Bu çalışma, tip 2 diyabetli hastalarda serum miR-3619-5p ekspresyon seviyelerini incelemiş ve bu molekülün pankreatik β-hücre fonksiyonundaki düzenleyici rolünü araştırmıştır. miR-3619-5p, T2DM'de downregüle olmuştur ve MTA3'ü hedefleyerek pankreatik β-hücre fonksiyonunun düzenlenmesinde rol oynayabilir.
Araştırma makalesi
Tip 2 Diyabetli Hastalarda miR-3619-5p Ekspresyonunun Klinik Önemi ve Pankreatik β-Hücre Proliferasyonu Üzerindeki Regülasyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Tip 2 diyabet melitusun (T2DM) temel patolojik özelliği pankreatik β-hücre yetmezliğidir; bu nedenle, pankreatik β-hücre homeostazını düzenleyen etkili dolaşım biyobelirteçlerinin ve moleküler hedeflerin belirlenmesi önemli bir pratik öneme sahiptir. Gen ekspresyonunun temel düzenleyici molekülleri olan miRNA'lar, pankreatik β-hücrelerinin proliferasyonu, apoptozu ve insülin sekresyonunda önemli bir rol oynar. Bu çalışmanın amacı, T2DM serumunda miR-3619-5p'nin ekspresyon modellerini ve klinik değerini araştırmak ve pankreatik β-hücre proliferasyonundaki düzenleyici rolünü açıklığa kavuşturmaktır. miR-3619-5p ve MTA3 ekspresyonunu saptamak için RT-qPCR kullanılmıştır. Tanısal performansı değerlendirmek için ROC eğrileri kullanılmıştır. Hedef-ligand ilişkisini doğrulamak için biyoinformatik ve çift-lüsiferaz analizleri kullanılmıştır. Hücre proliferasyonu CCK-8 analizi ile ölçülürken, apoptoz akış sitometrisi ile incelenmiştir. İnsülin sekresyon seviyeleri ELISA kullanılarak ölçülmüştür. Sonuçlar, miR-3619-5p ve MTA3'ün T2DM hastalarında ve pankreatik β-hücrelerinde azalmış olduğunu göstermiştir. miR-3619-5p, T2DM tanısı için bir biyobelirteç olabilir; aşırı ekspresyonu hücre proliferasyonunu teşvik eder, apoptozu inhibe eder ve insülin sekresyonunu artırır. miR-3619-5p, MTA3'ü hedefler ve düzenler; bu ikisi arasında anlamlı pozitif bir korelasyon vardır. miR-3619-5p mimiği, si-MTA3'ün pankreatik β-hücre fonksiyonunda yol açtığı hasarı geri çevirebilir. Özetle, miR-3619-5p T2DM'de azalmıştır ve tanısal değere sahiptir. miR-3619-5p, MTA3'ü hedefleyerek pankreatik β-hücre fonksiyonunun düzenlenmesinde yer alabilir.
Giriş
Kronik metabolik bir bozukluk olan tip 2 diyabet mellitus (T2DM), temel olarak insülin direnci ve beraberinde seyreden progresif insülin sekresyon fonksiyonu kaybı ile kendini gösterir ve tüm diyabet vakalarının %80'inden fazlasını oluşturur1. Patogenezi; genetik ve çevresel faktörlerin kombinasyonunun yanı sıra hücresel ve moleküler regülasyondaki anomalileri içeren karmaşık bir yapıdadır2,3. Pankreatik β-hücreleri insülin sekresyonundan sorumlu temel hücreler olduğundan, bu hücrelerin proliferasyon kapasitesindeki anormal azalma, T2DM'deki yetersiz insülin sekresyonunun temel nedenlerinden biridir4. Günümüzde T2DM'nin klinik tanısı öncelikle kan glukozu ve glikozillenmiş hemoglobin (HbA1c) gibi geleneksel göstergelere dayanmaktadır; ancak bunların erken tarama ve hastalık progresyonunu öngörmedeki hassasiyetleri sınırlıdır5. T2DM'nin kesin tanısı ve tedavisi için yeni stratejiler sunabilecek hassas, spesifik biyobelirteçlerin ve temel regülatör hedeflerin belirlenmesine acil ihtiyaç vardır.
Uzamış hipergliseminin neden olduğu glukotoksisite etkisiyle, pankreatik β-hücre proliferasyonu kısıtlanır ve apoptoz artar; bu durum, glukoz bağımlı insülin sekresyonunun kademeli kaybına yol açar; bu süreç, hastalığın sürekli ilerlemesini tetikleyen temel bir faktördür6,7. MikroRNA'lar (miRNA'lar), hücrelerdeki çeşitli fizyolojik süreçlerle ilişkilidir8 ve pankreatik adacık hücresi proliferasyonu, apoptoz ve insülin sekresyonu dahil olmak üzere fizyolojik süreçler üzerinde kritik bir düzenleyici etki uygularlar9,10. Çok sayıda çalışma, çeşitli miRNA'ların T2DM'de anormal şekilde eksprese edildiğini ve hastalığın patogenezinde yakından rol oynadığını göstermiştir11,12,13. miR-3619-5p, hücre proliferasyonu ve apoptoz dahil olmak üzere biyolojik süreçlere katılır ve bu molekül üzerine yapılan mevcut araştırmalar öncelikle onkoloji alanına odaklanmıştır14,15. miR-3619-5p'nin anormal ekspresyonu; deri skuamöz hücreli karsinomu, akciğer kanseri, kolorektal kanser ve mide kanseri dahil olmak üzere malign tümörlerde gözlemlenmiş olup, burada tümör hücresi proliferasyonunu, metastazını ve apoptozunu etkilemek için hedef genleri düzenlemektedir16,17,18,19. Ancak, T2DM'de miR-3619-5p'nin klinik ekspresyon özellikleri, klinik ilişkisi ve pankreatik fonksiyon düzenleme mekanizmalarına ilişkin araştırmalarda belirgin bir boşluk bulunmaktadır.
MTA ailesinin önemli bir üyesi olan MTA3, protein-protein etkileşimlerini ve gen transkripsiyonel düzenlemesini aracılar ve hücre proliferasyonu, apoptoz ve metabolizma dahil olmak üzere temel fizyolojik süreçlerde kapsamlı bir şekilde rol oynar20. MTA3 üzerine yapılan güncel araştırmalar öncelikle onkolojiye odaklanmış21,22,23, metabolik hastalıklardaki, özellikle de T2DM'deki rolünü inceleyen çalışmalar ise sınırlı kalmıştır. Bazı çalışmalar, diyabetle ilişkili bir gen olan MTA3'ün, hiperglisemi kaynaklı karaciğer fibrozisinin düzenlenmesinde yer aldığını saptamıştır24. Bu durum, MTA3'ün T2DM'nin ilerlemesinde rol oynayabileceğini düşündürmektedir; ancak, T2DM bağlamında miR-3619-5p tarafından düzenlenip düzenlenmediği henüz doğrulanmamıştır.
