Kan Alma I

1. Retro-orbital kanama

1. Ekipman
   1. İzofluran gibi bir anestezik gaz uygulamak için bir çan kavanozu veya anestezik indüksiyon odası hazırlayın. Bir çan kavanozu kullanırken, deri yoluyla emilimini önlemek için sıvı anestezikin hayvanla temas etmemesi zorunludur. Küçük delikli bir platform kullanılabilir.
   2. 50-75 mikrolitre kapasiteli mikrohematokrit tüpleri tercih edilir. Mylar sarılı tüplerin operatörün parmakları arasında kırılma olasılığı daha düşüktür ve bir güvenlik önlemi olarak düşünülmelidir.
   3. İşlem sırasında hayvanın vücut ısısını korumak için çalışma yüzeyine birkaç kağıt havlu kalınlığı veya diğer yalıtım malzemeleri yerleştirilir.
2. Hayvanın hazırlanması ve konumlandırılması
   1. Hayvan, etki etmek için bir çan kavanozunda veya gaz anestezi indüksiyon odasında izofluran gibi bir inhalasyon anestezikliği ile uyuşturulur.
   2. Hayvan tamamen uyuşturulduktan sonra çıkarılır ve yanal yaslanma pozisyonuna yerleştirilir.
   3. Göz, başın üstüne ve çene çizgisi boyunca bir parmak yerleştirilerek ve cilt geriye ve aşağı çekilerek dışarı çıkarılır.
   4. Trakeaya baskı uygulamaktan kaçının, çünkü bu, asfiksi nedeniyle ölüme neden olan hava yolunu çökertebilir veya tıkayabilir.
3. Kan alma
   1. Mikrohematokrit, gözün medial kantusuna yerleştirilir ve burun düzleminden 30-45°'lik bir açıyla kaudal olarak yönlendirilir.
   2. Hematokrit tüpünü hafifçe döndürürken basınç uygulayın. Bu, konjonktival zarları kesecek ve oküler pleksusu yırtacaktır.
   3. Kan, kılcal damar hareketi ile hematokrit tüpüne akacaktır.
   4. Oküler boşluğun arkasındaki kemiğe çarpacak kadar derine itmekten kaçının.
   5. Kan akmaya başladığında, gözü çıkıntılı tutmak için basıncı koruyun.
   6. Birden fazla tüp kan toplamak için, bir sonraki tüpü oküler pleksusa yerleştirmek gerekli değildir, çünkü kan akmaya devam edecek ve medial kantustan geldiği gibi toplanabilir.
   7. Kanamayı durdurmak için cildi serbest bırakın ve gözün normal konumuna dönmesine izin verin. Hemostazı sağlamak için yörüngeye baskı uygulayın.

Şekil 1. Farelerde retro orbital kan çekilmesi.

2. Kuyruk kanaması prosedürleri: kuyruk kesme ve kuyruk takma adı

1. Ekipman
   1. Steril bir neşter bıçağı, tercihen 11 numara bıçak veya tek taraflı bir tıraş bıçağı, kuyruk kesme yöntemi için ilk amputasyonu yapmak için kullanılır. Makas kullanılmamalıdır çünkü makasla yapılan kesi kırıcıdır, böylece pıhtılaşmayı teşvik eder ve kan akışını azaltır. Kuyruk çentiği prosedürü için, kesimi yapmak için 11 veya 15 numaralı bir neşter bıçağı kullanılır.
   2. Farenin kuyruğuna erişime izin veren bir kısıtlama borusu hazırlanır.
   3. Kuyruk kesme işlemini gerçekleştirmek için alt tabaka olarak emici kağıt havlular veya gazlı bez kullanılır.
   4. Toplama tüpleri veya hematokrit tüpleri de gereklidir.
   5. Hemostaza yardımcı olmak için styptic tozu mevcut olmalıdır.
2. Kısıtlama
   1. Hayvan, kuyruğu erişilebilir olacak şekilde tüpe yerleştirilir. Broome tipi kısıtlayıcılar için, hayvan önce tüpe kıç çekilir. Diğer tüpler için, hayvan önce kafa yerleştirilir.
   2. Hayvanlar, geri dönemeyecekleri veya kuyruğunu çekemeyecekleri şekilde tüpe sabitlenir.
   3. Bazı fareler, pürüzlü bir yüzeyi tutmalarına izin verilirse, minimum manuel kısıtlama ile kuyruk kesimine ve kan alımına izin verir.
   4. Bazı sıçanlar bu kan alma yöntemi için inhalasyon anestezisine ihtiyaç duyacaktır.
3. Kan alma
   1. Kuyruk, kalıntıları gidermek ve hafif vazodilatasyona neden olmak için ılık suyla silinir. Sıcak su KULLANMAYIN.
   2. Kuyruk kesimi için kuyruk uzatılır ve kuyruğun en ucu (fareler için 0,5-1 mm ve sıçanlar için 2 mm'ye kadar) neşter bıçağı ile kesilir.
   3. Kuyruk çentiği için kuyruk uzatılır ve neşter bıçağı ile sağrıdan yaklaşık 2/3 uzaklıkta, doğrudan yan kuyruk damarı üzerinden bir kesim yapılır.
   4. Kan akışını teşvik etmek için kuyruk kıçtan uca okşanabilir; Ancak bu, numunenin kalitesini düşürecektir.
   5. Kan, hematokrit tüpleri kullanılarak uçtan veya çentikten toplanır veya bir toplama şişesine damlamasına izin verilir.

3. Kardiyak kan alımı

1. Ekipman
   1. Bir fare için, 22-25 gauge x 1" iğneli 3 cc'lik bir şırınga tercih edilir. Daha küçük şırıngalar aynı geri basıncına sahip değildir ve kan alımını zorlaştırabilir. 25 gauge'den daha küçük iğneler kan akışını kısıtlayarak pıhtılaşmanın artmasına ve kan hücrelerinin zarar görmesine neden olur. 1 inçten kısa iğneler diyaframdan yaklaşırken kalp seviyesine ulaşamayabilir.
   2. Bir sıçan için, 18 gauge x 1.5" iğneli 10-12 cc'lik bir şırınga tercih edilir. Sıçanın büyüklüğüne bağlı olarak, daha küçük bir şırınga toplanacak tüm kan hacmini tutamayabilir ve bu nedenle şırınganın işlem sırasında değiştirilmesi gerekecektir. 20 gauge'den küçük iğneler kan akışını kısıtlayarak pıhtılaşmanın artmasına neden olur. 1.5 inçten kısa iğneler diyaframdan yaklaşırken kalp seviyesine ulaşamayabilir.
   3. Alınan kanı tutmak için yeterli büyüklükte bir kan alma tüpü kullanılır.
2. Kısıtlama
   1. Bu yöntemin başarısı için uygun kısıtlama şarttır. Hayvan, vücut dikey olarak asılı olacak şekilde tırnık tarafından tutulur. Kalbin sapmasını veya göğsün bükülmesini önlemek için vücudun düz olması önemlidir.
   2. Alternatif bir pozisyon, iğneyi hayvanın sol tarafındaki kaburgalar arasına yerleştirirken sırt yaslanmasıdır. Bu, özellikle çok büyük sıçanlar için veya birden fazla hayvanın kanının kanaması gerektiğinde kullanışlıdır.

Şekil 2. Dikey olarak tutulan fare ile kardiyak kan çekilmesi.

3. Kan alma
   1. Arka açıdan yaklaşım, diyaframın delinmesi, fare veya sıçan tırnağa tarafından dikey olarak tutulduğunda daha kolay gerçekleştirilir.
      1. İğne, hayvanın ksifoidinin hemen solundaki çentikte ilerletilir.
      2. İğne omurgaya paralel olmalı ve kaburgaların hemen altına yerleştirilmelidir.
      3. Kalp yaklaşık olarak dirsek seviyesinde bulunur.
      4. İğneyi göğsün içine eğim vererek yerleştirin ve kalbi delin.
      5. Şırınga ile hafif bir geri basınç uygulayın. İğne kalbin içindeyse, kan şırıngaya akacaktır.
      6. Şırıngaya ek geri basınç eklemeden önce kanın şırıngayı doldurmasını bekleyin.
   2. Hayvanın sol tarafından yanal yaklaşım, hayvanın sırt yaslanmasında konumlandırılmasını gerektirir.
      1. Giriş noktası, göğüs duvarındaki dirsek noktasına karşı ölçülür. Kalp yaklaşık olarak dirsek seviyesinde bulunur.
      2. İğne, dorsoventral olarak ölçüldüğü gibi göğüs duvarının ortasındaki bir noktada masanın düzlemine dik olarak yerleştirilir.
      3. İğneyi göğsün içine eğim vererek yerleştirin ve kalbi delin.
      4. Şırınga ile hafif bir geri basınç uygulayın. İğne kalbin içindeyse, kan şırıngaya akacaktır.
      5. Şırıngaya ek geri basınç eklemeden önce kanın şırıngayı doldurmasını bekleyin.

