1. Kulak yumruğu tanımlama
Kulak delme kodları, tek tek hayvanları etiketlemek için hızlı ve ucuz bir yöntem olarak geliştirilmiştir. Üç tip kulak zımbası vardır: makas zımbası, başparmak zımbası ve kol zımbası. Hayvanın sağ kulağı tek haneli rakamlar için, sol kulağı onlarca, kulakların ortası ise yüzlercesi için kullanılır.

Şekil 1. Makas zımbası kullanarak farelerde kulak delme.
2. Kulak küpesi tanımlama
Özelleştirilmiş kulak küpeleri, fare suşlarının veya araştırmacıların ayırt edilmesine olanak tanıyan alfabetik ve/veya sayısal kodlara sahip üreticilerden sipariş edilebilir. Kulak küpeleri metal veya plastikten yapılabilir.

Şekil 2. Kulak kepçesine düzgün şekilde yerleştirilmiş kulak küpesine sahip bir fare.
Kaynak: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Notre Dame Üniversitesi, IN
Biyomedikal araştırmanın temel bir gerekliliği, a…
1. Kulak yumruğu tanımlama
Kulak delme kodları, tek tek hayvanları etiketlemek için hızlı ve ucuz bir yöntem olarak geliştirilmiştir. Üç tip kulak zımbası vardır: makas zımbası, başparmak zımbası ve kol zımbası. Hayvanın sağ kulağı tek haneli rakamlar için, sol kulağı onlarca, kulakların ortası ise yüzlercesi için kullanılır.

Şekil 1. Makas zımbası kullanarak farelerde kulak delme.
2. Kulak küpesi tanımlama
Özelleştirilmiş kulak küpeleri, fare suşlarının veya araştırmacıların ayırt edilmesine olanak tanıyan alfabetik ve/veya sayısal kodlara sahip üreticilerden sipariş edilebilir. Kulak küpeleri metal veya plastikten yapılabilir.

Şekil 2. Kulak kepçesine düzgün şekilde yerleştirilmiş kulak küpesine sahip bir fare.
Laboratuvar hayvanlarının uygun şekilde tanımlanması, biyomedikal araştırmaların temel bir gerekliliğidir. Araştırmacıların, deneysel prosedürler ve veri toplama için doğru hayvanın kullanılması için bireysel hayvanlar arasında ayrım yapabilmeleri çok önemlidir. Bilim adamları, bireysel laboratuvar hayvanlarını tanımlamak için birkaç kalıcı ve geçici yöntem geliştirdiler. Burada, en sık kullanılan iki yöntemi tartışacağız: kulak etiketleme ve kulak delme.
Kulak delme prosedürüne girmeden önce, kulak delme kodunu, mevcut zımba türlerini tanıtalım ve bu yöntemin yararlarını ve dezavantajlarını tartışalım. Tahmin edebileceğiniz gibi, kulak delme, hayvanın dış kulağına veya kulak kepçesine bir delik veya çentik açmayı içerir. Bu yöntemi standart hale getirmek için evrensel kulak delme kodları geliştirilmiştir.
Konuma bağlı olarak, sağ kulaktaki çentikler 1, 3 ve 5 gibi tek rakamları temsil eder ve çift çentik 2'yi temsil eder. Bu çentiklerin farklı kombinasyonlarını kullanarak ve her çentiğin değerini toplayarak, hayvanı 1'den 9'a kadar etiketleyebilirsiniz. Benzer şekilde, sol kulakta da aynı çentikler onlukları temsil eder. Ve yine, farklı kombinasyonlar 10 ile 90 arasındaki aralığı kapsayacaktır. Sağ ve sol kulak kepçesinin ortasındaki delikler sırasıyla 100 ve 200'ü temsil eder. Ve her ikisinde de delikler 300'ü gösteriyor. Bu nedenle, örneğin, hayvanı 173 olarak etiketlemek istiyorsanız, sağ kulağın ortasına 100 için bir delik açmalı, sol yılda toplamı 70'e çıkaran üç çentik açmalı ve sağ üst kulakta ünitenin "üç" yerini temsil eden tek bir çentik açmalısınız.
Şimdi, piyasada bulunan üç kulak zımbası stilini tartışalım: makas zımbası, başparmak zımbası ve kol zımbası. Bunların her birinin avantajları ve dezavantajları vardır.
Başparmak yumruğu bir kıstırma hareketi gerektirir, ancak kulak dokusunun daha kolay toplanabilmesi için bir Eppendorf tüpüne sığacak kadar küçüktür. Ergonomik olarak, özellikle yaşlı sıçanların daha kalın kulakları için, kol zımbasının kullanımı başparmak zımbasından daha kolaydır. Makas zımbası kıstırma hareketi gerektirmez, böylece karpal tünel yorgunluğunu ve yaralanmasını önler.
Hızlı ve basit bir tanımlama yöntemi olmasına rağmen, kulak delmenin bazı sınırlamaları vardır. İlk olarak, yukarıda tartışılan kulak delme kodunun üst sınırı 399'dur ve bu da bazı büyük ölçekli çalışmalarda bu yöntemin kullanımını sınırlayabilir. Diğer bir sınırlama, çoğu hayvanın kodu okumak için tırnağın kavranması gerektiğidir, böylece ele alınma süreleri artar. Sıçanlar yaşlandıkça, kulaklarının derisi kalınlaşır ve hayvanda önemli bir sıkıntıya neden olmadan kulak yumruğu yapmak zordur. Bu nedenle, sütten kesildikleri için genç sıçanlara kulak yumrukları atmak en iyisidir. Tanımlama gerektiren yetişkin sıçanlar için, kulak zımbaları yapılırken inhalan anestezi kullanımı düşünülmelidir.
Artık kulak delme kodu ve mevcut araç türleri hakkında bazı arka plan bilgilerine sahip olduğunuza göre, bu tekniğin farelerde nasıl uygulanacağını öğrenelim.
Prosedüre başlamadan önce, delme aletlerinin dezenfektan bir solüsyonla temizlenmesi, alkol ile durulanması ve iyice kurutulması önerilir. Kulak zımbalarını otoklavlamaktan kaçının, çünkü sonunda onları köreltecektir.
Başlamak için, hayvanın deney koduna ve kullanılacak yumruğa karar verin. Burada örnek olarak 173 kodunu ve makas zımbasını kullanalım. Aynı prosedür başka herhangi bir kod veya zımba için de geçerlidir. Hazır olduğunuzda, kulaklara kolayca erişilebilmesi için hayvanı tırnağından kavrayarak tutun. 100 için delikle başlayın. Sağ kulağı, zımbanın deliği kulak kepçesi kenarından uzağa yerleştirilecek şekilde zımbanın içine yerleştirin. Ardından, cildi kesmek için makası hızlı ve sıkı bir şekilde kapatmak için baskı uygulayın. Ardından, yumruğu serbest bırakın ve kulaktan çıkarın. Kulağın yırtılmasını önlemek için zımbayı çekmekten veya bükmekten kaçının. Bir çentik yapmak için, zımbayı kulak kepçesinin kenarına doğru noktaya, bu durumda kodun birim yerindeki "üç" için sağ kulağın üst kısmına yerleştirin ve aynısını yapın - hızlı ve sıkı bir baskı uygulayın ve ardından çıkarmak için makası açın. Üç çentik açmak için diğer kulakta da aynı işlemi tekrarlayın - ikisi dış köşeye yakın "20" için ve biri iç köşeye yakın "50" için, kodu "70" olarak toplayın.
Hayvanı kafese geri eklemeden önce doğru kodun delindiğini onaylayın. Yine, zımbayı bir dezenfektanla temizleyin, alkolle durulayın ve paslanmayı önlemek için iyice kurulayın.
Şimdi, farelerin ve sıçanların bireysel olarak tanımlanması için başka bir ucuz ve gerçekleştirmesi kolay yöntem olan kulak etiketlemeye geçelim. Piyasada bulunan çeşitli kulak küpeleri vardır. Bunlar şunları içerir: üzerlerine bir dizi sayı ve/veya harf kazınmış metal etiketler ve parlak renkli arka planlar üzerinde karakterler veya barkodlar içeren plastik etiketler.
Metal etiketlerin bir dezavantajı, kodu okumak için genellikle hayvanı almanın gerekli olmasıdır. Buna karşılık, plastik etiketlerin hayvanlarla uğraşmak zorunda kalmadan okunması kolaydır. Plastik etiketlerin bir diğer avantajı da MRI görüntüleme ile uyumlu olmalarıdır. Etiketler bir fare veya sıçan için bireysel bir tanımlayıcı sağlarken, yanılmaz değildirler. Etiketler, aşırı tımar, dermatit veya enfeksiyon, hoşgörüsüzlük, kavga ve agresif üreme davranışı nedeniyle etiketleri çıkarmaya çalışırken oluşan kendi kendine travma nedeniyle kaybolabilir. Aynı kafeste birden fazla hayvan barındırılıyorsa, kulak küpesinin kaybı sıkıntılı olabilir. Bu sorunu aşmak için, etiketin karşısındaki kulakta bulunan bir zımba kodu gibi ikincil bir tanımlama biçimi kullanılmalıdır. Bir tesis hem etiketlenecek kulak seçimini hem de diğer kulakta kullanılacak kodu standart hale getirmeli ve tüm kodlar kafes kartı üzerinde belirtilmelidir.
Şimdi bir kulak küpesinin nasıl düzgün bir şekilde uygulanacağını öğrenelim, çünkü yanlış konumlandırmanın birkaç talihsiz sonucu olabilir. Uygulamanın ardından, genellikle etiket uygulamasına bağlı bir enfeksiyon olması durumunda gerçekleştirilen kulak küpesinin çıkarılması konusunu da tartışacağız.
İlk adım, tanımlanacak hayvanlar için uygun bir etiket seçmektir. Burada, fareler üzerindeki prosedürü göstermek için metal bir etiket kullanacağız. Kullanılan kulak küpelerinin belirli boyutuna ve stiline uygun aplikatörü sipariş ettiğinizden emin olun. Etiketi karton tutucudan nazikçe çıkarın ve delikli uç uygulayıcının çentikli alanı üzerine gelecek şekilde uygulayıcıya yönlendirin. Etiketin sivri ucu çentiğin karşısında olmalıdır.
Kulak küpesini takmaya hazır olduğunuzda, kulaklara kolayca erişilebilecek şekilde hayvanı tutun. Arka bacaklar kafes üstü veya tezgah üstü gibi bir yüzeye dayanabiliyorsa, hayvanların mücadele etme olasılığı daha düşük olabilir. Hayvan zapt edildikten sonra, kulak küpesinin ucunu kulağın etçesine derinlemesine yerleştirin, böylece etiket numaraları hayvanın arkasına bakacak şekilde yerleştirin. Ardından, uygulayıcıyı sıkıca sıkın; Kulak küpesi kulağı delecek ve birbirine kilitlenecektir. Serbest bıraktığınızda, etiketli kulak uygulayıcıdan düşecektir. Etiketin doğru şekilde yerleştirildiğini ve uygulandığını onaylayın. Kulak küpesi numaralarının hayvanın burnuna bakmasını tercih ederseniz, etiketin ucunu kulak kepçesinin tabanına, kulağın arkasına yerleştirin ve ardından etiketi yerine kilitlemek için sıkın.
Etiketler, kulakta bir bükülmeye neden olmayacak, hayvanın hareketliliğine müdahale etmeyecek veya kafesin herhangi bir yerine takılmayacak şekilde yerleştirilmelidir. Etiket kulağın kenarına çok yakın yerleştirilirse kolayca yırtılabilir. Başa çok yakın yerleştirilirse, boyun bölgesinin derisi etikete takılabilir, tahriş, ağrı ve kısıtlı hareket yaratabilir ve bu da kendi kendine travmaya yol açabilir. Bazen, metal etiketler kulakta tahrişe ve şişmeye neden olabilir. Bu genellikle kulak kepçesi enfeksiyonlarına yol açar ve acil tedavi etiketin çıkarılmasını içermelidir.
Etiketi çıkarmak için, pamuk uçlu bir aplikatörü antiseptik bir solüsyonla nemlendirin ve etiketin etrafındaki kalıntıları temizlemek için kullanın. Ciddi enfeksiyon vakalarında, hayvanın anestezi altına alınması gerekebilir. Ardından, tel kesiciler kullanarak etiket halkasının üst kısmını kenardan kenara kesin. Daha da önemlisi, etiketi sıkıştıracağı, kulağı sıkıştıracağı ve kulağa zarar vereceği için düz yüzeyi kesmeyin. Kanama durdurucuları kullanarak kulak küpesini nazikçe kulağın içinden ve dışından geçirin. Etiketi, kıvrılmış uç geçmeyecek ve delme deliğinin travmasına ve genişlemesine neden olmayacak şekilde dışarı kaydırın. Etiket bittiğinde, kulağı antiseptik ıslatılmış pamuklu bir aplikatör çubuğuyla silin ve hayvanı kafesine geri koyun. Kulaktan cerahatli bir akıntı varsa, takip tedavisi gerekli olabilir ve değerlendirme için veteriner personeline danışılması önerilir.
Artık laboratuvar hayvanlarını kulak küpeleri ve zımbalar kullanarak nasıl işaretleyeceğinizi bildiğinize göre, bu yöntemlerin yararlı olabileceği bazı deneyleri gözden geçirelim. Kulak delme kodunu kullanmanın en büyük avantajlarından biri, zımbaların genotipleme için doku örnekleri olarak ikiye katlanabilmesi ve böylece tekrarlanan kullanımdan kaynaklanan hayvanlara yönelik stresi azaltmasıdır. Bununla birlikte, zımbaları PCR örneklerini toplamak için kullanmayı planlıyorsanız, artık DNA veya RNA'yı çıkarmak için önce cihazı en az 3 dakika bir yüzey dekontaminan solüsyonuna batırmayı ve ardından kullanmadan önce alkolle durulamayı unutmayın.
Deney birkaç gün sürerse tanımlama tekniğinin önemi daha da artar. Örneğin, bu deneyde bilim adamları önce hayvanları metal bir etiket kullanarak etiketlediler ve daha sonra siyatik sinire, lusiferaz proteinini eksprese eden transgenik tümör hücrelerinin bir süspansiyonu enjekte ettiler. Daha sonra, kanserin ilerlemesini ölçmek için, enjeksiyondan bir, on ve on sekiz gün sonra biyolüminesans kullanarak hayvanları görüntülediler.
JoVE'nin kemirgenlerde yaygın olarak kullanılan iki tanımlama yöntemini gösteren sunumunu izlediniz: kulak küpeleri ve kulak zımbaları. Artık kulak delme kodunu anlamalı, piyasada bulunan farklı kemirgen kulak küpelerini bilmeli ve bu prosedürleri önemli bir hayvan rahatsızlığına neden olmadan doğru bir şekilde gerçekleştirebilmelisiniz.
Unutmayın, her tekniğin deneysel ihtiyaçlarınızla ilgili olarak dikkate alınması gereken avantajları ve dezavantajları vardır. Maliyeti göz önünde bulundurmanın yanı sıra, tekniğin kolaylığı ve hayvanlara verilen acı seviyesi, uygun tanımlama yöntemini seçerken dikkate alınması gereken başlıca hususlardan bazıları olmalıdır. Her zaman olduğu gibi, izlediğiniz için teşekkürler!
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: How does the ear punch code system work for identifying rodents?
The ear punch code uses standardized notch positions on both ears to create unique animal identifiers. Right ear notches represent single digits (1, 3, 5 for units; double notch for 2), while left ear notches represent tens (10-90). Center holes represent 100 (right ear) and 200 (left ear), with both holes indicating 300. This system allows labeling animals from 1 through 399 by combining notch values.
Q2: What are the main differences between scissor, thumb, and lever ear punches?
Scissor punches avoid pinching motions, reducing carpal tunnel fatigue and injury. Thumb punches are small enough to fit in an Eppendorf tube for easier tissue collection but require a pinching motion. Lever punches are ergonomically superior for thicker ears of older rats. Each design offers distinct advantages depending on your specific research needs and animal age.
Q3: Why is ear punching best performed on young rats rather than adults?
As rats age, their ear skin thickens, making ear punching difficult and causing significant distress without anesthesia. Young rats, ideally when weaned, have thinner, more pliable ears that tolerate the procedure better. For adult rats requiring identification, inhalant anesthesia induction and maintenance laboratory animals should be considered to minimize animal discomfort during ear punching.
Q4: What are the advantages and disadvantages of metal versus plastic ear tags?
Metal tags require picking up the animal to read the code, while plastic tags are easily readable without handling. Plastic tags are compatible with MRI imaging and reduce animal stress from repeated handling. However, both tag types can be lost due to over-grooming, infection, fighting, or self-trauma. Using a secondary identification method like punch codes on the opposite ear prevents identification loss.
Q5: What positioning errors should be avoided when applying ear tags to rodents?
Tags placed too close to the ear edge risk tearing; tags positioned too close to the head can catch neck skin, causing irritation and restricted movement. Tags must not bend the ear, interfere with mobility, or catch on caging. Incorrect positioning leads to self-trauma, infection, and swelling, potentially requiring tag removal and veterinary treatment.
Q6: How should ear punch tissue samples be prepared for PCR genotyping?
Before collecting punch tissue for PCR samples, soak the apparatus in a surface decontaminant solution for at least 3 minutes to remove residual DNA or RNA, then rinse with alcohol. This preparation prevents contamination and ensures accurate genotyping results. Using punches for tissue collection reduces animal stress by eliminating repeat handling for separate sampling procedures.
Q7: What is the proper procedure for removing an infected ear tag from a rodent?
First, moisten a cotton-tipped applicator with antiseptic solution and remove debris around the tag. For severe infections, anesthetize the animal. Using wire cutters, cut across the tag loop edge-to-edge, never the flat surface. Gently guide the tag out with hemostats, avoiding the crimped end to prevent hole enlargement. Wipe the ear with antiseptic and monitor for purulent discharge requiring veterinary follow-up.
Chapters in this video
0:00
Overview
0:47
Ear Punching: Code, Types, Benefits and Disadvantages
3:35
Method of Ear Punching
4:40
Ear Tagging: Types, Benefits and Disadvantages
5:56
Method of Applying and Removing an Ear Tag
9:05
Applications
10:20
Summary
Videos from this collection: