Kemirgen Tanımlama II

Bireysel araştırma hayvanlarını tanımlama yeteneği, bilimsel kayıt tutma ve veri toplamanın önemli bir yönüdür. Hayvanlar arasında ayrım yapmak, amaçlanan deneysel prosedür için doğru deneğin kullanılmasını sağlar.

Bilim adamlarının bireysel laboratuvar hayvanlarını tanımlamak için kullandıkları birkaç kalıcı ve geçici yöntem vardır. Bu videoda, yetişkin kemirgen kuyruğu, yenidoğan ayak parmakları ve yetişkin ayak parmaklarına dövme yaptırma yöntemlerini tartışacağız. Daha sonra, yetişkin sıçanlarda yaygın olarak uygulanan mikroçip yerleştirme tekniğine ve ardından toksik olmayan boyaları kullanan evrensel geçici tanımlama yöntemine değineceğiz.

Bu yöntemler için protokolleri incelemeden önce, bu tekniklerin her birinin düşüncelerini, faydalarını ve eksikliklerini gözden geçirelim. Kuyruk dövmesi, MRI görüntülemeyi içeren deneyler veya hayvanların genetik olarak ülseratif dermatit de dahil olmak üzere cilt rahatsızlıklarına yatkın olduğu deneyler gibi birçok araştırma protokolünde faydalıdır. Kuyruk dövmelerinin bir başka avantajı da, hayvanı manuel olarak dizginlemek zorunda kalmadan kolayca görselleştirilebilmeleridir.

Bazı deneysel protokoller, yenidoğanların ilk günden itibaren genotiplenmesini gerektirir, bu da bu yavruların kalıcı olarak tanımlanmasını zorunlu kılar. Ayak parmağı dövmesinin kullanılması, bu tür hayvanların kulak etiketleme veya kulak delme için yeterince büyük olana kadar tanımlanmasına izin verir. Yetişkin anneye, yavrusunun yeni dövmesine aşırı tepki vermesini ve aşırı derecede tımar etmesini önlemek için benzer bir ayak parmağı dövmesi uygulamak iyi bir fikirdir. Bu yöntemi kullanmanın çeşitli avantajları olmasına rağmen, dezavantajı prosedürün beceri, pratik, sabit bir el ve özel ekipman gerektirmesidir.

Söz konusu olan bir sonraki kalıcı tanımlama yöntemi mikroçiplemedir. Mikroçiplerin implante edilmesi nispeten kolay bir işlem olsa da, kullanışlılığını sınırlayan birkaç faktör vardır. İlk olarak, bu cipsler yaklaşık olarak büyük bir pirinç tanesi büyüklüğündedir ve implantasyon için 10-12 gauge iğne gerektirir, bu da bir fare için çok büyüktür, bu nedenle yöntemi yetişkin farelerle sınırlar. İkincisi, mikroçipler pahalıdır ve bu nedenle çok sayıda hayvanı tanımlamak için ideal değildir. Son olarak, MRG içeren deneylerde mikroçipler kullanılamaz. Bununla birlikte, damızlık hayvanlar gibi kalıcı olarak tanımlanması gereken benzersiz genetiğe sahip bir grup değerli hayvan varsa, mikroçipler kullanılabilir.

Tartışacağımız son yöntem, toksik olmayan belirteçler kullanarak geçici tanımlamadır. Toksik olmayan işaretleyiciler, araştırma hayvanlarının kürklerini renklendirmek için yapılmıştır. Bu yöntem, boyaların birkaç hafta boyunca görünür kalabilmesine rağmen, hayvanların yalnızca birkaç saat veya gün boyunca tanımlanmasını gerektiren kısa süreli çalışmalar için idealdir. Bazı araştırmacılar, bir gruptaki belirli hayvanları kolayca tespit etmek için bu belirteçleri diğer tanımlama yöntemleriyle birlikte kullanır.

Artık arka planı tartıştığımıza göre, kuyruk dövmesinden başlayarak prosedürleri öğrenelim. Burada, yetişkin fareler üzerindeki prosedürü göstereceğiz, ancak aynısı sütten kesme ve yetişkin sıçanlar için de uygulanabilir.

Hayvanlara yönelik herhangi bir endişe veya sıkıntıyı en aza indirmek için, kuyruk dövmesi hayvan barınma alanı yerine işlem odasında yapılmalıdır. Dövmeyi uygulamadan önce, kuyruğu açıklıktan gergin bir şekilde çekilecek şekilde bir fincan tutucu kullanarak fareyi kısıtlayın. Kabın flanşı, özel bir cam platform aracılığıyla yerinde tutulur. Ardından, kuyruğu pamuk uçlu bir çubukla az miktarda seyreltilmiş doku temizleyici ile temizleyin. Bu adım, dövmeye müdahale edebilecek herhangi bir ölçek ve kalıntı birikimini gidermek için önemlidir. Daha sonra, başka bir çubukla kuyruk derisine doku yağı uygulayın. Bu, cildi yumuşatarak ve dövme iğnesi için kayganlık sağlayarak doku hasarını en aza indirir. Ayrıca yağ, temizleme işlemi ile çıkarılmayan kirleri çözer ve dövme yapılmamış ciltte mürekkep lekesini önler. Artık dövmeyi uygulamaya hazırsınız.

