Why is sterile tissue harvest important in laboratory animal research?

Sterile tissue harvest prevents contamination of cells and organs collected from research animals, which is essential for cell and tissue cultures, protein and RNA analysis, and metabolic profiling. Using harvested tissues for in vitro experiments reduces overall animal usage in research, supporting the replacement principle of the 3 R's framework for humane research practices.

What equipment and preparation are needed before starting a sterile tissue harvest?

The procedure requires a laminar flow hood running for at least 15 minutes before use. Disinfect the hood with 70% alcohol and place wet paper towels inside. Arrange sterile instruments in order of use from left to right to maintain unidirectional workflow. The sterile technician must wear a sterile gown and two pairs of sterile surgical gloves covering the wrists to prevent skin cell contamination.

How are abdominal organs like the liver and spleen removed during sterile harvest?

For the spleen, position the animal in right lateral recumbency and cut directly over the organ, gently retracting it while avoiding punctures. For the liver, place the animal in dorsal recumbency, reflect it away from the diaphragm, and carefully sever membranes and blood vessels. The liver is fragile and easily punctured, so handle it carefully to prevent excessive blood release that could compromise tissue quality.

What is the proper technique for harvesting the heart and lungs together?

Place the animal in dorsal recumbency and open the thoracic cavity by cutting through the abdominal muscle and diaphragm. Puncture the diaphragm at the lateral rib cage and extend cuts to the sternum. Grasp the trachea with forceps and sever it with scissors, then lift and remove lung attachments from the spinal surface until the heart and lungs can be lifted free from the chest cavity.

How is the brain harvested using aseptic technique?

Strip the skin from the body and over the skull, then saturate with alcohol and remove outer gloves. Make a cut along the midline from the cervical area to the nose. Using dedicated sterile scissors, cut through the spine at the skull base and along the midline through the foramen magnum. Lever the parietal bones away, disrupt nerve attachments with a spatula, and break olfactory bulb attachments with forceps before dropping the brain into sterile media.

What research applications use sterile tissue harvest techniques?

Neural stem researchers extract tissue from mouse neonatal brains to study stem cell development and cancer progression in vitro. Metabolic profiling studies analyze tissue metabolites using nuclear magnetic resonance spectroscopy. Immunologists harvest lungs aseptically to measure bacterial load in infection models, collecting samples at multiple time points to track disease progression.

What roles do sterile and non-sterile technicians play during tissue harvest?

Both technicians wear masks and bouffants. The non-sterile technician euthanizes the animal, places the carcass on paper towels, soaks it with 70% alcohol, and opens sterile instrument packages without touching inner surfaces. The sterile technician wears a sterile gown and two pairs of gloves, removes instruments aseptically, and performs the actual organ extraction to maintain sterility throughout the procedure.

Steril Doku Hasadı

0 görüntüleme12:29 dk

1. Hazırlık

Yaygın olarak kullanılan malzemeler arasında bir fışkırtma şişesinde% 70 alkol, steril 20-25 gauge iğneler, iki paket steril iris makası ve başparmak forseps aleti (biri cilt ve diğeri iç dokular için), kağıt havlular, steril cerrah eldivenleri, steril bir petri kabı, steril ortam ve steril salin.
Davlumbaz fanı işlemden en az 15 dakika önce çalışır durumda olmalı ve %70 alkol ile dezenfekte edilmelidir.
Davlumbaz bir UV sterilizasyon lambası ile donatılmışsa, çalışma yüzeyini daha fazla dezenfekte etmek için kullanılabilir.
Davlumbazın kurulumu için temiz eldivenler giyilir. Ekipman, kullanılacakları sırayla, genellikle soldan sağa doğru davlumbaza yüklenir. Bu, işin tek yönlü bir iş akışında yürütülmesine olanak tanıyarak kirli öğelerin temiz öğeleri kirletmesini önler. Bu, hasat edilen dokuları veya organları hayvan leşlerinden kazara kontaminasyondan koruyacaktır.
Steril alet paketleri, paketlerin steril iç kısmına saygı gösterilerek açılır. Steriliteyi korumak için, paket masanın ortasına yerleştirilir ve her bir kanat steril alanın veya paketin iç kısmının üzerinden geçmeden açılır. Steril olmayan kişi, ilk üst kanadı kendisi için yansıtarak açar. Yan kanatlar daha sonra her kanatta bir tane olmak üzere iki el kullanılarak açılır ve paketten çekilir. Son kanat daha sonra paketi açan kişiye doğru çekilir ve paketin iç yüzeylerinden herhangi birine dokunmamaya özen gösterilir.
Kağıt havluları davlumbazın içine yerleştirin ve alkolle ıslatın.
Steril olmayan kişi hayvanlara ötenazi yapacaktır.
Steril kişi iki set steril cerrahi eldiven giyer.
Steril olmayan kişi karkası kağıt havluların üzerine yerleştirir ve karkası %70 alkol ile tamamen ıslatır.
Bir set steril makas ve forseps kullanarak, prepusun hemen önünde (erkeklerde) veya pelvik kemiğin (kadınlarda) hemen önünde ciltte yatay bir kesim yapın. Karın kaslarını kesmekten kaçının.
Aletleri bir kenara koyun.

