Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">Hücre Biyolojisi Şu Protokolleri</a> .

Yazarların beyan edilecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

xenopus laevis dişiler yumurta alınması

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Xenopus, yumurta, parçalanmış, bozulmamış ve / veya fraksiyone çeşitli deneyler için yararlıdır laevis. Bu protokol, yumurtlama neden yumurtaları toplamak ve dejelly ve herhangi bir hasarlı yumurta kaldırmak için yumurta sıralamak nasıl gösterir.

Xenopus laevis Dişiler Yumurta Alınması

Xenopus laevis yumurtalarının sağlam, lizlemiş ve/veya fraksiyonlarına ayrılmış halleri, çok çeşitli deneyler için faydalıdır. Bu protokol, yumurtlama işleminin nasıl tetikleneceğini göstermektedir, ...

Xenopus labis yumurta özütleri, nükleer montaj ve nükleer protein importu gibi hücresel olayların in vitro yeniden yapılandırılması için sitoplazmik ve organel materyal kaynakları olarak yararlıdır. Elbette, yumurta özütlerini kullanabilmeniz için öncelikle yumurtaları dişi kurbağalardan elde etmeniz gerekir. Merhaba, ismim Marie Cross; Georgia, Atlanta'daki Emory Üniversitesi Hücre Biyolojisi Bölümü'nde Dr. Maureen Power'ın laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim.Bugün size olgun Xenopus laevis dişilerinden nasıl yumurta elde edileceğini ve bunların nasıl ayrıştırılacağını göstereceğiz. Bu prosedür şu adımları içermektedir: hamile kurbağaların yumurtlaması için hazırlanması, yumurtlamayı uyarmak için insan koryonik gonadotropini ile serum gonadotropini uygulanması ve bozuk yumurtaların veya oositlerin ayıklanması. Haydi başlayalım.Yumurta üretimi için, olgun dişi kurbağalar öncelikle gebelikle ilişkili kısrak serum gonadotropini ile ön işleme tabi tutulur. Ön işleme prosedürüne başlamak için, kurbağaları barındırmak amacıyla yüz milimolar sodyum klorür içeren bir tank hazırlayın. Enjeksiyondan sonra, ön işlem gören kurbağalar yaklaşık litre başına bir kurbağa yoğunluğunda tutulmalıdır.Kurbağalar 18 °C'de barındırılarak optimal yumurta üretimi sağlanır. Bir mililitrelik şırıngaya takılmış 27 gauge iğne kullanarak, kurbağanın dorsal lenf kesesine 0,5 mL'lik 200 unit/mL konsantrasyonda gebelikte kısrak serum gonadotropini enjekte edin.Hazırlanan kurbağaları 100 mM sodyum klorür içeren tanka geri yerleştirin. İki ila üç gün sonra, kurbağaların dorsal lenf kesesine deri altına tekrar 0,5 ml 100 IU/ml insan koryonik gonadotropini enjekte ederek yumurtlamayı uyarın.Enjeksiyondan sonra, her kurbağayı beş litre 100 mM sodyum klorür içerisine yerleştirin. Yumurta kalitesi kurbağadan kurbağaya farklılık gösterdiği için her kurbağayı kendi kabına koymak en iyisidir. İnsan koriyonik gonadotropin enjeksiyonundan yaklaşık 16 ila 22 saat sonra, kurbağayı temiz su tankına alın ve yumurtaları bir behere boşaltın.Kurbağaların, enjeksiyon bölgesinde enfeksiyon belirtileri açısından bir ila iki gün boyunca gözlemlenmesi önerilir. Bu aşamada, her yumurtayı çevreleyen şeffaf bir jöle tabakası, yumurtaların birbirine temas etmesini önler; jöleli yumurtaları temizlemek için, yumurtaları bir kez %2L sistein pH 8 ile durulayın, ardından her kurbağa için %2L sistein çözeltisi içeren yüz adet kapta yaklaşık beş dakika boyunca inkübasyona devam edin. Oda sıcaklığında, beş dakika sonra yumurtaları periyodik olarak nazikçe çalkalayın.Sistein çözeltisini deje yumurtalarının üzerinden dökün ve yumurtaları 0.25 x modifiye ringer çözeltisi ile üç kez yıkayın. Kalıntıları temizlemek için, bir diseksiyon mikroskobu altında çalışarak yumurtaları yüz milimetrelik cam bir Petri kabına aktarın. Bozuk yumurtaları bir pastör pipeti ile Petri kabından çıkarın.Olgun xip yumurtalarının üst yarısı koyu renkli, alt yarısı ise açık renklidir. Olgun yumurtanın koyu renkli yarım küresinin merkezinde, oosit olgunlaşmasını belirten iğne ucu büyüklüğünde beyaz bir nokta görülmelidir. İyi bir yumurta, pigmentasyonu düzgün ve modellemiş olan yumurtadır.Bu beyaz lekeye sahip olmayan her şey bir oositdir ve uzaklaştırılmalıdır. Beyazlaşmış, büyümüş veya pigmentasyonu homojen olmayan tüm yumurtalar da uzaklaştırılmalıdır. Özellikle sorunlu bir yumurta, hemisferler arasındaki sınırın tamamen belirsizleştiği beyaz, şişkin bir top şeklinde görünecektir; ayrıştırılmış yumurtaları, üzerlerine yumurta lizleme tamponu döküp ardından tamponu dikkatlice dökerek, yumurtaların dışarı taşmasını minimize edecek şekilde iki ila üç kez yıkayın.Artık yumurtalar lizatlanabilir ve ekstraktlar hazırlanabilir. Size olgun Xenopus laevis dişilerinden yumurtaların nasıl elde edileceğini ve jöle tabakasının nasıl temizleneceğini göstermiş olduk. Ham yumurta ekstraktlarının nasıl hazırlanacağını ve fraksiyone edilmiş yumurta ekstraktları kullanılarak in vitro nükleer montajın nasıl yeniden oluşturulacağını gösteren diğer iki videomuzu da izlediğinizden emin olun.İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

obtaining-eggs-from-xenopus-laevis-females

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Emory University.  Xenopus, yumurta, parçalanmış, bozulmamış ve / veya fraksiyone çeşitli deneyler için yararlıdır laevis. Bu protokol, yumurtlama neden yumurtaları toplamak ve dejelly ve herhangi bir hasarlı yumurta kaldırmak için yumurta sıralamak nasıl gösterir.

Xenopus laevis Dişiler Yumurta Alınması

Bu makalede

Özet

Özet

Protokol

Açıklamalar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler