Bu randomize kontrollü çalışma, akut iskemik inme bakımına yardımcı olarak standart akupunktur ile modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonu'nun birlikte kullanımına yönelik tekrarlanabilir bir protokol sunmaktadır. Müdahalenin, 28. gündeki hafif nörolojik iyileşme ve seçili biyobelirteç farkları ile ilişkili olduğu görülmüştür; katılımcı düzeyindeki analizler, aracılık etkisini veya nedensel bir aracılık iddiasını desteklememiştir.
Araştırma makalesi
Akut İskemik İnme İçin Standart Akupunktur ve Modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonu: Randomize Kontrollü Bir Çalışma
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Akut iskemik inmeye sistemik inflamasyon ve intestinal mikrobiyal bozulma eşlik eder. Bu tek merkezli, değerlendiricisi körleştirilmiş randomize kontrollü çalışma, standart bakıma eklenen standardize akupunktur ile modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonunun, erken nörolojik iyileşmeyi artırıp artırmadığını ve önceden tanımlanmış bağırsak ve inflamatuar biyobelirteçlerle ilişkili olup olmadığını test etti. Görüntüleme ile doğrulanmış, 72 saat içinde gelişen akut iskemik inmeli ve Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği (NIHSS) puanı 4–15 arasında olan yetişkinler, grup başına 64 katılımcı olacak şekilde 28 gün boyunca standart bakım veya kombine müdahale kollarına 1:1 oranında randomize edildi. Birincil sonlanım noktası, başlangıç NIHSS, yaş, cinsiyet, reperfüzyon tedavisi ve başlangıçtan randomizasyona kadar geçen süreye göre düzeltilmiş 28. gün NIHSS puanıydı ve eksik sonuçlar 30 katlı çoklu imputasyonla yönetildi. İkincil ve keşif amaçlı sonuçlar arasında Barthel İndeksi, 90. gün modifiye Rankin Ölçeği (mRS), advers olaylar, inflamatuar belirteçler, lipopolisakkarit (LPS), fekal mikrobiyal çeşitlilik, seçili cinsler ve kısa zincirli yağ asitleri yer aldı. Çoklu imputasyon analizi, müdahale grubunda daha düşük 28. gün NIHSS puanı tahmin etti (düzeltilmiş fark: −1,30 puan; %95 güven aralığı: −2,36 ila −0,24; P = 0,017). 28. gün Barthel İndeksi daha yüksekti, ancak 90. gün NIHSS, Barthel İndeksi ve gözlemlenen mRS 0–2 arasında anlamlı bir fark yoktu. 28. günde müdahale grubu daha yüksek Shannon çeşitliliği ve fekal bütirat ile daha düşük interlökin-6 ve LPS değerlerine sahipti. Katılımcı düzeyindeki bütirat, interlökin-6, LPS ve Shannon çeşitliliği değişimleri NIHSS değişimi ile anlamlı düzeyde ilişkili değildi; bu nedenle aracılık analizi yapılmadı. Müdahaleye bağlı herhangi bir ciddi advers olay tespit edilmedi. Kombine müdahale, mütevazı bir erken nörolojik iyileşme ve seçili biyobelirteç farklılıkları ile ilişkiliydi, ancak biyolojik bulgular keşif niteliğindedir ve nedensel bir beyin-bağırsak yolu oluşturmamaktadır.
Giriş
İnme, dünya çapında önde gelen ölüm ve uzun süreli engellilik nedenlerinden biri olmaya devam etmektedir ve iskemik inme vakaların çoğunu oluşturmaktadır. Standart bakım; hızlı tanı, endike olduğu durumlarda reperfüzyon, antiplatelet tedavi, risk faktörlerinin yönetimi, komplikasyonların önlenmesi ve rehabilitasyon üzerinde durur1,2. Bu önlemlere rağmen, kalıcı nörolojik defisitler yaygındır ve bu durum tekrarlanabilir yardımcı müdahalelerin değerlendirilmesini teşvik etmektedir.
İskemi sonrası inflamasyon, endotelyal ve kan-beyin bariyeri stresi, periferik immün aktivasyon ve metabolik bozukluklar, sekonder hasara ve iyileşme sürecine katkıda bulunur3. İnme ayrıca intestinal motiliteyi, geçirgenliği, mikrobiyal kompozisyonu ve bağırsak kaynaklı immün sinyallemeyi değiştirerek, genellikle beyin-bağırsak aksı olarak tanımlanan çift yönlü ilişkiler oluşturabilir4.
Klinik çalışmalar, akut iskemik inmeyi bağırsak disbiyozu, değişmiş kısa zincirli yağ asidi (SCFA) profilleri ve daha kötü sonuçlarla ilişkilendirmiştir5. Bütirat, epitel bariyer bütünlüğünü desteklediği ve immün sinyalizasyonu düzenlediği için ilgi çekicidir6. Bu gözlemler, paralel değişimlerin aracılık ettiğini kanıtlamadığının bilinciyle, nörolojik sonuçların yanı sıra mikrobiyal çeşitliliğin, mikrobiyal metabolitlerin, endotoksin maruziyetinin ve inflamatuar mediyatörlerin ölçülmesini haklı çıkarmaktadır.
Akupunktur, inme için tamamlayıcı bir tedavi olarak değerlendirilmiştir; ancak yayınlanan çalışmalar zamanlama, akupunktur noktası seçimi, sıklık ve sonuç değerlendirmesi açısından farklılıklar göstermektedir7,8. Bu nedenle, tekrarlanabilir bir protokolün açık iğneleme, stimülasyon, tutma, güvenlik ve uyum prosedürlerine ihtiyacı vardır. Xiaoxuming Decoction, inme ile ilişkili durumlar için kullanılan klasik bir bitkisel formüldür. Sistematik ve farmakolojik çalışmalar olası faydalar bildirmektedir, ancak klinik kanıtlar örneklem büyüklüğü, heterojenlik ve yanlılık riski nedeniyle sınırlı kalmaktadır9,10. İki gruplu kombine müdahale tasarımında, bu formülün katkısı akupunkturlan ayrılamaz.
Bu çalışma, klinik sonuçlar ile önceden tanımlanmış keşifsel bağırsak ve inflamatuar biyobelirteçleri kullanarak standartlaştırılmış kombine bir müdahale değerlendirmiştir11. Hipotez, standart bakıma standartlaştırılmış akupunktur ile modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonu eklenmesinin, erken nörolojik iyileşmeyi artıracağı ve önceden tanımlanmış beyin-bağırsak aksı ile ilgili biyobelirteçleri olumlu yönde değiştireceği yönündeydi.
Protokol
Bu çalışma için etik onay, 10 Haziran 2025 tarihinde Dazhou Şehri Geleneksel Çin Tıbbı ve Batı Tıbbı Hastanesi Tıbbi Etik Komitesi tarafından verilmiştir (onay no. 2025–29; 9 Haziran 2027 tarihine kadar geçerlidir). Randomizasyon öncesinde her katılımcı veya yasal olarak yetkilendirilmiş temsilcisi yazılı bilgilendirilmiş onam vermiştir. Onam; akupunkturu, bitkisel tedaviyi, kan ve dışkı örneklemesini, mikrobiyom veri korumasını ve standart bakımdan ödün vermeden biyolojik örneklemeden çekilme hakkını kapsamaktadır. Prosedürler Helsinki Deklarasyonu'na uygun olarak yürütülmüştür. Protokolde kullanılan araştırma araçları Malzemeler Tablosunda listelenmiştir. Katılımcı alımı başlamadan önce kayıt işlemi tamamlanmadığı için çalışma prospektif olarak kaydedilmemiştir.
1. Çalışma tasarımı ve randomizasyon
Katılımcılar 1 Mart ile 31 Aralık 2025 tarihleri arasında toplandı ve her bir katılımcı 90 gün boyunca takip edildi. Çalışmada, 28 günlük aktif müdahalenin yer aldığı tek merkezli, değerlendirici körlemesi yapılmış, paralel grup tasarımı kullanıldı. Uygun katılımcılar 1:1 oranında standart bakım veya standart bakım artı akupunktur ve modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonu gruplarına atandı. Randomizasyon, bilgisayar tarafından oluşturulan 4'lü veya 6'lı bloklar kullanılarak yapıldı ve başlangıç NIHSS skoruna (4–8 karşı 9–15) göre tabakalandırıldı. Atamalar, sıralı numaralandırılmış, opak ve mühürlü zarflar kullanılarak gizlendi.
28 günlük son müdahale 28 Ocak 2026 tarihinde tamamlanmış, son takip 31 Mart 2026 tarihinde sona ermiş, veri tabanı 15 Nisan 2026 tarihinde kilitlenmiş ve önceden belirlenmiş analizler 30 Nisan 2026 tarihine kadar tamamlanmıştır. Çalışma CONSORT prensiplerine12 uygun olarak yürütülmüştür; katılımcı akışı Şekil 1'de gösterilmiş ve değerlendirme takvimi Tablo 1'de sunulmuştur.
2. Katılımcı taraması ve kaydı
Bilgisayarlı tomografi veya manyetik rezonans görüntüleme ile doğrulanmış akut iskemik inme hastaları, semptomların başlangıcından veya son bilinen iyi durumda oldukları zamandan sonraki 72 saat içinde tarandı. Uygun katılımcılar; 40–80 yaş arası, başlangıç National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS) puanı 4–15 olan, acil değerlendirme sonrası vital bulguları stabil olan, tahsis edilen müdahaleye 24 saat içinde başlayabilme yeteneğine sahip ve kan ile dışkı örnekleri vermeye istekli yetişkinlerdi. NIHSS değerlendirmeleri, eğitimli değerlendiriciler tarafından gerçekleştirildi13.
Dışlama kriterleri şunlardı: intraserebral kanama; enfarktüs olmaksızın geçici iskemik atak; koma; planlanmış dekompresif cerrahi; güvenli olmayan oral alım; sistemik antibiyotikler gerektiren aktif enfeksiyon; son 4 hafta içinde antibiyotik, probiyotik takviyesi veya prebiyotik takviyesi kullanımı; inflamatuar bağırsak hastalığı; kronik diyare; son 6 ay içinde gastrointestinal cerrahi; malignite; şiddetli hepatik veya renal disfonksiyon; kontrol altına alınamayan hipertansiyon; stabil olmayan koroner hastalık; uygun olmayan aritmi; trombosit sayısı < 80 × 109/L; akupunktura karşı kontrendikasyon; herbal formüle karşı alerji; gebelik veya laktasyon; son 3 ay içinde başka bir girişimsel çalışmaya katılım veya takibi tamamlama yetersizliği. Rutin Çin diyetleri tam olarak standartlaştırılamadığı için sıradan bitkisel gıdalar, turşu sebzeler ve fermente tofu yasaklı ürünler olarak sınıflandırılmadı.
3. Standart bakım ve mikrobiyomla ilgili maruziyetler
Her iki grup da, endike olduğunda intravenöz tromboliz ve/veya mekanik trombektomi; antiplatelet, lipid düşürücü, kan basıncı ve glukoz yönetimi; hidrasyon ve beslenme; disfaji taraması; pnömoni ve derin ven trombozunun önlenmesi; rehabilitasyon ve sekonder prevensiyonu içeren kılavuz yönlendirmeli bakım almıştır14. Reperfüzyon tedavisi, çalışmaya katılım nedeniyle geciktirilmemiş veya değiştirilmemiştir.
Rastgele seçimelemeden 28. güne kadar çalışma dışı akupunktur, moksibüsyon, inme ile ilgili bitkisel reçeteler, probiyotik/prebiyotik/sinbiyotik takviyeler ve mikrobiyota hedefli preparatların kullanımı yasaklanmıştır. Katılımcılara ve bakım verenlere, bu kısıtlamaların rutin gıdalardan ziyade takviyeler ve piyasaya sürülmüş probiyotik ürünler için geçerli olduğu bildirilmiştir.
Reperfüzyon tedavisi ve protokol sapmaları kaydedildi. Diyet, disfaji şiddeti, enteral beslenme, randomizasyon sonrası antibiyotik kullanımı, proton pompası inhibitörü kullanımı, konstipasyon ve hastanede yatış süresi, mikrobiyomla ilişkili potansiyel karıştırıcı faktörler olarak kaydedildi. Bu değişkenler, mikrobiyom istatistik modellerine kovaryat olarak dahil edilmedi ve bu nedenle kalıntılı karıştırıcı faktörler olarak değerlendirildi.
4. Tahsis gizlemesi
Randomizasyon dizisi, bağımsız bir istatistikçi tarafından oluşturulmuştur. Ardışık numaralandırılmış, opak ve mühürlü zarflar; katılımcı alımı, tedavi, sonuç değerlendirmesi, laboratuvar çalışmaları veya istatistiksel analizlerle ilgisi olmayan bir koordinatör tarafından hazırlanmıştır. Bir sonraki zarf, ancak bilgilendirilmiş onam alındıktan, uygunluk onaylandıktan ve başlangıç değerlendirmeleri tamamlandıktan sonra açılmıştır. Randomizasyon dizisi, temel analiz tamamlanana kadar sonuç değerlendiricilerinin, laboratuvar personelinin ve analizcilerin erişemeyeceği, şifreyle korunan bir dosyada saklanmıştır.
5. Sonuç, laboratuvar ve analiz körlemesi
NIHSS, Barthel İndeksi ve modifiye Rankin Ölçeği (mRS) değerlendirmeleri, tedavi uygulama sürecinden bağımsız değerlendiriciler tarafından gerçekleştirilmiştir. Katılımcılara ve bakım verenlere, sonuç değerlendiricilerine tedavi atamalarını açıklamamaları talimatı verilmiştir. Biyolojik örnekler kodlanmış tanımlayıcılar kullanılarak etiketlenmiş; laboratuvar personeli ve istatistikçiler, önceden belirlenmiş analizler tamamlanana kadar grup kodlarına karşı kör tutulmuştur. Yanlışlıkla körlemenin bozulduğu durumlar belgelenmiştir.
6. Standartlaştırılmış manuel akupunktur
Akupunktur, tedavi eden nörolog hemodinamik stabiliteyi ve kabul edilebilir kanama riskini onayladıktan sonra, randomizasyonu takip eden 24 saat içinde başlatılmıştır. Tedavi, haftada 5 gün, günde bir kez 30 dakikalık seanslar şeklinde 4 hafta boyunca, toplamda planlanan 20 seans olarak programlanmıştır.
Katılımcılar güvenli bir şekilde konumlandırıldı ve iğneleme işleminden önce cilt dezenfekte edildi. Baihui (GV20), Shuigou (GV26), bilateral Fengchi (GB20), Quchi (LI11), Hegu (LI4), Zusanli (ST36), Yanglingquan (GB34) ve Sanyinjiao (SP6) noktaları, Tablo 215'de belirtilen yanallık ve derinliğe göre iğnelendi.
0.25 mm × 40 mm ölçülerinde steril tek kullanımlık paslanmaz çelik akupunktur iğneleri kullanılmıştır. İğneler, akupunktura ve vücut yapısına bağlı olarak 10–25 mm derinliklere yerleştirilmiştir. Deqi veya lokal bir iğneleme yanıtı elde edilene kadar manuel kaldırma-itme ve döndürme teknikleri uygulanmıştır. İğneler 30 dk boyunca tutulmuş ve her 10 dk'da bir manuel olarak yeniden uyarılmıştır. Elektroakupunktur kullanılmamıştır.
Akupunktur, en az 5 yıllık klinik deneyime sahip lisanslı akupunktur uzmanları tarafından uygulanmıştır. Ateş, stabil olmayan kan basıncı, nörolojik kötüleşme, aktif kanama, şiddetli ajitasyon veya yorgunluk durumlarında ya da katılımcının reddetmesi halinde seanslar ertelenmiştir. Erteleme nedeni ve buna bağlı gelişen her türlü advers olay kaydedilmiştir.
7. Modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonu
Her bir günlük doz; Ephedrae Herba 6 g, Cinnamomi Ramulus 9 g, Paeoniae Radix Alba 12 g, Saposhnikoviae Radix 9 g, Zingiberis Rhizoma Recens 6 g, Glycyrrhizae Radix et Rhizoma 6 g, Angelicae Sinensis Radix 10 g, Chuanxiong Rhizoma 10 g, Astragali Radix 20 g, Poria 15 g ve Paeoniae Radix Rubra 12 g içeriyordu. Reçete edilen ham bitkilerin kimlikleri hazırlık öncesinde hastane eczanesi tarafından doğrulanmış olup, rutin dağıtım ve dekoksiyon prosedürleri takip edilmiştir. Formül Tablo 39˒16 içerisinde detaylandırılmıştır.
Yalnızca önceden tanımlanmış modifikasyonlara izin verildi. Kabızlık için 10 g Cannabis Fructus eklenebildi, gevşek dışkı için Poria miktarı 20 g'a çıkarılabildi ve belirgin spontan terleme için Astragali Radix miktarı 30 g'a çıkarılabildi. Her modifikasyon, atlanan doz, kusma atağı ve tedavi kesintisi kaydedildi.
Günlük bir doz hastane eczanesinde dekoksiyon yöntemiyle hazırlanmış ve 400 mL'ye konsantre edilmiştir. Hazırlanan karışım, iki adet 200 mL'lik porsiyona ayrılmış ve 28 gün boyunca kahvaltı ve akşam yemeğinden sonra uygulanmıştır. Güvenli olmayan yutma, sürekli kusma, alerji, alanin/aspartat aminotransferaz durumlarında uygulama durdurulmuştur. >3× tahmini glomerüler filtrasyon hızının normal üst sınırı <45 mL/dak/1,73 m²2, kontrol altına alınamayan kan basıncı, klinik olarak önemli taşikardik aritmi, yeni gelişen göğüs ağrısı veya araştırmacı tarafından belirlenen risk.
8. Kontrol grubu kısıtlamaları
Kontrol grubuna atanan katılımcılar yalnızca standart bakım aldı. Protokol dışı akupunktur, moksibüsyon, inme ile ilgili bitkisel tedavi, probiyotik/prebiyotik/sinbiyotik takviyeler ve mikrobiyota hedefli ürünlerin kullanımı 28. güne kadar yasaklandı. Bu müdahalelerin herhangi bir kullanımı, protokol sapması olarak kaydedildi.
9. Uyum ve güvenlik izlemi
Akupunktur uyumu, tamamlanan seans sayısının planlanan 20 seansa bölünmesiyle hesaplandı. Bitkisel tedavi uyumu, iade edilen paketler ve ilaç günlükleri kullanılarak değerlendirildi. Protokole uyum, en az 16 akupunktur seansının tamamlanması ve reçete edilen dekoksiyon dozlarının en az %80'inin tüketilmesi olarak tanımlandı. Yatan hastalar günlük olarak gözlemlendi ve ayakta tedavi gören hastalar planlanmış takip temaslarında izlendi. Kaydedilen advers olaylar arasında lokal kanama, hematom, ağrı, baş dönmesi, senkop, enfeksiyon, gastrointestinal semptomlar, döküntü, hepatik veya renal anomaliler, çarpıntı, kan basıncı dalgalanması ve alerji yer aldı. Ciddi advers olaylar ve bunların ilişkilendirmeleri, iki klinisyen tarafından bağımsız olarak ilişkisiz, muhtemelen ilişkili, büyük olasılıkla ilişkili veya kesinlikle ilişkili şeklinde sınıflandırıldı.
10. Klinik sonuç değerlendirmesi
NIHSS, başlangıçta ve 14, 28 ve 90. günlerde değerlendirildi. Başlangıç NIHSS değerine göre düzeltilmiş 28. gün NIHSS değeri, birincil sonlanım noktasıydı. Barthel İndeksi başlangıçta ve 28 ile 90. günlerde değerlendirildi; mRS ise 90. günde değerlendirildi. Tekrarlayan inme, tüm nedenlere bağlı ölüm ve advers olaylar 90. güne kadar kaydedildi17. 90. gündeki olumlu sonuç, mRS 0–2 olarak tanımlandı. Klinik ve biyolojik sonuçlar, değerlendirme zaman noktaları, tanımlar ve analiz sınıflandırmaları Tablo 4'te özetlenmiştir.
11. Kan toplama ve biyobelirteç analizleri
Venöz kan, müdahale öncesi başlangıçta ve 14. ile 28. günlerde, tercihen gece boyu açlıktan sonra 06:30 ile 08:30 saatleri arasında toplanmıştır. Uygun olduğu durumlarda, açlık dışı örnekleme belgelenmiştir.
Örnekler 2 h içinde işlendi. Santrifüj işlemi 4 °C'de 10 min boyunca 850 × g hızında gerçekleştirildi. Serum ve plazma, steril kriyotüplere aliquotlar halinde paylaştırıldı ve −80 °C'de saklandı. Aynı katılımcıya ait örnekler, mümkün olduğunca aynı analiz grubunda tutuldu.
Yüksek duyarlılıklı C-reaktif protein, interlökin-6 (IL-6), tümör nekroz faktör-alfa, lipopolisakkarit (LPS) ve zonulin miktarları belirtilen analizler kullanılarak belirlenmiştir. IL-6, tümör nekroz faktör-alfa, LPS ve zonulin ölçümleri çift örnekle (duplicate) yapılmış ve çift örnek varyasyon katsayısının %15'i aştığı durumlarda ölçümler tekrarlanmıştır.
Çalışmaya özel validasyon sonuçlarından ziyade, üretici tarafından bildirilen katalog spesifikasyonları şu şekildeydi: hs-CRP hassasiyeti, 5.36 pg/mL; aralık, 18.75–1,200 pg/mL; serum içi/deneyler arası CV'ler, %1.4/%4.0; IL-6 hassasiyeti, 0.7 pg/mL; aralık, 3.12–300 pg/mL; serum/plazma deney içi CV, %1.6–%4.2; deneyler arası CV, %3.3–%6.4; tümör nekroz faktör-alfa hassasiyeti, 6.23 pg/mL; aralık, 15.6–1,000 pg/mL; deney içi CV, %2.2–%3.0; deneyler arası CV, %7.3–%8.4; ve zonulin tespit limiti, 0.183 ng/mL; nicelleme limiti, 0.183 ng/mL; lineerlik, 3.03–40.25 ng/mL; tekrarlanabilirlik CV, %3.5–%6.0; ve yeniden üretilebilirlik CV, %7.7–%8.3. Zonulin tespit limiti ve nicelleme limiti, üretici tarafından örnek seyreltme faktörü uygulanmadan önceki değerler olarak bildirilmiştir.
LPS konsantrasyonları EU/mL, plazma trimetilamin N-oksit konsantrasyonları ise µmol/L olarak bildirilmiştir. Her iki ölçüm de keşifsel biyobelirteç sonuçları olarak değerlendirilmiştir.
12. Fekal örnekleme ve 16S rRNA dizileme
Dışkı örnekleri, başlangıçta ve 28. günde steril tüplere toplandı; defekasyon ve dondurma zamanları kaydedildi. Bir katılımcı planlanan toplama penceresi içinde defekasyon yapamadığında, bir sonraki spontan dışkı klinik olarak mümkün olan en kısa sürede toplandı. Randomize edilen tüm katılımcılar nihayetinde mikrobiyom ve kısa zincirli yağ asidi analizleri için uygun dışkı örnekleri sağladı; gecikmiş toplama prosedürleri, planlanan dışkı tabanlı analizler için eksik dışkı örneklerine yol açmadı. Toplama gecikmesi ve konstipasyon durumu belgelendi ve sadece araştırma örneklemesi amacıyla laksatif uygulanmadı.
Taze dışkı örnekleri 2 h içinde taşındı. Hemen taşıma imkanı olmadığında, örnekler −80 °C'de saklanmadan önce en fazla 6 h boyunca 4 °C'de tutuldu. Tekrarlayan dondurma-çözme döngülerinden kaçınıldı. DNA, belirtilen fekal DNA ekstraksiyon kiti kullanılarak izole edildi. V3–V4 bölgesi 338F ve 806R primerleri ile amplifiye edildi ve 300-bp çift uçlu (paired-end) sekanslama gerçekleştirildi. QIIME 2 versiyon 2024.10.1 (RRID: SCR_021258) kullanılarak okumalar demultipleks edildi ve primerler kırpıldı. Kalite filtreleme, gürültü giderme (denoising), çift uçlu okuma birleştirme, kimera temizleme ve amplikon sekans varyantı çıkarımı için DADA2 kullanıldı. Taksonomi atamaları SILVA sürüm 138.1 (RRID: SCR_006423) üzerinden yapıldı.
Alfa çeşitliliği için Shannon ve Chao1 indeksleri hesaplanmıştır. Beta çeşitliliği için Bray–Curtis uzaklıkları ve temel koordinat analizi kullanılmış, beta-çeşitlilik farklarını değerlendirmek için ise permütasyonel çok değişkenli varyans analizi (PERMANOVA) uygulanmıştır18.
13. Fekal kısa zincirli yağ asidi kantifikasyonu
Çözülmüş dışkının yaklaşık 100 mg'ı 1,0 mL %0,5 fosforik asit ile karıştırıldı, 60 s boyunca vortekslendi ve 4 °C'de 10 dk boyunca 14.000 × g hızında santrifüj edildi. Süpernatan, iç standart olarak 4-metilvalerik asit içeren etil asetat ile ekstrakte edildi.
1 µL'lik bir alikot, 30 m × 0.25 mm × 0.25 µm ölçülerinde bir DB-FFAP kolon kullanılarak, kütle seçici dedektörle eşleştirilmiş gaz kromatografisi ile analiz edildi. Helyum 1.0 mL/min hızda, 10:1 split oranıyla ve 70 eV'luk elektron iyonizasyonu ile kullanıldı.
Asetat, propionat, bütirat, izobütirat, valerat ve izovalerat miktarları belirlenmiş ve toplam kısa zincirli yağ asitleri bunların toplamı olarak tanımlanmıştır. Analistler, tedavi atamalarına karşı kör tutulmuş ve kısa zincirli yağ asidi analizleri keşifsel olarak değerlendirilmiştir.
14. Keşifsel biyobelirteç yanıtı
Keşifsel kompozit yanıt, 28. gündeki dört değişimden en az ikisinin varlığı olarak tanımlandı: Shannon indeksi artışı > 0.20, fekal bütirat artışı > %20, plazma LPS azalması > %15 ve IL-6 azalması > %20. Bu pragmatik eşikler, küçük analitik dalgalanmaların üzerine çıkmak amacıyla belirlenmiş olup klinik olarak valide edilmemiştir ve yalnızca keşifsel tanımlama için kullanılmıştır. < 1.5 değerinde herhangi bir Shannon eşiği kullanılmamıştır.
15. Örneklem büyüklüğü hesaplaması
Örneklem büyüklüğü hesaplamasında, 28. gündeki NIHSS değişiminde gruplar arası 1,2 puanlık bir fark, 2,3 standart sapma, 0,05 iki taraflı alfa düzeyi ve %80 güç varsayılmıştır. Bu hesaplama, grup başına 58 katılımcı gerektirmiştir. Birincil sonlanım noktalarının %10 oranında tamamlanmaması durumu göz önünde bulundurularak, grup başına 64 katılımcı hedefi belirlenmiş ve toplamda 128 katılımcı randomize edilmiştir19.
16. Veri yönetimi ve kalite kontrolü
Klinik veriler standardize edilmiş vaka rapor formları kullanılarak kaydedilmiş ve çift veri girişine tabi tutulmuştur. Veri tabanı kilitlenmeden önce aralık ve tutarlılık kontrolleri uygulanmış ve tutarsızlıklar kaynak kayıtlar üzerinden çözümlenmiştir. Sonuç değerlendiricileri, katılımcı kaydı öncesinde eğitilmiştir. Numune toplama, işleme süresi, saklama sıcaklığı, dondurma-çözme döngüsü, analiz grubu ve sekanslama grubu kodlanmış tanımlayıcılar kullanılarak takip edilmiştir.
17. İstatistiksel analiz
Randomize edilen 128 katılımcının tamamı birincil tedavi niyeti (intention-to-treat) analizine dahil edildi. Protokolle uyumlu (per-protocol) popülasyon; 28. gün değerlendirmesinin tamamlanması, atanan müdahalenin en az %80'ine maruz kalınması ve majör bir protokol ihlalinin olmaması şeklinde tanımlandı. Tedavi gören tüm katılımcılar güvenlik analizlerine dahil edildi. Mikrobiyom ve kısa zincirli yağ asidi analizleri, başlangıçta ve 28. günde toplanan değerlendirilebilir dışkı örnekleri kullanılarak gerçekleştirildi. Randomize edilen tüm katılımcılar analiz edilebilir dışkı örnekleri sağladığı için hiçbir katılımcı hariç tutulmadı ve dışkı tabanlı analizler için eksik örnek ataması (imputation) gerekmedi.
Eksik olan 28. gün NIHSS değerleri; tedavi, başlangıç ve 14. gün NIHSS, başlangıç Barthel İndeksi, yaş, cinsiyet, reperfüzyon tedavisi ve başlangıçtan randomizasyona kadar geçen süreyi içeren zincirlenmiş denklem Bayesian ridge modelleri kullanılarak, rastgele eksiklik (missing-at-random) varsayımı altında 30 kez impute edilmiştir. Tahminler Rubin kuralları kullanılarak havuzlanmış ve duyarlılık analizi olarak tam vaka analizi gerçekleştirilmiştir.
Histogramlar ve Q–Q grafikleri incelendi ve model kalıntılarına Shapiro–Wilk testleri uygulandı. Birincil tam vaka ANCOVA'sından elde edilen kalıntılar normallik ile uyumluydu (P = 0.308). Güçlü şekilde sağa çarpık olan biyobelirteçler, gerektiğinde doğrusal modellemeden önce dönüştürüldü. Lojistik regresyon için ikili sonucun dağılımının normal olması gerekmiyordu; sürekli öngörücülerin doğrusallığı ve etkili gözlemler değerlendirildi.
