Kan Alma II

Farelerden ve sıçanlardan kan toplanması çok çeşitli bilimsel çalışmalar için gereklidir ve araştırmacılar belirli deneysel hedeflere ulaşmak için farklı yöntemler geliştirmişlerdir.

İlk bölümde, genel kan alma düşüncesini tartıştık ve retro-orbital göz kanaması, kuyruk kırpıntıları ve çentiklerin yanı sıra intrakardiyak kan alma yöntemlerini gözden geçirdik. Burada, yüz, submandibular, safen ve femoral damarlardan kan alma prosedürlerini özetleyeceğiz. Bu yöntemler daha az invazivdir ve anestezi gerektirmez, bu da anestezik kullanımının kan sonuçlarını veya diğer verileri karıştırabileceği durumlarda onları tercih edilen yöntemler haline getirir.

Bir murin yüz damarından kan örneği alma prosedürü ile başlayalım. Farenin üzerinde, yanak boyunca uzanan kolay erişilebilir bir yüz damarı vardır. Prosedür için uygun ekipmanı seçerek başlayın. Temel olarak, kan alma için küçük bir santrifüj tüpüne ve farklı boyutlarda mevcut olan bir neştere ihtiyacınız vardır. Doğru lanset seçimi, hayvanın yaşına, cinsiyetine ve vücut ağırlığına ve toplanacak numunenin boyutuna bağlıdır. Lanset seçimiyle ilgili ayrıntılar için metin protokolüne bakın.

Tırmalama tekniğini kullanarak hayvanı kısıtlayarak işleme başlayın. Uygun kısıtlama, başın yan yana hareketini en aza indirir ve neşter ile doğru ve güvenli damar delinmesinin sağlanmasına yardımcı olur. Kavrama çok sıkıysa, kan akışı kısıtlanabilir ve bu da toplanan hacmin azalmasına neden olabilir. Hayvan zapt edildikten sonra, lateral kantusun altındaki gözün uzunluğunu ve kaudal olarak gözün genişliğini ölçerek yüz damarının yaklaşık alanını bulun. Lansetin ucu ile çene kemiğinin bittiği noktayı nazikçe hissedin. Damarı delmede daha iyi doğruluk için fareyi yan yatırmak isteyebilirsiniz.

Şimdi, yerleştirme yerinde, lanseti cilt yüzeyine dik olarak, ucu hafifçe buruna bakacak şekilde tutun. Bu çok önemlidir, çünkü neşter ucu kaudal olarak yönlendirilirse, kulak kanalı delinir ve kulaktan kanamaya neden olur. Damarı delmek için sıkı bir itme uygulayın ve cildi neşter omzuna kadar delin. Çıkarıldıktan sonra kan akmaya başlayacaktır. Akışa yardımcı olmak için, hayvanı başı kalpten daha aşağıda olacak şekilde konumlandırın. Kanamayı durdurmak için, hemostaz elde etmek ve aşırı kan kaybını önlemek için delinme bölgesini kurulayın. Son olarak, tırnağın üzerindeki baskıyı bırakın ve hayvanı kafesine geri koyun. Toplama hacimlerinin değişeceğini unutmayın, ancak hayatta kalma kan alımı için maksimum hacmi aşmamak zorunludur. Önerilen maksimum toplama hacmiyle ilgili ayrıntılar için Blood Extraction One videosunun metin protokolüne bakın. Kullanılan taraf değiştirilerek seri numuneler alınabilir. Her iki taraf da 5-7 günde bir defadan daha sık kullanılmamalıdır.

Şimdi submandibuler ven kanaması yöntemini gözden geçirelim. Bu, yüz damarı kanaması tekniğine çok benzese de, ekipmanda farklılıklar ve kanama prosedüründe ince farklılıklar vardır.

Submandibular ven, farenin alt çenesi boyunca uzanır ve yüz veni ile juguler ven içine birleşir. Neşter yerine bu yöntem iğneler kullanılarak gerçekleştirilir. Ancak neşterlere benzer şekilde, iğne ölçer seçimi yaş, cinsiyet ve hayvanın ağırlığına ve numune boyutuna bağlıdır - ayrıntılar için metin protokolüne bakın.

