6.4: Santrifüjlerle Çalışma

1. Güvenli Santrifüj Kullanımı için Genel Protokol

1. Laboratuvar sorumlusu veya laboratuvar güvenliği görevlisi, tüm kullanıcıların rotor ve numune tüpü seçimi ve santrifüjün düzgün çalışması konusunda uygun şekilde eğitildiğinden emin olmalıdır.
2. Herhangi bir yeni kullanıcı, cihazı doğru şekilde nasıl kullanacağından emin olana kadar eğitimli bir kullanıcı tarafından yakından denetlenmelidir.
3. Cihazı kullanmadan önce, her kullanıcı belirli santrifüj için güvenlik talimatlarını dikkatlice okumalı ve anlamalıdır.
4. Örneğe bağlı olarak, uyumlu rotorlar kullanılmalıdır.
5. Rotor, boru ve mil temiz, kuru olmalı ve çatlak veya şekil bozukluğu içermemelidir.
6. O-ringlerde herhangi bir aşınma veya çatlak olup olmadığı kontrol edilmelidir.
7. Santrifüjleme için kullanılan tüplerin numune ve dönüş hızı (düşük, yüksek veya ultra) ile uyumlu olduğundan emin olmak önemlidir.
8. Santrifüj tüpleri, maksimum dolum seviyelerinin dörtte üçünden fazla doldurulmamalıdır.
9. Tüpler sıkıca kapatılmalıdır.
10. Tüplerin birbirlerinin karşıtlıklarının dengelenmesi son derece önemlidir. Bunun yapılmaması, eksik ayırmaya yol açabilir ve aşırı durumlarda, santrifüj muhafazasındaki tüp içeriğinin dağılmasına neden olabilir.
11. Santrifüjü açmadan önce, rotorun sürücüye doğru şekilde oturduğundan ve kapağın düzgün şekilde kapatıldığından emin olmak için kontrol edilmelidir.
12. Santrifüj çalışırken kapak her zaman kapalı tutulmalı ve rotor tamamen durana kadar asla açık bırakılmamalıdır.
13. Operatör, hedef çalışma hızına güvenli bir şekilde ulaşana kadar santrifüjün yakınında kalmalıdır. Olağandışı sesler veya titreşimler durumunda, cihaz derhal kapatılmalıdır. Cihazın hız sınırı asla aşılmamalıdır. Kapattıktan sonra, rotorun durma konumuna yavaşlaması için yeterli zaman tanıyın. Modern santrifüjler, santrifüjü açmanın güvenli olduğunu gösteren göstergelere sahiptir.
14. Santrifüjleme bittikten sonra numuneler çıkarılmalı ve cihazda herhangi bir dökülme veya sızıntı olup olmadığı kontrol edilmelidir. Gerekirse, rotor iyice temizlenmelidir.

2. Tehlikeli Kimyasallar veya Bulaşıcı Maddelerle Çalışırken Ek Önlemler

1. Bulaşıcı olabilecek tehlikeli kimyasallar veya biyolojik numuneler kullanırken, diğer çalışanları tehlikeye karşı uyarmak için kullanım sırasında cihazı etiketlemek önemlidir.
2. Tehlikeli numuneleri işlemek için uygun eldivenler¹ giyilmelidir.
3. Sızdırmaz güvenlik tüpleri kullanılmalıdır. Santrifüj tüpleri için varsa ikincil hapsin kullanılması tercih edilir. Bunlar genellikle doğrudan santrifüjün numune kovalarına yerleştirilen plastik veya cam ekler şeklindedir.
4. Santrifüjleme bittikten sonra, tüpler rotordan çıkarılmalı ve uygun olduğu şekilde sadece çeker ocak veya biyolojik güvenlik kabininde açılmalıdır.
5. Gerekirse, operatörü tehlikeli kimyasallara veya bulaşıcı maddelere maruz bırakmamak için temizlik çok dikkatli yapılmalıdır. Bu tür numunelerin dökülmesi durumunda, aşağıdaki 3. adım olan Acil Durumlara bakın.
6. Belirli tehlikeli numune türleri için, laboratuvarda standart prosedürlerin ve temizlik protokollerinin sürdürülmesi tercih edilebilir. Bunlar, gerektiğinde uygun şekilde gözden geçirilmeli ve güncellenmelidir.

3. Acil Durumlar ve Güvenlik Önlemleri

Rotor arızalanırsa veya tüp kırılması veya yanlış kullanım nedeniyle santrifüjde bir dökülme olursa acil bir durum ortaya çıkabilir. Bu gibi durumlarda aşağıdaki adımlar atılmalıdır.

1. Santrifüj derhal kapatılmalı ve başkalarına haber verilip yeri boşaltana kadar kapak kapalı tutulmalıdır. Güç, cihaz üzerindeki güç düğmesinde sonlandırılmalıdır. Düğme, cihazın önünde, yanında veya arkasında yer alacaktır. Kullanıcı, konumu hakkında bilgi sahibi olmalıdır. Güç düğmesi arızalıysa, kullanıcı ana elektrik fişini duvar prizinden çıkarmalıdır.
2. Aerosol riskini azaltmak için, santrifüjü en az 0,5 saat boyunca el değmeden bırakmak bazen daha iyidir. Santrifüj teknik belgesine danışın.
3. Dökülenleri temizlemek için operatör, kullanılan numuneyi iyi tanımalı ve laboratuvar önlüğü, eldiven, yüz siperi ve koruyucu gözlük dahil olmak üzere uygun kıyafetler giymelidir.
   1. Temizlendikten sonra, dökülen malzeme uygun şekilde atılmalı ve kontamine koruyucu giysi uygun şekilde atılmalı veya temizlenmelidir. Eller ve açıkta kalan cilt iyice yıkanmalıdır.
4. Son derece tehlikeli maddelere açıkça maruz kalınırsa, 911 aranmalı veya etkilenen kişiye derhal tıbbi yardım uygulanmalıdır.

4. Santrifüjün Bakımı

NOT: Santrifüjün gövdesi genellikle nem, kimyasallar veya güçlü temizlik maddelerinin varlığında korozyona uğrayabilen metallerden yapılır. Santrifüjün uygun bakımı için, üreticinin temizlik ve bakım talimatlarına dikkatlice uyulması önerilir. Bunun dışında bakım için akılda tutulması gereken birkaç genel önlem aşağıdaki gibidir.

1. Santrifüj her zaman temiz ve kuru tutulmalıdır.
2. Her türlü dökülme derhal temizlenmelidir.
3. Rotor, biyolojik ve radyoaktif maddelerle kullanıldıktan sonra dekontamine edilmelidir. 30 dakika boyunca %10 ağartıcı ve ardından %70 etanol kullanılması ve rotorun kurumaya bırakılması önerilir.
4. Rotoru ve ilgili parçaları temizlemek için asla aşındırıcı fırça telleri kullanılmamalıdır.
5. Rotor, operatör tarafından her kullanımdan sonra ve en az yılda bir kez üretici denetçisi tarafından kontrol edilmelidir.
6. Kullanıcıların, numunelerin ve servis geçmişinin kaydını tutmak için her santrifüj için bir kayıt defteri tutulmalıdır. Ek olarak, garantiyle ilgili materyallerin kopyaları bu kayıt defterine dahil edilebilir.

Santrifüjleme, laboratuvarlarda heterojen karışımların ayrılması için kullanılan en güçlü araçlardan biridir, ancak tehlikeli olabilir ve bu nedenle güvenlik önlemleri uygulanmalıdır.

Bir santrifüj, heterojen malzemeleri ayırmak için numuneleri hızla döndürür, bu da numuneler ve cihaz üzerinde aşırı merkezkaç kuvvetlerine neden olur. Bir santrifüjün çalıştığı yüksek hız nedeniyle, yanlış kullanıldığında kullanıcının ciddi şekilde yaralanmasına neden olabilir. Bu nedenle, dökülmeleri ve ekipmanın hasar görmesini önlemek için santrifüj kullanırken özel dikkat gösterilmelidir.

Bu video, bir santrifüjün mekanizmasını ve bir santrifüjün nasıl güvenli bir şekilde çalıştırılacağını ve bakımının nasıl yapılacağını gösterecektir.

Güvenlik önlemlerinin ayrıntılarına girmeden önce, santrifüjlemenin temellerini hızlıca gözden geçirelim. Santrifüjler, bir mil üzerine yerleştirilmiş bir rotor içerir. Farklı boyutlardaki rotorlar, farklı numune şişelerini, tüpleri veya torbaları barındırmak için genellikle tek bir mil üzerine takılabilir. Bir motor, rotoru belirli bir RPM'de veya dakikadaki devirlerde döndürür. Bu da, farklı yoğunluklara sahip parçacıkları ayıran dönme ekseninden uzağa yönlendirilen heterojen karışım üzerindeki merkezkaç kuvvetini verir.

Farklı santrifüj türleri farklı RPM'lerde çalışır. Düşük hızlı santrifüjler 10.000 RPM'den daha az, yüksek hızlı 21.000'e kadar ve ultrasantrifüjler 30.000 ve üzeri hızlarda çalışır. Her tipin kendisiyle uyumlu farklı rotorları vardır. Çalışmadan sonra, bir fren sistemi genellikle rotoru yavaşlatır. Herhangi bir santrifüjde, yüksek hız rotoru deforme eder.

Normal kullanımda eski boyutuna dönecektir. Bununla birlikte, eğirmeden kaynaklanan kuvvet, rotorun kaldırabileceği maksimum kuvveti aşarsa, kalıcı olarak deforme olabilir. Bu, çatlaklara yol açabilir ve bu da ciddi arızalara yol açabilir. Öte yandan, santrifüj arızaları, tehlikeli maddeler söz konusu olduğunda tehlikeli olabilecek ve dikkatli bir şekilde kullanılması gereken numune sızıntısına neden olabilir. Şimdi size numuneleri nasıl hazırlayacağınızı ve santrifüjde nasıl güvenli bir şekilde kullanacağınızı göstereceğiz.

İlk olarak, kullanmak istediğiniz dönüş hızlarıyla uyumlu uygun santrifüj tüplerini seçin. Tüpün limitlerini öğrenmek için belgelere bakın. Tüpler sağlam olmalı ve herhangi bir çatlak içermemelidir. Dökülmeleri önlemek için her birini en fazla 3/4 oranında doldurun. Ardından tüplerin dengelendiğinden emin olun ve sıkıca kapatın.

Tehlikeli kimyasal veya biyolojik numuneleri santrifüjlerken özel önlemler alın. Uygun koruyucu ekipman giyin ve numuneleri çeker ocak veya laminer akış kabini gibi uygun bir çalışma ortamında hazırlayın. Bu güvenlik özellikleri hakkında daha fazla bilgi için JoVE'nin Çeker Ocaklar hakkındaki videolarına bakın.

Gerekirse, tehlikeli maddeler için cam veya plastik ek gibi ikincil bir muhafaza kullanın. Kapalı bir ortam sağlayan sızdırmaz güvenlik tüpleri de kullanılabilir. Herhangi bir santrifüj veya rotor kullanmadan önce herkes eğitilmelidir.

Santrifüje uygun bir rotor seçin. Rotorun ve kapağının temiz ve kuru olduğunu ve çatlak veya şekil bozukluğu olmadığını kontrol edin. Rotor veya kapaktaki O-ringlerin aşınmadığından ekstra emin olun. Ayrıca, bükülmüş olup olmadığını veya başka herhangi bir deformasyonu olup olmadığını görmek için santrifüj milini kontrol edin. Ardından rotoru milin üzerine yerleştirin ve doğru şekilde oturduğundan emin olun. Tüplerin rotora tam olarak oturduğundan emin olarak numuneleri rotora yerleştirin.

Her zaman dengeli tüpleri birbirinin karşısına koyun. Contanın sıkı olduğundan emin olarak rotoru kapatın. Santrifüj kapağını kapatın ve programınızı başlatın. Yine, bir santrifüj programının çalıştırılması hakkında daha fazla bilgi için JoVE'nin önceki santrifüj videosuna bakın.

Maksimum hızına ulaşana kadar santrifüjde kalın. Güç düğmesinin konumunu öğrenin. Santrifüjü hemen durdurmak için olağandışı sesler veya titreşimler varsa güç düğmesini kapatın. Ardından, rotor durana kadar yakın alanı boşaltın. Durduktan sonra, numunelerde dökülme olup olmadığını ve rotorda herhangi bir anormallik veya dengesizlik olup olmadığını kontrol edin. Herhangi bir sorun yoksa, santrifüj programını tamamlayana ve tamamen durana kadar bekleyin.

Aerosol oluşturan kimyasallar varsa yarım saat daha bekleyin. Aksi takdirde, santrifüjü hemen açabilirsiniz

. Numuneleri çıkarın ve gerekirse açılması için özel bir alana geri götürün. Dökülme durumunda santrifüjü hemen temizleyin. Mevcut herhangi bir tehlikeye karşı uygun KKD kullanın ve kontamine malzemeleri yönergelere göre atın. Rotora zarar verebileceğinden temizlemek için aşındırıcı fırça telleri kullanmayın. Acil durum personelini uyarın ve yaşamı tehdit eden tehlikeler döküldüyse santrifüjü temizlemeye çalışmayın.

Dökülme olup olmadığına bakılmaksızın santrifüjde kullanılan herhangi bir biyolojik numune için rotoru %10 ağartıcı ile dekontamine edin. Çamaşır suyunu 30 dakika bekletin ve ardından %70 etanolü durulayın ve havayla kurutun. Son olarak, rotoru çıkarın ve herhangi bir hasar olup olmadığını kontrol edin ve kullanımınızı kayıt defterine not edin.

JoVE'nin Santrifüj Kullanımına Giriş kitabını az önce izlediniz. Artık numunelerinizi nasıl hazırlayacağınızı ve cihazı nasıl çalıştıracağınızı ve bakımını yapacağınızı anlamalısınız.

İzlediğiniz için teşekkürler.