28. gün NIHSS değerleri için; tedavi, başlangıç NIHSS, yaş, cinsiyet, reperfüzyon tedavisi ve başlangıçtan randomizasyona kadar geçen sürenin modele dahil edildiği kovaryans analizi (ANCOVA) kullanılmıştır20. 28. günle ilgili sürekli keşifsel sonuçlar için başlangıç değerine göre düzeltilmiş doğrusal modeller kullanılmıştır. Oranlar için ki-kare veya Fisher kesin testleri, Bray–Curtis uzaklıkları için ise 9.999 permutasyonlu PERMANOVA kullanılmıştır. Mikrobiyom çeşitliliği ve topluluk yapısı analizleri; diyet, disfaji şiddeti, enteral beslenme, randomizasyon sonrası antibiyotik kullanımı, proton pompası inhibitörü kullanımı, konstipasyon veya hastanede kalış süresine göre düzeltilmemiştir; bu faktörler potansiyel kalıntı karıştırıcı değişkenler olarak değerlendirilmiştir.
Görüntülenen üç cins genelinde Benjamini–Hochberg yanlış keşif oranı düzeltmesi uygulanmış; hem nominal P değerleri hem de q değerleri raporlanmıştır. Katılımcı düzeyindeki keşifsel ilişkiler için 5.000 bootstrap yeniden örnekleme ile Spearman rho kullanılmış ve çıkarımsal yorumlamalar için Pearson korelasyon katsayıları kullanılmamıştır. Aracılık analizi, yalnızca hem maruziyet–aracı hem de aracı–sonuç ilişkileri desteklendiği takdirde planlanmıştır. Birincil ve önceden belirlenmiş klinik sonuçlar için iki yönlü P < 0,05 değeri kullanılmıştır.
Şekil 1: Katılımcı akışı ve değerlendirme programı. (A) Tarama (n = 176), dışlamalar (n = 48), randomizasyon (grup başına 64), intravenöz tromboliz (16 kontrol; 18 müdahale), mekanik trombektomi (4; 5), 28. gün NIHSS erişilebilirliği (59; 58), gözlemlenen 90. gün takibi (57; 56) ve analiz popülasyonlarını gösteren CONSORT tarzı akış şeması. (B) Müdahale ve değerlendirme programı. NIHSS, Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği; ITT, tedavi niyeti; mRS, modifiye Rankin Ölçeği. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Çalışma Prosedürü | Tarama | Başlangıç | 1–28. Gün | 14. Gün | 28. Gün | 90. Gün |
| Takvim aralığı | 1 Mar–31 Ara 2025 | Randomizasyon ile aynı gün | Mar 2025–Oca 2026 | ±2 gün | ±3 gün | ±7 gün |
| Uygunluk değerlendirmesi | ✓ | |||||
| Yazılı bilgilendirilmiş onam | ✓ | |||||
| İskemik inmenin BT/MR ile doğrulanması | ✓ | |||||
| Demografik ve klinik verilerin toplanması | ✓ | |||||
| Randomizasyon | ✓ | |||||
| Standart akut iskemik inme bakımı | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| Standardize manuel akupunktur | ✓ | |||||
| Modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonu | ✓ | |||||
| NIHSS değerlendirmesi | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ||
| Barthel İndeksi değerlendirmesi | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| Modifiye Rankin Ölçeği değerlendirmesi | ✓ | |||||
| Periferik kan örneği toplanması | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| Gaita örneği toplanması | ✓ | ✓ | ||||
| Advers olay izlemi | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| Final klinik takibin tamamlanması | 31 Mar 2026 tarihine kadar | |||||
| Veri temizleme ve istatistiksel analiz | 1 Nis–30 Nis 2026 |
Tablo 1: Çalışma takvimi, müdahale maruziyeti, örnek toplama ve sonuç değerlendirmeleri. CT, bilgisayarlı tomografi; MRI, manyetik rezonans görüntüleme; NIHSS, Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği.
| Akupunktur noktası | Konum kategorisi | Lateralite | İğne derinliği | Stimülasyon yöntemi | Alıkonma süresi | Tedavi sıklığı | Güvenlik önlemleri |
| Baihui (GV20) | Kafa derisi noktası | Tekli | 10–15 mm | Hafif manuel stimülasyon eşliğinde oblik yerleştirme | 30 dk | 4 hafta boyunca haftada 5 seans | Vital bulguları stabil olmayan hastalarda aşırı stimülasyondan kaçının |
| Shuigou (GV26) | Yüz noktası | Tekli | 5–10 mm | Hafif manuel stimülasyonla birlikte oblik yerleştirme | 30 dk | 4 hafta boyunca haftada 5 seans | Lokal cilt yaralanması, enfeksiyonu veya kooperasyon eksikliği olan hastalarda iğnelemeden kaçının |
| Fengchi (GB20) | Baş ve boyun noktası | Bilateral | 15–25 mm | Eğik yerleştirme; derin medial iğnelemeden kaçınılmıştır | 30 dk | 4 hafta boyunca haftada 5 seans | Spinal kanal veya vertebral arter bölgesine doğru derin insersiyondan kaçının |
| Quchi (LI11) | Üst ekstremite noktası | Bilateral | 15–25 mm | Manuel kaldırma-itme ve döndürme | 30 dk | 4 hafta boyunca haftada 5 seans | Ezilmiş, ödemli veya enfekte cilt üzerinden iğnelemeden kaçının |
| Hegu (LI4) | Üst ekstremite noktası | Bilateral | 10–20 mm | Manuel kaldırma-itme ve döndürme | 30 dk | 4 hafta boyunca haftada 5 seans | Kırılgan hastalarda veya ağrı toleransı düşük hastalarda aşırı manipülasyondan kaçının |
| Zusanli (ST36) | Alt ekstremite noktası | Bilateral | 20–25 mm | Manuel kaldırma-itme ve döndürme | 30 dk | 4 hafta boyunca haftada 5 seans | Ödem, enfeksiyon veya lokal travmanın bulunduğu bölgelerde iğnelemeden kaçının |
| Yanglingquan (GB34) | Alt ekstremite noktası | Bilateral | 20–25 mm | Manuel kaldırma-itme ve döndürme | 30 dk | 4 hafta boyunca haftada 5 seans | Şiddetli ekstremite ağrısı, travma veya ajitasyonu olan hastalarda iğnelemeden kaçının |
| Sanyinjiao (SP6) | Alt ekstremite noktası | Bilateral | 15–25 mm | Manuel kaldırma-itme ve döndürme | 30 dk | 4 hafta boyunca haftada 5 seans | Gebelik döneminde ve lokal cilt lezyonları olan hastalarda kullanımdan kaçının |
Tablo 2: Standartlaştırılmış akupunktur reçetesi ve uygulama protokolü. Uygulama notları: 0.25 mm × 40 mm ölçülerinde steril tek kullanımlık paslanmaz çelik iğneler kullanılmıştır. Deqi hissi bildirilene veya lokal bir iğneleme yanıtı gözlenene kadar manuel stimülasyon uygulanmıştır. İğneler 30 dk boyunca yerinde tutulmuş ve tutma süresi boyunca her 10 dk'da bir manuel stimülasyon tekrarlanmıştır.
| Bileşen | Latin farmasötik adı | Günlük doz | Formüldeki fonksiyonel rol | Kalite kontrol ve güvenlik notları |
| Ephedra | Ephedrae Herba | 6 g | Rüzgar dağıtıcı ve kanal açıcı bileşen | Tedavi sırasında kan basıncı, çarpıntı, göğüste rahatsızlık ve uykusuzluk izlendi |
| Tarçın dalı | Cinnamomi Ramulus | 9 g | Isıtıcı ve dolaşımı destekleyici bileşen | Aşırı terleme veya ısıya bağlı semptomları olan hastalarda dikkatli kullanıldı |
| Beyaz şakayık kökü | Paeoniae Radix Alba | 12 g | Uyumlayıcı ve antispazmodik bileşen | Eczane onaylaması ve parti dokümantasyonu gereklidir |
| Saposhnikovia kökü | Saposhnikoviae Radix | 9 g | Rüzgar dağıtıcı bileşen | Eczane onaylaması ve parti dokümantasyonu gereklidir |
| Taze zencefil | Zingiberis Rhizoma Recens | 6 g | Gastrointestinal uyumlayıcı bileşen | Kalıcı kusma meydana gelirse uygulama durduruldu |
| Meyan kökü | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | 6 g | Formül uyumlayıcı bileşen | Yüksek riskli hastalarda elektrolit bozukluğu ve ödem izlendi |
| Angelica kökü | Angelicae Sinensis Radix | 10 g | Kan besleyici ve dolaşımı destekleyici bileşen | Eşlik eden antiplatelet veya antikoagülan kullanımı kaydedildi |
| Chuanxiong rizomu | Chuanxiong Rhizoma | 10 g | Kan aktive edici bileşen | Kanama ile ilgili advers olaylar izlendi ve kaydedildi |
| Astragalus kökü | Astragali Radix | 20 g | Qi destekleyici bileşen | Protokol tanımlı bir modifikasyon olarak kaydedilmek kaydıyla, belirgin spontan terleme durumunda 30 g'a artırılabilir |
| Poria | Poria | 15 g | Dalak destekleyici ve nem çözücü bileşen | Protokol tanımlı bir modifikasyon olarak kaydedilmek kaydıyla, gevşek dışkı durumunda 20 g'a artırılabilir |
| Kırmızı şakayık kökü | Paeoniae Radix Rubra | 12 g | Kan aktive edici ve antiinflamatuar bileşen | Eczane onaylaması ve parti dokümantasyonu gereklidir |
| Kenevir tohumu | Cannabis Fructus | Gerekirse 10 g | Yalnızca konstipasyon düzenlemesi | Yalnızca konstipasyon için eklendi ve protokol tanımlı bir modifikasyon olarak kaydedildi |
Tablo 3: Modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonunun bileşimi ve uygulama protokolü. Uygulama protokolü: Günlük tek doz hastane eczanesinde dekokte edilmiş ve 400 mL'ye konsantre edilmiştir. Dekoksiyon, iki adet 200 mL'lik doza bölünmüş ve 28 gün boyunca ardışık olarak kahvaltı ve akşam yemeğinden sonra oral yolla uygulanmıştır. Güvensiz yutma, kalıcı kusma, şüphelenilen alerjik reaksiyon, alanin aminotransferaz veya aspartat aminotransferaz düzeyinin normalin üst sınırının üç katından fazla olması, tahmini glomerüler filtrasyon hızının 45 mL/min/1.73 m2 altında olması, standart yönetim sonrası kontrol altına alınamayan kan basıncı, klinik olarak anlamlı taşikardik aritmi, yeni başlayan göğüs ağrısı veya araştırmacı tarafından belirlenen herhangi bir güvenlik endişesi olan hastalarda uygulama durdurulmuştur.
