When is intradermal injection used in rodent research?

Intradermal injection delivers compounds into the space between the epidermis and dermis layers. This route is typically used to assess inflammation, measure cutaneous blood flow, or evaluate allergenic reactions to antigens. The procedure requires anesthesia and specialized training to ensure accurate placement and minimize tissue damage at the injection site.

What are the key advantages of intranasal administration in laboratory animals?

Intranasal administration is non-invasive and requires minimal training and simple equipment like a calibrated micropipette. The nasal mucosa's rich blood vessel and nerve supply enables rapid systemic absorption and direct central nervous system targeting. This route is commonly used for vaccine delivery and local decongestant applications in rodents.

Why is anesthesia recommended for intranasal dosing in conscious rodents?

Anesthesia during intranasal administration ensures proper compound placement at the nares for accurate dosing, prevents animals from biting equipment, and eliminates head jerking that could injure nasal tissue or eyes. Anesthesia also reduces the likelihood of the animal snorting and spraying the compound from the nares upon administration.

What volume limits apply to intranasal administration in different rodent species?

For rats, intranasal administration should not exceed 50 microliters per administration. For mice, the maximum total volume is less than 20 microliters. These volume restrictions prevent complications and ensure compliance with institutional guidelines and IACUC-approved protocols for safe compound delivery.

How is needle depth controlled during neonatal intracranial injection?

A needle guard is created by measuring the correct needle against its cap, marking the desired length, and cutting the cap with a razor blade to produce a clean, level cut. This custom depth-control device is prepared aseptically and ensures the needle penetrates only to the validated depth appropriate for the target brain structure and animal age.

What preparation steps are essential before intradermal injection in rodents?

The injection site must be shaved using an electric razor or depilatory cream, then thoroughly cleaned with water-dampened gauze to remove lingering hair. A topical antiseptic solution is applied to the shaved area. The skin is stabilized by stretching it between thumb and index finger before needle insertion to ensure accurate bleb formation.

Why is a separate needle used to draw test articles for intracranial injection?

A separate needle is used to draw the test article because insertion into the stopper significantly dulls fine-gauge needles, which compromises injection quality. Using a fresh needle for intracranial administration preserves needle sharpness and ensures precise, trauma-free delivery directly into the neonatal rodent brain.

Bileşik Yönetim III

0 views13:19 min

1. İntradermal uygulama

İntradermal enjeksiyonların çoğu sulu bazlı bileşiklerdir. Enjeksiyon bölgesinde doku nekrozunu önlemek için çözeltiler nötr bir pH'a sahip olacak şekilde fizyolojik olarak tamponlanmalıdır.
İğne boyutu aralığı, mümkün olan en küçük olan 25-30 gauge'dir.
Enjeksiyon bölgesi başına doz aralığı 50-100 μL'dir. Aşırı hacimlerin enjekte edilmesi, enjeksiyon bölgesinde nekroza veya basınç nedeniyle bileşiğin bölgeden sızmasına neden olabilir.
İğnenin intradermal boşluğa doğru bir şekilde yerleştirilmesi için, hem fareleri hem de sıçanları uyuşturmak gerekir. İnhalasyon anestezisi hızlı bir indüksiyon ve iyileşme sağlar; Bununla birlikte, enjekte edilebilir anestezi, bölgenin hazırlanması ve enjeksiyonun gerçekleştirilmesi için yeterli zaman sağlama avantajına sahiptir. ¹
Tüy dökücü bir krem kullanarak veya bölgeyi tıraş ederek enjeksiyon bölgesindeki tüyleri alın.
Kalan tüy dökücü kremi veya saç kalıntılarını iyice temizleyin.
İyot çözeltisi, klorheksidin çözeltisi veya alkol gibi topikal bir antiseptik uygulayın.
Yönetim prosedürleri
1. Cildi başparmak ve işaret parmağı arasında gergin bir şekilde gerin. Bu, iğneyi yerleştirirken cilde stabilite sağlar.
2. İğne eğimini cilde yerleştirin.
3. İğneyi nazikçe epidermis ve dermis arasındaki cilde sokun. İğneyi eğimin hemen ötesine ilerletin.
4. Maddeyi yavaşça enjekte edin. Bileşiğin enjeksiyonu ciltte bir kabarcık veya küçük bir kabarcık oluşturacaktır.
5. İğneyi çekmeden önce cildin gerilmesine ve ayarlanmasına izin vermek için enjeksiyondan sonra duraklayın.
Önlem
1. Pistonu geri çekmek gerekli değildir.
2. İğne deri altı boşluğa sokulursa, kabarcık oluşmaz. Çok derin enjekte etmek deri altı enjeksiyonu ile sonuçlanır.
3. Bileşiğin enjeksiyon bölgesinden sızmasına neden olabileceğinden, alanı lekelemekten veya silmekten kaçının.
4. Birden fazla enjeksiyon yaparken, kabarcıklar üst üste gelmeyecek şekilde boşluk bırakın.

Şekil 1. Farelerde intradermal enjeksiyon.

2. İntranazal uygulama

Ekipman
1. Doğru bir hacim sağlamak için kalibre edilebilen bir mikropipetleme ünitesi pipeti kullanın.
2. Çapraz kontaminasyonu önlemek için tek kullanımlık pipet uçları kullanılmalıdır. Dozlama için TB şırıngaları, künt iğneler ve esnek borular da kullanılabilir.
3. Sıçanlar için toplam enjeksiyon hacimleri 40-100 μL'yi geçmemeli ve 6-10 μL'lik damlalar halinde verilmelidir. Fareler için maksimum toplam hacim 24 μL'dir ve 3-4 μL'lik damlalar halinde verilir.
Bilinçli hayvanlarda uygulama
1. Bilinçli hayvanlarda elle kısıtlama, başın nispeten hareketsiz olmasını gerektirir, böylece pipet ucu veya künt iğne, bileşiği iletmek için burun deliklerine yeterince yakın yerleştirilebilir, ancak burun dokusunu dürtecek veya yırtacak kadar yakın olmamalıdır.
2. Hayvanı kısıtlayın ve dikey konumda tutun.
3. Burun açıklığına küçük bir damla sıvı bileşik yerleştirin. Hayvan damlacığı solumalıdır.
4. Tüm hacim verilene kadar arka kısımları değiştirerek ek bir hacim uygulayın.
5. Daha büyük hacimleri uygularken, kısıtlama sırasında göğsü daraltmamak önemlidir. Göğüs kompresiyonu, hayvanın sıvıyı bronşlara ve akciğerlere çekmek için yeterince derin nefes alma yeteneğini engeller.

Şekil 2. Bilinçli farelerde intranazal uygulama.

Bilinçsiz hayvanlarda uygulama
1. İnhalasyon anesteziklerinin kullanılması, bileşiğin yaklaşması ve verilmesi sırasında hareketsiz hale getirilmiş bir hayvana izin verir. Bu, hayvanın dozlama ekipmanını ısırma olasılığını, başın sarsılması nedeniyle bileşiğin kaybını ve hayvanın burun dokusunun, gözlerinin veya yüz derisinin yaralanmasını ortadan kaldırır. Hayvanın ayrıca, uygulama sırasında bileşiği burun deliklerinden burnundan çekmesi ve püskürtmesi daha az olasıdır.
2. Hayvanı sırtüstü pozisyona getirin. Başın pozisyonu, çözeltinin burunlara yerleştirilmesini etkiler. CNS doğumu için ideal pozisyonun hayvanın sırtüstü yattığı gösterilmiştir; Bu daha iyi emilim sağlar. ²
3. Bileşiğin yarısını doğrudan burun açıklığının bir tarafına uygulayın ve inhalasyon ile zamanlayın. Sonra hayvanı ters çevirin.
4. Yukarıdaki gibi, hacmin diğer yarısını diğer burun açıklığına uygulayın.

Şekil 3. Bilinçsiz farelerde intranazal uygulama.

3. Yenidoğan farelerde ve sıçanlarda intrakraniyal uygulama

Fareler veya sıçanlar intrakraniyal enjeksiyonlar için anestezi altına alınmalıdır.

Fare		Sıçan
Yaş (gün)	İğne ölçer (g)	Yaş (gün)	İğne ölçer (g)
0-7	29-30	0-5	27-29
7-14	27	5-10	25-27
14-28	25	10-14	25
Yaş (gün)	İğne uzunluğu (mm)	Yaş (gün)	İğne uzunluğu (mm)
0-7	2	0-4	2-3
7-14	3	4-7	3
14-21	4	7-10	4
21-28	5	10-14	5
Yaş (gün)	Hacim (μL)	Yaş (gün)	Hacim (μL)
0-5	<20	1-3	<20
6-20	<60	4-10	<60
20-28	<100	11-14	<100

Tablo 1. Fare ve sıçanların yaşına göre iğne ölçüsü, iğne uzunluğu ve maksimum intrakraniyal uygulama hacmi. ⁴

Ekipman
1. Tablo 1'ye göre doğru iğne ölçüsünü ve maksimum uygulama hacmini belirleyin.
2. Hayvanı uyuşturmadan önce bir iğne koruyucu hazırlayın.
  NOT: İğnenin enjeksiyon derinliği, iğne kapağı ile oluşturulan bir koruyucu kullanılarak kontrol edilir.
  1. Koruyucuyu oluşturmak için, iğne kapağına karşı bir iğne ölçülür ve nerede kesileceğini belirtmek için kapağın üzerine bir işaret yerleştirilir. Kesim, iğne üzerindeki kapak değiştirildiğinde iğnenin 2 ila 5 mm'si açıkta kalacak şekilde yapılmalıdır.
  2. Açıkta kalan iğnenin uzunluğu, cilde ve kafatasına nüfuz edecek ve beyinde istenen derinliğe ulaşacak kadar uzun olmalıdır.
  3. Fareler ve sıçanlar için gereken iğne uzunlukları Tablo 1'de listelenmiştir.
3. Yavrularda hipotermiyi önlemek için bir ısıtma kaynağı gereklidir. Birkaç türü vardır: alçakta ayarlanmış bir elektrikli ısıtma yastığı, sirkülasyonlu bir su battaniyesi veya yeniden kullanılabilir bir kimyasal reaksiyon ısı torbası.
Kısıtlama
1. 10 günlük veya daha küçük fare ve sıçan yavruları bu işlem için anestezi gerektirmez. Başın hemen arkasında tutarak ve omuzlara hafif bir baskı uygulamak için cildi kaudally çekerek manuel olarak kısıtlayın.
2. İzofluran inhalasyonu ile 10 günlük yavruları uyuşturun. Bir indüksiyon odasını hassas bir buharlaştırıcıya veya izofluran ile ıslatılmış bir pamuk top içeren bir çan kavanozuna takın. Yavru hareketsiz hale getirildikten sonra, anestezi yaklaşık 40 saniye etkilidir ve bu da enjeksiyon için yeterli zaman sağlar.
Enjeksiyon tekniği
1. Maddeyi şırıngaya çekin ve kapağı/iğne kılavuzunu iğnenin üzerine yerleştirin.
2. Yenidoğan fare veya sıçan başına maksimum hacim olarak önerilen enjeksiyon hacmi 100 μL'dir ve sütten kesilen veya daha yaşlı fareler için bu hacim 300 μL'ye kadardır.
3. Yenidoğanların serebral korteksine enjekte etmek için, iğneyi gözün 5 mm arkasına, kafatasının orta hattından yaklaşık 3 mm uzağa sokun.
4. Sütten kesilen fare enjeksiyon bölgesi, göz ve kulak arasında yaklaşık olarak yarı yolda ve orta hattın hemen dışındadır.