Standart Ekleme Yöntemi

1. Reaktiflerin Hazırlanması

1. 100 ppm standart Al³⁺ çözeltisi: 0.9151 g alüminyum nitratı (Al(NO₃)₃•9H₂O) DI su ile 1 L'lik hacimsel bir şişeye çözün.
2. 1 M asetik asit içinde 8HQ çözeltisi (ağırlıkça %2/hacim): 100 mL'lik hacimsel bir şişeye 2.0 g 8-hidroksikinolin ekleyin.
3. 100 mL'lik şişeye dikkatlice 5.74 mL buzlu asetik asit ekleyin, ardından işarete kadar DI su ile seyreltin. Bu, 8-hidroksikinolinin sulu fazda çözünmesine izin verir.
4. 1 M NH₄⁺/NH₃ tamponu (pH~8): 100 mL'lik bir şişeye 20 g amonyum asetat (NH₄OAc) ekleyin.
5. Bu 100 mL'lik şişeye 7 mL% 30 amonyum hidroksit ekleyin ve işarete kadar DI su ile seyreltin. Bu, birleştirildiğinde 8HQ çözeltisindeki asidi nötralize etmeye yardımcı olur.
6. Diğer reaktifler arasında susuz sodyum sülfat (_Na2S04) ve kloroform (Spec derecesi) bulunur.

2. Numunelerin Hazırlanması

1. 1.00 mL hacimsel bir şişeye bir pipet ile 1.0 ppm stok Al^{3 +} çözeltisinden 100 mL ekleyerek 100 ppm standart Al 3 + çözeltisi hazırlayın.
2. Başlıkta bulunan büyük bir halka standı üzerinde bulunan halkaların üzerine altı adet 125 mL'lik ayırma hunisi yerleştirin. Aşağıdaki gibi etiketlenmelidirler: BL, 0, 1, 2, 3, 4. Tüm cam eşyaların titizlikle temiz olduğundan emin olun, çünkü cam eşyaların duvarlarına küçük kloroform boncukları yapışırsa kantitatif sonuçlar elde etmek zordur.
3. 0, 1, 2, 3 ve 4 olarak etiketlenmiş beş ayırıcı huniye bilinmeyen Al^{3 +} çözeltisinin 25.00 mL'sini ekleyin. Bu örnekte, bilinmeyen konsantrasyon 0.110 ppm'dir.
4. 1.00 ppm standart Al^{3 +} çözeltisinin sırasıyla 0, 1.00, 2.00, 3.00 ve 4.00 mL'sini 1 mL'lik bir pipetle 5 huniye ekleyin.
5. BL etiketli ayırma hunisine 25.00 mL damıtılmış su ekleyerek bir BLANK hazırlayın.
6. Altı çözeltinin her birine bir pipet ile 1.0 mL 8-hidroksikinolin çözeltisi ekleyin.
7. Altı çözeltinin her birine bir pipetle 3.0 mL tampon çözeltisi ekleyin.
8. Her çözeltiyi 10 mL kloroform ile iki kez ekstrakte edin ve her seferinde 1 dakika kuvvetlice çalkalayın. Basınç birikimini serbest bırakmak için ayırıcı huniyi ara sıra havalandırmayı unutmayın. (NOT: İyi bir ekstraksiyon, yalnızca fazlar arasında çok fazla sıvı-sıvı teması olduğunda gerçekleşir).
9. Kloroformu temiz, kuru 100 mL etiketli bir beherde toplayın. Kloroform 1,5 g/^cm3'e yakın bir yoğunluğa sahiptir, bu nedenle alt katmandır. Tam bir ekstraksiyondan sonra sulu fazda sarı renk izi kalmamalıdır.
10. Kombine kloroform ekstraktını her bir beherden ilgili 25 mL hacimsel şişelerine aktarın ve kloroform ile işarete kadar seyreltin. Herhangi bir kloroformun buharlaşmasını önlemek için her hacimsel şişeye tıpalar yerleştirdiğinizden emin olun.
11. Adım 2.9'dan itibaren altı adet 100 mL'lik beherin her birine ~ 1 g susuz sodyum sülfat (Na_2S04) ekleyin. Sodyum sülfat, kloroform ekstraktında bulunabilecek herhangi bir su izinin giderilmesine yardımcı olur.
12. Çözümleri saygın beherlerine geri aktarın. Numunedeki herhangi bir suyun dehidrasyonunu kolaylaştırmak için dikkatlice döndürün.
13. Kloroform ekstraktlarını bir kuvars florimetre hücresine boşaltın (Not: Kloroform plastik bir polistiren hücreyi çözecektir).

3. Uyarma dalga boyunun seçilmesi

Taramaları çalıştırarak uyarma ve emisyon dalga boylarını belirleyin, ardından bu değerlerdeki tüm örneklerin floresan yoğunluğunu okuyun ve kaydedin. Uyarma ve emisyon bant genişlikleri 5 nm'de önceden ayarlanmıştır. Kompleks yakın UV'yi emer, bu nedenle uyarma dalga boyu yaklaşık 385 nm olmalıdır. İlk olarak, emisyon dalındaki floresansı 500 nm'de izleyin.

1. Florimetrede, ksenon lambayı çalıştırmadan önce florimetredeki hem iç hem de dış soğutma fanlarının açık olduğunu doğrulayın. Xenon lamba çok ısınır ve sürekli soğutma gerektirir.
2. PMT dedektörüne giden yüksek voltajı (HV) 400 V'a getirin.
3. Her iki panjuru da açın.
4. Bilgisayarda veri toplama programını açın, işte "100nmFluorScan".
5. En iyi uyarma ve emisyon dalga boylarını belirlemek için kullanmak üzere "Numune + 2 mL eklenmiş" (2) çözeltisini kuvars hücresine yerleştirin.
6. Emisyon dalga boyu başlangıçta 500 nm'ye ayarlanmışken, 2 nm/s'lik bir tarama hızıyla 335-435 nm arasında bir uyarma taraması yapın.
7. Elde edilen floresan grafiğinden, maksimum fluorescence uyarma dalga boyunu (<span style="line-height: 20.8px;">EXλ<sub style="line-height: 20.8px;">max) belirleyin ve enstrümanı bu değere ayarlayın.

4. Emisyon dalga boyunun seçilmesi

1. Florimetre emisyon dalga boyunu 450 nm'ye ayarlayın.
2. Emisyon dalga boyu aralığını 450-550 nm arasında 100 nm'lik bir tarama yapacak şekilde ayarlayın.
3. Taramayı başlatmak için, florimetrenin ön panelindeki "BAŞLAT" düğmesine basarken aynı anda programdaki "denemeyi başlat" düğmesine tıklayın.
4. Elde edilen floresan grafiğinden, maksimum floresan emisyon dalga boyunu (EMλ_max) belirleyin ve cihazı bu değere ayarlayın (Şekil 2).

Şekil 2. Optimum EXλ_max ve EMλ_max Dalga boyları.

5. Numunelerin floresansının ölçülmesi

1. Tüm numuneler EMλ_max ve EXλ_max'ta çalıştırılır. Her numune için taramalar gerekli değildir, ancak bu koşullarda sadece floresan değeri gereklidir. En seyreltik numuneden (boş) başlayarak, bir kuvars hücresine ve ardından alete yerleştirin. Floresan yoğunluğunu laboratuvar not defterine kaydedin.
2. Diğer tüm örnekler için tekrarlayın.
3. Kalibrasyon tablosunu oluşturmadan önce Boş Bağıl Yoğunluğun her bir çözeltinin Bağıl Yoğunluklarından çıkarılması gerektiğini unutmayın.

6. Standart Toplama Grafiği Oluşturma

1. Eklenen Al³⁺'ın μg'sine karşı floresan yoğunluğunu çizin.
2. Elde edilen grafiğin en küçük kareler değerini belirleyin ve hem eğimi hem de kesişim noktasını kaydedin.
3. Al³⁺ = -b/m μg denkleminden bilinmeyen örnekte Al^{3 +} 'nun μg'sini belirleyin
4. Bilinmeyen alüminyumun her numuneye 25.0 mL'lik bir hacim eklendiğini bilerek, bilinmeyendeki alüminyum konsantrasyonunu belirleyin.