| Sonuç kategorisi | Değişken | Değerlendirme zaman noktası | Tanım veya ölçüm | Analiz sınıflandırması |
| Nörolojik defisit | NIHSS skoru | Başlangıç, 14. gün, 28. gün, 90. gün | Körleme yöntemiyle değerlendirme yapan nörologlar tarafından uygulanan Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği | 28. gündeki birincil klinik sonuç; 14. gündeki/90. gündeki ikincil sonuç |
| Günlük yaşam fonksiyonu | Barthel İndeksi | Başlangıç, 28. gün, 90. gün | Eğitimli kör değerlendiriciler tarafından belirlenen günlük yaşam aktiviteleri puanı | İkincil klinik sonuç |
| Küresel engellilik | Modifiye Rankin Ölçeği | 90. Gün | Fonksiyonel yetersizlik skoru 0–6 | İkincil klinik sonuç; gözlemlenen dağılım ve ayrı olarak etiketlenmiş ITT dikotomisi |
| Olumlu fonksiyonel sonuç | mRS 0–2 | 90. Gün | mRS değerleri 0, 1 veya 2 olan katılımcılar | İkincil klinik sonuç |
| İnme nüksü | Tekrarlayan iskemik inme | 90. güne kadar | Mümkün olduğunda görüntüleme ile birlikte nörolog tanısı | Güvenlikle ilgili sonuç |
| Mortalite | Tüm nedenlere bağlı ölüm | 90. güne kadar | Tüm nedenlere bağlı ölüm | Güvenlilik sonucu |
| Sistemik inflamasyon | hs-CRP, IL-6, TNF-alfa | Başlangıç, 14. gün, 28. gün | Serum/plazma konsantrasyonları | Keşifsel biyobelirteç sonucu |
| Endotoksin/bariyer belirteçleri | LPS, zonulin | Başlangıç, 14. gün, 28. gün | Kan bazlı konsantrasyonlar | Keşifsel biyobelirteç sonucu |
| Mikrobiyal metabolit | TMAO | Bazal değer, 28. gün | Plazma konsantrasyonu | Keşifsel biyobelirteç sonucu |
| Bağırsak mikrobiyota çeşitliliği | Shannon, Chao1, Bray–Curtis | Başlangıç, 28. gün | 16S rRNA kaynaklı çeşitlilik | Keşifsel biyobelirteç sonucu |
| Mikrobiyal kompozisyon | Seçili cinsler | 28. Gün | Cins düzeyinde göreceli bolluk | Keşifsel; üç farklı cins genelinde nominal P ve BH-FDR q değerleri |
| Kısa zincirli yağ asitleri | Asetat, propionat, bütirat, toplam SKK'lar | 28. Gün | GC-MS ile fekal konsantrasyonlar | Keşifsel biyobelirteç sonucu |
| Keşifsel yanıt | Kompozit yanıt | 28. Gün | En az iki: Shannon >0,20; bütirat >%20; LPS azalması >%15; IL-6 azalması >20% | Keşifsel; eşikler klinik olarak valide edilmemiştir |
| Müdahale güvenliği | Olumsuz ve ciddi olumsuz olaylar | 1–90. Gün | Araştırmacı tarafından kaydedilen olaylar ve atıf | Güvenlik sonucu |
Tablo 4: Klinik ve biyolojik sonuçlar, pencereler, tanımlar ve analiz sınıflandırması. Bu tablo; önceden belirlenmiş klinik ve biyolojik sonuçları, bunların değerlendirme zaman noktalarını, operasyonel tanımlarını ve analiz sınıflandırmalarını özetlemektedir. FDR, yanlış keşif oranı; hs-CRP, yüksek hassasiyetli C-reaktif protein; IL-6, interlökin-6; LPS, lipopolisakkarit; mRS, modifiye Rankin Ölçeği; NIHSS, Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği; SCFA, kısa zincirli yağ asidi; TMAO, trimetilamin N-oksit.
Sonuçlar
Katılımcı akışı ve analiz popülasyonları
Taranan 176 hastadan 48'i randomizasyon öncesinde hariç tutuldu ve 128'i randomize edildi (grup başına 64; Şekil 1). Randomize edilen tüm katılımcılar, tedavi edilme niyeti ve güvenlik popülasyonlarına dahil edildi. 28. gün NIHSS değerleri 59 kontrol ve 58 müdahale katılımcısı için gözlemlendi; 90. gün takibi sırasıyla 57 ve 56 katılımcı tarafından tamamlandı. Protokolle uyumlu popülasyonlar 58 ve 57 katılımcıdan oluşmaktaydı (Şekil 2).
Temel özellikler
Bazal özellikler gruplar arasında benzerdi (Tablo 5). Ortalama yaş 65,1 idi. ± 8.7 karşı 64.7 ± 9,1 yıl, başlangıç NIHSS değeri 8,6 idi ± 2.6 karşı 8.4 ± 2,9 ve bazal Barthel İndeksi 43,5'ti ± 13.2 karşı 44.8 ± 12.7. Kontrol grubundaki katılımcıların 16/64'üne (%25,0) ve müdahale grubundaki katılımcıların 18/64'üne (%28,1) intravenöz tromboliz uygulanmış; mekanik trombektomi ise sırasıyla 4/64 (%6,3) ve 5/64 (%7,8) katılımcıya gerçekleştirilmiştir.
Müdahaleye uyum
Müdahale grubunda, ortanca akupunktur seans sayısı 18 idi (çeyrekler arası aralık, 17–20); 57 katılımcı ≥ 16 seansı tamamladı ve 58 katılımcı dekoksiyonun ≥ %80'ini tüketti. Protokol dışı probiyotik/prebiyotik kullanımı, iki kontrol katılımcısında ve bir müdahale katılımcısında görüldü; bu katılımcılar tedavi niyeti analizine dahil edildi ancak protokolle uyumlu analizden hariç tutuldu (Ek Tablo 1).
Klinik sonuçlar
Gözlemlenen NIHSS skorları, kontrol grubunda 8,6 ± 2,6'dan 5,5 ± 3,1'e (28. günde n = 59) ve müdahale grubunda 8,4 ± 2,9'dan 4,1 ± 2,9'a gerilemiştir (Şekil 3A). Gözlemlenen ortalama değişimler sırasıyla −3,34 ± 4,14 ve −3,97 ± 4,03 puan olarak belirlenmiştir (Şekil 3B). Önceden belirlenmiş 30-imputasyonlu ANCOVA analizinde, düzeltilmiş 28. gün NIHSS skoru müdahale ile 1,30 puan daha düşük çıkmıştır (%95 güven aralığı [GA], −2,36 ile −0,24 arası; P = 0,017).
14. gündeki NIHSS değeri 5,49'du ± 2.45 karşı 4.61 ± 2,23 (bazal düzeltmeli P = 0,041) ve 90. gündeki gözlemlenen NIHSS değeri 3,68 idi ± 2,68 (n = 57) karşı 2.88 ± 2,36 (n = 56; P = 0,091; Şekil 3A).
28. Gün Barthel İndeksi 61,39'du ± 18.80 karşısında 68.82 ± 19,36 (bazal düzeltmeli P = 0,040); gözlemlenen 90. gün değerleri 75,56 idi ± 19.22 karşı 81.49 ± 17,67 (P = 0,098; Şekil 3C). Gözlemlenen vaka 90. gün mRS analizine dahil edilen katılımcılar arasında, olumlu sonuç 32/57 kontrolde (%56,1) ve 38/56 girişim katılımcısında (%67,9; P = 0,200) görülmüştür. Gözlemlenen vaka mRS kategori dağılımının tamamı şurada gösterilmiştir: Şekil 3D ve Ek Tablo 1Çoklu imputasyon kullanılarak dikotomize edilmiş mRS sonucu için hesaplanan ITT tahminleri (36/64) karşı 44/64; P = 0,144) ayrı ayrı raporlanmıştır.
Beyin-bağırsak aksı ile ilgili biyobelirteçler
Planlanan analiz zaman noktasında, randomize edilen tüm katılımcılar için (grup başına 64) dışkı örnekleri temin edilmiş ve başarıyla analiz edilmiştir. 28. gündeki Shannon çeşitliliği 3,08'dir. ± 0.52 karşı 3.31 ± 0,57 (bazal değere göre düzeltilmiş P = 0,019; Şekil 4A), ve fekal bütirat 10,21'di ± 4.27 karşısında 12.91 ± 5.08 µmol/g (P = 0,002; Şekil 4B).
14. günde IL-6 düzeyi 18,23 ± 9,44 karşıt 15,62 ± 8,06 pg/mL (nominal P = 0,095) ve 28. günde 14,61 ± 8,18 karşıt 11,84 ± 6,83 pg/mL idi (bazal düzeltmeli P = 0,041; Şekil 4C). LPS düzeyi 14. günde 0,85 ± 0,32 karşıt 0,78 ± 0,30 EU/mL (P = 0,204) ve 28. günde 0,78 ± 0,31 karşıt 0,66 ± 0,28 EU/mL idi (bazal düzeltmeli P = 0,023; Şekil 4D).
28. günde, Faecalibacterium ve Roseburia müdahale grubunda daha boldu (nominal P = 0,006 ve 0,009; her ikisi için q = 0,013), buna karşın Bifidobacterium nominal anlamlılık düzeyine ulaşmadı (P = q = 0,056; Şekil 4E). Gösterilen üç cins genelinde Benjamini–Hochberg düzeltmesi uygulanmıştır.
Keşifsel kompozit yanıt 21/64 kontrol grubunda (%32,8) ve 34/64 müdahale katılımcısında (%53,1; P = 0.020) meydana gelmiştir. Bileşen sonuçları Şekil 4F ve Ek Tablo 2'de raporlanmıştır; eşik değerleri keşifseldir ve klinik olarak valide edilmemiştir.
Katılımcı düzeyindeki keşifsel ilişkiler
Katılımcı düzeyindeki keşifsel ilişkiler, 5.000 bootstrap yeniden örneklemesi ile Spearman's rho kullanılarak değerlendirildi. Fekal bütirat, IL-6, LPS ve Shannon çeşitliliğindeki değişikliklerin, ilgili nörolojik veya biyobelirteç değişiklikleriyle anlamlı bir ilişkisi saptanmadı (Şekil 5).
Fekal bütirat ve NIHSS'deki değişiklikler arasında anlamlı bir ilişki saptanmamıştır (Spearman rho = −0.05; %95 bootstrap güven aralığı [CI], −0.23 ile 0.13 arası; P = 0.601; n = 117). IL-6 değişimi ile NIHSS değişimi arasında bir ilişki bulunmamıştır (rho = −0.01; %95 bootstrap CI, −0.18 ile 0.15 arası; P = 0.887; n = 117) ve LPS değişimi ile IL-6 değişimi arasında bir ilişki saptanmamıştır (rho = −0.14; %95 bootstrap CI, −0.29 ile 0.03 arası; P = 0.125; n = 128).
Shannon çeşitliliğindeki değişim, NIHSS değişimi ile anlamlı bir ilişki göstermemiştir (rho = −0.15; %95 GA, −0.34 ile 0.06 arası; P = 0.119; n = 117). Önceden belirlenmiş katılımcı düzeyindeki maruziyet-aracı ve aracı-sonuç ilişkileri desteklenmediği için aracılık analizi gerçekleştirilmemiş; herhangi bir dolaylı etki veya nedensel beyin-bağırsak yolu çıkarımı yapılmamıştır.
Güvenlik sonuçları
Kontrol grubundaki 8/64 katılımcıda ve müdahale grubundaki 11/64 katılımcıda (%12,5) herhangi bir advers olay meydana gelmiştir. karşı %17,2; P = 0,456). İğne giriş yerinde morarma 0 kişide görüldü karşı 5 katılımcıda (P = 0,023) görülmüş ve tedavi uygulanmadan düzelmiştir; 3 katılımcıda hafif gastrointestinal rahatsızlık meydana gelmiştir karşı 6 katılımcı (P = 0,300; Tablo 6).
3 kontrol ve 2 müdahale katılımcısında ciddi yan etkiler meydana gelmiştir (P = 0.648). Her grupta bir ölüm gerçekleşmiştir; hiçbir ciddi yan etkinin kesin olarak akupunktur veya modifiye Xiaoxuming Decoction ile ilişkili olduğu değerlendirilmemiştir.
Özetle, kombine müdahale, 28. gündeki NIHSS skorlarında ve seçili 28. gün biyobelirteçlerinde mütevazı bir iyileşme ile ilişkilendirilmiştir. 90. gündeki klinik farklar istatistiksel olarak anlamlı değildi ve katılımcı düzeyindeki veriler, ölçülen biyobelirteçler aracılığıyla gerçekleşen bir aracılığa destek vermedi.
Şekil 2: Klinik ve biyolojik örnekleme iş akışı. Mikrobiyom, kısa zincirli yağ asidi (SCFA), enflamatuar ve bağırsak bariyeri ile ilgili ölçümler için kan ve dışkı örnekleri toplanmıştır. İş akışı keşifsel ilişkileri tanımlamakta olup nedensel bir beyin-bağırsak mekanizması öne sürmemektedir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Klinik sonuçlar. (A) NIHSS seyri; noktalar ortalama ± SD'yi temsil etmektedir, her zaman noktası için n değeri gösterilmiştir. (B) Bazal değerden 28. güne kadar gözlemlenen NIHSS değişimi, ortalama ± SD olarak sunulmuştur (kontrol n = 59; girişim n = 58); açıklama, bazal NIHSS, yaş, cinsiyet, reperfüzyon ve başlangıçtan randomizasyona kadar geçen süre için düzeltilmiş 30-imputasyonlu ANCOVA sonucunu bildirmektedir. (C) Barthel İndeksi, ortalama ± SD olarak sunulmuştur, n değeri gösterilmiştir. (D) Gözlemlenen vaka 90. gün mRS kategorileri (kontrol n = 57; girişim n = 56); yüzdeler gözlemlenen paydaları kullanmaktadır. P değerleri çift yönlüdür. Anlamlılık sembolleri kullanılmamıştır. CI, güven aralığı; MI, çoklu imputasyon; SD, standart sapma. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: Keşifsel biyobelirteçler. Çubuklar ve noktalar ortalama ± SD'dir. Randomize edilen tüm katılımcılar ilgili analizler için değerlendirilebilir örnekler sağlamıştır; bu nedenle, her panel için n = 64/grup mevcuttu. Belirlenmiş toplama penceresi içerisinde gecikmeli toplama gerektirenler de dahil olmak üzere tüm katılımcılardan dışkı örnekleri başarıyla toplanmış ve işlenmiştir. (A) Shannon indeksi ve (B) fekal bütirat: 28. gün bazal ayarlı doğrusal modeller. (C) IL-6 ve (D) LPS seyirleri: 14. gün Welch testleri ve 28. gün bazal ayarlı modeller. (E) Seçili 28. gün cinsleri: Görüntülenen üç cins arasında Benjamini–Hochberg düzeltmeli Welch testleri; hem nominal P hem de q değerleri gösterilmiştir. (F) Yanıt bileşenleri: Pearson ki-kare testleri. Tüm P değerleri çift yönlüdür; anlamlılık sembolleri kullanılmamıştır. IL-6, interlökin-6; LPS, lipopolisakkarit; SCFA, kısa zincirli yağ asidi; SD, standart sapma. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 5Katılımcı düzeyindeki keşifsel ilişkiler. (A) Bütirat değişimi ile NIHSS değişimi karşılaştırması (n = 117). (B) IL-6 değişimi karşı NIHSS değişimi (n = 117). (C) LPS değişimi ile IL-6 değişimi karşılaştırması (n = 128). Çizgiler yalnızca görselleştirme amacıyla gösterilmiştir ve regresyona dayalı bir çıkarımı temsil etmemektedir. İstatistiksel çıkarımlar, 5.000 bootstrap yeniden örneklemesi ile Spearman's rho'ya dayandırılmıştır. (D) 5.000 yeniden örneklemeli bootstrap %95 GA'ya sahip Spearman tahminleri; NIHSS değişimiyle karşılaştırılan Shannon değişimini içerir (n = 117). Hiçbir ilişki P değerini karşılamadı < 0,05; bu nedenle aracılık analizi gerçekleştirilmemiştir. Herhangi bir anlamlılık sembolü kullanılmamıştır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Değişken | Kontrol grubu (n = 64) | Müdahale grubu (n = 64) | p değeri |
| Yaş, yıl | 65.1 ± 8.7 | 64.6 ± 9.0 | 0.775 |
| Erkek cinsiyet, n (%) | 40 (62.5) | 39 (60.9) | 0.855 |
| Randomizasyona kadar geçen süre, sa | 41.7 ± 14.9 | 40.9 ± 15.7 | 0.773 |
| Başlangıç NIHSS skoru | 8.6 ± 2.6 | 8.4 ± 2.9 | 0.665 |
| Bazal Barthel İndeksi | 43.5 ± 13.2 | 44.8 ± 12.7 | 0.573 |
| Hipertansiyon, n (%) | 42 (65.6) | 41 (64.1) | 0.855 |
| Diabetes mellitus, n (%) | 18 (28.1) | 17 (26.6) | 0.839 |
| İntravenöz tromboliz, n (%) | 16 (25.0) | 18 (28.1) | 0.690 |
| Mekanik trombektomi, n (%) | 4 (6.3) | 5 (7.8) | 0.732 |
| hs-CRP, mg/L | 7.21 ± 4.18 | 7.04 ± 4.03 | 0.813 |
| IL-6, pg/mL | 24.03 ± 10.14 | 23.62 ± 9.96 | 0.817 |
| TNF-alfa, pg/mL | 30.5 ± 11.2 | 30.0 ± 11.0 | 0.799 |
| Shannon indeksi | 2.84 ± 0.55 | 2.86 ± 0.56 | 0.833 |
| Fekal bütirat, µmol/g | 8.41 ± 3.99 | 8.53 ± 4.04 | 0.859 |
| LPS, EU/mL | 0.94 ± 0.34 | 0.93 ± 0.35 | 0.870 |
| Zonulin, ng/mL | 54.50 ± 15.60 | 54.11 ± 15.08 | 0.885 |
Tablo 5: Başlangıç demografik, klinik ve biyobelirteç özellikleri.Bu tablo, kontrol ve müdahale gruplarındaki başlangıç demografik, klinik, tedaviyle ilgili ve biyobelirteç özelliklerini özetlemektedir. Değerler ortalama ± SD veya n (%) olarak verilmiştir. İntravenöz tromboliz ve mekanik trombektomi, ayrı standart bakım kategorileri olarak rapor edilmiştir.
| Güvenlik Sonucu | Kontrol Grubu (n=64) | Müdahale Grubu (n=64) | P Değeri |
| Herhangi bir yan etki, n (%) | 8 (12.5) | 11 (17.2) | 0.456 |
| İğne giriş yeri morluğu, n (%) | 0 | 5 (7.8) | 0.023 |
| Hafif gastrointestinal rahatsızlık, n (%) | 3 (4.7) | 6 (9.4) | 0.3 |
| Geçici baş dönmesi, n (%) | 2 (3.1) | 3 (4.7) | 0.648 |
| Hafif döküntü, n (%) | 1 (1.6) | 2 (3.1) | 0.56 |
| Anormal karaciğer fonksiyonu, n (%) | 1 (1.6) | 2 (3.1) | 0.56 |
| Anormal böbrek fonksiyonu, n (%) | 1 (1.6) | 1 (1.6) | 1 |
| Kan basıncı dalgalanması, n (%) | 2 (3.1) | 3 (4.7) | 0.648 |
| Çarpıntı, n (%) | 0 | 1 (1.6) | 0.315 |
| Ciddi yan etki, n (%) | 3 (4.7) | 2 (3.1) | 0.648 |
| Müdahale ile ilişkili ciddi yan etki, n (%) | 0 | 0 | -- |
| Tüm nedenli ölüm, n (%) | 1 (1.6) | 1 (1.6) | 1 |
Tablo 6: Advers olaylar ve ciddi advers olaylar. Bu tablo; kontrol ve müdahale gruplarındaki advers olayları, ciddi advers olayları, müdahale ile ilişkili ciddi advers olayları ve tüm nedenlere bağlı ölümleri özetlemektedir. Değerler n (%) olarak sunulmuştur.
VERİ KULLANILABİLİRLİĞİ:
Rapor edilen klinik, biyobelirteç, mikrobiyom, uyum ve güvenlik analizlerini destekleyen, kimliksizleştirilmiş katılımcı düzeyi veriler Zenodo'da (https://zenodo.org/records/22725409) kamuya açık olarak sunulmaktadır.
Ek Tablo 1: Takip, uyum ve klinik sonuçlar. Gözlemlenen ve impute edilen analiz popülasyonları ayrı ayrı etiketlenmiştir. Birincil tahmin, başlangıç NIHSS, yaş, cinsiyet, reperfüzyon ve başlangıçtan randomizasyona kadar geçen süre için düzeltilmiş 30 katlı çoklu imputasyon ve ANCOVA kullanılarak yapılmıştır. CI, güven aralığı; IQR,lerçeyler arası aralık; mRS, modifiye Rankin Ölçeği; NIHSS, Ulusal Sağlık Enstitüleri İnme Ölçeği.Lütfen bu dosyayı indirmek için buraya tıklayın.
Ek Tablo 2: Keşifsel biyobelirteç sonuçları. Değerler ortalama ± SD veya n (%) olarak verilmiştir. Nominal P değerleri ve FDR ile düzeltilmiş q değerleri ayırt edilmiştir. Kompozit yanıt, önceden belirlenmiş dört değişikliğin en az ikisini gerektirmiştir ve klinik olarak valide edilmemiştir. Korelasyon analizleri keşifseldir; ön koşul olan katılımcı düzeyindeki ilişkiler anlamlı olmadığı için aracılık analizi gerçekleştirilmemiştir.Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Dosya 1 : Şekil ve tablolara karşılık gelen ham veriler.Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Tartışma
Kombine protokol, erken nörolojik defisitte mütevazı bir iyileşme sağlamıştır ve çoklu atama ANCOVA, 28. gündeki NIHSS skorunda −1.30 puanlık bir fark tahmin etmiştir. 28. gün Barthel İndeksi ve seçili 28. gün biyobelirteçleri de farklılık göstermiş, buna karşın 90. gün sonuçları istatistiksel anlamlılığa ulaşmamıştır. Bu bulgular, kombine müdahalenin; reperfüzyon, antitrombotik tedavi, rehabilitasyon veya diğer standart bakımların yerine geçmekten ziyade, bunlara yardımcı bir yöntem olarak değerlendirilmesini desteklemektedir.
Bu çalışmada gözlemlenen klinik etki, akupunkturun semptomatik modülasyonun ötesinde inme sonrası iyileşmeye katkıda bulunabileceğine dair büyüyen görüşle uyumludur. Önceki çalışmalar, faydanın büyüklüğü ve kalıcılığı çalışmalar arasında değişkenlik gösterse de, akupunkturun akut iskemik inmede nörolojik fonksiyonu iyileştirebileceğini ve inflamatuar aktiviteyi azaltabileceğini öne sürmüştür21. Mevcut sonuçlar, akupunkturu standardize bir bitkisel formülle birlikte kombine bir müdahalenin parçası olarak inceleyerek ve klinik etkiyi önceden tanımlanmış beyin-bağırsak aksı ile ilişkili biyobelirteçlere bağlayarak bu kanıt dizisini genişletmektedir. Etki büyüklüğü dramatik olmaktan ziyade mütevazıdır ve bu durum yorumlama açısından önemlidir; NIHSS skorundaki 1 puanlık düzeltilmiş fark, fonksiyonel ve biyolojik sinyallerle birlikte olduğunda hafif ila orta dereceli inmede anlamlı olabilir, ancak bu durum tek başına müdahalenin iyileşmeyi belirlediğine dair bir kanıt olarak yorumlanmamalıdır. Tekrar üretilebilirliğe karşı en hassas adımlar; tutarlı uygunluk zamanlaması, gizli tahsis, güvenli iğneleme, standardize dekoksiyon maruziyeti, körleme yapılmış sonuç değerlendirmesi ve hızlı, sıcaklık kontrollü örnek işlemedir. Yaygın operasyonel sorunlar arasında kaçırılan akupunktur seansları, güvenli olmayan yutma, gecikmiş dışkı üretimi ve taşıma sırasında çözülme yer almaktadır. Bu sorunlar; ertelemelerin belgelenmesi, güvenli olmadığı durumlarda oral tedavinin durdurulması, araştırma amaçlı laksatifler kullanmadan bir sonraki spontan dışkının toplanması, kabızlık ve toplama gecikmesinin kaydedilmesi ve işleme ile dondurma-çözme geçmişinin takibi yoluyla çözülmüştür.
Shannon çeşitliliği, bütirat, IL-6 ve LPS'deki 28. gün farkları, grup düzeyindeki keşifsel ilişkilerdi. Bütirat–NIHSS, IL-6–NIHSS, LPS–IL-6 ve Shannon–NIHSS ilişkilerine yönelik katılımcı düzeyindeki keşifsel analizler, aracılık analizi için gerekli olan ön koşul ilişkilerini desteklemedi; bu nedenle aracılık analizi yapılmadı ve veriler nedensel bir beyin-bağırsak yolu oluşturmamaktadır. Shotgun metagenomiği, izotopla işaretlenmiş standartlar içeren hedefli metabolomik, seri beslenme kayıtları ve tekrarlanan biyobelirteç örneklemesi dahil olmak üzere alternatif yaklaşımlar, işlevi ve zamansal sırayı 16S rRNA dizileme ve iki dışkı zaman noktasına göre daha doğrudan tanımlayacaktır22,23,24.
Yorumlamalar; tek merkezli örneklem, katılımcı körlemesinin olmaması, kayıt öncesi prospektif çalışma tescilinin eksikliği ve sadece akupunktur veya sadece dekoksiyon gruplarının bulunmadığı kombine müdahale tasarımı ile sınırlıdır. Bu nedenle, mevcut tasarım etkileri tek bir bileşene veya sinerjiye atfedemez. Rutin diyet, disfaji şiddeti, enteral beslenme, randomizasyon sonrası antibiyotik kullanımı, proton pompası inhibitörü kullanımı, kabızlık, rehabilitasyon yoğunluğu ve yatış süresi mikrobiyom sonuçlarını etkileyebilir. Bu faktörler, düzeltilmiş mikrobiyom modellerine dahil edilmemiştir ve bu nedenle potansiyel kalıntı karıştırıcı değişkenler olarak kalmaktadır. Seçilen cins için FDR düzeltmesi, görüntülenen üç cins ile sınırlı tutulmuştur ve keşifsel yanıt eşikleri dışsal olarak valide edilmemiştir. Biyobelirteç analizleri keşifsel niteliktedir; bazı IL-6 ve TNF-alpha konsantrasyonları üreticilerin nominal analiz aralıklarının altında kalmıştır ve dikkatle yorumlanmalıdır.
Gelecekteki çalışmalarda prospektif kayıt, çok merkezli katılımcı alımı, faktöriyel tasarım, kaynağı doğrulanmış eş zamanlı müdahale verileri, standartlaştırılmış diyet/maruziyet kayıtları ile bağımsız olarak tekrarlanabilir mikrobiyom ve metabolomik işlem hatları kullanılmalıdır. Aracılık etkileri, tedavi bileşeni etkileri veya mikrobiyom tabanlı tedavi seçimleri test edilmeden önce daha büyük örneklemler ve daha sık örnekleme yapılması gerekmektedir. Güvenlik izlemi, müdahaleyle kesin olarak ilişkili herhangi bir ciddi advers olay saptamamıştır, ancak örneklem boyutu nadir görülen zararları dışlamak için çok küçüktü. Akupunktur ve bitkisel tedaviler akut inme tedavisine entegre edilirken kanama riski, yutma güvenliği, gastrointestinal intolerans, hepatik/renal fonksiyonlar, kan basıncı ve aritmiye özel dikkat gösterilmeye devam edilmelidir.
