Çeşitli video klipler, faz kontrast gösteren ve DIC mikroskopi başlıklı başka bir video-makale <a href="details.stp?ID=197">alınmıştır Symbiosis,</a> Katmanlar . Vallahi Leadbetter laboratuvarı tarafından yapılan bu katkı nezaketle kabul eder.

Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">Hücre Biyolojisi Şu Protokolleri.</a>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

faz kontrast ve diferansiyel girişim kontrast (dic) mikroskopi

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Faz-kontrast mikroskobu genellikle şeffaf olmayan, biyolojik örneklerin ışık emici kontrast üretmek için kullanılır. Teknik Zernike, 1942 yılında, onun başarısı için Nobel ödülü aldı tarafından keşfedildi. , Örnek yapısal detay kenarları vurgulamaktadır doku hücrelerinin, yumurta ve embriyolar da dahil olmak üzere, kalın kesitlerle yüksek çözünürlüklü optik bölümleri sağlar ve faz haleler tipik bir zarar vermez, çünkü 1960&#39;ların sonlarında piyasaya DIC mikroskopi, biyomedikal araştırma popüler oldu faz kontrastlı görüntüler. Bu protokol, bu mikroskopi teknikleri ilkeleri ve pratik uygulamalar vurgulamaktadır.

Bu protokol, Faz ve Diferansiyel Girişim Kontrast ilkeleri ve pratik uygulamalar (DIC) Mikroskopi vurgulamaktadır

Faz Kontrast ve Diferansiyel Girişim Kontrast (DIC) Mikroskopi

Faz-kontrast mikroskopisi, şeffaf ve ışığı absorbe etmeyen biyolojik numunelerde kontrast oluşturmak için sıklıkla kullanılır. Bu teknik, ... tarafından keşfedilmiştir.

