Name: Fare Dalak gentleMACS Dissociator Tek Hücreli Cezalar hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Öğrenin, fare dalak dokusunu gentleMACS Dissociator ile otomatik olarak parçalayarak canlı tek hücreli süspansiyonlar hazırlama yöntemini. Bu teknik, akış sitometrisi analizleri için hücre hazırlama verimliliğini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Equipment Giriş <ol><li> Doku uygulanabilir tek hücre süspansiyonları içine menekşe C Tüpler kullanarak, hafifçe ayrışmış. </li><li> PBS / BSA EDTA tampon hücreleri ayırmak kullanılır. Tampon BSA Stok çözelti, EDTA içeren Çözüm Durulama autoMACS 20 kısım 1 kısım ekleyerek hazırlanır. </li><li> MACS Ön Ayırma Filtreler başarılı MACS ayrılması ve daha sonraki analiz teşvik ayrışmış doku örnekleri tüm hücre kümeleri, böylece kullanılır. </li></ol> Dalak hücreleri Dissociating <ol><li> Tüm dalak dalak gentleMACS Dissociator kullanarak tek hücre süspansiyonları disscociated. </li><li> Prosedürü başlatmak için, dalak, kitle göre tampon hacmi ile C Tüp yük. Genç bir yetişkin erkek BALB / c fare sağlıklı bir dalak 80-120 mg ağırlığındadır. Bu kitle her 1 ila 2 dalak 3 mL tampon gerektirir. Enfeksiyonları ile büyük hayvan veya hayvanların dalak genellikle büyük ve tampon tartılır olmalıdır. Tampon hacimleri buna göre ölçeklenmiş olmalıdır. 10 ml toplam tampon hacmi aşmayın. </li><li> 3 ml tampon içeren C Tüp disseke dalak ekleyin. </li><li> C Tüp kapağı sıkı olduğundan emin olun ve kapağı aşağı dissociator C Tüp takmak. </li><li> Dissociator kadar güç. 1-2 dalak için program m_spleen_01 seçin. Programını tamamlamak için 56 saniye sürer. Dalak, sayı büyükse, program m_spleen_04 kullanın, bu program 720 mg dalak doku için kullanılabilir. </li><li> Programın tamamlanmasından sonra yerli dalak doku splenocyte süspansiyon ayrışmış. </li><li> Yaklaşık 30 saniye boyunca oda sıcaklığında 300xg tüm hücre süspansiyonu aşağı spin. Bu rotor ve stator C Boru altında toplanan tüm hücreleri serbest olmasını sağlayacaktır. </li><li> 1000 mikrolitrelik pipetter kullanarak septum-C Tüp kapağı kapalı açılış ile örnek çıkarın. </li></ol> Filtrasyon adım <ol><li> Filtrasyon adım başlamak için, Pre-Ayırma Filtre ya da 30 mikron gözenek boyutu ile bir hücre süzgeç ayrışmış doku geçerlidir. Süzgeç fazla 2 dalak, 1-2 dalak ya da 50 ml tüp 15 ml tüp uygun olmalıdır. </li><li> Hücre süspansiyonu geçmesine izin verin. Daha sonra 5 ml tampon uygulayarak filtre yıkayın. </li><li> Şimdi, bir dalak hücre pelletini tüm splenositlerin toplamak için 10 dakika boyunca oda sıcaklığında, 300xg hücre süspansiyonu ile tüp santrifüj. </li><li> Şimdi, ayrışmış splenositlerin bir pelet, süpernatantı aspirat ve tamponu uygun bir miktarda hücre pelletini tekrar süspansiyon gerekir. </li></ol> Dalak ayrılma gentleMACS Dissociator kullanarak canlı splenositlerin MACSQuant Analyzer kullanarak flow sitometri gösterdiği yüksek bir yüzdesi verecektir. Ölü hücreler propidium iyodür tarafından lekeli. Verilen örnekte, ileri yan dağılım nokta arsa hazırlanan splenositlerin gösterir.

Tüm protokolleri ve veri sayfaları mevcuttur<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

GentleMACS Dissociator sıkıcı ve sıklıkla ağrılı manuel dissociations önlemek için, kontrollü ve tekrarlanabilir koşullar altında çok etkin bir şekilde doku ayırmak sağlar. Doku disosiasyon prosedürü yüksek canlılık oranı ile hücre ve verim hücre süspansiyonları yumuşaktır. C Tüpleri ile birlikte gentleMACS Dissociator, çeşitli dokuların tek hücre süspansiyonları hazırlanması için tasarlanmıştır. Cihaz fare dalak, karaciğer, akciğer veya sinir doku ayırmak önceden belirlenmiş programları bir dizi ile donatılmıştır. Çeşitli programların ve protokollerin ek dokuların sürekli kapsayacak şekilde genişletildi olacaktır.

<table><tbody><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Başlangıç Kiti</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>C Tüpleri</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>13 mL Tüpler</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-596</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; Durulama Solüsyonu </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; BSA Stok Solüsyonu</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Ayırma Öncesi Filtreler </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSQuant Analizör</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-197</td><td></td></tr><tr><td>Propidyum İyodür Solüsyonu</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

fare dalak gentlemacs dissociator tek hücreli cezalar hazırlanması

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Tek hücre süspansiyonları hücre ayırma, hücre analizi ve hücre kültürü deneyleri için bir önkoşuldur. GentleMACS Dissociator sıkıcı ve sıklıkla ağrılı manuel dissociations önlemek için kontrollü ve tekrarlanabilir koşullar altında çok etkin bir şekilde doku ayırmak sağlar. GentleMACS Dissociator optimal, kullanıcı güvenliği ile zaman kazandıran ve standardizasyon birleştirerek, fare dalak ayrılabilir. Bu video gentleMACS Dissociator, mekanik, canlı hücre süspansiyonları üretmek için özel tüpler kullanılarak dokuların bozabilir otomatik bir tezgah üstü cihazı kullanarak fare dalak ayırmak anlatılmaktadır. Disosiasyon ardından, dalak, süzülür ve başka uygulamalar için yeniden süspanse.

Bu video gentleMACS Dissociator kullanarak fare dalak tek hücre süspansiyonları hazırlamak için otomatik doku ayrılma için basit, zaman tasarrufu sağlayan bir teknik açıklar.

Fare Dalak gentleMACS Dissociator Tek Hücreli Cezalar hazırlanması

Tek hücre süspansiyonları; hücre ayırma, hücre analizi ve hücre kültürü deneyleri için bir ön koşuldur. Zahmetli ve sıklıkla ağrılı olan manuel...

Bu video protokolünde, özel tüpler kullanarak dokuları mekanik olarak parçalayan ve canlı hücre süspansiyonları üreten otomatik bir masaüstü cihaz olan Gentle Max ile fare dalaklarının nasıl disosiye edileceğini göreceksiniz. Disosiyasyonun ardından dalaklar Max Pres ayırma filtreleri ile filtrelenir, santrifüj edilir ve ileri uygulamalar için süspanse edilir. Merhaba, ben Melanie mlu.Almanya'daki BE Lab Park'ta bulunan Milton Biotech'te çalışan bir bilim insanıyım. Bugün size, bu GenX disosiyasyon kitini kullanarak fare dalağından tek hücre süspansiyonu hazırlamayı göstereceğim. GenX disosiyasyon işlemi, tek hücre süspansiyonunun oldukça kolay ve hızlı bir şekilde hazırlanmasını sağlar.Öyleyse başlayalım. Zahmetli ve genellikle ağrılı olan manuel disosyasyonlardan kaçınmak için, gentle max di associator kontrollü ve tekrarlanabilir koşullar altında dokuların çok verimli bir şekilde disose edilmesini sağlar. Dokular, violet C tüpleri kullanılarak canlı tek hücre süspansiyonlarına nazikçe disose edilir.C tüpü, kapağın merkezine doğru septumla kapatılmış bir açıklık sağlayarak, steriliteyi sürekli korurken tüpten pipetleme yapılmasına olanak tanır. Disosiye hücreleri süspanse etmek için uygun P-B-S-B-S-A-E-D-T-A tamponu kullanmanız gerekecektir. Tampon, bir birim BSA stok çözeltisinin, EDTA içeren 20 birim AutoMax çitleme çözeltisine eklenmesiyle hazırlanır.Max Pres ayırma filtreleri kullanılarak, disosiye edilmiş doku örnekleri tüm hücre kümelerinden arındırılır; bu sayede başarılı bir maksimum ayırma ve ardından gelen analizler desteklenir. Prosedüre başlamak için, C tüpüne belirli bir hacimde tampon çözelti yükleriz. Dalak kütlesine göre, altı ila yedi haftalık dişi bir biyopsi faresinin sağlıklı dalağı yaklaşık 80 ila 120 miligram ağırlığındadır.Bu kütlenin her bir veya iki dalak için üç mililitre tampon çözelti gerekir. Toplam hacmin 10 mililitreyi geçmemesine dikkat edin. Şimdi, disseke edilen dalağımızı üç mililitre tampon çözelti içeren C tüpüne ekleyebiliriz. Yaşlı hayvanlardan veya enfeksiyonu olan hayvanlardan alınan dalaklar genellikle daha büyüktür ve tampon çözelti içinde tartılmalıdır.Tampon hacimleri buna göre ölçeklendirilmelidir, ancak yine de toplam hacim 10 mililitreyi geçmemelidir. Şimdi, C tüp kapağının sıkı olduğundan emin olun ve C tüpünü disosiyasyon cihazına takın. Kapak aşağıya bakacak şekilde, bir ila iki dalak için disosiyasyonu çalıştırın ve Program M spleen oh one'ı seçin. Programın tamamlanması 56 saniye sürecektir; dalak sayısı daha fazlaysa program M spleen oh four'u kullanın.Bu program, 720 miligrama kadar dalak dokusu için kullanılabilir. Program tamamlandıktan sonra, doğal dalak dokusu bir PLE hücre süspansiyonuna ayrıştırılır; örneği tüpün dibinde toplamak için bunu kısa süre santrifüjleyin. Bu işlem, rotor ve statorun, C tüpünün dibinde toplanan tüm hücrelerden arındırılmasını sağlayacaktır.Bin mikrolitrelik bir pipet kullanarak, C tüp kapağındaki septumla kapatılmış açıklıktan numuneyi çıkarıyoruz. Filtrasyon adımına başlamak için, disosiye edilmiş dokuyu pres ayırma filtresine veya 30 mikron gözenek boyutuna sahip bir süzgece uyguluyoruz. Süzgeç, bir ila iki dalak için 15 mililitrelik bir tüpe veya ikiden fazla dalak için 50 mililitrelik bir tüpe uygun olmalıdır.Hücre süspansiyonunun geçmesine izin verin, ardından filtreyi beş mililitre tampon uygulayarak yıkayın. Şimdi, tüm sitleri bir dalak hücresi peleti şeklinde toplamak için hücre süspansiyonunun bulunduğu tüpü oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 300 Gs ile santrifüj edin. Ayrıştırılmış sitlerden oluşan bir pelet elde ettiğimize göre, süpernatantı aspire etmeli ve hücre peletini uygun miktarda dalak ayrıştırma tamponunda yeniden süspande etmeliyiz.GentleMax kullanımı, MaxQuant ile yapılan akış sitometrisiyle kanıtlandığı üzere, yüksek oranlarda canlı PLE sitleri elde edilmesini sağlar. Örnekte sunulduğu gibi, ölü hücreler Propidyum iyodür ile boyanmıştır. İleri saçılım noktasal grafiği (forward side scattered dot plot), hazırlanmış SP sitlerini göstermektedir.Tamam.Sizi, bu nazik X disosiyasyonunu kullanarak dalak dokusunun nasıl ayrıştırılacağı konusunda bilgilendirdim. Bu prosedürü uygularken, tampon miktarı numune boyutuna göre ayarlamanız ve doğru Gentle X programını seçmeniz önemlidir. Tamam, bu kadar.Deneyinizde başarılar dileriz.

preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-spleen-with-gentlemacs

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz, antijen-spesifik sıçan T lenfosit hatları in vitro genişlemesi için kullanılan T hücre büyüme faktörü hazırlık açıklar.

Rat splenositlerin T Hücre Büyüme Faktörü hazırlanması

Belirli doku tiplerinin hücreleri Dissociating doku ajitasyon için belirli parametreler uygulanabilir kültürlenebilen hücrelerinin yüksek ses elde etmek için gereklidir. Miltenyi gentleMACS dissociator basit, pratik bir protokol ile bu görevi en iyi hale getirir. Bu yayında akciğer dokusunda bu cihazların kullanımı açıklanmıştır.

Standardize Hazırlık gentleMACS Dissociator kullanarak Fare Akciğer Doku Tek Hücre Cezalar

Belirli doku tiplerinin hücreleri Dissociating doku aggitation için belirli parametreler uygulanabilir kültürlenebilen hücrelerinin yüksek ses elde etmek için gereklidir. Miltenyi gentleMACS Dissociator basit, pratik bir protokol ile bu görevi en iyi hale getirir. Bu yayında, nerual doku bu cihazların kullanımı açıklanmıştır.