Sonuç olarak, standart bakıma eklendiğinde, standardize akupunktur artı modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonu, 28. gündeki mütevazı nörolojik iyileşme ve seçili biyobelirteç farklılıkları ile ilişkilendirilmiştir. Biyolojik sonuçlar hipotez oluşturucu niteliktedir ve nedensel bir beyin-bağırsak mekanizması kanıtlamamaktadır.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Yazar Katkıları:
Zhiqiang Huang kavramlaştırma, metodoloji, araştırma, veri düzenleme ve taslak yazımına katkıda bulundu; Bo Wang formal analiz, yazılım, görselleştirme ve inceleme ile düzenleme yazılarına katkıda bulundu; Zhen Chen araştırma, kaynaklar ve doğrulamaya katkıda bulundu; Aiping Wang araştırma, veri düzenleme ve proje yönetimine katkıda bulundu; Longhai Wang ise kavramlaştırma, süpervizyon, proje yönetimi ve inceleme ile düzenleme yazılarına katkıda bulundu. Tüm yazarlar nihai taslağı onaylamıştır
Teşekkürler
Yazarlar; katılımcı alımı, klinik bakım ve veri toplama süreçlerindeki destekleri için Sichuan Eyaleti, Dazhou Şehri'ndeki Geleneksel Çin Tıbbı ve Batı Tıbbı Hastanesi'nin klinik ve laboratuvar personeline içtenlikle teşekkür ederler. Yazarlar ayrıca, bu randomize kontrollü çalışmaya katıldıkları için hastalara ve ailelerine teşekkür ederler. Bu araştırma; kamu, ticari veya kar amacı gütmeyen sektörlerdeki herhangi bir finansman kuruluşundan özel bir hibe almamıştır.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 4-Metilvalerik asit | Sigma-Aldrich, ABD | 142342 | GC-MS iç standart |
| 16S rRNA geni primerleri (V3–V4 bölgesi) | Sangon Biotech, Çin | Özel sentez | 341F/806R primer çifti |
| Akupunktur iğneleri | Hwato (Suzhou Medical Appliance Factory), Çin | 0.25 × 40 mm | Steril tek kullanımlık paslanmaz çelik iğneler |
| Barthel İndeksi değerlendirmesi | Uygulanamaz | Uygulanamaz | Günlük yaşam aktiviteleri değerlendirmesi |
| Kriyojenik tüpler | Corning, ABD | 430659 | Dışkı örneği saklama |
| Etil asetat (kromatografi derecesinde) | Merck, Almanya | 109623 | Organik ekstraksiyon çözücüsü |
| Filtreli pipet uçları | Axygen, ABD | Çeşitli | RNaz/DNaz içermeyen |
| Gaz kromatografı | Agilent Technologies, ABD | 7890B GC | GC ayırma sistemi |
| İnsan IL-6 ELISA Kiti | R&D Systems, ABD | D6050 | Serum IL-6'nın kantifikasyonu |
| İnsan Lipopolisakkarit (LPS) ELISA Kiti | Cusabio, Çin | CSB-E13066h | Serum LPS kantifikasyonu |
| İnsan TMAO Analiz Kiti | Sigma-Aldrich, ABD | MAK264 | Kolorimetrik/florometrik TMAO kantifikasyonu |
| Kütle seçici dedektör | Agilent Technologies, ABD | 5977B MSD | Kuadrupol kütle spektrometresi |
| MassHunter İş İstasyonu Yazılımı | Agilent Technologies, ABD | G1701EA | GC-MS veri toplama ve analizi |
| Mikropipetler | Eppendorf, Almanya | Araştırma artı serisi | Laboratuvar sıvı taşıma işlemleri |
| MiSeq Reagent Kit v3 (600 döngü) | Illumina, ABD | MS-102-3003 | Paired-end 2 × 300 bp sekanslama |
| MiSeq Sistemi | Illumina, ABD | SY-410-1003 | Çift uçlu sekanslama platformu; 2 × 300 bp sekanslama kimyası |
| Modifiye Rankin Ölçeği (mRS) değerlendirmesi | Uygulanamaz | Uygulanamaz | 90. gündeki fonksiyonel sonuç değerlendirmesi |
| Modifiye Xiaoxuming Dekoksiyonu (bitkisel formül) | Dazhou Şehri Geleneksel Çin Tıbbı ve Batı Tıbbı Hastanesi, Hastane Eczanesi | Uygulanamaz | Kurumsal eczacılık standartlarına göre hazırlanmış; hastane eczacıları tarafından onaylanmış ve dağıtılmıştır |
| NIH İnme Ölçeği (NIHSS) değerlendirme formu | Ulusal Nörolojik Hastalıklar ve İnme Enstitüsü | Uygulanamaz | Standardize edilmiş klinik değerlendirme aracı |
| NumPy | NumPy geliştiricileri | RRID: SCR_008633 | Sürüm 1.26.x |
| pandas | pandas geliştirme ekibi | RRID: SCR_018239 | Sürüm 2.1.x |
| Fosforik asit | Sigma-Aldrich, ABD | 79619 | Analitik saflukta reaktif |
| Python | Python Software Foundation | RRID: SCR_008394 | Sürüm 3.11.x |
| QIAamp PowerFecal Pro DNA Kiti | Qiagen, Almanya | 51804 | Dışkı mikrobiyomu DNA ekstraksiyonu |
| QIIME 2 | QIIME 2 geliştirme ekibi | RRID: SCR_008249 | Sürüm 2024.5 |
| Qubit dsDNA HS Analiz Kiti | Thermo Fisher Scientific, ABD | Q32851 | Floresan tabanlı DNA kantifikasyonu |
| scikit-learn | scikit-learn geliştiricileri | RRID: SCR_002577 | Sürüm 1.4.x |
| SciPy | SciPy geliştiricileri | RRID: SCR_008058 | Sürüm 1.11.x |
| SILVA rRNA veri tabanı | SILVA Projesi | RRID: SCR_006423 | Sürüm 138.1 |
| Ultra düşük sıcaklıklı dondurucu | Thermo Fisher Scientific | TSX60086A | −80 °C saklama |
Kaynaklar
- GBD 2019 Stroke Collaborators. Global, regional, and national burden of stroke and its risk factors, 1990-2019: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. Lancet Neurol. 2021;20(10):795-820. doi:10.1016/S1474-4422(21)00252-0.
- Campbell BCV et al. Ischaemic stroke. Nat Rev Dis Primers. 2019;5(1):70. doi:10.1038/s41572-019-0118-8.
- Iadecola C, Anrather J. The immunology of stroke: from mechanisms to translation. Nat Med. 2011;17(7):796-808. doi:10.1038/nm.2399.
- Benakis C et al. Commensal microbiota affects ischemic stroke outcome by regulating intestinal gamma delta T cells. Nat Med. 2016;22(5):516-523. doi:10.1038/nm.4068.
- Xia GH et al. Stroke Dysbiosis Index (SDI) in gut microbiome are associated with brain injury and prognosis of stroke. Front Neurol. 2019;10:397. doi:10.3389/fneur.2019.00397.
- Dalile B, Van Oudenhove L, Vervliet B, Verbeke K. The role of short-chain fatty acids in microbiota-gut-brain communication. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2019;16(8):461-478. doi:10.1038/s41575-019-0157-3.
- Tsai CY et al. Acupuncture improves neurological function and anti-inflammatory effect in patients with acute ischemic stroke: a double-blinded randomized controlled trial. Complement Ther Med. 2024;82:103049. doi:10.1016/j.ctim.2024.103049.
- Cao JP et al. Acupuncture as adjunctive therapy for acute cerebral infarction: a randomized clinical trial. Front Neurol. 2025;16:1509204. doi:10.3389/fneur.2025.1509204.
- Fu DL et al. Xiaoxuming decoction for acute ischemic stroke: a systematic review and meta-analysis. J Ethnopharmacol. 2013;148(1):1-13. doi:10.1016/j.jep.2013.04.002.
- Li DH et al. A network pharmacology-based identification study on the mechanism of Xiao-Xu-Ming Decoction for cerebral ischemic stroke. Evid Based Complement Alternat Med. 2020;2020:2507074. doi:10.1155/2020/2507074.
- Winek K, Dirnagl U, Meisel A. The gut microbiome as therapeutic target in central nervous system diseases: implications for stroke. Neurotherapeutics. 2016;13(4):762-774. doi:10.1007/s13311-016-0475-x.
- Moher D et al. CONSORT 2010 explanation and elaboration: updated guidelines for reporting parallel group randomised trials. BMJ. 2010;340:c869. doi:10.1136/bmj.c869.
- Brott T et al. Measurements of acute cerebral infarction: a clinical examination scale. Stroke. 1989;20(7):864-870. doi:10.1161/01.STR.20.7.864.
- Powers WJ et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: 2019 update to the 2018 guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke. Stroke. 2019;50(12):e344-e418. doi:10.1161/STR.0000000000000211.
- Chen L et al. Additional effects of acupuncture on early comprehensive rehabilitation in patients with mild to moderate acute ischemic stroke: a multicenter randomized controlled trial. BMC Complement Altern Med. 2016;16:226. doi:10.1186/s12906-016-1193-y.
- Lan R et al. Xiao-Xu-Ming Decoction protects against blood-brain barrier disruption and neurological injury induced by cerebral ischemia and reperfusion in rats. Evid Based Complement Alternat Med. 2013;2013:629782. doi:10.1155/2013/629782.
- Broderick JP, Adeoye O, Elm J. Evolution of the Modified Rankin Scale and its use in future stroke trials. Stroke. 2017;48(7):2007-2012. doi:10.1161/STROKEAHA.117.017866.
- Battaglini D et al. Gut microbiota in acute ischemic stroke: from pathophysiology to therapeutic implications. Front Neurol. 2020;11:598. doi:10.3389/fneur.2020.00598.
- Xu M, Li D, Zhang S. Acupuncture for acute stroke. Cochrane Database Syst Rev. 2018;3(3):CD003317. doi:10.1002/14651858.CD003317.pub3.
- Vickers AJ, Altman DG. Statistics notes: analysing controlled trials with baseline and follow up measurements. BMJ. 2001;323(7321):1123-1124. doi:10.1136/bmj.323.7321.1123.
- Yu F et al. Usage, anti-inflammatory effect and safety of adjunctive acupuncture for cerebral infarction: an Apriori algorithm-based data mining and meta-analysis. Front Neurol. 2025;16:1546194. doi:10.3389/fneur.2025.1546194.
- Iadecola C, Buckwalter MS, Anrather J. Immune responses to stroke: mechanisms, modulation, and therapeutic potential. J Clin Invest. 2020;130(6):2777-2788. doi:10.1172/JCI135530.
- Tan C et al. Dysbiosis of gut microbiota and short-chain fatty acids in acute ischemic stroke and the subsequent risk for poor functional outcomes. JPEN J Parenter Enteral Nutr. 2021;45(3):518-529. doi:10.1002/jpen.1861.
- Zhang W, Dong XY, Huang R. Gut microbiota in ischemic stroke: role of gut bacteria-derived metabolites. Transl Stroke Res. 2023;14(6):811-828. doi:10.1007/s12975-022-01096-3.
- Zhang Q et al. Xiaoxuming Decoction: a traditional herbal recipe for stroke with emerging therapeutic mechanisms. Front Pharmacol. 2021;12:802381. doi:10.3389/fphar.2021.802381.