6.10: Otoklavların Doğru Kullanımı

1. Uygun Kişisel Koruyucu Ekipman (KKD) Giyin

Otoklavlama sırasında karşılaşılan yüksek basınç ve sıcaklık çalışma koşulları, potansiyel ısı yanığı veya patlama riskleri oluşturur. Uygun KKD, bir laboratuvar önlüğü, koruyucu gözlükler, ısıya dayanıklı eldivenler ve kapalı burunlu ayakkabılar içerir; Otoklavdan malzeme yüklenirken ve boşaltılırken bunlar giyilmelidir. Sıvı numunelerle uğraşırken, ek KKD olarak bir önlük ve yüz siperi kullanın.

2. Yüklenecek Malzemelerin Hazırlanması

1. Otoklav Uyumlu Malzeme ve Otoklav Uyumsuz Malzeme Tanımlayın
   Otoklavlama, dekontaminasyon için yaygın olarak kullanılan ve ekonomik bir yöntemi temsil etse de, yüksek basınç ve sıcaklık çalışma koşulları nedeniyle tüm malzemeler otoklavlama için uygun değildir. Genel olarak yüksek basınçlı buhar altında buharlaşacak veya eriyecek olan tüm malzemeler otoklavlama ile uyumlu değildir. Buna organik çözücüler, polistiren, polietilen gibi zayıf ısıya dayanıklı plastikler ve paslanmaz çelik hariç metaller gibi malzemeler dahildir. Yanıcı, aşındırıcı, toksik, reaktif veya radyoaktif kimyasalları asla otoklavlamayın. Otoklavlama için uyumlu malzemeler arasında Pyrex veya Tip I borosilikat cam, polipropilen, polikarbonat, eldivenler, paslanmaz çelik, pipet uçları, kağıt (otoklav torbalarına konur) ve ortam çözeltileri bulunur.
2. Ambalaj Malzemesi
   Otoklav uyumlu malzemeleri belirledikten sonra, güvenlik ve verimli otoklavlama sağladığı için uygun paketleme de önemlidir. Malzemeleri paketlerken temel ilkeler şunlardır:
   1. Daima polipropilen veya paslanmaz çelikten yapılmış ikincil bir kap kullanın.
   2. Sıvı numuneler için, şişeyi yaklaşık 1/2 oranında doldurun ve kapakları gevşetin veya havalandırmalı kapaklar kullanın. Kapları asla 2/3'ten fazla doldurmayın, kapak tamamen sıkılmış durumda.
   3. Çatlak olmadığından emin olmak için cam kabı inceleyin. Çatlaklar tespit edilirse, cam eşyaları uygun bir kaba atın. Asla bilinen bir kırık cam kabı otoklavlamayın.
   4. Atıkları paketlemek için her zaman otoklav uyumlu torbalar kullanın. Torbaların üzerinde gösterge bantları bulunmalı ve yüklemeden önce uçlarından açılarak torbanın içine buhar girmesi sağlanmalıdır.
   5. Tam sterilizasyon için yeterli buhar akışına izin vermek için torbaları veya kabı asla aşırı yüklemeyin. Öğeler arasında boşluk bırakın.
   6. Uyumsuz malzemeleri karıştırmayın.
   7. Çöp torbasına asla keskin nesneler koymayın.

3. Malzemeyi Yükleyin

1. Önceki kullanıcıdan kalan potansiyel bir tehlike olmadığından emin olmak için otoklavın içini kontrol edin.
2. İyi bir sirkülasyon sağlamak için malzemeleri yüklemeden önce tahliyeyi temizleyin.
3. Erimeyi önlemek için torbaların otoklavın iç duvarlarına temas etmediğinden emin olun.
4. Sıvılar ve kuru malzemeler farklı döngüler gerektirir ve ayrı ayrı otoklavlanmaları gerekir.
5. Kapıyı sıkıca kapatın.

4. Otoklavın Çalışması

1. Otoklavları yalnızca eğitimli personelin kullanmasına izin verilmelidir. Çalışma protokolleri farklı otoklavlar arasında farklılık gösterdiğinden, gerekirse ekipman kılavuzuna bakın.
2. Otoklav kapısının sıkıca kapatıldığından emin olduktan sonra, otoklav sıcaklığını 121 °C'ye ayarlayın ve en az 15 psi'lik bir basınç sağlayın.
3. Otoklav süresini ve döngüsünü ayarlamak için aşağıdaki faktörlerin dikkate alınması gerekir:
   1. Üretici el kitabından ekipman önerileri.
   2. İçerideki yüklü malzemelerin türü: kuru veya sıvı.
   3. Yüklenen malzeme(ler)in miktarları.
   4. Kullanılan kabın şekli ve boyutu.
   5. Konteyner ve malzemelerin ısı iletkenliği.
   6. Dekontaminasyonun amacı.

5. Otoklavlanmış Malzemenin Boşaltılması

1. Yukarıda açıklandığı gibi uygun KKD giyin.
2. Otoklavın sıcaklığının ve basıncının güvenli bir aralığa döndüğünden emin olun.
3. Kapının arkasında durun ve otoklavın içinde kalan buharı odaya boşaltmak için kapıyı dikkatlice açın.
4. Malzemenin içinde sıkışan buhar veya sıcak havayı serbest bırakmak için otoklav içindeki malzemelerin 10 dakika bekletilmesine izin verin.
5. Otoklavdan çıkarırken herhangi bir sıvı malzemeyi sallamayın. Gerekirse, malzemenin yakın zamanda otoklavlandığı gerçeğinden potansiyel olarak habersiz olabilecek bir kişiye ısı yanıklarını önlemek için malzemeyi sıcak olarak etiketleyin.
6. Laboratuvar içinde veya laboratuvar dışında taşımadan önce malzemenin oda sıcaklığına soğumasını bekleyin. Her iki durumda da, taşıma için uygun muhafazayı kullandığınızdan emin olun.
7. Malzemelerin ayrıntılarını ve otoklavlama koşullarını bir kullanıcının günlüğüne kaydedin.

Otoklavlama, laboratuvarda dekontaminasyon amacıyla en sık kullanılan yöntemlerden biridir.

Birçok bilim insanı, özellikle biyolojik numunelerle çalışanlar, sterilize edilmiş ekipman ve ortama ihtiyaç duyar ve otoklavlar, malzemeleri dekontamine etmek için hızlı ve ekonomik bir yol sağlar. Mikroorganizmaları öldürmek için yüksek sıcaklıklarda ve basınçta buhar kullanırlar. Ancak bu aşırı koşullar nedeniyle dikkatli kullanılmaları gerekir.

Bu video, otoklavların nasıl çalıştığını ve nasıl doğru şekilde kullanılacağını gösterecektir.

Bir otoklavda, malzemeler en az 15 psi basınçta 121 santigrat dereceye kadar buharla ısıtılır. En az 30 dakika sonra, bu koşullar hücreleri kurutur ve öldürür.

Otoklavlar hem sıvı hem de katı malzemeleri sterilize edebilir, ancak farklı çalışma ayarlarının dikkate alınması gerekir. Sıvılar, ani kaynamayı önlemek için buharı boşaltmak için katılardan daha uzun sürelere ihtiyaç duyar. Ek olarak, daha büyük hacimlerdeki sıvı malzemelerin doğru sıcaklığa kadar ısınması daha uzun sürer.

Tüm malzemeler bir otoklav içindeki sıcaklıklara dayanamaz. Bu nedenle eriyen, yanan, patlayıcı veya buharlaşacak sıvıları asla otoklavlamayın. Ayrıca, toksik veya radyoaktif kimyasalları otoklavlamayın.

Şimdi size otoklav için numunelerin nasıl hazırlanacağını ve nasıl çalıştırılacağını göstereceğiz.

İlk olarak, otoklavlayacağınız malzemeleri seçin ve yalnızca uyumlu kaplar ve aletler kullanın. Otoklavlama için pyrex, borosilikat cam, paslanmaz çelik, polipropilen ve polikarbonat kullanılabilir.

Pipet uçları ve kutular gibi diğer yaygın laboratuvar malzemeleri de uyumludur. Kağıt, otoklav uyumlu torbalarda otoklavlanabilir.

Katı atıklar da uygun bir torbada otoklavlanabilir. Buharın dolaşmasına izin vermek ve uçlarını bağlamak için bu torbada boşluk bırakın. Son olarak, otoklavlamadan önce, buharın girmesine izin vermek için torbada küçük bir açıklık oluşturduğunuzdan emin olun.

Sulu ortam ve diğer uyumlu sıvı numuneler için, herhangi bir çatlak içermeyen sağlam bir kap kullanın. Kabı yaklaşık yarısı kadar doldurun ve asla üçte ikisinden fazla doldurmayın.

Gazları bir sıvı kabından havalandırmak için kapağı gevşetin. Kapak yoksa, otoklavlanmış malzemenin kirlenmesini önlemek için alüminyum folyo ile gevşek bir şekilde örtün.

Tüm malzemeleri polipropilen veya paslanmaz çelikten yapılmış ikincil bir kaba koyun. Otoklavlanacak katı ve sıvı malzemeleri ayırın. Malzemeler arasında boşluk bırakın ve kabı aşırı doldurmayın.

Son olarak, tüm malzemelere bir parça otoklav bandı yapıştırın. Bu bant, yeterli sıcaklığa ulaşıldığında kararacak sıcaklığa duyarlı göstergelere sahiptir.

Otoklav kullanırken, yüksek sıcaklık ve basınç risklerine karşı koruma sağlamak için uygun kişisel koruyucu ekipman kullanın. Buna standart KKD koruyucu gözlükler, laboratuvar önlükleri ve kapalı burunlu ayakkabılar ve ısıya dayanıklı eldivenler dahildir. Sıvı numuneleri tutarken bir önlük ve yüz siperi kullanın.

Otoklavda önce kapıyı açın ve içinde herhangi bir tehlike olup olmadığını kontrol edin. Farklı otoklav döngüleri gerektirdiğinden sıvı ve kuru malzemeleri ayrı ayrı yükleyin.

Erimeyi önlemek için malzemelerin duvarlara temas etmediğinden emin olun. Malzemeler arasında yeterli boşluk bırakarak iyi bir ısı akışı sağlayın. Son olarak, kapıyı kapatın ve kapatın.

Farklı otoklavların farklı kullanım talimatları vardır. Döngüler, sıcaklık ve süre manuel olarak ayarlanarak veya önceden ayarlanmış bir listeden seçim yapılarak ayarlanabilir. Genel olarak, dekontamine ettiğiniz malzeme türü için önerilen döngüleri kullanın.

Katılar ve sıvılar için olduğu kadar otoklavlanacak farklı miktarlarda malzeme ve atık için çeşitli döngüler mevcuttur. Bir döngü çalıştırdığınızda, sıcaklığın en az 121 santigrat dereceye ve basıncın en az 15 p.s.i.'ye ulaştığından emin olun.

Döngü bittikten sonra, basıncın sıfıra döndüğünden ve otoklavın soğuduğundan emin olun. Kalan buharı dışarı atmak için kapıyı dikkatlice açın. Ardından, sıcak gazları serbest bırakmak için malzemelerin 10 dakika bekletilmesine izin verin. Otoklav bandı artık siyah çizgilere sahip olmalı veya üzerinde otoklavlanmış demelidir, ancak bu sterilizasyonun gerçekleştiğinin garantisi değildir.

Uygun KKD giyerek, herhangi bir sıvı numuneyi sallamadığınızdan emin olarak malzemeleri çıkarın. Maddelerin türü ve karşılaşılırsa özel durumlar da dahil olmak üzere kullanımınızı günlüğe not edin. Son olarak, malzemeleri soğuması için güvenli bir alana veya laminer akış başlığına taşıyın.

JoVE'nin otoklavlara girişini yeni izlediniz. Artık hangi malzemelerin otoklavlanabileceğini, nasıl hazırlanacağını ve cihazın nasıl güvenli bir şekilde kullanılacağını anlamalısınız. İzlediğiniz için teşekkürler!