Bu laboratuvar çalışması, Kocaeli Sağlık ve Teknoloji Üniversitesi kurumsal etik kurulu tarafından onaylanmış (onay numarası 31/22) olup, Helsinki Deklarasyonu ve PRILE 2021 kılavuzlarında belirtilen etik ilkelere uygun olarak yürütülmüştür28 (Ek Dosya 1 ve Ek Dosya 2). Çekilmiş dişlerin kullanımı için donörlerden bilgilendirilmiş onam alınmıştır. Örnek modeli, kanal hazırlığı ve puanlama, tanımlanmış bir protokol takip edilerek yapılmıştır8. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, aletler ve yazılımlar Malzemeler Tablosu'nda listelenmiştir.
Örneklem büyüklüğü hesaplaması
Örneklem büyüklüğü, aynı yapay oluk modelini ve puanlama sistemini kullanan önceki bir araştırmaya dayandırılmıştır26. Söz konusu çalışmada, a priori bir güç analizi (etki büyüklüğü = 0,6, α = 0,05, güç = 0,95), grup başına n = 12 olduğunu göstermiş; yazarlar olası kayıpları telafi etmek için bu sayıyı 15'e çıkarmışlardır. Hassasiyeti artırmak için mevcut çalışmada grup başına n = 20 kullanılmış ve toplamda 400 oluk elde edilmiştir. Bu hesaplama, temizleme tekniğinin ana etkisini ele almış; teknik × kanal patı etkileşimi için ayrı bir a priori hesaplama yapılmamıştır. Scheirer-Ray-Hare istatistiğinin ki-kare dağılımına dayalı bir post hoc duyarlılık analizi (statsmodels 0.14.6), her bölgede analiz edilen 200 oluğun, w = 0,24 etki büyüklüğündeki (4 serbestlik derecesi) bir etkileşimi ve w = 0,20 (1 serbestlik derecesi) kanal patı ana etkisini tespit etmek için %80 güç (α = 0,05) sağladığını göstermiştir; bu nedenle, bunlardan daha küçük olan ve Cohen'in w = 0,3 orta etki büyüklüğünün altındaki etkiler tespit edilememiş olabilir.
Örnek seçim kriterleri
İki yüz adet çekilmiş insan üst çene santral kesici diş kullanılmıştır. Dişler çekildikten sonra %2 NaOCl ile dezenfekte edilmiş, distile su ile durulanmış ve kullanıma kadar timol solüsyonunda saklanmıştır. Düz tek bir kök kanalına ve sağlam bir apikale sahip olan dişler çalışmaya dahil edilmiş ve tek kanal varlığı radyografik olarak doğrulanmıştır. Eğrilik, kalsifikasyon, önceki tedavi, rezorpsiyon veya başlangıç apikal boyutu #30 veya daha büyük olan dişler hariç tutulmuştur. Kronlar standart bir uzunlukta kesilmiş ve 18 mm'lik bir çalışma boyu belirlenmiştir. Randomizasyon, web tabanlı bir rastgele dizi oluşturucu (random.org) ile iki aşamada gerçekleştirilmiştir: 200 diş önce iki patlayıcıya (her biri n = 100) ayrılmış, ardından her bir patlayıcıya ait dişler beş farklı uzaklaştırma tekniğine (her grup için n = 20) atanmış, böylece atamalar patlayıcıya göre tabakalandırılmıştır. Rastgele diziler, puanlamayı yapmayan bir araştırmacı tarafından oluşturulup uygulanmış ve gözlemcilerin hem patlayıcıya hem de uzaklaştırma tekniğine karşı kör kalmasını sağlamak için örnekler kodlanmış tanımlayıcılarla etiketlenmiştir.
DİKKAT: Ekstraksiyonla alınan insan dişleri potansiyel bir biyolojik tehlike teşkil eder. Tüm numunelerle çalışırken eldiven, maske ve koruyucu gözlük dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipman kullanın.
Numune hazırlama
ISO boyut 10 K-file ile açıklık onaylandıktan sonra, kanallar %3 sodyum hipoklorit (NaOCl) irrigasyonu altında, rotary endodontik enstrümantasyon sistemi kullanılarak çalışma boyunda 40/0.04 boyutuna kadar genişletildi; ardından 5 mL %3 NaOCl ve 5 mL %17 etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ile durulama yapıldı. Tüm NaOCl çözeltileri, %5,25'lik stok çözeltinin distile su ile dilüsyonuyla hazırlandı: %3 NaOCl, %5,25'lik NaOCl ve distile suyun 4:3 hacim oranında karıştırılmasıyla (örneğin, 100 mL %5,25'lik NaOCl ve 75 mL distile su) ve %5 NaOCl ise 20:1 hacim oranında (örneğin, 100 mL %5,25'lik NaOCl ve 5 mL distile su) hazırlandı.
DİKKAT: Sodyum hipoklorit cilt, gözler ve mukoza zarları için aşındırıcıdır. Tüm çözeltileri eldiven ve koruyucu gözlük kullanarak hazırlayın ve uygulayın; apikal foramenin ötesine taşmaktan kaçının.
Kökler, santrifüj tüpleri içindeki kalıp materyaline gömülmüş ve kanal boşluğuna nüfuz etmeden elmas disk ile boylamasına ikiye bölünmüştür. Bölme işlemi sırasında kanal boşluğuna nüfuz edilen herhangi bir kök çalışma dışı bırakılacak ve aynı şekilde hazırlanmış başka bir dişle değiştirilecektir; mevcut seride hiçbir kök bu kriterle karşılaşmamıştır. Dental operasyon mikroskobu altında ×20 büyütmede, %40 güçte çalışan piezoelektrik ultrasonik endodontik üniteye takılı bir profilaksi detertraj ucu ile kanal duvarına 4 mm uzunluğunda, 0,2 mm genişliğinde ve 0,5 mm derinliğinde iki yapay oluk açılmıştır. Oluklar, apeksden 2 ila 6 mm ve 10 ila 14 mm uzaklıkta, karşılıklı kanal duvarlarına hazırlanmıştır (Şekil 1). Oluk hazırlığının ardından, 2 mL %17 EDTA kullanılarak smear tabakası uzaklaştırılmıştır.
100 dişin kanalları CeraSeal ile, geri kalan 100 dişinkiler ise gutta-perka konlar kullanılarak BioRoot Flow ile dolduruldu. Kanalların tam olarak doldurulduğu, dental operasyon mikroskobu altında ×20 büyütmede doğrulandı. Kök yarıları Eppendorf tüpleri içinde yeniden birleştirildi, giriş kavitesi geçici bir dolgu materyali ile mühürlendi, apikal foramen ve kök yüzeyleri mum ile kaplandı ve örnekler 30 gün boyunca 37 °C ve %100 nemde tutuldu. Ardından, kanal patının sertleşmesi dental operasyon mikroskobu altında ×20 büyütmede doğrulandı.
Kaldırma prosedürleri
Her bir kanal patı için numuneler, SNI'nin aktive edilmemiş kontrol grubu olduğu beş farklı uzaklaştırma tekniğine (grup başına n = 20) atandı. SNI, PUI, R-SWEEPS ve Er,Cr:YSGG grupları, üçü %5 NaOCl ve ardından üçü %17 EDTA ile yapılan altı iletim-aktivasyon döngüsünden oluşan tek bir irrigasyon rejimi paylaştı. Her döngüde, bir irrigasyon pompası ile 2 mL/min hızında 150 s boyunca 5 mL irrigan iletildi ve ardından kanalı dolduran irrigan, test edilen teknikle 20 s boyunca aktive edildi. Üç NaOCl döngüsü, üç EDTA döngüsünden önce tamamlandı; böylece her numuneye 15 mL %5 NaOCl ve 15 mL %17 EDTA (toplamda 30 mL) ile altı adet 20 s aktivasyon (her irrigan için üç, toplamda 120 s) uygulandı. Bu nedenle, aktive edilmiş üç gruptaki işlem süresi yaklaşık 17 dakikaydı (6 × 150 s iletim artı 6 × 20 s aktivasyon).
SNI grubunda, irigasyon sıvıları aktivasyon uygulanmadan, çalışma boyunun 2 mm gerisine yerleştirilmiş 30-G'lik bir iğne aracılığıyla verildi; bu grup, aktive edilen gruplarla aynı hacim, akış hızı ve irigasyon sırasını almış, ancak aktivasyon süreleri yerine gönderimler arasında herhangi bir bekleme aralığı bırakılmamıştır, böylece toplam maruziyet süresi yaklaşık 15 dk (6 × 150 s) olmuştur.
PUI grubunda, irrigasyon solüsyonu, piezoelektrik ultrasonik endodontik üniteye monte edilmiş 20 numara IrriSafe uç kullanılarak %40 güçte, uç çalışma boyunun 2 mm üzerinde konumlandırılarak, her irrigant için üç adet 20 s'lik döngü şeklinde aktive edilmiştir.
R-SWEEPS grubunda, irrigant; hava ve su spreyi kapatılmış halde, kanal içine girilmeden kanal ağzında tutulan radyali bir uç (400 µm çap, 14 mm uzunluk) kullanılarak R-SWEEPS modundaki 2940 nm Er:YAG lazer ile her irrigant için üç adet 20 s'lik döngü şeklinde aktive edilmiştir. Bu modda, her 15 mJ'lik puls, 15 Hz'lik bir puls-çifti tekrarlama hızında (çift başına 30 mJ) senkronize bir çiftin parçası olarak iletilmekte olup, bu durum 0,45 W ortalama güç, 20 s'lik aktivasyon başına 9 J ve örnek başına 54 J enerji sağlamaktadır; puls enerjisi, 400 µm uç uç yüzeyinde 11,9 J/cm2 enerji yoğunluğuna karşılık gelmektedir.
Er,Cr:YSGG grubunda irrigasyon solüsyonu, hava ve su spreyi kapalıyken, çalışma boyunun 2 mm gerisinde tutulan bir RFT2 radyal ateşleme ucu kullanılarak, H modunda (puls başına 25 mJ, 50 Hz, 1.25 W; 20 s'lik aktivasyon başına 25 J ve örnek başına 150 J) 2780 nm Er,Cr:YSGG lazer ile irrigasyon solüsyonu başına üç adet 20 s'lik döngü şeklinde aktive edilmiştir. Her iki lazer grubunda da kanal, lazer aktive edilmeden önce pompa tarafından iletilen irrigasyon solüsyonu ile doldurulmuş ve parametreler, üreticinin endodontik irrigasyon aktivasyonu için önceden tanımlanmış ayarları değiştirilmeden uygulanmıştır. Tablo 1, puls başına enerji, enerji yoğunluğu ve iletilen toplam enerji dahil olmak üzere tüm ışınlama parametrelerini sunmaktadır.
GentleWave G4 grubunda, yeniden birleştirilen örnek santrifüj tüpünde tutulmuş, endodontik irigasyon cihazı ile kanal açıklığı arasında hava sızdırmaz bir mühür oluşturmak için kökün koronal ucunun üzerine üreticinin SoundSeal rezin malzemesiyle bir platform inşa edilmiş ve GentleWave G4 sisteminin ProControl yazılımı ile otomatik işlem döngüsü, üreticinin işlem sıvıları kullanılarak şu sırayla çalıştırılmıştır: 5 dk boyunca %3 NaOCl, 30 sn boyunca distile su, 2 dk boyunca %8 EDTA ve son olarak 30 sn boyunca distile su ile durulama (toplamda yaklaşık 8 dk). İşlem cihazı, tüm döngü boyunca platform tarafından sabit tutulmuştur. İrigant konsantrasyonları, akış hızları, gaz giderme ve döngü süreleri üretici tarafından önceden belirlenmiştir ve operatör tarafından değiştirilemez; bu nedenle bu grup, irigant konsantrasyonu, hacmi ve işlem süresi açısından diğer dört gruptan farklılık göstermiştir (bkz. Tartışma bölümü).
Kalıntı sızdırmazlık maddesinin değerlendirilmesi
Kök yarımları ayrıldı ve dental operasyon mikroskobu altında ×20 büyütmede incelendi. Her bir olukta kalan kanal dolgusu materyali, dört puanlı bir ölçekle puanlandı29: 0, olukta dolgu materyali yok; 1, yarısından azında dolgu materyali var; 2, yarısından fazlasında dolgu materyali var; ve 3, oluk tamamen dolu. Dolgu materyalinden ve temizleme tekniğinden habersiz, kalibre edilmiş iki gözlemci olukları bağımsız olarak puanladı; gözlemciler arası uyum κ = 0.92 (Cohen's kappa) olarak belirlendi. Uyuşmazlıklar fikir birliğiyle çözüldü.
İstatistiksel analiz
Veriler; Python 3.9.6 ile SciPy 1.13.1, statsmodels 0.14.6 ve scikit-posthocs 0.14.0 kütüphaneleri kullanılarak analiz edildi. Apikal ve koronal oluklar ayrı ayrı analiz edildi. 10 grup arasındaki artık kanal patı skorları, Kruskal-Wallis testi ve ardından Bonferroni düzeltmeli Dunn testi ile karşılaştırıldı. Etki büyüklüğü olarak Epsilon-kare hesaplandı. Kanal patının ve uzaklaştırma tekniğinin etkileri, etkileşimleri ile birlikte Scheirer-Ray-Hare testi kullanılarak incelendi. Her bir uzaklaştırma tekniği dahilinde iki kanal patı, Bonferroni düzeltmeli Mann-Whitney U testi ile karşılaştırıldı ve etki büyüklüğü olarak bootstrap yöntemiyle hesaplanmış %95 güven aralıkları ile Cliff's delta raporlandı. Anlamlılık düzeyi %5 olarak belirlendi.