Mikroskopik gözlem ilaç duyarlılık (MODS) tayini, düşük maliyetli, yüksek performanslı bir algılama tüberküloz (TB) ve çoklu ilaca dirençli tüberküloz (MDRTB) düşük teknolojili bir araçtır. Bu video MODS sıvı medya kültürü yöntemi açıklanmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Mikroskopik gözlem ilaç duyarlılık (MODS) tayini, düşük maliyetli, yüksek performanslı bir algılama tüberküloz (TB) ve çoklu ilaca dirençli tüberküloz (MDRTB) düşük teknolojili bir araçtır. Bu video MODS sıvı medya kültürü yöntemi açıklanmıştır.
Aktif akciğer tüberküloz (TB) olan hastalar, hasta kür ve yeni enfeksiyonların önlenmesi için gerekli aktif verem teşhis yapma, yılda 10-15 kişi enfekte. Ayrıca, çok ilaca dirençli tüberküloz (MDRTB) ortaya çıkması, ilaç direncinin saptanması ilaca dirençli suşların yayılmasını durdurmak için gerekli anlamına gelir. Mikroskopik gözlem ilaç duyarlılık (MODS) testi, TB ve MDRTB yüksek performanslı bir algılama için düşük maliyetli, düşük teknolojili bir araçtır. Mycobacterium tuberculosis (MTB) mikroskobik MTB büyüme katı ortam kolonilerinin makroskopik görünüm için beklemek yerine sıvı ortamda daha önce tespit ve olabilir) katı ortam 2 daha sıvı ortamda hızlı büyür 1): MODS testi üç temel ilkeye dayanır büyüme altkültürü gerçekleştirmek için ihtiyaç kalmayabilir, MTB karakteristik ilaçlar izoniazid ve rifampisin MDRTB eş zamanlı olarak doğrudan tespiti için izin MODS testi dahil edilebilir atipik mikobakteriler veya mantar veya bakteriyel kontaminasyon 3) ayırt edilmesi için izin dolaylı bir ilaç duyarlılık testi. Rekabet mevcut teşhis balgam smear ile düşük hassasiyet, katı ortam kültürü, mevcut sıvı ortam kültür yöntemleri ile yasaklı yüksek maliyet ve MDRTB tespit etmek için dolaylı olarak ilaç duyarlılık testi için altkültürü yapmak ihtiyacı ile tanıya kadar uzun gecikmeler engel. Buna karşılık, ticari olmayan MODS yöntemi, TB ve MDRTB için bir yüksek hassasiyet vardır bir görece hızlı kültür yöntemi, MDRTB için eş zamanlı olarak ilaç duyarlılık testi sağlar, ve TB için test için sadece altında ABD doları 3 kaynak sınırlı ayarları erişilebilir ve MDRTB.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
MODS tahlil, kaynak sınırlı ayarları hedeflenmektedir. Ilk kez, MODS tüberküloz hızlı sıvı kültür algılama yeteneği getiriyor ve hemen altında test başına 3 $ kaynak sınırlı ayarları dirençli tüberküloz ilaca. MODS ticari olmayan, iteratif metodoloji ve MODS topluluk her zaman diğer laboratuvarlardan yapmak başarmış iyileştirmelerini de ilgileniyor.
Sıvı dökülürse veya aerosolize olabilir, çünkü tüberküloz sıvı medya kültürü, nükseden bir endişe biyogüvenlik. MODS testi dolaylı olarak ilaç duyarlılık testi mikobakteriler, dökülme ve...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Biz Sean Fitzwater ve Carmen Giannina Luna Colombo tüberküloz büyüme time-lapse video segment için kabul etmek istiyorum. Biz eksiksiz ve mükemmel bir geri bildirim için geçerli protokol çoğunlukla birebir alındığı Kullanım Kılavuzu, düzenleme sırasında Marty Roper teşekkür ediyorum ve co-yazma. Bu video Üretim NIH / Fogarty Uluslararası Merkezi tarafından finanse edildi http://www.fic.nih.gov/ David AJ Moore Imperial College London Bulaşıcı Hastalıklar Tropikal Tıp ve Reader Wellcome Trust Klinik Araştırma Görevlisi (Fellowship olarak katkıda ödül sayısı 078067/Z/05). Mark F. Brady bir NIH / Fogarty Uluslararası Araştırma Merkezi Araştırma Görevlisi olarak katkıda bulundu.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Buzdolabı/dondurucu | Ekipman | önceden hazırlanmış besiyeri ve antibiyotik stoklarını saklamak için | ||
| Vorteksle karıştırın | Ekipman | balgam dekontaminasyonuna yardımcı olmak için | ||
