Bu yazıda, merkezi sinir sistemi incelemek için nasıl üçüncü instar Drosophila larvaları göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Drosophila melanogaster Larvaların MSS diseksiyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Drosophila larvaların merkezi sinir sistemi (MSS), karmaşık ve tam olarak anlaşılamamıştır. MSS araştırmak için bir yol, çeşitli roman ve marker proteinleri ifade incelemek için immünhistokimya kullanmaktır. Sert manikür beden boşluğunun içine nüfuz antikorlar engeller çünkü bütün larva boyama pratik değildir. Bu dokuların leke için sabitleme ve boyamadan önce hayvan incelemek için gereklidir. Bu yazıda, Drosophila larvaları MSS zarar vermeden nasıl incelemek göstermektedir. Ince forseps bir çift yarım larva yırtarak başlayın ve sonra MSS maruz kütikül "iç-dış" açmak. Diseksiyon dikkatli bir şekilde yapılırsa MSS manikür bağlı kalacaktır. Biz genellikle fiksasyon ve boyama adımları boyunca manikür bağlı MSS tutmak ve sadece cam slaytlar tamamen montaj örnekleri hemen önce manikür CNS kaldırmak. Ayrıca, Havva, MSS nöronların bir alt kümesi olarak ifade edilen bir transkripsiyon faktörü ile boyanmış bir larva MSS bazı temsili görüntü gösteriyor. Makalede, bu tekniği ve ortaya çıkabilecek olası zorlukları bazı pratik kullanımları ile ilgili bir tartışma ile sona erer.
Protokol
- Manikür bağlı MSS bırakarak, 3. instar larvaları parçalara ayır. 1.5 ml tüp yerleştirin.
- Sallanan 40 dakika için% 2'lik formaldehit içeren PBS (1x) sabitleyin. Her 5-10 disseke MSS 250ul kullanın.
- PBS +% 0.1 Triton X-100 (PBST) formaldehit kaldırın ve kısa bir süre ile 3 kere yıkayın. Doku kaybını önlemek için ince çekilmiş Pasteur pipet kullanın.
- Non-spesifik protein bağlayıcı siteleri engelleme ve PBST doku 1-8 saat inkübe hücre zarları permeabilize +% 5 4 sallanan BSA, ° C
- 4 ° C gecede PBST +% 5 BSA sallanan seyreltilmiş primer antikor inkübe edin. Optimal antikor seyreltme farklı antikorları için değişecektir.
- 4 az iki 30dk yıkar ° C tarafından takip 3x PBST durulayın
- PBST içinde seyreltilmesi ikincil antikor inkübe + 4 sallanan 1-3 saat için% 5 BSA ° C. 4 az iki 30dk yıkar ° C tarafından takip 3x PBST durulayın Ikincil bir ışığa duyarlı bileşik konjuge ise tüp, alüminyum folyo ile sarın.
- Daha doku teşrih (gerekirse) ve slaytlar monte.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu video üçüncü instar Drosophila larvaları CNS incelemek için nasıl gösteriyor. Diseksiyonu sonra, merkezi sinir sistemi, bir standart immünohistokimya protokolü kullanılarak boyandı. Şu anda, hala çok yetişkin sinir sisteminin nasıl saklar yanı sıra nasıl oluşturulur bilinmiyor ve bilgi iletir. Gelişmekte olan Drosophila larva MSS çalışmalar, sinir sistemi kablolama ve işlevi hakkındaki bilgimizi artırmak gerekir.
Drosophila larvaları gibi çevresel uyaranlara yanıt olarak stereotpyed davranışlar, bir dizi sergilerler. Bu davranışl...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan edecek bir çıkar çatışması yoktur.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Pens | ince uçlu | |||
| 9 kuyucuklu saat camı | ||||
| Plastik Petri kabı |
Kaynaklar
- Lin, D. M., Goodman, C. S. Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance. Neuron. 13, 507-523 (1994).
- Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128. , 1899-1909 (2001).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