Şekil 3. Dorsal yaslanma pozisyonunda fare ile kardiyak kan çekilmesi.

4. Teknik ipuçları
   1. Normal kalp, tepe noktası sola bakacak şekilde yerleştirilmiştir. Nadir durumlarda, kalp tersine çevrilebilir ve bu da kalbin delinmesinde zorluklara neden olabilir.
   2. Şırınga üzerindeki aşırı geri basınç, kalbi çökertebilir, iğne eğimini tıkayabilir ve şırıngaya kan akışını durdurabilir.
   3. Karşı basınç uygulamak ve tekrar tekrar serbest bırakmak, şırıngada pıhtılaşmayı başlatacaktır.
   4. Karaciğere nazikçe baskı uygulamak, dolaşım sistemine ek kan hacmini zorlayabilir ve bu da onu geri çekilmeye uygun hale getirebilir.

4. Posterior vena kava kan çekilmesi

4. Ekipman
   1. Farede kan toplama için 25-29 gauge iğneli bir TB şırınga kullanılır. Sıçanlar için, 22-25 gauge x 1 "iğneli 10-12 cc'lik bir şırınga gereklidir.
   2. Uzuvları yerine sabitlemek için bağlar, bant veya pimlerle birlikte hayvanı sabitlemek için bir cerrahi platform, diseksiyon tepsisi veya başka bir yüzeye ihtiyaç vardır.
   3. Enjekte edilebilir anestezi veya inhalasyon anestezisi gereklidir. İnhalasyon anestezisi kullanılıyorsa, anestezinin burun konisi olan hassas bir buharlaştırıcı ile verilmesi arzu edilir. Prosedür uzunluğu, ek anestezik gaz verilmesi olmadan bir indüksiyon odasının kullanılması, hayvan canlanmadan önce kan alımını tamamlamak için yeterli zaman sağlamayacak şekildedir.
   4. Fare için iris makası veya sıçan için ameliyathane keskin-künt makası, küçük atravmatik başparmak forsepsleri ve 2 "x 2" gazlı bez süngeri ile birlikte gereklidir.
5. Kısıtlama
   1. Hayvan tamamen anestezi uygulandığında, ayak parmağı tutamağı veya kuyruk tutamağı ile belirlendiği gibi, hayvan sırt yaslığına yerleştirilir.
   2. Uzuvlar platforma bant veya pimlerle sabitlenir. Uzuvlar vücuttan uzağa uzatılmalıdır.
6. Çekilme
   1. Deri kaldırılır ve kadınlarda pelvisin hemen üzerinden, erkeklerde ise prepusun hemen üstünden deri içinden küçük bir enine kesi yapılır.
   2. Makasın ucu kesiğe yerleştirilir ve pelvis/prepustan ksifoide kadar deriden orta hat kesisi yapılır.
   3. Cilt her iki tarafa yanal olarak yansıtılır. Altta yatan kastan gevşetmek için künt diseksiyon gerekebilir.
   4. Kas kaldırılır ve deri kesiğinin hemen üzerindeki kasın içinden küçük bir enine kesi yapılır.
   5. Makasın ucu karın içine yerleştirilir ve kas içinden ksifoide orta hat kesisi yapılır. Herhangi bir organı kesmemek için makasın ucunu yukarı doğru açılı tuttuğunuzdan emin olun.
   6. Her iki taraftaki kaburgaların eğrisi boyunca enine kesin. Karaciğeri delmemek için ekstra dikkatli olun.
   7. Posterior vena kava'yı ortaya çıkarmak için bağırsakları yavaşça hayvanın soluna doğru hareket ettirin.
   8. Karaciğerin üzerine bir gazlı bez yerleştirin ve işaret parmağını ve orta parmağınızı karaciğerin üzerine koyun.
   9. Öte yandan, iğneyi yukarı doğru eğimli olarak, böbrek damarlarının birleştiği yer ile iliak bifurkasyon arasındaki vena kavaya sokun.
   10. Karaciğere baskı uygularken kanı yavaşça çekin.

Şekil 4. Posterior vena kavadan kan çekilmesi.