Özetle, miR-3619-5p üzerine mevcut araştırmalar büyük ölçüde tümör ve inflamatuar modellerle sınırlı kalmıştır; T2DM'deki klinik ekspresyon profili ile pankreatik β-hücre homeostazı ve glikoz metabolizma bozukluklarındaki rolü henüz araştırılmamıştır. Bu nedenle, bu çalışma, T2DM'li hastaların serumunda miR-3619-5p'nin ekspresyonunu ve klinik önemini değerlendirerek miR-3619-5p ile MTA3 arasındaki hedef ilişkisini doğrulamayı ve pankreatik β-hücre proliferasyonundaki düzenleyici rolünü incelemeyi amaçlamaktadır; böylece T2DM'nin patogenezi ile klinik tanı ve tedavisi üzerine yapılan araştırmalar için yeni bir teorik temel sağlamayı hedeflemektedir.
Protokol
Bu çalışma, TongzhouBay Halk Hastanesi Tıbbi Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (Onay No. 2024122001). Bu çalışmada kullanılan prosedürler, Helsinki Deklarasyonu'nun ilkelerine uygundur. Çalışmaya dahil edilen tüm bireysel katılımcılardan bilgilendirilmiş onam alınmıştır. Çalışmada yer alan her bireyin verilerinin yayınlanması için onay alınmıştır.
Araştırma denekleri
Bu çalışmada, Ocak 2022 ile Haziran 2023 tarihleri arasında hastanemizde tanı konulmuş 102 T2DM'li hasta retrospektif olarak seçilmiştir. Uygun katılımcılar; açlık kan glukozu ≥7.0 mmol/L ve 2 saatlik tok kan glukozu ≥11.1 mmol/L dahil olmak üzere T2DM tanı kriterlerini karşılayan, önceki 3 ay içinde insülin veya yeni nesil antidiyabetik ilaçlarla tedavi görmemiş, kalp, karaciğer, böbrekler veya diğer organları etkileyen ciddi komplikasyonları bulunmayan, malign tümör, otoimmün hastalık veya enfeksiyöz hastalık öyküsü olmayan ve klinik kayıtları eksiksiz olan kişilerdir. Tip 1 diyabet veya diğer spesifik diyabet türleri olanlar, ciddi enfeksiyon, travma, cerrahi veya diğer nedenlerle stres durumunda olanlar, önceki 3 ay içinde glukokortikoidler, immünosüpresanlar veya benzeri ilaçlar kullanmış olanlar ile hamile veya emziren kadınlar çalışma dışı bırakılmıştır. Aynı dönemde hastanemizde rutin sağlık taramasından geçen 80 kişiden oluşan bir kontrol grubu da çalışmaya dahil edilmiştir.
Örnek toplama
Tüm çalışma katılımcıları en az 8–12 saat aç kalmıştır; sabah ilk iş olarak 5 mL venöz kan toplanıp RNase-free EP tüplerine aktarılmış, serumu ayırmak için santrifüjlenmiş (3000 × g, 10 min) ve gelecekte kullanılmak üzere -80 °C'de saklanmıştır.
Hücre kültürü ve işlem
Sıçan pankreatik adacık β-hücre hattı INS-1, %10 FBS ve %1 penisilin-streptomisin içeren RPMI 1640 besiyerinde kültüre edildi. Yüksek glikoz (HG)-indüklemeli hücresel hasar modeli oluşturmak için INS-1 hücreleri 25 mM glikoz içeren besiyerinde kültüre edildi25. İşlem görmemiş grupta, INS-1 hücreleri RPMI 1640 besiyerinde (11,1 mM glikoz içeren) kültüre edildi.
Transfeksiyon işlemi; miR-3619-5p mimicleri, miRNA boş kontrol (miR-NC), si-MTA3 ve boş kontrol (si-NC) içeren transfeksiyon kiti kullanılarak gerçekleştirilmiştir. miR-3619-5p mimic, miR-3619-5p inhibitörü, siRNA ve bunlara karşılık gelen negatif kontrollerin tamamı RiboBio'dan satın alınmıştır. miRNA mimic konsantrasyonu: 50 nM; miRNA inhibitör konsantrasyonu: 100 nM; siRNA konsantrasyonu: 50 nM. Sonraki deneyler, transfeksiyondan 48 s sonra yürütülmüştür. İlgili diziler Ek Tablo 1'de gösterilmiştir.
Kantitatif ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR)
Serumdan toplam RNA ekstraksiyonu için TRIzol reaktifi, hücrelerden toplam RNA ekstraksiyonu için ise miRNeasy Mini Kit kullanılmıştır. miR-3619-5p'nin tespiti için, bir ters transkripsiyon kiti kullanılarak ters transkripsiyon gerçekleştirilmiştir; cDNA sentezinin ardından, iç kontrol olarak U6 kullanılarak bir miRNA kantifikasyon kiti uygulanmıştır. MTA3'ün tespiti için, bir mRNA ters transkripsiyon kiti kullanılarak cDNA'ya ters transkripsiyon yapılmış ve iç kontrol olarak GAPDH kullanılarak bir mRNA kantifikasyon kiti ile RT-qPCR gerçekleştirilmiştir. miR-3619-5p ve MTA3 ekspresyonundaki değişiklikler 2-ΔΔCt yöntemi kullanılarak analiz edilmiştir. Primer dizileri Ek Tablo 1'de gösterilmiştir.
Dual lusiferaz raporlayıcı (DLR) analizi
miR-3619-5p bağlanma bölgesini içeren MTA3'ün yaban tip (WT) ve mutant (MUT) 3'-UTR bölgeleri pmirGLO vektörüne klonlanmıştır. Vektör, transfeksiyon reaktifleri kullanılarak miR-3619-5p mimik ve miR-3619-5p inhibitörü ile birlikte 293T hücrelerine ko-transfekte edilmiştir. Transfeksiyon kontrol grupları şunları içermiştir: boş raporlayıcı plazmid grubu (Kontrol) ve miRNA negatif kontrol transfeksiyon grubu (miR-NC). 48 saat sonra, Renilla lusiferaz aktivitesinin iç kontrol olarak kullanıldığı bir dual-lusiferaz raporlayıcı sistem ile göreceli lusiferaz aktivitesi ölçülmüştür. Her grup üç bağımsız biyolojik replikattan oluşmakta olup, her biyolojik replikat üç teknik replikat içermektedir.
