Sedimentten Lipid Biyobelirteçlerinin Soxhlet Ekstraksiyonu

1. Malzemelerin Kurulumu ve Hazırlanması

1. Dondurulmuş, dondurularak kurutulmuş, ezilmiş ve homojenize edilmiş deniz tortusu örneği toplayın. Bunun gibi bir numune, standartlar için gerekli olan birçok bileşiğin içerdiğini içerir.
   1. Standartlar genellikle bir karot alma seferi veya analizinden sonra kalan tortulardan yapılır. Örneğin, bu deneyde, Cape Cod'un hemen güneyinde bulunan 'Çamur Yaması'ndan elde edilen tortu çıkarılır. Bu tortu, bir karot toplama seferinin bir parçası olarak alındı, ancak bilimsel soruları cevaplamak için kullanılmayacak. Bu nedenle onu bir standart oluşturmak için kullanabiliriz.
   2. ~100 g'lık bir tortu parçasını donması için gece boyunca dondurucuya koyun.
   3. Tortu tamamen donduktan sonra, dondurarak kurutucuyu açın (Fisher gibi birçok bilimsel ekipman perakendecisinden temin edilebilir) ve kondansatör ayar noktasına (genellikle ~-30 °C) ulaşana kadar bekleyin.
   4. Tortu numunesini dondurarak kurutucuya yükleyin ve numune üzerinde bir vakum çekmeye başlamak için tahliyeyi kapatın.
   5. Tortudaki su miktarına ve numunenin boyutuna bağlı olarak, numunenin kuruması birkaç gün sürebilir.
   6. Numune kuruduktan sonra dondurarak kurutucuyu kapatın, havalandırın ve numuneyi çıkarın.
   7. Numuneyi çözücü ile durulanmış bir harç içine yerleştirin ve bir havaneli kullanarak toz haline getirin. Bunu tüm numuneye yapın ve çıkarmaya hazır olana kadar dondurucuda bir cam kavanozda saklayın.
2. Numunenin boyutuna bağlı olarak, hacmi 4-60 mL arasında değişen şişeler kullanın. Bu deney için borosilikat cam şişeler (40 mL) ve solvent güvenli kapaklar kullanın. Olası organik kirleticilerin uzaklaştırılmasını sağlamak için şişeleri, borosilikat cam pipetleri ve tartı tenekelerini 550 °C'de 6 saat boyunca yakın.
3. Diklorometan ve metanol elde edin (her ikisi de çoğu organik jeokimya laboratuvarında yaygındır), daha sonra kullanmadan önce laboratuvar aletlerini ve cam eşyaları durulamak için bunları ayrı ayrı kullanın. Diklorometan (DCM) ile metanol (MeOH; 9:1) karışımı, birçok laboratuvarda çok çeşitli polaritelere sahip biyobelirteçleri verimli bir şekilde çıkarmak için kullanılır. Solventler organik kirleticilerden arındırılmış olmalıdır.
4. Bu deneyde kullanmak için bir soxhlet aparatı edinin (bunlar Fisher Scientific veya başka bir bilim perakendecisinden satın alınabilir), ardından kullanmadan önce 550 ° C'de 6 saat yıkayın ve yakın.
5. Cam elyaf yüksükler edinin (Whatman'dan satın alınabilir) ve kullanmadan önce 550 °C'de 6 saat boyunca yakın.

2. Numunenin Hazırlanması

1. Laboratuvar terazisine yanmış bir tartım tenekesi yerleştirin ve ardından dara alın.
2. Laboratuvar spatulasını çözücü ile durulayın, ardından uygun bir numune kütlesini tartım kutusuna aktarmak için kullanın ve kütleyi kaydedin.
   1. Numunenin kütlesi, organik madde içeriğine bağlı olarak değişir. Nispeten organik madde bakımından zengin materyal (deniz çamuru) birkaç gram gerektirebilirken, organik madde bakımından zengin materyal (yaprak dokusu) çok daha azına ihtiyaç duyabilir.
3. Tartım kutusundaki tüm malzemeyi yanmış bir cam elyaf yüksüğe aktarın.

3. Çıkarma

1. ~400 mL DCM:MeOH (9:1) karışımını yuvarlak tabanlı şişeye aktarın (şişenin yarısından fazlası dolu olmalıdır) ve ısıtma mantosuna koyun. Birkaç (5-10) çözücü ile durulanmış kaynar cips ekleyin.
2. Numune yüksüğünü, ucu açık olacak şekilde Soxhlet aparatının orta parçasına yerleştirin.
3. Orta parçayı yuvarlak tabanlı şişenin üzerine yerleştirin ve bir cam eşya kelepçesi ile sabitleyin.
4. Kondansatörü Soxhlet'in orta parçasının üzerine monte edin ve bir cam eşya kelepçesi ile sabitleyin.
5. Kondenserden gelen soğuk su hatlarından birini bir hortum kelepçesi kullanarak davlumbazdaki soğuk su hattına takın. Diğerini kanalizasyona yönlendirin.
6. Uygun sirkülasyon ve drenajı sağlamak için suyu açın.
7. Isıtma mantosunu açın ve yuvarlak tabanlı şişedeki çözücü hafifçe kaynayana kadar sıcaklığı ayarlayın.
8. Çıkarma işlemini sonraki bir saat içinde birkaç kez izleyin.
   1. Sıcaklığın düşük bir kaynama noktasına uygun şekilde ayarlandığından, çözücünün kondansatörde yoğunlaştığından ve orta parçaya damladığından, orta parçanın düzgün bir şekilde doldurulup boşaltıldığından ve suyun davlumbaz tahliyesine düzgün bir şekilde boşaltıldığından emin olmak için kontrol edin.
9. Ekstraksiyonu sonraki 36 saat boyunca izleyin.
   1. Sıcaklığın düşük bir kaynama noktasına uygun şekilde ayarlandığından, çözücünün kondansatörde yoğunlaştığından ve orta parçaya damladığından, orta parçanın düzgün bir şekilde doldurulduğundan ve boşaltıldığından, suyun davlumbaz tahliyesine düzgün bir şekilde boşaltıldığından ve yuvarlak tabanlı şişedeki çözücü seviyesinin hala yaklaşık yarısı dolu olduğundan emin olun.
10. 36 saat sonra, ısıtma mantosunu kapatarak ekstraksiyonu durdurun.
11. Şişeyi "TLE" olarak etiketleyin.