Makine kapalıyken, neşter veya hipodermik iğne olan dövme iğnesinin ucunu pigmente batırın. Ardından, ayak pedalını kullanarak tabancayı etkinleştirin, dövme aletini kuyruğa yerleştirin ve iğnenin ucunu dövme bölgesine getirin. Cilde 90 derecede iğne ile yaklaşın? açı verin ve pigmentin kalıcı olarak birikmesi için dermise yeterince derinlemesine nüfuz edin. Aktive edilmiş iğnenin sesindeki bir değişiklik, derinliği ayırt etmeye yardımcı olabilir. Rakamlar ve harfler oluşturarak tek yönde kısa eşit vuruşlar yapın. Dövmeyi uygularken minimal eğriler ve açılar kullanmaya çalışın.

Ek pigment eklemek için, fareler için her bir-iki karakter ve sıçanlar için her bir karakter için iğnenin ucunu boya haznesine batırın. Fazla pigmenti çıkarmak için tamamlanan dövmeyi bir kağıt havluyla kurulayın. Dövme veya kağıt havlu üzerinde kan bulunması, dövmenin çok derin yapıldığını ve bu nedenle kalıcı olma ihtimalinin düşük olduğunu gösterir. İğneyi zaten birikmiş pigmentin üstüne değil, paralel olarak yerleştirerek ince karakterleri ek pigmentle güçlendirin. Her kullanımdan sonra dövme ekipmanını iyice temizleyin ve hastalık bulaşmasını önlemek için kafesler arasında yeni veya sterilize edilmiş bir iğne ve taze bir mürekkep kaynağı kullanılmalıdır.

Daha sonra, yenidoğanlara ve yetişkinlere ayak dövmelerinin nasıl uygulanacağını öğreneceğiz. Burada, farelerde prosedürü göstereceğiz, ancak aynı adımlar fareler için de geçerlidir.

Kuyruk kemikleri kemikleşmediği ve kuyruğun uzunluğu çok küçük olduğu için yenidoğanlar ayak parmaklarına dövme yapılır. Ayrıca kuyruk büyüdükçe cilt gerilir ve sayılar bozulabilir, soluklaşabilir ve okunamaz hale gelebilir. Alüminyum folyo gibi gözeneksiz bir yüzeye yeşil dövme macunu lekesi yerleştirerek başlayın. Ardından, önceden sütten kesilmiş yavruyu bir gazlı bez kullanarak elinize alın. Dövme için seçilen ayak parmaklarını ortaya çıkarmak için ayağınızı baş parmağınız ile işaret parmağınızın kıvrımı arasına yerleştirin. Ayağı ayak parmaklarına yakın tutun, böylece seçilen ayak parmağının bükülmesini önlemek için arkasında sağlam bir yüzey olur.

Şimdi, 4,5 mm'lik bir lansetin ucunu dövme macununa batırın. Ardından, önceden belirlenmiş koda göre istediğiniz ayak parmağını dürtün. Uygun geçirgenliği sağlamak için aynı noktayı üç kez dürtün. Macun bir iz bırakacak şekilde cilde yeterince nüfuz edin, ancak ayak parmağının kanamasına neden olacak kadar derine sokmaktan kaçının. Fazla dövme macununu çıkarmak için yeni dövmeyi gazlı bezle nazikçe kurulayın ve hayvanı kafesine geri koyun. Bir sonraki çöp için yeni bir lanset kullanın. İşlemden bir gün sonra dövmenin görünür olduğunu doğrulayın.

Emziren yavrulara dövme yapıldığında, baraja da dövme yapılması tavsiye edilir. Bu, onun aşırı tepki vermesini ve yavrusunun dövmelerini aşırı derecede tımar etmesini önleyebilir. Bir yetişkine ayak parmağı dövmesi uygulamak için, yine önce bir alüminyum folyo üzerine küçük bir yeşil dövme macunu yerleştirin. Ardından, plastik bir koni veya arka ayaklara erişim sağlayan bir Pleksiglas tutucu kullanarak hayvanı kısıtlayın. Ayağınızı emniyet aletinden uzatın ve dövme için seçilen ayak parmaklarını ortaya çıkarmak için ayağınızı baş parmağınız ile işaret parmağınızın kıvrımı arasına yerleştirin.

Şimdi, 5 mm'lik bir lansetin ucunu dövme macununa batırın. Ve daha önce olduğu gibi, uygun penetrasyonu sağlamak için istenen ayak parmağının derisini en az üç kez dürterek ve delerek dövmeyi uygulayın. Ardından, fazla macunu çıkarmak için dövmeyi nazikçe kurulayın ve hayvanı kafesine geri koyun. Yenidoğanlarda olduğu gibi, işlemden bir gün sonra dövmeyi doğrulayın. İşaret dövmeden bir gün sonra görünüyorsa, hayvanın ömrü boyunca görünür kalmalıdır. Soluksa veya görünmüyorsa, dövmeyi daha önce açıklandığı gibi yeniden yapın.

Tartışacağımız bir sonraki tanımlama yöntemi, mikroçiplerin kemirgenlere implante edilmesini içerir. Laboratuvar hayvanlarını etiketlemek için yaygın olarak kullanılan çip, bir Radyo Frekansı Tanımlama veya RFID çipidir. Genellikle, çip iğnelere önceden yüklenir ve daha sonra uygulayıcıya yerleştirilebilir. Çip yerleştirme için, hayvanı dizginlemek için bir Pleksiglas tüp kullanın ve cildi omuzların üzerinden hala kavrayabildiğinizden emin olun. İlk olarak, bir cep oluşturmak için cildi çadır haline getirin. Daha sonra iğneyi deriden geçirin, eğim verin, omurgaya paralel olarak yerleştirin ve kuyruğa doğru yönlendirin. Mikroçipi deri altından çıkarın ve iğneyi geri çekin. Çipin iğneyi ciltten takip etmesini önlemek için cildi enjeksiyon bölgesinde sıkıştırın. Herhangi bir cilt kanaması için hemostaz sağlamak için basınç uygulamaya devam edin. Hayvanı emniyet cihazından çıkarın ve tanımlama kodunu doğrulamak için üretici tarafından sağlanan okuyucuyu kullanarak çipi tarayın.

Son olarak, tanımlama için kemirgenlere geçici boyaların nasıl uygulanacağını öğrenelim. Farelerle başlayalım. İlk olarak, hayvanı omuz bıçakları arasındaki alana erişilebilecek şekilde kısıtlayın. Vücudun bu kısmı kendi kendini tımar etmekten güvenlidir. Bu alandaki kürkün üzerine bir nokta veya boya çizgisi yerleştirin ve hayvanı kafesine geri koyun.

Sıçanlar için, kuyruğunu kavrayarak ve gergin tutarak hayvanı manuel olarak kısıtlayın. Bu, boya uygulaması için baş, omuz veya sağrı olabilecek alana kolayca erişilebilmesini sağlar. Kürkün üzerine bir nokta veya boya çizgisi yerleştirin. Bazen hayvanı kısıtlamadan toksik olmayan boya uygulamak mümkündür. Bu hayvanların üzerindeki işaretleri periyodik olarak kontrol edin, özellikle de bunları birkaç günden uzun süredir tek tanımlayıcı olarak kullanıyorsanız.

Artık bu farklı tanımlama yöntemlerinin prosedürlerini gözden geçirdiğimize göre, bilim adamlarının bunları bugün farklı araştırma çalışmalarında nasıl kullandıklarını görelim.

Kemirgenlerin davranış deneylerinde kullanımı oldukça yaygındır. Burada, araştırmacılar hayvanları kalıcı olarak işaretlemek için kuyruk dövmesini kullandılar ve daha sonra yapay olarak inşa edilmiş bir ev kafesi ortamında birkaç gün boyunca gözlemlediler. Toplanan veriler, ameliyat sonrası 10 günlük bir süre boyunca kontrol ve deney hayvanları arasında hareket edilen mesafe gibi davranışlarda farklılıklar olduğunu ortaya koydu.

Başka bir davranış deneyinde, araştırmacılar yenidoğanlarda ayak parmağı dövmesi yaptılar ve ultrasonik seslendirmeleri kaydetmek için özel mikrofonlara sahip bir kayıt kutusuna yerleştirdiler. Bu deneyin amacı, 12 günlük yenidoğan dönemi ve yetişkinlik döneminde otizmin bir modeli olan vahşi tip ve Shank2 eksikliği olan farelerde çağrı hızındaki farklılıklara, yani dakikadaki seslendirme sayısına bakmaktı.

Son olarak, daha önce tartışıldığı gibi, toksik olmayan boya kullanımı, hayvanları kısa süreli deneyler için işaretlemenin etkili bir yoludur. Burada, bilim adamları bir plazma proteininin geçici ifadesi ile ilgilendiler. Bu yüzden hayvanları geçici belirteçlerle işaretlediler, plazmit DNA'yı intravenöz olarak enjekte ettiler ve western blot tekniğini kullanarak protein ekspresyonunu belirlemek için iki gün sonra kan örneğini topladılar.

JoVE'nin laboratuvar fareleri ve sıçanları için dövme, mikroçip yerleştirme ve geçici tanımlama yöntemlerine girişini izlediniz. Hayvan tanımlaması, araştırmada kayıt tutmanın birincil bileşenidir. Bu nedenle, uygun tanımlama yöntemini seçerken, birçok faktörün göz önünde bulundurulması gerekir. Bu, hayvana verilen rahatsızlık seviyesini, tekniğin kolaylığını, deneysel ihtiyaçları ve son olarak yöntemle ilişkili maliyeti içerir. Her zaman olduğu gibi, izlediğiniz için teşekkürler!