ve kolonla ilişkili kilit düzenleyici proteinlerin tespiti

Tek bir membran üzerinde üç bağımsız biyolojik tekrar gerçekleştirildi ve hedef proteinler için sırayla problandı. Tüm tekrarlar, eş zamanlı olarak sakrifiye edilen tek bir hayvan kohortundan elde edildi. Bir hedef proteinin moleküler ağırlığı GAPDH'ninkine çok yakın olduğunda (<5 kDa fark), sinyal çakışmasını önlemek için bağımsız membranlar üzerinde analiz edildiler. Doğru kantifikasyon sağlamak amacıyla, her membran münhasıran ya hedef protein ya da GAPDH için problandı. Şu primer antikorlar kullanıldı: GAPDH poliklonal antikor (1:5000), CMKLR1 poliklonal antikor (1:1000), Wnt5a poliklonal antikor (1:1000), TP53 poliklonal antikor (1:1000), AP-1 monoklonal antikor (1:5000) ve PPAR gamma (PPAR-γ) poliklonal antikor (1:1000). Toplam proteinler, hücre lizini ve ardından santrifügasyon ile elde edildi. Protein konsantrasyonları, BCA analizi kullanılarak belirlendi. Ekstre edilen proteinler, %12'lik ayırıcı jel kullanılarak SDS-PAGE ile ayrıştırıldı ve ardından membranlara transfer edildi. Membranlar, %5 yağsız süt içeren TBST ile bloke edildi ve uygun primer antikorlarla 4 °C'de gece boyunca inkübe edildi. Yıkamanın ardından membranlar, 1:10.000 dilüsyonda HRP-konjuge anti-rabbit veya anti-mouse sekonder antikorlarla inkübe edildi. Son olarak, protein bantları kemilüminesans görüntüleme yoluyla görselleştirildi ve analiz edildi. Görselleştirme ve veri işleme sırasında, ilgisiz moleküler ağırlık bölgelerini çıkarmak için blotlar yatay olarak kırpıldı ve şeritler arası alanlar kaldırılmadan tüm örnek şeritleri korundu. İlgisiz jel bölgelerini çıkarmak için yapılan kırpma sırasında hafif kenar bozulmaları meydana gelmiş olabilir.

16S rDNA sekanslama analizi ile bağırsak mikrobiyotasının tespiti

Terminal prosedürler öncesinde her fareden taze dışkı örnekleri toplandı. Spontane defekasyona izin vermek için fareler 10–15 dk boyunca tek tek steril kafeslere yerleştirildi. Dışkı peletleri steril penslerle hemen toplandı, steril 1,5 mL tüplere aktarıldı, sıvı azot ile şok donduruldu ve DNA ekstraksiyonuna kadar -80 °C'de saklandı. Çapraz kontaminasyonu minimize etmek için tüm prosedürler steril koşullar altında gerçekleştirildi. Mikrobiyal bütünlüğü sağlamak için defekasyon ile dondurma arasındaki süre 10 dk içinde tutuldu. Fekal genomik DNA (gDNA) örnekleri, Fecal gDNA ekstraksiyon kiti kullanılarak saflaştırıldı ve ardından 8F (5’-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3’) ve 1492R (5’-CGGTTACCTTGTTACGACTT-3’) evrensel primerleri ile polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) aracılığıyla tam uzunluktaki 16S rDNA geni amplifikasyonu yapıldı. PCR ürünleri daha sonra agaroz jel elektroforezi ile analiz edildi, saflaştırıldı ve sonraki uygulamalar için miktar tayini yapıldı. Yüksek kapasiteli sekanslama, Nanopore GridION sekanslayıcıda gerçekleştirildi. Veri analiz süreci; baz çağırma (basecalling), veri kalite kontrolü, tür anotasyonu, filogenetik ağaç oluşturma, topluluk analizi, Alfa ve Beta çeşitlilik analizi, farklı bolluktaki türlerin analizi ve topluluk fonksiyonu tahmini aşamalarını içeriyordu. Analiz sırasında NanoFilt, Usearch, R programlama dili, Python ve SILVA veri tabanı gibi çeşitli araçlar ve veri tabanları kullanıldı.

Bağırsak-retina ekseninin sistemik inflamasyon ve çok seviyeli bağırsak mikrobiyotası ile korelasyon analizi

Çok seviyeli bağırsak mikrobiyotası ile serum inflamatuar sitokinleri ve temel düzenleyici proteinler arasındaki potansiyel ilişkileri araştırmak için Luoning Bio-Cloud platformu kullanılarak korelasyon analizi gerçekleştirilmiştir. Başlangıçta, Kingdom, Phylum, Class, Order, Family, Genus ve Species seviyelerindeki tür bolluk verileri sekanslama sonuçlarından çıkarılmıştır. Serum inflamatuar sitokinleri ve protein ekspresyon seviyeleri dahil olmak üzere fizikokimyasal faktörler, bir çevresel faktör dosyasında derlenmiştir. Korelasyonların güvenilirliğini ve görselleştirilmesini sağlamak amacıyla, mikrobiyal bolluk ile klinik ölçüm birimleri arasındaki ölçek farklarını gidermek için veriler normalizasyona tabi tutulmuştur. Korelasyon katsayıları (R-değerleri) ve bunlara karşılık gelen anlamlılık seviyeleri (P-değerleri) hesaplanmıştır. Sonuçlar, renk gradyanlarının korelasyonun gücünü ve yönünü belirttiği (kırmızı pozitif korelasyonu, mavi negatif korelasyonu temsil eder) ve yıldızların (**) istatistiksel anlamlılığı (P < 0.01) gösterdiği bir korelasyon ısı haritası kullanılarak görselleştirilmiştir.

İstatistiksel yöntemler

Tüm istatistiksel analizler ve görselleştirmeler GraphPad Prism kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Normal dağılıma uyan veriler için ortalamaların karşılaştırılmasında t-testi kullanılmıştır. Verilerin normalden saptığı durumlarda Kruskal-Wallis testi uygulanmıştır. Değişkenler arasındaki ilişkiler için Spearman veya Pearson korelasyonu yapılmıştır. Tüm istatistiksel testler çift yönlü olarak yürütülmüş ve istatistiksel anlamlılık düzeyi 0,05 olarak belirlenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

General situation of experimental animals

Blood glucose levels were significantly elevated in the model group (27.21 ± 6.03 mmol/L) compared with the blank group (P < 0.001), indicating the successful induction of the DM model. During the study period, the experimental animals showed stable body weight, continuous water and food intake, normal urine output, body temperature, healthy fur and skin condition, and normal behavior during the experiment.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Diyabetik retinopati (DR), kronik hiperglisemi, inflamasyon ve metabolik disregülasyon tarafından tetiklenen karmaşık bir nörovasküler komplikasyondur22. Amerikan Oftalmoloji Akademisi, DR'yi neovaskülarizasyonun başlangıcı ile karakterize edilen non-proliferatif DR ve proliferatif DR olarak kategorize eder23. Mevcut terapötik stratejilerin sınırlılıkları göz önüne alındığında, yeni mekanizmaların araştırılması DR'nin tedavisi için gelecek vaat eden bir yön olarak ortaya çı...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, bu makalede rapor edilen çalışmayı etkilediği düşünülebilecek herhangi bir bilinen rakip finansal çıkarı veya kişisel ilişkisi olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Yazar, bu araştırmayı tamamlamak için büyük destek ve yardım sağlayan tüm ekip üyelerine teşekkürlerini sunar .

Bu araştırma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe Numarası: 82474580) ve Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hastanesi Hastane Vakfı Serbest Araştırma Projesi (No. 23ZYTS1601) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AP-1 monoklonal antikoruProteintech66313-1-IG1:5000
CMKLR1 poliklonal antikoruAffinityAF52911:1000
GAPDH poliklonal antikoruAffinityAF70211:5000
GoatAnti-Mouse IgG(H+L) HRPMULTI SCIENCESGAM00721:10000
GoatAnti-Rabbit IgG(H+L) HRPMULTI SCIENCESGAR00721:10000
GraphPad Prism/versiyon 9.5
Image-Pro PlusMedia Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USAversiyon 6.0
Luoning Bio-Cloud platformu http://www.biomediv.cn/login.html
Mouse IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA KitiElabscienceE-EL-M0037Serum sitokin tayini
Mouse IL-6(Interleukin-6) ELISA KitiElabscienceE-EL-M0044Serum sitokin tayini
Mouse TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA KitiElabscienceE-EL-M3063Serum sitokin tayini
NanoFilt/versiyon 2.7.1
Nanopore GridION sekanslama cihazıOxford Nanopore Technologieshttps://store.nanoporetech.com/gridion.html
Pannoramic SCAN II3DHISTECH Pannoramic SCAN tarayıcı https://www.3dhistech.com/scanners/pannoramic-scan-ii-digital-scanner/
PPAR gamma (PPAR-γ) poliklonal antikoru ImmunoWaybs-0530R1:1000
Python/versiyon 3.7.4
Qiming GranuleZhejiang Sansheng Mandi Pharmaceutical Co., Ltd.Chinese National Drug Approval No. Z200900360.9 g/kg, oral gavage
R programlama dili/versiyon 4.0.3
SILVA veri tabanı/versiyon 138
Streptozotosin (STZ)Sigma-AldrichS013035 mg/kg, i.p.
TP53 poliklonal antikoruAbcamab1314421:1000
Usearch/versiyon 10.0.240
Wnt5a poliklonal antikoruProteintech55184-1-AP1:1000
Zymo Research BIOMICS DNA Microprep KitiZymo ResearchD4301Fekal gDNA ekstraksiyonu

Kaynaklar

  1. Lei C, et al. Homocysteine and diabetic retinopathy. Exp Eye Res. 2026;262:110729.
  2. Owens DR, et al. IDF diabetes Atlas: A worldwide review of studies utilizing retinal photography to screen for diabetic retinopathy from 2017 to 2024 inclusive. Diabetes Res Clin Pract. 2025;226:112346.
  3. Zhu J, Huang J, Sun Y, Xu W, Qian H. Emerging role of extracellular vesicles in diabetic retinopathy. Theranostics. 2024;14(4):1631–1646.
  4. Xie L, Lin W. The role of gut microbiota dysbiosis in the inflammatory pathogenesis of diabetic retinopathy. Front Immunol. 2025;16:1604315.
  5. Niu J, Liu Y, Peng H, Chen J, Chen L. Early-stage diabetic retinopathy: gut-metabolic triggers, immune-neurodegeneration, and interventions. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2025;263(10):2723–2736.
  6. Rowan S, et al. Involvement of a gut-retina axis in protection against dietary glycemia-induced age-related macular degeneration. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017;114(22):E4472–E4481.
  7. Rzeczycki P, Pęciak O, Plust M, Droździk M. Gut Microbiota in the Regulation of Intestinal Drug Transporters: Molecular Mechanisms and Pharmacokinetic Implications. Int J Mol Sci. 2025;26(24):11897.
  8. Yang H, et al. Mediating role of aging and obesity in the relationship between dietary index for gut microbiota and metabolic syndrome and its potential regulatory mechanisms. Eur J Med Res. 2025;31(1):137.
  9. Zahavi EE, et al. Repeat-element RNAs integrate a neuronal growth circuit. Cell. 2025;188(16):4350–4365.e22.
  10. Dander E, et al. The chemerin/CMKLR1 axis regulates intestinal graft-versus-host disease. JCI Insight. 2023;8(5):e154440.
  11. Zhang J, et al. Therapeutic targets in the Wnt signaling pathway: Treating cancer with specificity. Biochem Pharmacol. 2025;236:116848.
  12. Liu M, Lim ST, Song W, Coffman TM, Wang X. Beyond lipids: fenofibrate in diabetic retinopathy and nephropathy. Trends Pharmacol Sci. 2026;47(3):325–341.
  13. Wu Y, et al. The active ingredient β-sitosterol in the anti-inflammatory agents alleviates perianal inflammation in rats by inhibiting the expression of Srebf2, activating the PPAR signaling pathway, and altering the composition of gut microbiota. Int Immunopharmacol. 2025;152:114470.
  14. Lin T, Chen C, Zhao LC, Zhu HY, Li W. The beneficial effects of Traditional Chinese Medicine on diabetic retinopathy: mechanisms, therapeutics, and prospects. Acupunct Herb Med 2026;6(2):188–204.
  15. Huo J, et al. Evaluation of individualized treatment of nonproliferative diabetic retinopathy: a multicenter, randomized, parallel-controlled study. J Tradit Chin Med. 2022;42(1):90–95.
  16. Huang Y, et al. Pharmacological mechanism and clinical study of Qiming granules in treating diabetic retinopathy based on network pharmacology and literature review. J Ethnopharmacol. 2023;302(Pt A):115861.
  17. Salma B, et al. Ameliorative Efficacy of the Cassia auriculata Root Against High-Fat-Diet + STZ-Induced Type-2 Diabetes in C57BL/6 Mice. ACS Omega. 2020;6(1):492–504.
  18. Srinivasan K, Viswanad B, Asrat L, Kaul CL, Ramarao P. Combination of high-fat diet-fed and low-dose streptozotocin-treated rat: a model for type 2 diabetes and pharmacological screening. Pharmacol Res. 2005;52(4):313–320.
  19. Liu Y, Deng J, Fan D. Ginsenoside Rk3 ameliorates high-fat-diet/streptozocin-induced type 2 diabetes mellitus in mice via the AMPK/Akt signaling pathway. Food Funct. 2019;10(5):2538–2551.
  20. Hu RY, et al. AFG Ameliorates Diabetic Retinopathy through AMPK-Dependent Autolysosomal Pathway: From Network Pharmacology to In Vivo and In Vitro Validation. J Agric Food Chem. 2026;74(2):2124–2139.
  21. Reagan-Shaw S, Nihal M, Ahmad N. Dose translation from animal to human studies revisited. FASEB J. 2008;22(3):659–661.
  22. Zou Q, et al. Oxidative stress in diabetic retinopathy. Clin Chim Acta. 2026;584:120871.
  23. Clements JN, Mesawich J, Twisdale C. Current and Emerging Pharmacologic Therapies for Diabetic Retinopathy. Pharmacotherapy. 2026;46(3):e70119.
  24. Rezvani Z, Khani F, Afarid M, Asadian F, Takhshid MA. Clinical values of systemic inflammatory indices in diabetic retinopathy. Clin Exp Optom. 2026;109(3):371–385.
  25. Zhu Z, et al. Targeting the CMKLR1-Mediated Signaling Rebalances Immunometabolism State in Middle-Age Testicular Macrophages. Adv Sci (Weinh). 2026;13(14):e15166.
  26. Lin Y, et al. Epithelial chemerin-CMKLR1 signaling restricts microbiota-driven colonic neutrophilia and tumorigenesis by up-regulating lactoperoxidase. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022;119(29):e2205574119.
  27. Puthanmadhom Narayanan S, et al. Epigenetic Alterations Are Associated With Gastric Emptying Disturbances in Diabetes Mellitus. Clin Transl Gastroenterol. 2020;11(3):e00136.
  28. Wang L, et al. Chemerin/CMKLR1 Axis Promotes the Progression of Proliferative Diabetic Retinopathy. Int J Endocrinol. 2021;2021:4468625.
  29. Zheng C, et al. α-NETA down-regulates CMKLR1 mRNA expression in ileum and prevents body weight gains collaborating with ERK inhibitor PD98059 in turn to alleviate hepatic steatosis in HFD-induced obese mice but no impact on ileal mucosal integrity and steatohepatitis progression. BMC Endocr Disord. 2023;23(1):9.
  30. Dranse HJ, et al. The impact of chemerin or chemokine-like receptor 1 loss on the mouse gut microbiome. PeerJ. 2018;6:e5494.
  31. Flores-Hernández E, et al. Canonical and non-canonical Wnt signaling are simultaneously activated by Wnts in colon cancer cells. Cell Signal. 2020;72:109636.
  32. Qi Y, et al. Heat-inactivated Bifidobacterium adolescentis ameliorates colon senescence through Paneth-like-cell-mediated stem cell activation. Nat Commun. 2023;14(1):6121.
  33. Ou W, et al. Cooperation of Wnt/β-catenin and Dll1-mediated Notch pathway in Lgr5-positive intestinal stem cells regulates the mucosal injury and repair in DSS-induced colitis mice model. Gastroenterol Rep (Oxf). 2024;12:goae090.
  34. Dong Y, et al. Berberine ameliorates DSS-induced intestinal mucosal barrier dysfunction through microbiota-dependence and Wnt/β-catenin pathway. Int J Biol Sci. 2022;18(4):1381–1397.
  35. Escandon P, et al. The role of peroxisome proliferator-activated receptors in healthy and diseased eyes. Exp Eye Res. 2021;208:108617.
  36. Blot G, et al. Perilipin 2-positive mononuclear phagocytes accumulate in the diabetic retina and promote PPARγ-dependent vasodegeneration. J Clin Invest. 2023;133(19):e161348.
  37. Zhou W, et al. TREM2-dependent activation of microglial cell protects photoreceptor cell during retinal degeneration via PPARγ and CD36. Cell Death Dis. 2024;15(8):623.
  38. Bala Kumar S, et al. Gut microbial metabolites targeting JUN in renal cell carcinoma via IL-17 signaling pathway: network pharmacology approach. Mol Divers. 2026;30(1):613–632.
  39. Wang L, et al. Gut microbial bile acid metabolite skews macrophage polarization and contributes to high-fat diet-induced colonic inflammation. Gut Microbes. 2020;12(1):1–20.
  40. Hagan T, et al. Antibiotics-Driven Gut Microbiome Perturbation Alters Immunity to Vaccines in Humans. Cell. 2019;178(6):1313–1328.e13.
  41. Meng Y, et al. Jinlida ameliorates diabetic kidney disease via gut microbiota-dependent production of pyridoxamine targeting renal AGEs/RAGE and TGF-β pathways. Phytomedicine. 2026;150:157744.