Başlamak için, hayvanı yüz damarı kanaması ile aynı şekilde tırmalayın, böylece başın yan yana minimum hareketi olur. Hatırlama - aşırı sıkı tutuş kan alma hacmini azaltabilir. Fareyi kısıtlarken, ağzın köşesinden yüz boyunca bir çizgi ve gözün yan kantusundan bir çizgi hayal edin. Bu çizgilerin kesişme noktası, submandibular venin yaklaşık alanıdır. Bu, ağzın köşesinde ve çene çizgisinin biraz altında kaudal bulunan küçük tüysüz bir çukurla çakışır.

Daha iyi doğruluk için, hayvanı yanal yaslanma pozisyonuna getirin (3.6.1). Ardından, iğneyi cildin yüzeyine dik tutun ve sıkıca iterek yerleştirin. İğneyi eğim ucunun ötesine SOKMAYIN, çünkü bundan daha büyük yerleştirme derinliği baş, boyun ve ağız boşluğundaki kaslarda, sinirlerde ve diğer damarlarda travmaya neden olabilir. İğnenin çıkarılmasından sonra kan akmaya başlayacaktır. Yüz damar kanamasında olduğu gibi, kan akışına yardımcı olmak için fareyi başı kalpten daha aşağıda olacak şekilde konumlandırın. Son olarak, hemostaz elde etmek için delinme bölgesini kurulayın ve hayvanı kafesine geri döndürmek için tırnağa üzerindeki baskıyı serbest bırakın.

Şimdi, safen damarından nasıl kan alınacağını öğrenelim. Bu damar, tarsal eklem boyunca dorsal ve daha sonra yanal olarak uzanan yüzeysel bir damardır.

Bu prosedür için ihtiyacınız olan ekipman, sıçanlar için esnek bir plastik olabilen bir kısıtlama cihazı içerir veya fareler için modifiye edilmiş 50 mililitrelik plastik konik bir tüp kullanılabilir. Tüp ucunun bir solunum deliğine izin verecek şekilde kesildiğini ve kapak ucundan yarım inç genişliğinde ve 2 inç uzunluğunda bir yuva kesildiğini unutmayın. Hayvanın güvenliği için kenarlar pıhtı bandı ile kaplanmıştır. Bu prosedür aynı zamanda 3 cc'lik bir şırınga ve 0-2 emilemeyen sütür uzunluğunda, bir çubukla üçlü antibiyotik merhem kullanılarak üretilen bir turnike gerektirir - cilt ile kan damlası, saç kesme makinesi, damar delinmesi için 22 gauge iğne ve kan toplama için hematokrit tüpü.

Bir fareyi dizginlemek için, önce burnu olacak şekilde tüpe yerleştirin. Ardından, arka bacağınızı nazikçe yuvaya yönlendirin ve işaret parmağı ve başparmağınızı kullanarak sabitleyin. Daha sonra, saçları bacağın yan yönünden dizden dikmeye kadar tıraş edin. Daha sonra, üçlü antibiyotik merhemin çok ince bir tabakasını saçsız bölgeye sürün. Bunu takiben, turnikeyi mümkün olduğunca kraniyal olarak uygulayın ve sıkın. Dizden ayak bileğine kadar dış yüzey boyunca uzanan safen damarı dolmaya başlayacak ve kabarık hale gelecek ve görüntülenmesi kolay hale gelecektir.

Ardından, 22 gauge bir iğneyi doğrudan kan damarının üzerinde ve cildin yüzeyine dik olarak tutun. Ve iğneyi çok derine sokmamaya ve kas veya kemiği delmemeye dikkat ederek damarı delin. Kan, bir hematokrit tüpüne toplanmak üzere bacağın yüzeyine boncuklanacaktır. Kan toplandıktan sonra, turnikeyi gevşetin ve hemostaz için delinme üzerine baskı uygulayın. Kanama durduktan sonra, hayvanı kısıtlamadan çıkarın ve kafesine geri koyun. Bu yöntemle toplanan hacimler 10 ile 150 ? L, örnekleme sıklığına bağlı olarak. Ve doku ürünleri içerebileceğinden numune kalitesi değişkendir. Aynı bacaktan 24 saatlik bir süre içinde en fazla 4 kan örneği alınmalıdır.

Son olarak, bir sıçanda kan almak için başka bir seçenek olan femoral venden nasıl kan alınacağını öğreneceğiz. Femoral ven, arka bacağın medial yönü üzerinde kasıktan diz eklemine kadar uzanır ve dizi geçmeden önce lateral safen ven haline gelir ve kolayca erişilebilir hale gelir.