Hücre proliferasyon deneyi
Transfekte edilmiş hücreleri 96 kuyucuklu plakaya ekiniz. Sırasıyla 0 h, 24 h, 48 h ve 72 h boyunca kültüre ettikten sonra, her kuyucuğa 10 μL CCK-8 reaktifi ekleyiniz, 37 °C'de 2 h inkübe ediniz ve bir mikroplaka okuyucu kullanarak 450 nm'de absorbansı ölçünüz.
Apoptoz analizi
Hücreleri üç kez PBS ile yıkayın, ardından 10 μL Annexin V-FITC ve 5 μL PI içeren 200 μL bağlanma tamponunda yeniden süspande edin. Oda sıcaklığında, karanlıkta 15 dk inkübe edin. 300 μL bağlanma tamponu ekleyin ve ardından apoptoz oranını hesaplamak için hücreleri hemen bir akış sitometresi kullanarak analiz edin.
Enzim bağlı immünosorbent assay (ELISA)
Transfekte edilmiş hücreler 96 kuyucuklu bir plakaya ekildi ve 37 °C'de gece boyunca aç bırakıldı. Kültür ortamı 25 mM glikoz içeren bir çözelti ile değiştirildi ve hücreler 1 saat boyunca kültüre edildi; ardından insülin sekresyonunu ölçmek için işlem görmüş INS-1 hücrelerinden kültür ortamı toplandı. INS-1 hücreleri asidik metanolden yeniden süspanse edildi, sonikasyona tabi tutuldu ve toplam insülin içeriğini belirlemek için süpernatan toplandı. Rat Insulin ELISA Kit kullanıldı ve analiz üreticinin talimatlarına göre gerçekleştirildi. Analiz, bir kalibrasyon eğrisi oluşturmak için test kiti ile birlikte verilen referans standartları kullanır; insülinin mutlak konsantrasyonu, mutlak konsantrasyon birimi μIU/mL olacak şekilde örneklerin absorbans değerlerine dayanarak hesaplanır. Son olarak, kültür ortamında ölçülen insülin seviyelerinin toplam hücre içi insülin içeriğine göre normalize edilmesiyle insülin sekresyon kapasitesi değerlendirildi. İstatistiksel grafiklerdeki veriler, kontrol grubuna göre hesaplanan kat değişimleri (fold change) olarak sunulmuştur.
Western blot
Her gruptaki transfekte edilmiş hücreler toplandı ve RIPA lizis tamponu eklendi. Toplam protein konsantrasyonu BCA yöntemi kullanılarak belirlendi. 50 μg toplam protein, 5× yükleme tamponu ile karıştırıldı ve 10 dk boyunca kaynatıldı. %10 SDS-poliakrilamid jel elektroforezinin ardından proteinler bir poliviniliden florür membrana aktarıldı. %5 yağsız süt ile 1 saat boyunca bloke edildi; MTA3 (1:1000) ve GAPDH (1:1000) primer antikorları eklendi ve 4 °C'de gece boyunca inkübe edildi; membran TBST ile yıkandı, ardından HRP ile işaretlenmiş keçi anti-tavşan IgG sekonder antikoru (1:1000) eklendi ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca inkübe edildi; ECL kemilüminesans yöntemi kullanılarak görselleştirildi.
İstatistiki analiz
Kantitatif veriler ortalama ± standart sapma olarak ifade edilmiştir. İstatistiki analizler gerçekleştirilmeden önce, parametrik testlerin uygunluğunu belirlemek amacıyla verilerin normalliğini doğrulamak için Shapiro–Wilk testi ve varyansların homojenliğini değerlendirmek için Levene testi kullanılmıştır. Bu testlerin sonuçları, çalışmadaki tüm kantitatif verilerin normal dağılım gösterdiğini ve varyansların homojenliği varsayımını karşıladığını göstermiştir; bu nedenle, istatistiki analizler için parametrik testler uygulanmıştır. İki gruptan elde edilen verileri analiz etmek için bağımsız örneklemler t-testi, çoklu gruplar arasındaki karşılaştırmalar için ise Tukey post-hoc testi ile tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanılmıştır. Değişkenler arasındaki doğrusal ilişkileri değerlendirmek için saçılım grafikleri kullanılmıştır. Normallik ve doğrusallık varsayımlarının karşılandığı durumlarda Pearson korelasyon analizi uygulanmıştır. Pearson korelasyon analizi 102 katılımcının tamamını kapsamıştır; herhangi bir uç değer dışlanmamıştır. Saçılım grafiğinde gözlenen noktaların kümelenmesi, örneklem gözlemlerinin üst üste binmesinden kaynaklanmaktadır. Tüm deneyler üç tekrarlı örnekleri içermiş ve her deney üç kez tekrarlanmıştır. p-değerinin <0.05 olması istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir.
Sonuçlar
Çalışma katılımcıları arasında demografik özelliklerin ve klinik metabolik parametrelerin karşılaştırılması
Karşılaştırma sonuçları, T2DM olan hastalarda FBG ve HbA1c seviyelerinin belirgin şekilde yüksek olduğunu (P < 0.001), diğer parametrelerde ise anlamlı bir fark olmadığını (P > 0.05) göstermiştir (Tablo 1).
miR-3619-5p'nin ekspresyonu ve klinik önemi
RT-qPCR analizi, T2DM hastalarının serumundaki miR-3619-5p ekspresyonunun anlamlı düzeyde azaldığını ortaya koymuştur (P < 0.001; Şekil 1A). ROC eğrisi analizi, T2DM tanısında miR-3619-5p için AUC değerinin 0,871 (%95 CI: 0,820–0,922) olduğunu göstermiştir (Şekil 1B). Ayrıca, 102 T2DM hastası üzerinde gerçekleştirilen Pearson korelasyon analizi sonuçları, miR‑3619‑5p ekspresyonunun FBG (Şekil 1C) ve HbA1c (Şekil 1D) ile belirgin ve ters yönlü bir ilişki içinde olduğunu göstermiştir.
Şekil 1: miR-3619-5p'nin ekspresyonu ve klinik önemi. (A) T2DM'li hastaların serumunda miR-3619-5p ekspresyonunun RT-qPCR analizi. (B) miR-3619-5p kullanılarak T2DM tanısı için ROC eğrisi. (C) miR-3619-5p'nin göreli ekspresyonu ile açlık kan şekeri (FBG) arasındaki Pearson korelasyon analizi. (D) miR-3619-5p'nin göreli ekspresyonu ile HbA1c arasındaki Pearson korelasyon analizi. Hata çubukları standart sapmayı (SD) temsil etmektedir; Kontrol, n = 80; T2DM, n = 102. ***P < 0.001 Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
miR-3619-5p'nin pankreatik β-hücre fonksiyonu üzerindeki etkisi
T2DM ilerlemesini taklit etmek amacıyla HG ile işlem görmüş INS-1 pankreatik β-hücrelerinde hücresel fonksiyonel analizler gerçekleştirdik. Sonuçlar, HG işlemi sonrası miR-3619-5p ekspresyonunun anlamlı derecede azaldığını (P < 0.001), buna karşın miR-3619-5p mimik transfeksiyonunun ekspresyonu belirgin şekilde artırdığını göstermiştir (P < 0.01; Şekil 2A). Hücre proliferasyonu ve apoptozu açısından, HG işlemi hücre proliferasyonunu belirgin şekilde inhibe etmiş ve apoptozu teşvik etmiştir (P < 0.001); buna karşın miR-3619-5p mimik, HG işlemi sonrası proliferasyonu artırmış ve apoptozu inhibe etmiştir (P < 0.01; Şekil 2B,C). ELISA sonuçları, HG işlemi sonrası insülin sekresyonunun anlamlı derecede azaldığını (P < 0.001), buna karşın miR-3619-5p mimiğin HG işlemi sonrası insülin sekresyonunu artırdığını göstermiştir (P < 0.01; Şekil 2D).