  42. Zhou H, Zhang L, Ding C, Zhou Y, Li Y. Upregulation of HMOX1 associated with M2 macrophage infiltration and ferroptosis in proliferative diabetic retinopathy. Int Immunopharmacol. 2024;134:112231.
  43. Mohammad HMF, et al. Neuroprotective effect of levetiracetam in mouse diabetic retinopathy: Effect on glucose transporter-1 and GAP43 expression. Life Sci. 2019;232:116588.
  44. Peng H, et al. Autophagy and senescence of rat retinal precursor cells under high glucose. Front Endocrinol (Lausanne). 2023;13:1047642.
  45. Ding Y, Chen L, Xu J, Feng Y, Liu Q. APAF1 Silencing Ameliorates Diabetic Retinopathy by Suppressing Inflammation, Oxidative Stress, and Caspase-3/GSDME-Dependent Pyroptosis. Diabetes Metab Syndr Obes. 2024;17:1635–1649.
  46. Yang T, et al. Clinical study on the modulating effects of Jiaotaiwan on the modulating effects of microbiota–SCFAs–neurotransmitter/immune axis in patients with depression. Acupunct Herb Med 2025;5(4):456–468.
  47. Luo XX, et al. Effect of qiming granule on retinal blood circulation of diabetic retinopathy: a multicenter clinical trial. Chin J Integr Med. 2009;15(5):384–388.
  48. Hu Z, et al. Add-on effect of Qiming granule, a Chinese patent medicine, in treating diabetic macular edema: A systematic review and meta-analysis. Phytother Res. 2021;35(2):587–602.
  49. Yang M, et al. The Efficacy and Safety of Qiming Granule for Dry Eye Disease: A Systematic Review and Meta-Analysis. Front Pharmacol. 2020;11:580.
  50. Ma XF, et al. Efficacy and Safety of Qiming Granule for Nerve Injury Associated with Non-proliferative Diabetic Retinopathy: A Multicenter, Randomized, Non-inferiority, Active-Controlled Clinical Trial. Chin J Integr Med. 2026;32(3):195–203.
  51. Zhou Q, et al. Qiming granules regulate Müller cell pyroptosis and the P2X7R/NLRP3 immune inflammatory pathway in diabetic retinopathy. Chin Med. 2026;21(1):89.
  52. Zhou L, Qin T, Lv Y, Wu Z. Qiming Granules Ameliorate Diabetic Retinopathy by Regulating the PI3K/Akt Signaling Pathway. J Ocul Pharmacol Ther. 2026;42(3):202–212.
  53. Li HD, Li MX, Zhang WH, Zhang SW, Gong YB. Effectiveness and safety of traditional Chinese medicine for diabetic retinopathy: A systematic review and network meta-analysis of randomized clinical trials. World J Diabetes. 2023;14(9):1422–1449.
  54. Chen F, et al. Isorhamnetin promotes functional recovery in rats with spinal cord injury by abating oxidative stress and modulating M2 macrophages/microglia polarization. Eur J Pharmacol. 2021;895:173878.
  55. Naudhani M, Thakur K, Ni ZJ, Zhang JG, Wei ZJ. Formononetin reshapes the gut microbiota, prevents progression of obesity and improves host metabolism. Food Funct. 2021;12(24):12303–12324.
  56. Qu Y, et al. Kaempferol Alleviates Murine Experimental Colitis by Restoring Gut Microbiota and Inhibiting the LPS-TLR4-NF-κB Axis. Front Immunol. 2021;12:679897.
  57. Saikia L, et al. Therapeutic Potential of Quercetin in Diabetic Neuropathy and Retinopathy: Exploring Molecular Mechanisms. Curr Top Med Chem. 2024;24(27):2351–2361.
  58. Yao H, et al. Kaempferol Protects Blood Vessels From Damage Induced by Oxidative Stress and Inflammation in Association With the Nrf2/HO-1 Signaling Pathway. Front Pharmacol. 2020;11:1118.
  59. Zhang HX, Li YY, Liu ZJ, Wang JF. Quercetin effectively improves LPS-induced intestinal inflammation, pyroptosis, and disruption of the barrier function through the TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway in vivo and in vitro. Food Nutr Res. 2022;66:10.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

CMKLR1 AğıBağırsak MikrobiyotasıRetinal Histopatolojiİnflamatuar SitokinlerWestern Blot16S rDNA Sekanslama
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.