<a href="http://www.springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-457-5_18">Springer Protokolleri</a> ziyaret ediniz insecidical bir ajan ve bu testte kullanılan oral bulaşma tekniklerini gibi mühendislik bakülovirüs hakkında daha fazla bilgi için.

Yazarların beyan edilecek bir çıkar çatışması yoktur.

baculovirus lepidopteran larva ağız enfeksiyon protokolleri

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculoviruses hem protein ekspresyon vektörleri ve böcek haşere kontrol ajanları olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu video lepidopteran larvaları damlacık beslenme ve diyet fiş tabanlı biyoanalizlere ile nasıl polyhedra ile enfekte olabilir gösterir. Bu eşlik eden Springer Protokolleri bölümü bakülovirüs yaşam döngüsü ve kullanımı, böcek öldürücü ajanlar olarak baculoviruses, böcek ilacı gibi baculoviruses kullanmak için artılarını ve eksilerini tartışma da dahil olmak üzere genel bir bakış ve geliştirilmiş böcek etkinlik için baculoviruses genetik geliştirme kaydedilen ilerleme sağlar.

Bu video, böcek etkinliğini belirlemek için bakülovirüs lepidopteran larvaları oral bulaşma tekniklerini göstermektedir.

Baculovirus lepidopteran Larva Ağız Enfeksiyon Protokolleri

Baculovirüsler, hem protein ekspresyon vektörleri hem de böcek zararlısı kontrol ajanları olarak yaygın şekilde kullanılmaktadır. Bu video, lepidopter larva etkileşimlerinin nasıl ...