Femoral ven kanamasının avantajı, safen veninden daha büyük bir hacmin daha kolay toplanmasıdır. Dezavantajı, bilinçli bir hayvanda bu prosedürün iki kişi gerektirmesidir. Bu prosedür için gerekli ekipman, turnike gerektirmemesi ve tercih edilen kısıtlama cihazının esnek bir koni olması dışında safen ven yöntemine benzer. Doğru koniyi seçmek için, hayvanın vücut uzunluğuna göre ölçün ve ardından uyluk seviyesinde oval bir delik açın.

Hayvanı dizginlemek için, önce burnu olan tüpe yerleştirin. Ardından, koninin ucunu katlayın ve hayvanın çıkmasını önlemek için küçük bir bağlayıcı klips kullanarak kapatın. Şimdi femoral ven'e erişmek için arka bacağınızı oval açıklıktan çekin. Hematom oluşumunu şiddetlendirebileceği için çok sıkı tutmayın. Daha sonra, bacağın iç yüzeyini kasıktan dizine kadar tıraş edin ve tüysüz bölgeye ince bir tabaka üçlü antibiyotik merhem sürün. Daha sonra, kısıtlayıcı kişi femoral veni tıkamalı ve bacağın iç yüzeyi kan alacak kişiye bakacak şekilde fareyi kavramalıdır. 22 gauge iğneyi kan damarına dik tutarak, damarı doğrudan delin ve kanı cilt yüzeyinde boncuklanırken hematokrit tüplerinde toplayın. Delinme, bu bölgenin önünde gelecekteki örneklemeye izin vermek için dize mümkün olduğunca yakın olmalıdır. Ayrıca, delinme derinliğinin iğnenin eğiminin uzunluğundan daha derin olmadığından emin olun. Kan akışına yardımcı olmak için, fareyi bacağı kalpten daha aşağıda olacak şekilde konumlandırın. Son olarak, bacak üzerindeki baskıyı serbest bırakın ve hemostaz elde etmek ve aşırı kan kaybını önlemek için delinme bölgesine baskı uygulayın. Bu prosedür kullanılarak önemli ölçüde daha fazla miktarda kan toplanabileceğini unutmayın.

Kan alma tekniklerinin temellerini tartıştıktan sonra, bu prosedürlerin bilimsel araştırmalar için neden yararlı olabileceğine dair bazı örnekleri gözden geçirelim

Aşı geliştirme sırasında bağışıklık tepkisini doğrulamak için kan genellikle analiz edilir. Burada, araştırmacılar mesane kanserinden muzdarip hayvanlara bir peptit aşısı verdiler. Daha sonra, submandibular ven yoluyla kan topladılar ve aşı etkinliğinin göstergesi olarak hizmet eden farklı sitokinlerin seviyelerini tespit etmek için serumu ayırdılar.

Kan alımı, diyabetteki glikoz seviyeleri gibi insan hastalığının biyobelirteçlerini inceleyerek bir tedavinin etkinliğini test etmek için de yaygın olarak yapılır. Bu araştırmacılar, diyabetik hayvanlarda kuyruk damarı yoluyla verilen yeni bir gen terapisinin etkinliğini test etmekle ilgileniyorlardı. Enjeksiyonu takiben, bu araştırmacılar, farklı tedavi protokollerinin kan şekeri seviyesi üzerindeki etkisini analiz etmek için birkaç zaman noktasında safen damarından kan topladılar.

Son olarak, bazı deneyler için, iltihaplanma veya stres seviyeleri gibi hayvanın temel durumunu bilmek önemlidir. Bu örnekte, stresli bir olaydan önce ve sonra bir sıçandan kan plazması toplandı. Ve gördüğünüz gibi, kortikosteron veya stres hormonu seviyesi, stresli olaydan on dakika sonra hayvanlarda daha yüksektir.

JoVE'nin fareler ve sıçanlar için kan alma teknikleri üzerine ikinci bölümünü izlediniz. Bu videoların her ikisini de izledikten sonra, bu hayvanlardan kan alma hususlarını ve prosedürlerini ve günümüzde biyomedikal araştırmalarda nasıl kullanıldıklarını daha iyi anlamalısınız. Her zaman olduğu gibi, izlediğiniz için teşekkürler!