2. Dokuların toplanması

Dişilerde pelvisin hemen önünde, erkeklerde ise prepusun üzerinde küçük bir kesi yapın.
Baş parmağınızı kesiğin altına yerleştirin ve kesiğin kafatası kenarını kavrayın. Diğer elinizi kullanarak, cildi başa doğru çekerken arka bacakları ve kuyruğu güvenli bir şekilde tutun.
Deri, arka bacakların hemen üzerinde vücuttan yırtılır ve baş ve ön ayaklar üzerinde ters çevrilebilir. Bu, organ hasadı sırasında saç kirleticilerini etkili bir şekilde ortadan kaldırır.
Vücudu tekrar% 70 alkolle ıslatın ve artık steril olmayan yüzeysel eldivenleri çıkarın.
Steril aletler kullanarak karın boşluğunu açın.
1. dalak
  1. Dalağı çıkarmak için vücut sağ lateral yaslanma pozisyonunda konumlandırılır.
  2. Dalak karın kası içinden görüntülenebilir.
  3. Doğrudan dalak üzerinden bir makas kesimi yapılır.
  4. Dalak vücut boşluğundan nazikçe geri çekilir.
  5. Dalak, mide ve pankreas dokusu arasındaki tüm ataşmanları keserken, organı delmekten veya yırtmaktan kaçının.
2. karaciğer
  1. Diğer karın organlarını hasat etmek için, vücut sırt yaslığına yerleştirilir.
  2. Karın kası kaldırılır ve kesilir, böylece doğrudan karın boşluğu üzerinde oval bir açıklık bırakılır.
  3. Karın boşluğunu açığa çıkardıktan sonra, karaciğeri kaudal olarak diyaframdan uzağa yansıtın.
  4. Karaciğeri diyaframa bağlayan zarları dikkatlice kesin.
  5. Karaciğer ve diyafram arasında görünen kan damarları boyunca omurgaya dik bir kesi yapın.
  6. Karaciğeri kaldırın ve altındaki ekleri görselleştirmek için diyaframa doğru yansıtın.
  7. Daha küçük karaciğer loblarını mide ve ince bağırsağa bağlayan ince zarlar olacaktır ve bunların bozulması gerekecektir.
  8. Karaciğerin ortasındaki fibröz düğümü alt tarafından kavrayın ve tüm ekleri bulmak için organı kaldırın. Karaciğeri alttaki organ ve dokulardan ayırın.
  9. Karaciğerin kırılgan olduğunu ve kolayca delinebileceğini ve bunun da kanın salınmasına neden olabileceğini unutmayın; bu nedenle, dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır.
3. böbrekler
  1. Karın boşluğunu açığa çıkardıktan sonra, sağ böbreği görselleştirmek için bağırsakları sola veya sol böbreği görselleştirmek için sağa doğru itin.
  2. Böbreği çıkarmak için, organı vücuttan izole etmek için böbreğin altını kavramak için forseps bıçakları kullanın. Makas veya neşter bıçağı kullanarak böbreği vücuttan kesin. Böbreğe zarar vermemek için forsepsin altındaki kesiği yapın.
  3. Böbrek çıkarıldıktan sonra, organdan herhangi bir yağ kesilebilir.
4. yumurtalık
  1. Karın boşluğunu açığa çıkardıktan sonra, uterusu görselleştirmek için bağırsakları kraniyal olarak hareket ettirin.
  2. Uterusun sol ve sonra sağ boynuzlarını yumurtalıklara doğru takip edin.
  3. Yumurtalıklar küçüktür. Yaşlı hayvanlarda, yağa gömülebilirler.
  4. Forsepsleri vücuttan izole etmek için yumurtalığın altına kaydırın ve yağdan ve fallop tüpünden ayırın.
5. Testis
  1. Karın boşluğunu açtıktan sonra, kasık yağ pedini nazikçe kavrayın ve öne doğru çekin.
  2. Bu, testisi skrotumdan çekecektir.
  3. Testis açığa çıktığında, vücuttan atmak için skrotum ve vas deferens'e olan ekleri kesin.
  4. Bu her testis için yapılır.
Göğüs organlarını çıkarmak için göğüs boşluğu açılır
1. Vücut dorsal yaslanmaya yerleştirilir. Göğüs boşluğu organlarının toplanması için cildin başın üzerine iyi bir şekilde yansıtılması zorunludur.
2. Ksifoid sürecini kavrayın ve kaburgalara sadece kaudal olan karın kasından bir kesik sağlamak için kaldırın. Kesiği her iki taraftaki göğüs kafesinin alt eğrisi boyunca uzatın. Bu, diyaframın görselleştirilmesine izin verecektir.
3. Göğüs kafesinde her iki tarafta mümkün olan en yanal noktada küçük bir kesik yaparak diyaframı delin. Diyaframı kaburgalardan uzakta kesin.
4. Torasik organları görselleştirmek için ksifoiddeki kaburgaları kaldırın.
5. Yanal kesimi her iki taraftaki sternumun tepesine kadar uzatın ve göğsü açın.
6. Kalp ve akciğerler en kolay şekilde birlikte çıkarılır.