Işık mikroskobu, biyomedikal araştırma alanındaki en etkin araçlardan biridir, hatta belki de en etkili olanıdır. Uygulamanıza bağlı olarak, numunelerin incelenmesi için farklı aydınlatma modları tercih edilir. Bu video, geçirgen ışık aydınlatmasının iki optik modunu, faz kontrast ve DIC veya diferansiyel girişim kontrast mikroskobisini gösterecektir.Merhaba, ben San Antonio'daki Texas Sağlık Bilimleri Merkezi Üniversitesi'nin merkezi Optik Görüntüleme tesisinden Victoria San Frolic. Bugün size faz kontrast ve diferansiyel girişim kontrast mikroskobisi kullanarak örneklerin nasıl doğru şekilde inceleneceğini göstereceğim. Hadi başlayalım.Standart parlak alan mikroskobu, şeffaf ve renksiz örneklerin görüntülenmesi için yeterli değildir. Faz kontrastlı mikroskopi, genellikle ışığı soğurmayan şeffaf biyolojik örnekler için kontrast oluşturmak amacıyla kullanılır. Bu teknik, başarısıyla Nobel Ödülü'ne layık görülen Zurninac tarafından 1942 yılında keşfedilmiştir.Faz kontrast mikroskobu, bir faz plakası veya halkası içeren özel faz kontrast objektiflerinin ve diyafram yerine bir kondansatör anulusunun eklendiği bir parlak alan ışık mikroskobudur. Anulus genellikle kondansatör taretinde bulunur ve farklı objektifler için uygun anulus boyutunun seçilmesi gerekir. Kohler aydınlatması kurulduktan sonra uygun faz objektifi seçilmeli ve ardından kondansatördeki uygun faz anulusu konuma getirilmelidir.Objektif faz halkası ve kondansatör anülü, konsentrik ve örtüşecek şekilde uygun şekilde hizalandıktan sonra, örneği görüntüleyebilir ve odağı doğru şekilde ayarlayabiliriz. Şimdi mikroskop altında faz kontrastının nasıl göründüğünü gösterelim. İşte bir sıçan karaciğer kesitine bakış.Faz kontrastı altında. Bu yöntem, kontrastı grinin farklı tonlarından siyah ve beyaz tonlarına dönüştürerek biyolojik materyalin görünümünü iyileştirir. Bununla birlikte, numunelerin çevresinde ince yapıları gölgeleyen bir halo oluştuğunu fark edeceksiniz.Bu hale, faz halkasının aydınlatmasından kaynaklanan bir artefaktır. Şimdi, parlak alan moduna geçtiğimizde bu örneği görüntülemenin çok zor olduğunu fark edeceksiniz. Tekrar faz kontrastına döndüğümüzde, 1960'ların sonlarında tanıtılmasından beri olduğu gibi, sıçan karaciğer dokusundaki hücrelerin yapısını ve şeklini net bir şekilde görebiliyoruz.Diferansiyel girişim kontrastı veya DIC mikroskobu, kontrastlı arayüzleri belirginleştirerek ince yapıların yüksek çözünürlüklü görüntülerini oluşturduğu için biyomedikal araştırmalarda popüler hale gelmiştir; elde edilen görüntü oldukça ince bir optik kesittir. Aslında, DIC'in optik kesitler oluşturabilme yeteneği, onu konfokal mikroskobun tamamlayıcı bir iletim ışığı aydınlatma modu haline getirmiştir. DIC mikroskobu, ışık kaynağı ile kondanser arasına yerleştirilmiş bir polarizatör gibi şu ek bileşenlere sahip bir parlak alan ışık mikroskobudur.Kondansatör kısmında bir DIC ışın ayırma prizması, objektifin hemen arkasında bir DIC ışın birleştirme prizması ve iki blenden önceki sonsuzluk boşluğunda bir analizör bulunur. DIC optiklerinden en iyi performansı elde etmek için, öncelikle ışık mikroskobunu Kohler aydınlatması için hizalamak ve ardından DIC elemanlarını optik yola yerleştirmek önemlidir. Kaynaktan gelen ışık bir polarizörden geçer ve ardından ilk prizma tarafından ayrılır.Bu eşleşmiş ışınlar birbirine yakın seyreder. Eğer çiftin her ikisi de numunedeki aynı malzemeden geçerse, ikinci prizma tarafından yeniden birleştirildiklerinde birbirleriyle girişim yapmazlar ve bu nedenle gri görünürler. Ancak bir yapının kenarında, çiftin bir ışını ortağından farklı bir malzemeden geçer ve değişime uğrar.Bu ışınlar ikinci prizma tarafından yeniden birleştirildiğinde, ya parlak bir nokta oluşturan yapıcı bir girişim ya da karanlık bir nokta oluşturan yıkıcı bir girişim gerçekleştireceklerdir. İşte DIC kontrastı altında diyatomlara bir bakış. Diyatom yapısının ince detaylarının kolayca görülebildiğini fark edeceksiniz.Ancak, DIC optikleri çıkarılırsa bu detaylar kaybolur. Numune üzerindeki kontrast bir tarafında parlak, diğer tarafında ise daha karanlıktır. Bu durum topografya izlenimi verir, ancak aslında bu bir illüzyondur.Gölge oluşturma etkisinin yönü, polarizör bir geçiş noktası üzerinden ters Kontrast'a döndürülerek tersine çevrilebilir. Faz kontrastı ve DIC'in optik modlarını inceledik. Hatırlatmak gerekirse, faz kontrastı giderme işlemi, kontrastlı örnekleri siyahtan beyaza doğru belirginleştirir ve hem renksiz hem de şeffaf olan örnekleri görüntülemek için kullanışlıdır.DIC ayrıca numunede kontrast oluşturur. Bunu, ince bir optik kesitin yüksek çözünürlüklü bir görüntüsünü oluşturarak yapar. İşte bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler, mikroskopi çalışmalarınızda başarılar dileriz.

phase-contrast-and-differential-interference-contrast-dic-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

University of Texas Health Science Center at San Antonio (UTHSCSA).  Bu protokol, Faz ve Diferansiyel Girişim Kontrast ilkeleri ve pratik uygulamalar (DIC) Mikroskopi vurgulamaktadır

Faz Kontrast ve Diferansiyel Girişim Kontrast (DIC) Mikroskopi

Bu makalede

Özet

Özet

Protokol

Açıklamalar

Teşekkürler

Yeniden basım ve izinler

Etiketler