Fare Sinir Doku Hücre Tek Cezalar Üretimi

Bu videoda, yüksek tuzla işlenmiş antijen sunan dendritik hücrelerin (DC'ler) farelere evlat edinerek transferi için bir prosedür gösterilmektedir. Murin CD11c + dendritik hücreleri (DC'ler), hücrelerde izolevuglandin (IsoLG) -protein eklentileri oluşturan yüksek miktarda sodyum içeren bir ortama maruz bırakılır. Bu eklentiler neoantijenler olarak işlev görür ve DC'lerin yüzeyinde sunulur. Yüksek tuzla muamele edilmiş hücreler, evlat edinici hücre transferi yoluyla farelere enjekte edilir.

Dendritik Hücrelerin Yüksek Tuz Tedavisi ve Farelere Evlat Edinme Transferi için Bir Yöntem

Video, bir murin beyin dokusundan tek hücreli bir bağışıklık hücresi süspansiyonunun hazırlanmasını göstermektedir. Hücreleri beyin dokusundan serbest bırakmak için enzimatik sindirimi ve ardından tek hücreli süspansiyonu elde etmek için bağışıklık hücrelerini yoğunluklarına göre izole etmek için yoğunluk gradyanlı santrifüjlemeyi içerir.

Murin Beyin Dokusundan Tek Hücreli Bağışıklık Hücrelerinin Süspansiyonunun Hazırlanması

Akış sitometri T hücreleri içinde kromatin durumunu değerlendirmek için kullanılabilir. Bu protokol, bilim adamları, floresan Histon H3 antikorların ortalama florasan yoğunluğu (MFI) bir artış gösterdiği, T hücresi aktivasyonu sırasında kromatin yoğunlaşması kanıt yorumlama sağlar...

Akış Sitometrinin Kullanımı T Hücrelerinde Kromatin Devleti değerlendirmek için

Burada, manyetik hücre sıralama ve içine saf fareler sonraki evlat edinen transfer tarafından fare dalağı dendritik hücreleri izole etmek için bir iletişim kuralı mevcut. Yüksek tuz aktif dendritik hücre modeli evlat edinen transfer ve Akış Sitometresi adım adım yordamlar açıklamak için seçildi.

Yalıtım ve yüksek tuz evlat edinen Transfer dendritik hücreler antijen sunan tedavi

Burada periton, dalak ve kemik iliği dokularındaki murin immün B hücre bölmesinin akış sitometrisine göre heterojenliğinin basit bir analizinde açıklanmaktadır. Protokol diğer fare dokularına uyarlanabilir ve genişletilebilir.

Murine B Hücre Gelişiminin Akış Sitometrik Karakterizasyonu

Burada yetişkin fare testislerinden canlı meiotik ve post-meyotik mikrop hücrelerini izole etmek için basit ve etkili bir yöntem salıyoruz. Düşük sitotoksisite, menekşe heyecanlı DNA bağlayıcı boya ve floresan-aktive hücre sıralama kullanarak, bir birçok downstream uygulamaları için son derece zenginleştirilmiş spermatojenik hücre popülasyonları izole edebilirsiniz.

Mor-Heyecanlı Hücre-Geçirgen DNA Bağlayıcı Boya Kullanılarak Murine Spermatojenik Hücrelerin İzolasyon

Bu makale, yarı katı bir bazal membran matrisi içinde dalak hücrelerini toplamak ve kapsüllemek için bir protokolü açıklamaktadır. Bazal membran matris yapıları, organoid gelişimini incelemek için veya in vivo transplantasyon ve doku rejenerasyon çalışmaları için üç boyutlu kültürde kullanılabilir.

Murin Dalak Dokusu Oluşumunu Araştırmak için Bazal Membran Matris Kapsüllü Hücre Agregasyonu

Burada, kollajenaz tip I ile sindirim ve ultrasantrifüjlemenin bir kombinasyonunu kullanarak fare dalağından türetilmiş eksozomları izole etmek için bir protokol sunuyoruz.

Fare Dalak Dokularından Elde Edilen Eksozomların İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Öğrenin, fare dalak dokusunu gentleMACS Dissociator ile otomatik olarak parçalayarak canlı tek hücreli süspansiyonlar hazırlama yöntemini. Bu teknik, akış sitometrisi analizleri için hücre hazırlama verimliliğini artırır.

Fare Dalak gentleMACS Dissociator Tek Hücreli Cezalar hazırlanması

Daha fazla video keşfet