Belirli zaman noktalarında cerrahi yara biyokimyasal mediyatörler toplamak ve ölçmek için bir tekniktir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Cerrahi Yaralar Nosiseptif ve İnflamatuar Arabulucular Toplama ve Ölçüm
Bu makalede
Retraction Notice
This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice
Özet
Özet
Bu çalışmanın amacı, cerrahi yerinde inflamatuar ve nosiseptif biyokimyasal mediyatörler toplama ve ölçme fizibilite test etmek için; yara ve serum düzeyleri arasındaki ilişkiyi değerlendirmek için; ve mediatör salınımı, ağrı ve analjezik tüketimi sonrası sezaryen arasında herhangi bir ilişkiyi belirlemek için teslim. Spinal anestezi ile elektif sezaryen geçiren Yirmi sağlıklı kadın alındı. Yara eksuda ve serum arabulucular, ağrı skorları ve analjezikler tüketimi, 1, 6, 24, ve 48 saat sonrası sezaryen ölçüldü. Yara eksuda, 20 mediatörlerin 19 güvenilir IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL dahil tespit edildi -17, TNF, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 ve MIP-1β, sinir büyüme faktörü (NGF), prostaglandin E2 (PG-E2) ve madde P. Yara PG-E2 ve çeşitli sitokinlerin erken zirve yaptı ise NGF daha gecikmeli bir sürümü gösterdi. Konsantrasyon karşı yara ve serum sitokinleri zaman profili arasında herhangi bir korelasyon vardı. Bu çalışma, belirli zaman noktalarında, cerrahi yaralar nosiseptif ve inflamatuvar mediatörlerin toplama ve ölçme fizibilite göstermektedir. Yara ve serum düzeyleri arasında anlamlı bir ilişki olmaması, lokalize patolojilerin incelenmesi gereken siteye özgü bir sürüm belirlenmesi önemini vurgulamaktadır.
Protokol
Nosiseptif ve inflamatuar biyokimyasal arabulucu koleksiyonu
- On-Q ® PainBuster ® Ağrı Kesici Sistem kapatma yara hemen önce cerrahi ekip tarafından subkutan tabaka eklenir. Sistemi sürekli subkutan 2 ml / saat hızında yara normal tuzlu su (veya lokal anestezi) sunar
- Üç yollu stopcock belirtilen zaman noktalarında yara eksuda aspirasyonu sağlamak için bu sistem içine dahil edilmiştir.
- Protokolü (örneğin, 1, 6, 24, ve 48 saat sonra sezaryen) tarafından belirlenen zaman noktalarında, yara eksuda 1 ml 30 ul proteinaz inhibitörü içeren bir polietilen kap içine geri çekilir.
- Aynı zamanda aralıklarla 10 ml kan lityum heparin içeren yeşil bir üst kan toplama tüpüne toplanır. 300 ul proteinaz inhibitörü sonra kan örnekleri eklenir.
- 1 saat içinde toplama örnekleri buz üzerinde konur ve 10 dakika 3000 rpm'de santrifüj.
- Serum ve yara supranate kaldırıldı ve yerini, standart bir mikrosantrifüj tüp içinde ve -20 ° C'de saklanan
Testi analizi
- Tüm örnekleri sonra, çözülmüş ve aynı zamanda analiz edilir.
- Sitokinler sonra A17 multipleks boncuk dizisi immunoassay plaka ile ölçülür. Multiplex immüno-assay teknolojisi 50 ul ve ELISA yöntemi ile elde edilen karşılaştırılabilir sonuçlar üretmek olarak hacim olarak küçük vücut sıvısı örneklerinde 100 analitler kadar assaying sağlar. Bu plaka interlökin 1SS (IL-1SS), interlökin 2 (IL-2), interlökin 4 (IL-4), interlökin 5 (IL-5), interlökin 6 (IL-6) 7, interlökin (IL ölçme yeteneğine -7), interlökin 8 (IL-8), interlökin (IL-10), interlökin-12 (IL-12), interlökin 13 (IL-13), interlökin 17 (IL-17), tümör nekroz faktörü α (TNF) , interferon α (INFα), granülosit koloni uyarıcı faktör (G-CSF), granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF), monosit kemoatraktan protein 1 (MCP-1) ve makrofaj inflamatuar protein 1 (MIP-1β).
- Sinir büyüme faktörü, Bio-Plex amin bağlantı kiti yardımı ile 17-karmaşık plaka ekleyerek NGF antikor DY256 ile ölçülür.
- Her ölçüm çiftleri ve üreticinin özelliklerine göre. Her analit için standart eğrileri 0.20 konsantrasyonları, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml artı sıfır standart (normal salin) üreticileri tarafından verilen referans analitler kullanarak oluşturulur. Standart eğrileri her çalışmaya dahil edilmiştir ve örnek konsantrasyonları Bio-Plex Manager yazılımı ile hesaplandı.
- Her tahlil üretici spesifikasyonuna göre iki nüsha halinde yapılır son derece hassasiyet ELISA Kitleri prostaglandin E2 ve P maddesi kullanılarak ölçülür.
Şekil 1: Eksuda ve serum düzeyleri, çeşitli pro-ve anti-inflamatuar sitokinler (interlökin (IL-1SS) 1SS, interlökin 2 (IL-2), interlökin 4 (IL-4), interlökin 5 (IL-5), interlökin 6 (IL-6) 7, interlökin (IL-7), interlökin 8 (IL-8), interlökin (IL-10), interlökin 12 (IL-12), interlökin 13 (IL-13), interlökin 17 (IL -17), tümör nekroz faktörü α (TNF-α), interferon-γ (INFγ), granülosit koloni uyarıcı faktör (G-CSF), granülosit makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF), monosit kemoatraktan protein 1 (MCP-1 6 ve 24 saat) ve makrofaj inflamatuar protein 1 (MIP 1SS), sinir büyüme faktörü (NGF), prostaglandin E2 (PG-E2) ve P maddesi (SP) düzeyleri (pg / mL) başlangıçta ölçülen sonrası sezaryen .
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
On-Q ® PainBuster ® Ağrı Kesici Sistem kapatma yara hemen önce subkutan tabaka tüm kesi boyunca takılmalıdır. Bu belirtilen zaman aralıklarında üç yollu stopcock yoluyla aspirasyon kolaylaştırır. On-Q ® sistemi yara içine 2 ml / saat hızında sürekli subkutan normal tuzlu su sağlar Bu kateter pıhtılaşmasını önler ve eksuda örnekleri üretmek için sistem güvenilirliğini artırır. Eksudasyonların aspirasyonu (vakaların yaklaşık% 5) zor ise, (örneğin, hasta kadar oturma veya onları düz yalan) öznenin konumunu değiştirmeden yaranın üzerine hafifçe...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bina Disiplinlerarası Kadın Sağlığı Kadın Sağlığı ve Ulusal, Ulusal Sağlık Enstitüleri (5K12 HD043452) Çocuk Sağlığı ve İnsani Gelişme Enstitüsü Araştırma Ofisi araştırma bursu Kariyer Dr. Carvalho çalışmaları desteklenmektedir. Dr Angst temini (On-Q ® PainBuster ® Post-Op Ağrı Kesici Sistemi) ve fon aldı I-Flow (Lake Forest, CA) biyokimyasal testlerin yapılması.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| On-Q® PainBuster® Ameliyat Sonrası Ağrı Giderme Sistemi | I-Flow, Lake Forest, CA | ||
| Komple proteinaz inhibitörü | Roche Group | ||
| 17-multiplex boncuk immünassay Bio-PlexTM plakası | Bio-Rad | ||
| Bio-Plex amin bağlama kiti | Bio-Rad | ||
| NGF antikoru DY256 | R&D Systems | ||
| Prostaglandin E2 ve substans P ELISA Kitleri | Assay Designs |
Kaynaklar
- Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
- Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
- Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
- Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.