Şekil 2: miR-3619-5p'nin pankreatik β-hücre fonksiyonu üzerindeki etkisi. T2DM progresyonunu simüle etmek için INS-1 pankreatik β-hücreleri HG ile işlenmiştir. (A) Hücrelerde miR-3619-5p ekspresyonunu saptamak için RT-qPCR kullanılmıştır. (B) Hücre proliferasyonu CCK-8 analizi ile değerlendirilmiştir. (C) Hücre apoptozunu değerlendirmek için akış sitometrisi kullanılmıştır. (D) İnsülin sekresyon seviyelerini ölçmek için (toplam hücre içi insülin içeriğine göre normalize edilmiştir) ELISA kullanılmıştır. Hata çubukları standart sapmayı (SD) temsil etmektedir, n = 3. ***P < 0.001; **P < 0.01 Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
miR-3619-5p hedeflerinin doğrulanması
Biyoinformatik tahminleri, dört veri tabanında toplam 174 hedef gen ortaya çıkarmıştır (Şekil 3A) ve MTA3 bağlanma bölgesi yüksek derecede korunmuştur (Context++ skoru: -0.31; Context++ skor yüzdesi: 98). miR-3619-5p ile MTA3'ün 3'-UTR bölgesi arasında tamamlayıcı bir bağlanma bölgesi belirlenmiştir (Şekil 3B). DLR sonuçları, MTA3 WT'nin göreceli lüsiferaz aktivitesinin miR-3619-5p mimik grubunda anlamlı şekilde arttığını göstermiş olup, bu durum miR-3619-5p'nin MTA3'e bağlanabildiğini göstermektedir (Şekil 3C).
T2DM hastalarının serumunda MTA3 ekspresyonu belirgin şekilde azalmıştır (Şekil 3D); ifadesi HG ile işlem görmüş INS-1 hücrelerinde de önemli ölçüde azalmışken, miR-3619-5p mimiği MTA3 ifadesini yukarı yönlü düzenlemiştir (Şekil 3E). Western blot sonuçları, miR-3619-5p mimiginin MTA3 protein seviyelerini artırdığını, miR-3619-5p inhibitörünün ise ekspresyonunu önemli ölçüde azalttığını göstermiştir (Ek Şekil 1). Pearson korelasyon analizi, T2DM olan 102 hastanın serumundaki miR-3619-5p ve MTA3 seviyeleri arasında anlamlı pozitif bir korelasyon olduğunu ortaya koymuştur (Şekil 3F). Bu sonuçlar, miR-3619-5p'nin MTA3 üzerindeki pozitif düzenleyici rolünü daha da doğrulamaktadır.
Şekil 3: miR-3619-5p hedeflerinin doğrulanması. (A) Dört veri tabanında (TargetScan, miRWalk, StarBase ve miRDB) tanımlanan miR-3619-5p'nin ortak hedef genleri. (B) miR-3619-5p'nin MTA3'ün 3’-UTR bölgesindeki bağlanma alanı. (C) DLR analizi (n = 3). (D) T2DM hastalarının serumundaki MTA3 ekspresyonunun RT-qPCR analizi (Kontrol, n = 80; T2DM, n = 102). (E) Hücrelerdeki MTA3 ekspresyonunun RT-qPCR analizi (n = 3). (F) T2DM hastalarının serumunda miR-3619-5p ve MTA3 ekspresyonunun Pearson korelasyon analizi (Kontrol, n = 80; T2DM, n = 102). Hata çubukları standart sapmayı (SD) temsil etmektedir. ***P < 0.001; **P < 0.01 Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
MTA3'ün pankreatik β-hücre fonksiyonu üzerindeki etkileri
Sonuçlar, si-MTA3'ün HG uygulaması sonrası MTA3 ekspresyonunu daha da azalttığını, buna karşın miR-3619-5p mimik ile birlikte yapılan ko-transfeksiyonun bu etkiyi tersine çevirdiğini göstermiştir (Şekil 4A). si-MTA3, HG uygulanmış hücrelerin proliferasyonunu daha fazla inhibe etmiş, apoptozu teşvik etmiş ve insülin sekresyonundaki bozulmayı şiddetlendirmiştir; buna karşın miR-3619-5p mimik ile ko-transfeksiyon, si-MTA3 tarafından aracılık edilen söz konusu hücresel fenotipleri tersine çevirerek hücre proliferasyonunu geri kazandırmış, apoptozu azaltmış ve insülin sekresyonu üzerindeki inhibisyonu hafifletmiştir (Şekil 4B–D).
Şekil 4: MTA3'ün pankreas β-hücre fonksiyonu üzerindeki etkisi. MTA3'ün pankreas β-hücre fonksiyonu üzerindeki etkisini daha ayrıntılı incelemek için hücrelere si-MTA3 ve miR-3619-5p mimic transfekte edildi. (A) Hücrelerdeki MTA3 ekspresyonunun RT-qPCR analizi. (B) Hücre proliferasyonu CCK-8 testi kullanılarak değerlendirildi. (C) Apoptoz oranı akış sitometrisi ile belirlendi. (D) İnsülin sekresyon seviyeleri ELISA ile ölçüldü (toplam hücre içi insülin içeriğine göre normalize edildi). Hata çubukları standart sapmayı (SD) temsil eder, n = 3. ***P < 0.001; **P < 0.01; *P < 0.05 Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Özetle, klinik örneklerden elde edilen sonuçlar, serum miR-3619-5p ekspresyonunun T2DM'li hastalarda anlamlı derecede düşük olduğunu ve miR-3619-5p'nin FBG ve HbA1c ile anlamlı şekilde korele olduğunu göstermektedir; hücre temelli deneyler, miR-3619-5p'nin MTA3'ü spesifik olarak regüle edebildiğini, böylece INS-1 sıçan pankreas β-hücrelerinin canlılığını ve insülin sekresyon fonksiyonunu etkilediğini doğrulamıştır. Birlikte değerlendirildiğinde bu sonuçlar, miR-3619-5p'nin pankreas β-hücre fonksiyonunun regülasyonunda yer aldığını göstermekte ve böylece bu çalışmanın tip 2 diyabette miR-3619-5p'nin rolünü ve potansiyel düzenleyici mekanizmalarını araştırma amacını öncül olarak karşılamaktadır.
VERİ ERİŞİLEBİLİRLİĞİ:
Bu çalışmanın sonuçlarını destekleyen tüm ham ve işlenmiş veri setleri Ek Dosya 1 olarak yüklenmiştir.
| Göstergeler | Kontrol grubu (n = 80) | T2DM grubu (n = 102) | P değeri |
| Yaş (yıl) | 51.41 ± 9.70 | 52.29 ± 7.03 | 0.478 |
| Cinsiyet (erkek/kadın) | 43/37 | 54/48 | 0.914 |
| VKI (kg/m2) | 24.04 ± 3.10 | 24.81 ± 3.04 | 0.093 |
| TC (mmol/L) | 4.60 ± 0.64 | 4.78 ± 0.65 | 0.068 |
| TG (mmol/L) | 1.61 ± 0.18 | 1.67 ± 0.26 | 0.093 |
| HDL-C (mmol/L) | 1.43 ± 0.13 | 1.38 ± 0.18 | 0.085 |
| LDL-C (mmol/L) | 2.55 ± 0.29 | 2.63 ± 0.31 | 0.067 |
| ABG (mmol/L) | 4.96 ± 0.97 | 7.16 ± 1.64 | <0.001 |
| HbA1c (%) | 4.42 ± 0.49 | 6.77 ± 1.16 | <0.001 |
Tablo 1: Denekler arasındaki klinik parametrelerin karşılaştırılması. T2DM, tip 2 diyabetes mellitus; BMI, vücut kitle indeksi; TC, toplam kolesterol; TG, trigliserit; HDL, yüksek yoğunluklu lipoproteinler; LDL, düşük yoğunluklu lipoproteinler; FBG, açlık kan glukozu; HbA1c, glikozillenmiş hemoglobin.
Ek Tablo 1: Bu çalışmada kullanılan primer ve reaktif dizileri.Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Şekil 1: MTA3 protein ekspresyonu. MTA3 protein seviyelerinin Western blot analizi. (A) MTA3 protein seviyeleri. (B) MTA3'e ait ham Western blot görüntüleri. (C) GAPDH'ye ait ham Western blot görüntüleri. Hata çubukları standart sapmayı (SD) temsil etmektedir, n = 3. ***P < 0.001; **P < 0.01Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Dosya 1: Ham veriler.Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Tartışma
T2DM'nin temel patolojik özellikleri insülin direnci ve pankreatik β-hücre disfonksiyonudur; azalmış proliferatif kapasite ve pankreatik β-hücre sayısındaki düşüş, anormal insülin sekresyonunun temel itici güçleri ve hastalığın ilerlemesinin birincil etkenleridir26. Pankreatik β-hücre proliferasyonunu düzenleyebilecek ve fonksiyonlarını iyileştirebilecek kilit moleküllerin belirlenmesi, T2DM'nin hassas teşhis ve tedavisi açısından büyük önem taşımaktadır.
Gen ekspresyonunun temel düzenleyici molekülleri olan miRNA'lar, pankreas β-hücre proliferasyonu, apoptozu ve insülin sekresyonunda kritik bir işlev yürütürler. Çok sayıda miRNA, T2DM patogenezi ile yakından ilişkilidir27,28,29. Song ve ark. miR-3619-5p nakavtının kolorektal kanserde hücre migrasyonunu inhibe ettiğini bulmuşlardır30. Diğer çalışmalar, peritoneal diyalize giren diyabetli hastalarda miR-3619-5p düzeylerinin azaldığını saptamıştır31. Ancak, miR-3619-5p'nin T2DM'deki rolü ve mekanizmaları henüz bildirilmemiştir. Bu çalışma, T2DM'li hastalardaki serum miR-3619-5p ekspresyonunun, Costa ve ark.'nın bulgularıyla uyumlu olarak31, sağlıklı kontrol grubuna göre anlamlı derecede düşük olduğunu ortaya koymuş ve bu durum, azalmış miR-3619-5p ekspresyonunun T2DM'nin başlangıcı ve gelişimi ile yakından bağlantılı olabileceğini göstermiştir. Korelasyon analizi, miR-3619-5p ekspresyonunun FBG ve HbA1c ile negatif korelasyon gösterdiğini, dolayısıyla daha düşük miR-3619-5p ekspresyonunun hastalarda daha kötü glisemik kontrol ile ilişkili olduğunu belirtmiştir. Bu durum, miR-3619-5p'nin T2DM'nin metabolik disregülasyon sürecinde yer alabileceğini ve ekspresyon düzeyinin hastalığın şiddetini yansıtabileceğini doğrulamaktadır; bu sonuçlar, diferansiyel eksprese olan RNA'ların lipid metabolizması, insülin sekresyonu ve glukoz düzenlemesinde rol oynayabileceğini bildiren Chen ve ark.'nın bulgularıyla uyumludur32. ROC eğrisi analizinden elde edilen bulgular, geleneksel kan glukoz göstergeleriyle ilişkili erken teşhisteki hassasiyet eksikliğini gidererek, miR-3619-5p'nin T2DM tanısı için bir biyobelirteç olabileceğini önermektedir.
Pankreatik β-hücre proliferasyon kapasitesindeki anormal düşüş, T2DM'de pankreatik adacık yetmezliğinin merkezi bir bileşenidir; pankreatik β-hücre proliferasyonunun teşvik edilmesi ve hücre sayısının artırılması, insülin sekresyon fonksiyonunun iyileştirilmesinde kilit rol oynar33,34. Bu çalışma, hücresel deneyler aracılığıyla miR-3619-5p'nin INS-1 hücre proliferasyonunu belirgin şekilde teşvik ettiğini ve apoptozu inhibe ederek insülin sekresyonunu artırdığını göstermiştir. Bu durum, miR-3619-5p'nin pankreatik β-hücre proliferasyonunu teşvik ederek ve apoptozu inhibe ederek insülin sekresyon fonksiyonunu iyileştirebileceğini ve böylece T2DM'nin patogenezinde rol oynayabileceğini düşündürmektedir. Bu bulgu, hedef genlerin ekspresyonunu düzenleyerek pankreatik β-hücre proliferasyonunu ve diferansiyasyonunu teşvik eden miR-26a-5p ve miR-765 gibi, önceki çalışmalarda tanımlanan pankreatik β-hücre proliferasyonundaki miRNA düzenleyici mekanizmalarıyla uyumludur35,36.
Bu çalışmada, MTA3'ün miR-3619-5p'nin bir hedef geni olduğunu doğrulamak için biyoinformatik öngörüler ve DLR analizleri kullanılmıştır. Metastazla ilişkili bir protein olan MTA3; hücre proliferasyonu, apoptoz ve metabolizma gibi temel fizyolojik süreçlerde kapsamlı bir rol oynar20. Araştırmalar, MTA3'ün yüksek glikozla indüklenen karaciğer fibrozisinin düzenlenmesinde yer aldığını bulmuştur24. T2DM kaynaklı MTA3 supresyonu, testislerdeki artmış oksidatif stres ile ilişkilendirilmiştir37. Bu çalışmada, HG ile işlem görmüş hücrelerde MTA3 aşağıye düzenlenmiştir. Hücre proliferasyon analizlerinin sonuçlarıyla birlikte değerlendirildiğinde, si-MTA3'ün pankreatik β-hücre proliferasyonunu inhibe ederek T2DM patogenezine katkıda bulunabileceği, miR-3619-5p'nin ise MTA3 ekspresyonunu düzenleyerek bu inhibisyonu hafifletebileceği ve böylece pankreatik β-hücre fonksiyonunu iyileştirebileceği hipotez edilmektedir. Bu mekanizmanın açıklığa kavuşturulması, pankreatik β-hücre proliferasyonunun miRNA düzenlemesine ilişkin moleküler ağı daha da detaylandırmakta ve T2DM patogenezi araştırmaları için yeni bir perspektif sunmaktadır.
Bu çalışmanın bulguları potansiyel klinik ve translasyonel değere sahiptir. Serum miR-3619-5p periferik venöz kanda tespit edilebilir; sonraki geniş ölçekli kohort çalışmalarında doğrulanırsa, klinisyenlerin pankreatik β-hücre disfonksiyonu riski taşıyan bireyleri tanımlamasına yardımcı olacak yardımcı bir biyolojik belirteç olarak gelecek vaat etmekte ve böylece daha erken risk sınıflandırmasına olanak tanımaktadır. miR-3619-5p, β-hücre sağkalımını ve insülin sekresyonunu korumak için MTA3 yolunu hedefleyip düzenleyerek hiperglisemi kaynaklı pankreatik β-hücre hasarını hafifletebilir. Bu durum, miR-3619-5p/MTA3 aksının diyabette adacık koruması için yeni bir hedef olarak hizmet etme potansiyeline sahip olduğunu göstermekte ve adacık fonksiyonunu korumaya yönelik nükleik asit tabanlı ilaçların veya küçük molekül inhibitörlerinin sonraki geliştirilmesi için temel deneysel bilgiler sunmaktadır.
Mevcut çalışmada birkaç kısıtlamaya dikkat çekilmelidir: İlk olarak, araştırmamız tek bir merkezde yürütülmüştür; seçim yanlılığı mevcut olabilir ve katılımcılar arasındaki bireyler arası değişkenlik nispeten sınırlıdır. Gelecekteki araştırmalar, miR‑3619‑5p'nin ekspresyon profilini ve klinik değerini doğrulamak için örneklem boyutunu genişletmeli ve çok merkezli çalışmalar yürütmelidir. İkinci olarak, bu çalışma miR-3619-5p'nin pankreatik β-hücre proliferasyonundaki düzenleyici işlevini yalnızca hücresel düzeyde doğrulamış ve hayvan deneyleri aracılığıyla daha ileri bir doğrulama yapmamıştır. Gelecekteki çalışmalar, in vivo etki mekanizmalarını daha ayrıntılı incelemek için bir T2DM hayvan modeli oluşturmalıdır. Üçüncü olarak, miRNA'lar genellikle çok fonksiyonlu özellikler sergiler ve miR-3619-5p çeşitli ilgili genleri de düzenleyebilir. Aynı zamanda, miRNA taklitleri veya inhibitörleri kullanan in vitro transfeksiyon sistemleri potansiyel hedef dışı etkilere açıktır; yüksek dozlardaki yapay müdahaleler, birden fazla sinyal yolunu spesifik olmayan şekilde aktive edebilir veya inhibe edebilir ve bu da fizyolojik koşullar altında gözlemlenen etki biçiminin tam olarak tekrarlanmasını zorlaştırabilir. Gelecekteki araştırmalar, spesifik hedefli düzenleme ile hedef dışı etkilerden kaynaklanan spesifik olmayan biyolojik etkiler arasındaki farkı ayırt etmek için daha kapsamlı tüm transkriptom hedef taramasına ihtiyaç duymaktadır. Dördüncü olarak, bu çalışma in vitro yüksek glukoz modelinde 25 mM glukoz müdahalesi kullanmış olsa da, mannitol ozmotik kontrol grubu oluşturulmamıştır; sonuç olarak, glukoza özgü metabolik etkiler ile ozmotik stresten kaynaklanan etkiler tam olarak ayırt edilememiştir. Gelecekteki deneyler, yüksek glukoz seviyelerinin INS-1 hücrelerini etkileme mekanizmasını daha fazla aydınlatmak için ozmotik kontrolü dahil etmelidir. Son olarak, klinik örnekler ile in vitro hücre modelleri arasında tür uyumsuzluğu vardır; INS-1 hücreleri pankreatik β-hücrelerinin fonksiyonel olgunlaşmasını incelemek için klasik bir in vitro model olsa da, sıçan hücrelerinde gözlemlenen düzenleyici mekanizmalar insanlardaki gerçek biyolojik süreçlerle doğrudan eşitlenemez. Bu nedenle, bu çalışmada in vitro hücresel düzeyde tanımlanan miR-3619-5p/MTA3 düzenleyici ilişkisinin klinik uygulamalar için yorumlanmasında dikkatli olunmalıdır. Gelecekteki çalışmalar, bu yolun türler arası korunumunu daha fazla doğrulamak için insan pankreatik β-hücre modellerini veya insan primer adacıklarını kullanacaktır.
miR-3619-5p, T2DM hastalarının serumunda ve pankreas β-hücrelerinde düşük seviyededir; MTA3'ü hedefleyerek miR-3619-5p, hiperglisemi kaynaklı pankreas β-hücresi disfonksiyonunu hafifletebilir, pankreas β-hücresi proliferasyonunu teşvik edebilir, apoptozu inhibe edebilir ve insülin sekresyonunu iyileştirebilir. Bu çalışma, miR-3619-5p'nin diyabet riskinin stratifikasyonuna yardımcı olmakta faydalı olabileceğini ve miR-3619-5p/MTA3 aksının adacık koruması için potansiyel bir hedef olduğunu göstermektedir. Gelecekte, klinik değerini doğrulamak için daha geniş ölçekli bir kohort çalışması yürüteceğiz ve diyabet hayvan modellerini kullanarak in vivo fonksiyonel doğrulama gerçekleştireceğiz; aynı zamanda, adacık fonksiyonundaki değişikliklere aracılık eden MTA3 altındaki sinyal yolaklarının derinlemesine bir analizini yapacağız ve bu hedefin adacık koruma tedavisi için translasyonel potansiyelini daha ayrıntılı değerlendireceğiz.
Açıklamalar
Yazarların beyan edilecek herhangi bir ilgili finansal veya finansal olmayan çıkarı yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, Diyabet ve Üriner Sistem Enfeksiyonları Olan Hastalar için Önleme Stratejileri (No. MSZ2025119) tarafından desteklenmiştir.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Annexin V-FITC/PI Apoptos Saptama Kiti | Roche, Switzerland | 11684795910 | Annexin V-FITC (10 µL) ve PI (5 µL) boyama; karanlıkta 15 dk inkübasyon |
| Hücre Sayım Kiti-8 (CCK-8) | Dojindo, Japan | CK04 | Hücre canlılığı için kolorimetrik analiz; kuyucuk başına 10 µL, 2 sa inkübasyon, OD450 ölçümü |
| D-Glikoz | Sigma-Aldrich | G7021 | Yüksek glikoz (HG)-indüklü hücresel hasar modelini oluşturmak için kültür ortamına 25 mM konsantrasyonda eklendi |
| Dual-Luciferase Reporter Analiz Sistemi | Promega, USA | E1910 | Ateş böceği ve Renilla lüsiferaz aktivitelerinin ardışık ölçümü |
| Fetal sığır serumu (FBS) | Gibco, USA | 10437028 | %10 nihai konsantrasyonda destekleyici |
| Akış sitometresi | Beckman Coulter, USA | CytoFLEX | Apoptos oranı hesaplaması için akış sitometrisi analizi |
| GAPDH antikoru | Abcam, UK | ab181602 | Western blot |
| GAPDH primerleri | Sangon Biotech, China | Custom synthesis | mRNA normalizasyonu için housekeeping geni |
| Keçi Anti-Tavşan IgG H&L (HRP) | Abcam, UK | ab6721 | Western blot |
| HEK293T hücre hattı | ATCC, USA | CRL-3216 | İnsan embriyonik böbrek hücreleri; lüsiferaz analizleri için yüksek transfeksiyon verimliliği |
| INS-1 hücre hattı | Sunncell, China | SNL-332 | Sıçan insülinoma hücre hattı; %10 FBS ve %1 penisilin-streptomisin içeren RPMI 1640'ta kültüre edildi |
| LightCycler 480 II Real-Time PCR Sistemi | Roche, Switzerland | 5015278001 | Real-time PCR amplifikasyonu; 96 kuyucuklu veya 384 kuyucuklu plaka formatı |
| Lipofectamine 3000 | Invitrogen, USA | L3000001 | Lipid bazlı transfeksiyon reaktifi |
| Mikroplaka okuyucu | BioTek, Agilent | Synergy H1 | Absorbans ölçümü; örnek konsantrasyonları standart eğrilerden interpole edildi |
| miR-3619-5p inhibitörleri | RiboBio, China | miR20017999-1-5 | miR-3619-5p fonksiyonunu inhibe etmek için kimyasal olarak sentezlenmiş tek sarmallı RNA |
| miR-3619-5p mimikleri | RiboBio, China | miR10017999-1-5 | miR-3619-5p aşırı ekspresyonu için kimyasal olarak sentezlenmiş çift sarmallı RNA |
| miR-3619-5p primerleri | Sangon Biotech, China | Custom synthesis | miR-3619-5p saptaması için spesifik primerler |
| miR-NC (miRNA boş kontrol) | RiboBio, China | miR2N0000001-1-5 | miRNA mimik/inhibitör deneyleri için hedef dışı negatif kontrol |
| miRNeasy Mini Kit | Qiagen, Germany | 217004 | Hücre örneklerinden toplam RNA ekstraksiyonu |
| miScript II RT Kiti | Qiagen, Germany | 218160 | miRNA için ters transkripsiyon; poly(A) kuyruklama ve oligo-dT primleme kullanır |
| miScript SYBR Green PCR Kiti | Qiagen, Germany | 218073 | miRNA saptaması için SYBR Green bazlı qPCR |
| MTA3 antikoru | Invitrogen, USA | PA5-100022 | Western blot |
| MTA3 primerleri | Sangon Biotech, China | Custom synthesis | MTA3 mRNA saptaması için spesifik primerler |
| NanoDrop 2000 spektrofotometresi | Thermo Fisher Scientific, USA | ND-2000 | RNA konsantrasyonu ve saflık değerlendirmesi |
| Penisilin-Streptomisin | Gibco, USA | 15140122 | Bakteriyel kontaminasyonu önlemek için %1'lik antibiyotik çözeltisi |
| pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Hedef Ekspresyon Vektörü | Promega, USA | E1330 | miRNA hedef validasyonu için dual-lüsiferaz reporter vektörü; ateş böceği ve Renilla lüsiferaz genlerini içerir |
| gDNA Eraser içeren PrimeScript RT Reaktif Kiti | TaKaRa, Japan | RR047A | Genomik DNA eliminasyon aşamalı ters transkripsiyon |
| Sıçan İnsülin ELISA Kiti | Invitrogen, USA | ERINS | INS-1 hücreleri tarafından kültür ortamına salgılanan insülinin kantitatif saptaması |
| RPMI 1640 ortamı | Gibco, USA | 11875093 | Bazal kültür ortamı; %10 FBS ve %1 penisilin-streptomisin ile desteklenmiş |
| si-MTA3 | RiboBio, China | siB170209084646-1-5 | Gen susturma için MTA3'ü hedefleyen küçük interferans RNA |
| si-NC (siRNA için boş kontrol) | RiboBio, China | siB06525141922-1-5 | Hedef dışı siRNA kontrolü |
| SYBR Green Master PCR Mix | TaKaRa, Japan | RR820A | SYBR Green bazlı qPCR amplifikasyonu |
| TRIzol Reaktifi | Invitrogen, USA | 15596026 | Serum örneklerinden toplam RNA ekstraksiyonu |
| U6 primerleri | Sangon Biotech, China | Custom synthesis | miRNA normalizasyonu için endojen referans |
Kaynaklar
- Wang L, et al. Associated factors and principal pathophysiological mechanisms of type 2 diabetes mellitus. Front Endocrinol (Lausanne). 2025;16:1499565.
- Wan Z, et al. The role of systemic inflammation in the association between serum 25-hydroxyvitamin D and type 2 diabetes mellitus. Clin Nutr. 2021;40(6):3661–7.
- Okamoto A, et al. Efficacy and safety of semaglutide in glycemic control, body weight management, lipid profiles and other biomarkers among obese type 2 diabetes patients initiated or switched to semaglutide from other GLP-1 receptor agonists. J Diabetes Metab Disord. 2021;20(2):2121–8.
- Aguayo-Mazzucato C, et al. β Cell Aging Markers Have Heterogeneous Distribution and Are Induced by Insulin Resistance. Cell Metab. 2017;25(4):898–910.e5.
- Goshrani A, Lin R, O'Neal D, Ekinci EI. Time in range-A new gold standard in type 2 diabetes research Diabetes Obes Metab. 2025;27(5):2342–62.
- Niu F, et al. β-cell neogenesis: A rising star to rescue diabetes mellitus. J Adv Res. 2024;62:71–89.
- Zhang Y, et al. THADA inhibition in mice protects against type 2 diabetes mellitus by improving pancreatic β-cell function and preserving β-cell mass. Nat Commun. 2023;14(1):1020.
- Ho PTB, Clark IM, Le LTT. MicroRNA-Based Diagnosis and Therapy. Int J Mol Sci. 2022;23(13).
- Poy MN, et al. A pancreatic islet-specific microRNA regulates insulin secretion. Nature. 2004;432(7014):226–30.
- Karagiannopoulos A, Cowan E, Eliasson L. miRNAs in the Beta Cell-Friends or Foes Endocrinology. 2023;164(5).
- Hu H, et al. Plasma miR-193b-3p Is Elevated in Type 2 Diabetes and Could Impair Glucose Metabolism. Front Endocrinol (Lausanne). 2022;13:814347.
- Benko J, et al. MiR-126 and miR-146a as markers of type 2 diabetes mellitus: a pilot study. Bratisl Lek Listy. 2023;124(7):527–33.
- Liu C, Gao Y, Wu J, Zou J. Exosomal miR-23a and miR-192, Potential Diagnostic Biomarkers for Type 2 Diabetes. Clin Lab. 2021;67(2).
- Liu Y, Li J, Wang S, Song H, Yu T. STAT4-mediated down-regulation of miR-3619-5p facilitates stomach adenocarcinoma by modulating TBC1D10B. Cancer Biol Ther. 2020;21(7):656–64.
- Ma J, et al. M2 macrophage facilitated angiogenesis in cutaneous squamous cell carcinoma via circ_TNFRSF21/miR-3619-5p/ROCK axis. Kaohsiung J Med Sci. 2022;38(8):761–71.
- Zhang M, Luo H, Hui L. MiR-3619-5p hampers proliferation and cisplatin resistance in cutaneous squamous-cell carcinoma via KPNA4. Biochem Biophys Res Commun. 2019;513(2):419–25.
- Ge L, Tan W, Li G, Gong N, Zhou L. Circ_0026134 promotes NSCLC progression by the miR-3619-5p/CHAF1B axis. Thorac Cancer. 2022;13(4):582–92.
- Sun Z, Li X, Shi Y, Yao Y. LncRNA PVT1 facilitates the growth and metastasis of colorectal cancer by sponging with miR-3619-5p to regulate TRIM29 expression. Cancer Rep (Hoboken). 2024;7(6):e2085.
- Wu C, et al. Long Noncoding RNA Plasmacytoma Variant Translocation 1 Regulates Cisplatin Resistance via miR-3619-5p/TBL1XR1 Axis in Gastric Cancer. Cancer Biother Radiopharm. 2020;35(10):741–52.
- Tang Y, et al. Mechanisms of MTA3 in cancer and related diseases and its clinical applications. Front Oncol. 2025;15:1731799.
- Lau P, et al. Sphingosine kinase 1 promotes tumor immune evasion by regulating the MTA3-PD-L1 axis. Cell Mol Immunol. 2022;19(10):1153–67.
- Du L, et al. MTA3 Represses Cancer Stemness by Targeting the SOX2OT/SOX2 Axis. iScience. 2019;22:353–68.
- Liu Y, et al. Discovery of Jaspamycin from marine-derived natural product based on MTA3 to inhibit hepatocellular carcinoma progression. Sci Rep. 2024;14(1):25294.
- Li Q, et al. High glucose promotes hepatic fibrosis via miR‑32/MTA3‑mediated epithelial‑to‑mesenchymal transition. Mol Med Rep. 2019;19(4):3190–200.
- Pu M, Kong L, Li J, Su L, Chen Y. LncRNA NBR2 affects pancreatic β-cell function in type 2 diabetes mellitus by targeting miR-646. Diabetol Metab Syndr. 2025;17(1):454.
- Galicia-Garcia U, et al. Pathophysiology of Type 2 Diabetes Mellitus. Int J Mol Sci. 2020;21(17).
- Wang J, et al. Extracellular vesicles mediate the communication of adipose tissue with brain and promote cognitive impairment associated with insulin resistance. Cell Metab. 2022;34(9):1264–79.e8.
- Rosado JA, Diez-Bello R, Salido GM, Jardin I. Fine-tuning of microRNAs in Type 2 Diabetes Mellitus. Curr Med Chem. 2019;26(22):4102–18.
- Taheri M, Eghtedarian R, Ghafouri-Fard S, Omrani MD. Non-coding RNAs and type 2 diabetes mellitus. Arch Physiol Biochem. 2023;129(2):526–35.
- Song B, et al. LINC00882 Plays a Tumor-promoter Role in Colorectal Cancer by Targeting miR-3619-5p to Up-regulate CTNNB1. Arch Med Res. 2022;53(1):29–36.
- Costa NA, et al. Peritoneal dialysis influences microRNA expression and pro-inflammatory response: results from a cross-sectional study. J Bras Nefrol. 2026;48(1):e20240218.
- Chen J, et al. Identification of the LncRNA PRNCR1/miR-642a-5p/SSTR3 CeRNA network and its diagnostic value in type 2 diabetes mellitus. Diabetol Metab Syndr. 2025;18(1):39.
- Elizabeth MM, et al. Pancreatic β-Cells and Type 2 Diabetes Development. Curr Diabetes Rev. 2017;13(2):108–21.
- Kerper N, Ashe S, Hebrok M. Pancreatic β-Cell Development and Regeneration. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2022;14(5).
- Yang F, Zhao S, Zhang X, Ding S, Xu Y. RNF6 Targeted by miR-26a-5p Protects Pancreatic β-Cell Function Against Type 2 Diabetes. Diabetes Metab Syndr Obes. 2022;15:93–102.
- Zheng L, et al. miR-765 targeting PDX1 impairs pancreatic β-cell function to induce type 2 diabetes. Arch Physiol Biochem. 2023;129(6):1279–88.
- Liu F, et al. T2DM-elicited oxidative stress represses MTA3 expression in mouse Leydig cells. Reproduction. 2022;163(5):267–80.