| Santrifüj | Ekipmanlar | balgam konsantrasyonu için; 3000 g'ye ulaşabilen; d–soğutulması gerekmez ancak biyogüvenli OLMALIDIR (kovalar sızdırmaz şekilde kapatılabilir) | ||
| İnkübatör (37 °C) | Ekipman | kültür için; CO2 ile zenginleştirilmesine gerek yoktur | ||
| Ters ışık mikroskobu | Mikroskop | MODS plaklarını okumak için | ||
| Otoklav | Ekipmanlar | besiyerlerini, PBS'yi ve kullanılmış plakaları sterilize etmek için | ||
| Terazi | Ekipman | izoniazid, rifampisin ve NALC tartmak için | ||
| Middlebrook 7H9 besiyeri (Difco) | Reaktif | Fisher Scientific | DF0713-17-9 | 500gr/şişe; kültür ortamı bazı |
| Casitone (pankreatik sindirim kazein) | Reaktif | Fisher Scientific | DF0259‐17‐9 | 500gr/şişe; kültür besiyeri bazı |
| Liyofilize gliserol (gliserin) | Reaktif | Sigma-Aldrich | G‐33‐500 | 500 ml/şişe; kültür ortamı bazı |
| PANTA (Liyofilize antibiyotik karışımı BD) | Reaktif | Fisher Scientific | B4345114 | 6 şişe/paket; antibiyotikli besiyeri takviyesi |
| OADC (Middlebrook OADC zenginleştirme BD) | Reaktif | Fisher Scientific | B11886 | 10 x 20ml/paket; besiyeri takviyesi |
| Dimetil sülfoksit (Hibri-Max) | Reaktif | Sigma-Aldrich | D-2650 | şişe başına 100 ml; rifampisin stok çözeltisi hazırlamak için |
| Antibiyotik stokları: izoniazid | Reaktif | Sigma-Aldrich | I-3377 | 50gr/şişe; doğrudan duyarlılık testi |
| Antibiyotik stokları: rifampisin | Reaktif | Sigma-Aldrich | R-3501 | 1gr/şişe; doğrudan duyarlılık testi |
| Sodyum hidroksit (pelet) | Reaktif | Sigma-Aldrich | 221465 | 500gr/şişe; sputum dekontaminasyonu |
| Sodyum sitrat (trisodyum tuz dihidrat) | Reaktif | Sigma-Aldrich | S-4641 | 500gr/şişe; sputum dekontaminasyonu |
| N-asetil-L-sistein | Reaktif | Sigma-Aldrich | A-7250 | 50gr/şişe; sputum dekontaminasyonu |
| Potasyum Fosfat Monobazik kristal. KH2PO4 | Reaktif | Sigma-Aldrich | P0662 | 500gr/şişe; sputum dekontaminasyonu |
| Sodyum Fosfat Dibazik, susuz. Na2HPO4 | Reaktif | Sigma-Aldrich | S0876 | 500gr/şişe; sputum dekontaminasyonu |
| Sodyum hipoklorit | Reaktif | ev tipi çamaşır suyu | kontamine atıkları bertaraf etmek için | |
| 15 ml santrifüj tüpleri (polipropilen 15 ml Falcon 35‐2096) | Sarf Malzeme | Fisher Scientific | 14‐959‐49B | Kasa başına 500 adet; balgam dekontaminasyonu ve konsantrasyonu için |
| 24 kuyucuklu plakalar (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) | Sarf Malzemesi | Fisher Scientific | 08-772-1 | koli başına 50 plaka; kültür ve okuma için |
| Kilitli polietilen torbalar 6 X 6 “ (kilitli torba) | Sarf Malzemesi | biyogüvenlik amacıyla 24 kuyucuklu plakayı muhafaza etmek için | ||
| Kapaklı cam tüpler (16 x 100mm ve 18 x 145mm) | Sarf Malzeme | VWR international | 47729-583 | Kutu başına 500 tüp; hazırlanan besiyeri stoklarının saklanması için |
| Vidalı kapaklı mikrosantrifüj tüpleri (1,5 ml) | Sarf Malzemesi | Fisher Scientific | 05‐669‐22 | kasa başına 1000 adet; antibiyotik stok alikotlarını saklamak için |
| 0.22μm filtreler (sulu çözücüler) Şırınga filtresi Millex blue | Sarf Malzeme | Fisher Scientific | SLGL 025 OS | kasa başına 50 adet; antibiyotik stoklarını filtrelemek için |
| 0.22μm filtreler (organik çözücüler) Şırınga filtresi Millex sarı | Sarf malzeme | Fisher Scientific | SLGV 033 RS | koli başına 50 adet; antibiyotik stoklarını filtrelemek için |
| Tek kullanımlık Pasteur pipetleri borosilikat cam 9″ | Sarf Malzemesi | Fisher Scientific | 13‐678‐20°C | koli başına 720 adet; PANTA'yı medya karışımıyla karıştırmak için |
| Aerosol bariyerli uçlar 1000‐1300μl | Sarf Malzemesi | Fisher Scientific | 02‐707‐51 | 1000 adet/paket; plaklara besiyeri dağıtmak için |
| USA Scientific Tips One 1‐200μsarı uçlar | Sarf malzemesi | Fisher Scientific | 1111‐0006 | 1000 uç/paket; antibiyotik stoklarını seyreltmek için |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.