  1. Forsepsleri trakeaya dik olarak yerleştirin ve trakeayı sıkıca kavrayın.
  2. Makası kullanarak, forsepsin hemen önünde trakeaya dik bir kesim yapın. Bu kesi soluk borusu ve yemek borusunu kesmelidir.
  3. Soluk borusu üzerindeki tutuşu gevşetmeden, soluk borusunu yukarı ve kaudal olarak kaldırın. Akciğerlerin göğüs kafesindeki omurga yüzeyine herhangi bir ekini kesin.
  4. Kalbi ve akciğerleri göğüs boşluğundan kurtarabilmek için yemek borusunun kesilmesi gerekebilir.
7. Sadece kalp
  1. Kalbi kaldırın ve perikardiyal keseyi dikkatlice kesin.
  2. Aort, hayvanın solundaki kalbin kafatası yönündedir.
  3. Aortu forseps ile tutarak, aort ve kalbi tutarak forsepsin distalinde bir kesik yapın.
  4. Ön vena kava ve pulmoner arterleri ve damarları keserken aortu kavrayın.
  5. Kalbi aort arteri tarafından göğüs boşluğundan serbest bırakın.
8. Diğer torasik organlar
  1. Aletlerin sterilitesini korumak için organlar şu sırayla toplanır: timus, lenf düğümleri ve yemek borusu.
beyin
1. Özel durumlarda, beynin steril kültür için hasat edilmesi gerekecektir.
2. Beyin, diğer organ alımlarından sonra en son toplanır.
3. Beynin toplanması gereken tek organ olduğu durumlarda, deri vücuttan sıyrılmaz, bunun yerine ense bölgesinden bir kesi yapılır ve dorsal servikal bölgeden burun ucuna kadar orta hat boyunca uzatılır.
4. Cildi kafatasından yanal olarak çektikten sonra, açıkta kalan kemik% 70 alkol ile ıslatılır ve kirli üst eldivenler çıkarılır.
5. Özel bir çift steril beyin hasadı makası kullanarak, kafatasının tabanındaki omurgayı kesin.
6. Makasın ucunu foramen magnuma yerleştirerek ve orta hat boyunca keserek kafatasını açın.
7. Parietal kemikleri beyinden uzaklaştırmak için makas bıçağının düz ucunu kullanın.
8. Beyin sapındaki sinir eklerini ve beynin altındaki optik kiazmayı, başparmak forsepslerinin kapalı noktasını kullanarak dikkatlice bozun.
9. Benzer şekilde, kapalı forsepsleri beynin altına öne doğru kaydırın ve koku ampullerindeki ekleri kırın.
10. Beyin daha sonra kafatasından steril ortama bırakılabilir.
11. Beyin alınırken, kafatası kesilirken ve beyin çıkarılırken, bir el kafasını stabilize etmek için çenenin altına yansıyan kafatasından gelen deriyi kavradığı için steril olmayan olarak kabul edilecektir.
cilt
1. Meme dokusu
  1. Meme dokusu, manubriumdaki sternumun tepesinden ventral yüzeydeki genital açıklığa kadar bulunur ve her iki tarafa kadar yanal olarak uzanır, neredeyse kalça ve omuzlardaki dorsal yüzeye temas eder.
  2. Kitleler, renk değişikliği veya anormallikler aramak için meme dokusunu inceleyin. Emziren veya hamile kadınlarda meme dokusu hacmi artacaktır ve süt mevcut olabilir.
  3. Meme bezlerinin eksizyonu, bezin kenarının başparmak forseps ile kavranmasını ve cilde olan ekleri gevşetmek için künt diseksiyon kullanılmasını gerektirir. Bez deriden ayrıldıktan sonra, kalan ekleri kesmek için iris makası kullanılabilir.
  4. Açıkta kalan yüzeyleri% 70 alkolle ıslatın ve yeni bir steril alet seti kullanarak doku toplamaya başlayın.
  5. Hasat edilen doku, kültür ortamına yerleştirilmeden önce steril tuzlu su ile durulanır.
2. Deri altı tümörler
  1. Çoğu zaman, tümör hücreleri tekrar tekrar hayvanlara implante edilir ve daha sonra ortaya çıkan tümör, tümör hücre hattını korumak için toplanır.
  2. Deri altı tümörlerin steril doku alımının, cilt bütünlüğünün bozulmasından önce yapılması zorunludur.
  3. Kitle aşınmışsa veya nekrotik ise, toplanan doku iyi kalitede olmayacak ve steril olmayabilir.
  4. Vücut, ilgilenilen alanı ortaya çıkaracak şekilde konumlandırılmıştır. Deri, tümörün bir tarafı boyunca kesilir.
  5. Tümörü ortaya çıkarmak için cildi dikkatlice yansıtın. Cilt aletlerini yana yerleştirin ve açıkta kalan dokuları% 70 alkolle ıslatın.
  6. Yeni steril aletlerle, kitleyi alttaki ataşmanlardan ayırın ve kitleyi besleyen tüm kan damarlarını kesin.
  7. Tümör daha sonra kültür ortamına yerleştirilir.