Baco virüsü, protein ekspresyonu için böcek hücre hatlarıyla birlikte kullanılan yaygın bir DNA vektörüdür. Bununla birlikte, bu virüsün böcekleri ölümcül sonuçlarla etkili bir şekilde enfekte etmesi, onu aynı zamanda etkili bir insektisid ajan haline getirmektedir. Örneğin Brezilya'da, kadife fasulyesi tırtılını kontrol etmek amacıyla her yıl 1 milyondan fazla hektar soya fasulyesi ürününe yabani tip baco virüsü uygulanmaktadır; insektisid etkinliklerini artırmak için baco virüsleri, böceğin hemoselinde aktif olan böceğe özgü toksinleri kodlayan genlerle genetik olarak mühendisliği yapılmıştır.Bu videoda, insektisidal etkinliği analiz etmek amacıyla lepidopter larvae'lerinin bacao virüsü ile oral enfeksiyon yöntemlerini gösteriyoruz. Merhaba, ben Iowa State Üniversitesi Oftalmoloji Bölümü'ndeki Boning laboratuvarından geliyorum. Ben de Boning laboratuvarından Wendy Sparks. Bugün size lepidopter larvae'lerinin VA virüsü enfeksiyonu için iki prosedür göstereceğiz.İlk bölümde, damla besleme biyolojik deneyi kullanarak yeni doğmuş larvaların nasıl enfekte edileceğini göstereceğim. Ardından, diyet kan biyolojik deneyi kullanarak orta ve geç dönem instar larvaların nasıl enfekte edileceğini göstereceğim. Hadi başlayalım.Damlacık besleme biyolojik analizleri, abacavir'in letal dozunun ve balo virüsü enfekte larvaların sağkalım süresinin belirlenmesinde kullanılabilir. Bu analiz için genellikle erken instar veya neonat larvalar kullanılır.Başlamadan önce, uygun diyetleri içeren diyet kaplarının elinizde olduğundan emin olun. Ayrıca, hacimce %4 konsantrasyona ulaşacak şekilde yeşil gıda boyası ekleyerek uygun virüs dilüsyonlarını hazırlayın. Letal viral konsantrasyonu belirlemek için, dilüsyon %1 ile %99 arasında bir mortalite aralığı sağlamalıdır. Uygun virüs konsantrasyonu aralığını belirlemek için ön biyolojik deneyler gerekebilir; polihidraların çökelmesini önlemek için tüpü vortekslendikten sonra, 60 milimetrelik bir Petri kabında virüs çözeltisinden oluşan küçük damlacıklarla iki eş merkezli daire oluşturun.Kullanılan her virüs konsantrasyonu için, negatif kontrol olarak bir yalancı (mock) enfeksiyon düzeneği kurmayı unutmayın. Ardından işlem için, steril bir boya fırçası kullanarak 25 ila 30 neonat larvayı eş merkezli halkaların ortasına aktarın. Larvaların kaçmasını önlemek için kapağı kaba yerleştirin ve paraform ile mühürleyin.Kontaminasyonu önlemek için ideal olarak, her virüs tipi aktarımı için farklı boya fırçaları kullanın. Larvaların beslenmesi için petri kabını oda sıcaklığında 10 ila 15 dakika bekletin. Beslenen larvalar, yeşil gıda boyası transferinden kaynaklanan ön bağırsaktaki yeşil renklenmeden ayırt edilebilir; yalnızca beslenmiş larvaları, her bir kaba bir larva gelecek şekilde, diyet içeren bir onsluk plastik kaplara aktarın.Larvaları aktardıktan sonra, kapları kapaklarla kapatın ve enfeksiyondan 24 saat sonra 28 degrees Celsius sıcaklıkta inkübe edin. Ölü larva içeren tüm kapları ayıklayın. Bu erken ölümler muhtemelen taşıma sırasındaki yaralanmalardan kaynaklanmaktadır.Lethal dozun belirlenmesi için bu biyolojik analiz kullanıldığında, mock enfekte larvalar ve hayatta kalan virüsle işlem görmüş larvalar pupa olana veya pupasyon için toprağa gömülmeye başlayana kadar larvalar her iki ila üç günde bir kontrol edilmelidir. Virüsle enfekte olan larvalar besinin üst kısmında kalacak ve ardından birkaç gün sonra ölecektir. Ölü larvalar bazen büzüşür ve siyaha döner; enfeksiyon nedeniyle ölen larvalar esasen tamamen çözünecek olan poliedra torbalarına dönüşür. Bu aşamada mekanik olarak rahatsız edildiklerinde, her bir işlemdeki larval mortalitesini kaydedin.Öldürücü konsantrasyon biyolojik analizleri, farklı zamanlarda üç veya dört kez tekrarlanmalıdır. Her virüs veya kontrol işlemi için doz başına 30 birey kullanın. LC 50 değerlerini, %95 güven aralıklarını ve uygun istatistikleri hesaplamak için polo veya SAS gibi uygun bir probit analiz programı kullanın.Bu damlacıkla besleme deneyi, ST 50 sağkalım süresi değerlerini belirlemek için de kullanılabilir. Bu durumda, larva mortalitesi daha sık gözlemlerle her dört ila sekiz saatte bir puanlanır. Mortalite oranı yüksekse, sağkalım süresi biyodeneyleri virüsün lc 99 dozu kullanılarak gerçekleştirilir; medyan sağkalım süreleri ve %95 güven sınırları, bir s plus veya SAS programı kullanılarak Kaplan Mayer tahmincisi ile hesaplanır.Harang size damlacık besleme biyolojik analizini gösterdiğine göre, şimdi ben de size diyet tıkaç biyolojik analizini göstereceğim. Diyet tıkaç biyolojik analizinde, letal dozu veya LD 50'yi belirlemek amacıyla, orta ila geç dönem larva evreleri, analizden bir gün önce bilinen dozda virüsle işlenmiş bir diyet tıkaçla beslenir. Larvaları gece boyunca aç bırakmak için diyeti kaptan çıkarın.Bu adım, larvaların virüsü tüketme hızını artıracaktır. Ertesi gün inoküle edilmiş diyet küplerini hazırlamak için diyeti yaklaşık iki kübik milimetrelik küçük küpler halinde kesin. Diyet küpleri çok küçük olursa kururlar.Diyet küpleri çok büyük olursa, larvalar tüm diyet küpünü bir gecede tüketemezler. Şimdi her bir diyet küpüne bir ila iki µL poliedra süspansiyonu ekleyin. Süspansiyon hacimce %4 gıda boyası içermektedir.Süspansiyonun diyet içine nüfuz etmesi için beş ila 15 dakika bekleyin. Negatif kontrol olarak yalancı virüsle işlem görmüş bir diyet küpü hazırlamayı da unutmayın. Ardından, her kaptaki dördüncü instar larvaların her birine birer diyet küpü aktarın.Ardından kapları gece boyunca 28 °C'de inkübatöre yerleştirin; ertesi gün diyet küpünü tamamen tüketmemiş olan larvaları ayıklayın. Daha sonra, kalan larvalar için her kaba büyük bir parça diyet ekleyin. Yalancı enfekte larvalar ve hayatta kalan virüs enfekte larvalar beslenene veya pupa evresine girene kadar, gerektiğinde ek diyet ekleyerek larvaları 28 °C'de tutun.Bu aşamada, ölü ve hayatta kalan böceklerin sayılarını kaydedin. Böcekleri baculovirüs ile enfekte etmek için size iki yöntem göstereceğiz: kanama yoluyla besleme biyopsisi ve diyet plağı biyopsisi. Bu prosedürü gerçekleştirirken, baculovirüs tarafından öldürülmüş larva kadavralarının genellikle hassas olduğunu ve kolayca yırtılarak virüs salabileceğini unutmamak önemlidir.Bu nedenle, kontaminasyonu önlemek için çalışma yüzeylerini sterilize edin ve kontamine olmuş eldivenler ile tek kullanımlık malzemeleri uygun bir şekilde bertaraf edin. Hepsi bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

protocols-for-oral-infection-of-lepidopteran-larvae-with-baculovirus

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Iowa State University.  Bu video, böcek etkinliğini belirlemek için bakülovirüs lepidopteran larvaları oral bulaşma tekniklerini göstermektedir.

Baculovirus lepidopteran Larva Ağız Enfeksiyon Protokolleri

Bu makalede

Özet

Özet

Protokol

Açıklamalar

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet